整合型HBV—DNA前C区基因突变与肝细胞癌的相关性

１．目的 探讨整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区基因突变与肝细胞癌的关系。２．方法应用聚合酶链反应单链构象多态技术,对２９例肝癌１２例慢性肝硬化和１４例非肝病病伯肝组织内整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区进行突变分析。３．结果 肝癌、肝硬化和正常肝组织中整型ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率分别为９６．５５％,６６．６７％和１４．２９％,组间比较差异有显著性（ｘ＾２＝２９．４３,Ｐ〈０．００１）,３组整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ前Ｃ区     

在西安地区HBeAg阴性患者中检出乙型肝炎病毒前C区基因突变株

作用ＨＢｅＡｇ阴性，抗ＨＢｅ阳性患血清提取ＨＢＶ ＤＮＡ作为模板，用前Ｃ区引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ），选择３份ＰＣＲ扩增阳性产物，用ＥｃｏＲＩ酶切获得长为３１２ｂｐ的基因片段。将其克至ＰＵＣ１８质粒中，转化大肠杆菌ＪＭ１０９，提取质粒，经ＰＣＲ扩增及酶切鉴定后，用双脱氧末端标记法进行基因序列测定。结果发现，在２例患ＨＢＶ ＤＮＡ克隆中存在有前Ｃ区基因突变，即１８９６位的鸟嘌呤为腺嘌呤...     

乙型肝炎病毒前C区基因变异的研究

作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ｅ系统阳性的慢件乙型肝炎（乙肝）患者血清乙肝病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ，筛选出乙肝ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）阳性／乙肝ｅ抗体（抗—ＨＢｅ）阴性和ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ阳性各２０份ＰＣＲ阳性血清，分别用人工合成的ＨＢＶ前Ｃ区基因寡核苷酸探针Ｍ０（无突变），Ｍ１（１点突变），Ｍ２（２点突变）进行斑点杂交，结果发现ＨＢｅＡｇ阴性／抗—ＨＢｅ附性慢性乙肝患含有１７例（占８５％）在１８９６位核苷酸发生点突变，形成终止密码，其中１０例（占５０％）发生２点突变。选突变ＰＣＲ产物直接测序，同样证实点突变的存在。提示乙肝患含ＨＢｅＡｇ阳性自然转换为抗—ＨＢｅ阳性、并不一定是病毒复制减弱，而可能足ＨＢＶＤＮＡ前Ｃ区发生了基因变异。     

肝细胞癌和癌旁肝组织中HCVRNA正,负链的检测

用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测了４２例肝细胞癌（ＨＣＣ）患者肝癌及癌旁肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的正，负链，结果显示，肝组织中ＨＣＶＲＮＡ正，负链的检出率分别为５４．８％和３５．７％，ＨＣＶＲＮＡ的正链和负链在肝癌和癌旁肝组织中，同时阳性的患者分别占４５．２％和３１．０％，血清ＨＣＶＲＮＡ和抗ＨＣＶ阴性埂肝组织中ＨＣＶＲＮＡ的检出率仍有５１．３％，肝组织ＨＣＶＲＮＡ与乙型肝炎     

湖南地区丙型肝炎病毒基因型在肝细胞癌组织中的分布

采用型特异性引物ＰＣＲ分型法对５０例肝细胞癌组织中感染的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）进行基因分型。结果显示：单独ＨＣＶⅡ型感染为６０％（３０／５０）；单独Ⅲ型感染６％（３／５０）；感染为Ⅱ＋Ⅲ型１０％（５／５０），Ⅱ＋Ⅳ型为１６％（８／５０），Ⅱ＋Ⅰ＋Ⅲ型为４％（２／５０）；Ⅰ￣Ⅳ型均阴性的病例４％（２／５０）。表明湖南地区肝细胞癌患者的ＨＣＶ感染以Ⅱ型为主，并存在Ⅱ型与其它型的混合感染；少数病例可能系     

前C区A83点突变在乙型肝炎病毒感染中的分布

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区Ａ８３点突变相当常见。我们设计一种错配引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）在含Ａ８３的序列中引进Ｂｓｕ３６１限制酶位点，经酶切即可检出Ａ８３。用以分析急慢性ＨＢＶ感染７７例：在乙型肝炎ｅ抗体（抗－ＨＢｅ）（＋）４８例中检出Ａ８３优势感染６５％；乙型肝炎ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）（＋）２９例中检出Ａ８３非优势混合感染３８％。急性乙肝和慢性无症状ＨＢＶ携带者中均未见Ａ８３。提示变异须     

抑癌基因p16在人肝细胞癌中的表达及其与HBxAg表达的关系

目的：探讨抑癌基因ｐ１６在肝细胞癌发生、发展中的作用。方法：采用免疫组化及原位杂交方法在８７例肝细胞癌及其癌旁肝组织内检测Ｐ１６蛋白、ＨＢｘＡｇ及ｐ１６ｍＲＮＡ。结果：在８７例中，１６例Ｐ１６蛋白和１９例ｐ１６ｍＲＮＡ阳性，分别占１８．４％和２１．８％。在５３例癌旁肝组织中，３２例Ｐ１６蛋白和３３例ｐ１６ｍＲＮＡ阳性，分别占６０．４％和６２．８％。在ＨＢｘＡｇ阳性的７０例中，９例Ｐ１６蛋白阳性，ＨＢｘＡｇ阴性的１７例中，７例Ｐ１６蛋白阳性。结论：肝细胞癌的发生可能与ｐ１６表达减少有关，ＨＢＶｘ基因表达产物可能参与ｐ１６基因表达的调控     

PCR-SSCP法检测乙型肝炎病毒前C区基因变异

为探索一种快速，简便检测乙型肝炎病毒（HBV）前C区基因变异的方法，用聚合酶链反应（PCR）技术扩增94例乙肝患者血清HBV前C区基因片段，阳性扩增产物用单链构象多态性（SSCP）法进行检测，对具有不同特征性电泳图谱的PCR产物再以直接测序法加以核定，以辨别不同图谱与野生株，变异株或野生株，变异株混合感染之间的关系。结果显示：有86例患者HBV前C区PCR扩增阳性，SSCP法检测发现有3种常见的特征性电泳图谱，测序后证实，它们分别代表了野生株，变异株（nt1896位G→A）及野生株，变异株混合感染的SSCP图谱；在某些变异株图谱中，尚可见其它位点也存在变异，其中以nt1899位G→A突变最为常见，提示：以PCR-SSCP技术检测HBV前C区变异具有敏感性高，特异性强，简单，快捷，价廉等优点，而且特别适用于大样本的筛检，因此有应用价值，值得推荐。     

乙型肝炎患者HBV前C区变异及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区变异的临床意义。方法 应用错配ＰＣＲ限制片段长度多态性分析，检测ＨＢＶ前奁１８９６位突变，结果 ６２０例乙型肝炎患者ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位变异２６４例变异率４２．５８％，在急性肝炎，慢性轻度，慢性中度，慢性重度，重型肝炎，肝硬化中，变异率分别为１２．５％，３５．０％，５５．９４％，４５．２６％，５４．７２％，４８．７６％，年龄，性别与变异无关，病程〉５年，中丙     

肝细胞癌P16基因的纯合性缺失及其临床意义

①目的　探讨肝细胞癌（ Ｈ Ｃ Ｃ）组织中 Ｐ１６ 基因的缺失及其临床意义。②方法　应用聚合酶链反应和单链构象多态技术银染法,检测２１ 例 Ｈ Ｃ Ｃ的癌组织、癌旁组织和外周血标本 Ｐ１６ 基因的缺失情况。③结果　２１ 例 Ｈ Ｃ Ｃ 中癌组织 Ｐ１６ 基因纯合性缺失 ３ 例,且均为高分化 Ｈ Ｃ Ｃ;癌旁组织和外周血均无 Ｐ１６ 基因的缺失。④结论 Ｈ Ｃ Ｃ组织中存在 Ｐ１６ 基因的纯合性缺失,而且其缺失与高分化有关。     

HBV相关性肝细胞癌与sFas/sFasL的关系

①目的 探讨血清可溶性Ｆａｓ／可溶性ＦａｓＬ配体（ｓＦａｓ／ｓＦａｓＬ）变化与慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）相关性肝细胞癌之间的关系。②方法 用酶联免疫吸附双抗体夹心（ＥＬＩＳＡ）方法,检测２１例无症状ＨＢＶ携带者及２２例ＨＢＶ相关性肝细胞癌病人血清ｓＦａｓ／ｓＦａｓＬ水平。③结果 与无症状ＨＢＶ携带者比较,ＨＢＶ相关性肝细胞癌病人血清ｓＦａｓ水平明显增高（ｔ＝６．９９０,Ｐ〈０．０１）,而ｓＦａｓＬ     

肝细胞不典型增生与肝硬化、肝癌及HBsAg、HBcAg的关系

本文对119例肝硬化和/或肝癌、24例正常肝组织作AFP、HBsAg、HBcAg免疫组化观察。结果表明:肝硬化和肝癌组其肝细胞不典型增生(LCD) 发生率显著高于非硬化者,同时在LCD中检出AFP,因而支持LCD为肝细胞癌的癌前病变;LCD的发生与乙型肝炎关系较大而与血吸虫感染无关。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

血清、白细胞HBV－DNA的PCR检测结果与HBV血清复制标志的关系

３０例慢性乙型肝炎患者中，有５３．３％的病人用ＰＣＲ可从清和白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ；ＨＢｅＡｇ阳性和抗－ＮＢｃ－ＩｇＭ阳性的患者１００％可以检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，而仅抗－ＨＢｃ－ＩｇＭ阳性的患者ＨＢＶ－ＤＮＡ的检出率为６６．７％。１３例乙肝血清学复制标志阴性的病人中有５例（３８．５％）也可检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。在ＨＢｓＡｇ转阴的３例病人中有１例可从白细胞中检测出ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

人肝癌组织中nm23-H1基因突变的检测及意义

目的观察肿瘤转移抑制基因nm23-H1在人原发性肝细胞癌中的突变情况,探讨nm23-H1基因突变与肝癌发生、发展及转移的关系。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性技术（PCR-SSCP）,对16例肝癌组织、12例癌旁组织和4例正常肝组织的nm23-H1基因的第1、2、4外显子突变情况突变进行检测。结果肝癌组织中有1例nm23-H1基因第1外显子纯合缺失;肝癌组织中1例第1外显子、1例第2外显子,癌旁组织中2例第2外显子有单链DNA泳动变位。结论nm23-H1基因突变在肝癌组织中发生率低。     

HBV感染与原发性肝癌关系的探讨

采用配比的方法,以原发性肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎和非肝病病人为研究对象,检测其HBV感染6项血清学标志。结果表明,原发性肝癌、肝硬化、慢性肝炎的HBV感染总阳性率分别为98.21%,93.75%和96.43%;与对照组有显著差异;3组的感染标志组合较一致,HBsAg和抗-HBc双阳性为主;HBeAg在肝硬化和慢性肝炎中明显高于肝癌组;抗-HBe和抗-HBcIgM3组间无显著差别。提示HBV感染的慢性化与原发性肝癌病因有密切联系。     

原发性肝癌与肝炎病毒感染的关系

目的探讨原发性肝癌（ＰＨＣ）与肝炎病毒感染的关系。②方法采用ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ法对１２６例ＰＨＣ病人,６０例慢性肝炎（ＣＨ）病人和６０例健康人（正常对照组）ＨＡＶ,ＨＢＶ,ＨＣＶ和ＨＥＶ等４种病毒的血清标志物进行了检测。③结果ＰＨＣ病人中ＨＢＶ感染率为９２．８５％,ＨＣＶ感染率为２０．６３％,显著高于正常对照组的１１．６７％和１．６７％（χ２＝１１．７８,１２０．５６,Ｐ＜０．０１）．５１．２８％的ＨＢＶ感染者表现为抗ＨＢｅ阳性和ＨＢｅＡｇ阴性。所有ＨＣＶ感染者均伴有ＨＢＶ感染。④结论ＰＨＣ发生除主要与ＨＢＶ感染有关外,亦与ＨＣＶ感染有关,而与ＨＡＶ和ＨＥＶ感染关系不大。     

原发性肝癌与乙型肝炎病毒感染

分析我院１００例原发性肝癌（ＰＨＣ）与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染的关系。１００例中有ＨＢＶ感染者８８例，无ＨＢＶ感染者１２例。男：女＝６．６９：１。乙肝组发生ＰＨＣ以３０～３９岁者居多，占４０．９％；平均发病年龄为３７．３岁。无乙肝组以５０～５９岁为多，占４１％，较乙肝组明显滞后。故认为，ＨＢＶ感染并发肝硬化１０年以上及ＨＢｓＡｇ与抗－ＨＢｅ阳性均可视为发生ＰＨＣ的高危人群。     

原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBV X、P基因的整合

目的 探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中乙型肝炎病毒（HBV）X、P基因整合与原发性肝细胞癌（HCC）的关系。方法 分离HBsAg阳性的40例原发性肝癌病人PBMCs,提取基因组DNA;分别设计HBVX基因、P基因PCR引物．检测HCC病人PBMCs基因组中HBV的X基因和P基因的整合情况。结果 HCC病人X基因在PBMCs中的整合率为77．5％（31/40）．P基因整合率为15．0％（6／40）,二者差异有显著性（x^2=31．43,P〈0．001）。结论 PBMCs中存在HBVX、P基因的整合．X基因片段的整合及表达是HCC发生的主要因素。