癌干细胞标记物CD44与ESA在舌癌淋巴道转移模型中的表达及其意义

目的:探讨癌干细胞标记物CD44与ESA蛋白在舌癌淋巴道转移模型中表达情况及其表达意义。方法:采用癌细胞足垫注射法建立淋巴道转移模型,4周后,取转移淋巴结进行原代细胞培养,从中分离、纯化舌癌细胞进行连续传代培养,建立舌癌永生化细胞系,命名为Tca8113-Ml。以舌癌永生化细胞系Tca8113-Ml为研究对象,采用足垫注射细胞的方法建立淋巴道转移模型。4周后,收集淋巴结,免疫组织化学染色检测癌干细胞标记物CD44与ESA蛋白的表达情况。结果:采用Tca8113-Ml建立了舌癌淋巴道转移模型,4周后收集淋巴结,检测癌干细胞标记物CD44与ESA蛋白在舌癌转移淋巴结组织中均呈阳性表达。结论:癌干细胞标记物在淋巴结转移性癌组织中呈阳性表达,表明淋巴结转移灶中有癌干细胞存在,提示癌转移的"种子"细胞极有可能是癌干细胞。     

小鼠H22肝癌细胞株淋巴结转移模型的构建

目的:使用H22肝癌细胞株建立小鼠自发淋巴道转移模型。方法:40只雄性昆明种小鼠随机分为4组(n=10),左后肢爪垫皮下接种H22肝癌细胞建立动物模型,各组小鼠接种细胞浓度分别为:1×106·只-1、5×105·只-1、2.5×105·只-1,对照组注射等体积PBS。接种后第27天解剖取小鼠爪垫原发灶肿瘤组织及腘窝部淋巴结,10%中性福尔马林液固定、HE染色后判断淋巴结转移情况,计算转移率。结果:高浓度组(1×106·只-1)转移率为100%,中浓度组(5×105·只-1)转移率为50%,低浓度组(2.5×105·只-1)转移率为40%。结论:小鼠爪垫皮下接种1×106的H22肝癌细胞株,可以建立100%腘窝部淋巴结转移模型。     

人肺腺癌裸鼠皮下移植瘤淋巴转移模型的构建与筛选

目的构建人肺腺癌的裸鼠皮下移植瘤模型,探讨不同注射部位对肿瘤生长和淋巴转移的影响。方法 20只BALB/c裸鼠随机分为4组,每组5只。分别于左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下注射A549细胞株,建立人肺腺癌移植瘤模型,考察各组裸鼠肿瘤生长和淋巴结转移情况。结果各组裸鼠成瘤明显,模型构建成功。背部近腋窝种植2组裸鼠肿瘤比后肢和爪垫种植的肿瘤出现时间早,生长速度快(P<0.05)。左侧背部近腋窝、右侧背部近腋窝、左侧后肢和左后爪垫皮下移植瘤的淋巴结转移率分别为41.7%、42.9%、23.1%和21.4%。其中左侧背部近腋窝注射最为方便。结论裸鼠左侧背部近腋窝皮下注射A549细胞操作方便,肿瘤易生长,淋巴转移率高,是构建人肺腺癌皮下移植瘤淋巴转移模型的优选方案。     

miR-203在舌癌组织中的表达及其对Tca8113细胞活力和侵袭的影响

目的:研究舌癌组织中miR-203的表达,分析它与临床病理学参数之间的相关性,并探讨其与人舌癌Tca8113细胞活力及侵袭能力的关系。方法:收集28例舌癌手术标本,每例标本分别取癌灶及远端5 cm处正常黏膜组织(即远癌正常组织)2个部分。实时定量PCR检测舌癌患者肿瘤组织中miR-203的相对表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系;脂质体2000介导miR-203 mimic和无关序列对照转染Tca8113细胞株,并通过CCK-8实验和Transwell小室侵袭实验检测上调miR-203对Tca8113细胞活力及侵袭能力的影响。结果:28例舌癌组织中miR-203表达水平与癌旁正常组织相比显著降低(P0.05),miR-203的表达与肿瘤TNM分期及淋巴结转移存在相关性(P0.05),而与患者的年龄和性别无关。Tca8113细胞转染miR-203 mimics上调miR-203表达可显著抑制Tca8113细胞株的活力及侵袭能力,与对照组比较差异有统计学显著性(P0.05)。结论:上调miR-203表达能有效抑制舌癌细胞的生长和侵袭,miR-203可能成为舌癌基因治疗的靶点。     

特异性干扰survivin 基因表达对人舌癌Tca8113 细胞体外增殖和侵袭性的影响

目的：探讨应用RNAi技术特异性沉默survivin基因表达对人舌癌细胞Tca8113增殖、凋亡、迁移的影响,阐明survivin在Tca8113细胞生物学行为中的作用。方法：取对数生长期的Tca8113细胞,分为干扰组、阴性对照组及空白对照组。采用RT-PCR和Western blot方法检测Tca8113细胞中survivin基因的mRNA及蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖状况;流式细胞术检测各组Tca8113细胞凋亡率;划痕实验检测Tca8113细胞的迁移状况。结果：RT-PCR 显示舌癌Tca8113细胞中survivin的mRNA表达水平明显低于空白对照组 (P<0.05),Western blot 蛋白免疫印迹结果显示,与空白对照组比较,survivin蛋白表达水平减少(P<0.05)。survivin干扰组Tca8113细胞的增殖能力降低（P<0.05）;细胞划痕实验发现转染Tca8113细胞48 h 后干扰组细胞的迁移距离明显短于空白对照组( P<0.05)。结论：特异性沉默siRNA-survivin的表达可有效抑制舌癌Tca8113细胞的体外迁移能力,可能与survivin表达减少有关,有望成为口腔舌癌生物治疗的潜在靶点。     

平阳霉素诱导的人舌癌多药耐药相关蛋白质表达谱的建立

目的:建立平阳霉素(pingyangmycin,PYM)诱导的人舌癌多药耐药相关蛋白质表达谱。方法:以前期本室通过用PYM浓度梯度诱导法建立的舌癌PYM多药耐药细胞Tca8113/PYM与其亲本细胞Tca8113为模型,用四甲基偶氮唑盐法检测该耐药细胞株的多药耐药性,运用比较蛋白质组学方法筛选耐药细胞与其亲本细胞中的差异蛋白质表达,并对部分差异蛋白质表达进行实时定量PCR及Western免疫印迹验证。结果:目前Tca8113/PYM细胞对PYM的耐药性约是Tca8113细胞的20倍,同时表现出对顺铂、紫杉醇、丝裂霉素C、四氢吡喃阿霉素和阿霉素存在交叉耐药;比较蛋白质组学筛选了18种差异表达蛋白质,其中在Tca8113/PYM细胞中表达上调的有13种,下调的有5种,实时荧光定量PCR与Western免疫印迹结果与蛋白质组学的结果趋势一致。结论:建立了舌癌PYM耐药相关蛋白质表达谱,为深入研究舌癌多药耐药的分子机制提供了新线索。     

口腔颌面部肿瘤细胞系中PTEN抑癌基因蛋白表达的研究

目的：研究口腔颌面部恶性肿瘤细胞系内源性PTEN蛋白的表达，比较高转移性癌细胞系与亲本细胞PTEN蛋白表达的差异。方法：应用ABC免疫组化染色法，检测8例癌细胞系PTEN蛋白的表达，包括舌癌细胞系Tca8113和HSC-3，口底癌细胞系HSC-2，颊癌细胞系BcaCD885，粘液表皮样癌细胞系MEC-1，腺样囊性癌细胞系SACC83以及高转移性舌癌细胞系Tb-TLP和高转移性粘液表皮样癌细胞系M3SP2。结果：5/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阳性，PTEN蛋白定位于靠近细胞核周围的细胞质中，3/8例癌细胞系PTEN蛋白的表达呈阴性，即BcaCD885细胞及高转移性Tb-TLP和M3SP2细胞。结论：PTEN蛋白表达缺失与癌细胞转移可能有定的关系。     

敲低核仁小RNA宿主基因6(SNHG6)抑制舌癌细胞的增殖及上皮间质转化

目的探究长链非编码RNA核仁小RNA宿主基因6 (SNHG6)在舌鳞状细胞癌组织、Tca1183舌癌细胞中的表达及对舌癌细胞生物学特性的影响。方法使用实时定量PCR检测舌鳞状细胞癌组织与正常组织、Tca1183舌癌细胞与正常舌上皮细胞中SNHG6的mRNA水平,分析舌癌临床病理指标与SNHG6表达的相关性。构建SNHG6干扰质粒并转染至Tca1183舌癌细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测舌癌细胞凋亡变化; Western blot法检测细胞上皮间质转化(EMT)相关蛋白β联蛋白(β-catenin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白水平。结果与正常组织和正常舌上皮细胞相比,舌癌组织以及舌癌细胞中SNHG6的mRNA水平显著升高。舌癌组织SNHG6 mRNA水平与患者年龄和性别等不相关,与组织分化差、临床分期高和淋巴结转移呈正相关。干扰SNHG6在Tca1183舌癌细胞中的表达能够抑制癌细胞增殖以及促进细胞凋亡,且可以通过促进β-catenin和E-cadherin蛋白表达以及抑制N-cadherin和vimentin蛋白表达抑制Tca1183细胞EMT。结论 SNHG6在舌癌组织中高表达,敲低舌癌细胞中SNHG6能够抑制其增殖和EMT。     

TGF-β1诱导上皮间质转化促进口腔鳞癌侵袭转移

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在人口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113上皮间质转化(EMT)发生中的作用。方法采用不用浓度的TGF-β1处理Tca8113细胞24 h,普通倒置光学显微镜下观测处理前后细胞形态学改变;分别采用Real timePCR和Western blot法检测细胞中上皮间质转化标记物E-cadherin、Vimentin mRNA和总蛋白的表达;Transwell体外细胞侵袭实验观测细胞侵袭能力变化。结果 TGF-β1可显著诱导口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞的形态从上皮样向间质样改变,并上调Vimentin mRNA和蛋白的表达和下调E-cadherin mRNA和蛋白的表达。此外,TGF-β1可明显促进Tca8113细胞的体外迁移和侵袭,而使用TGF-β1特异性抑制剂LY2109761则减弱这一效应。结论 TGF-β1通过启动上皮-间质转化(EMT)程序发生从而促进TCA8113细胞的侵袭转移。     

舌鳞癌Tca 8113细胞过表达Twist1促进其侵袭

目的:构建人Twist1真核表达载体并检测舌鳞癌Tca8113中过表达Twist1与侵袭转移的关系.方法:从Tca8113细胞中提取mRNA,反转录为cDNA,利用特异PCR引物扩增Twist1基因,将其定向克隆至pcDNA3.1-myc-hisA载体,融合蛋白表达载体命名为Myc-Twist1.将Myc-Twist1转染到Tca8113细胞系中,Western blot法检测蛋白表达.共聚焦激光扫描显微镜观察Twist1在Tca8113细胞中的定位.荧光素酶报告基因检测Myc-Twist1对上皮性钙粘素(E-cadherin)启动子活性调节.Transwell检测稳定表达Myc-Twist1的Tca8113细胞侵袭能力.结果:成功构建真核表达载体Myc-Twist1,Western blot法检测到Myc-Twist1融合蛋白表达.人Twist1主要定位于细胞核,少量定位于细胞质.Twsit1明显抑制E-cadherin的启动子活性,增强细胞侵袭能力.结论:Twist1能通过调控E-cadherin的表达促进Tca8113细胞的侵袭.     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.