氟对体外培养软骨细胞超微结构的影响

目的观察氟化物对体外培养乳鼠软骨细胞超微结构的影响。方法采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0（对照）、5、10、20、40mg／L组,染氟培养10d后,制备乳鼠软骨细胞超薄切片,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变。结果电镜下5、10mg／L组软骨细胞增殖,双核细胞数量增多,细胞器发达,可见囊池扩张;20、40mg／L组细胞表面微绒毛减少,部分细胞染色质固缩,并凝结成块状,聚集在核膜周边,核基质密度下降,核膜迂回曲折,胞浆内线粒体空泡化,有些细胞胞浆内可见大量的囊泡,泡内含有电子致密物质;在40mg／L组中可见到凋亡细胞。结论高氟可以引起乳鼠软骨细胞超微结构的损伤。     

硒对体外培养大骨节病软骨细胞生长及凋亡的影响

目的 观察硒对体外培养大骨节病(KBD)患者和正常人关节软骨细胞增殖和凋亡的影响,探索补硒防治KBD的作用,并为硒对正常软骨细胞生长的影响提供依据.方法 依据<大骨节病临床诊断标准>(GB 16003-1995),选择Ⅱ度和Ⅲ度KBD患者5例和非病区正常人意外事故者5例的关节软骨进行体外分离、培养.KBD组和对照组分别给予不同剂量的硒(0、0.0125、0.0250、0.0500、0.1000、0.2500、0.5000、1.0000 mg/L)进行干预,采用四氮唑蓝(MTT)法、流式细胞仪和免疫组化法观察细胞生长和凋亡情况.结果 对照组第6天时各剂量组的细胞增殖率(0.086±0.025、0.077±0.012、0.073±0.027、0.071±0.017、0.058±0.028、0.052±0.028和0.046±0.037)比0 mg/L组(0.138±0.026)明显降低(P均＜0.05);0.1000～1.0000 mg/L剂量组的平均细胞增殖率为负值(-0.001±0.001、-0.003±0.000、-0.003±0.001和-0.004±0.001),显著低于0 mg/L组(0.025±0.003,P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组(0.115±0.011)比较,0.2500 mg/L剂量组促进细胞增殖(0.128±0.037,P＜0.05),1.0000 mg/L剂量组细胞生长受到抑制(0.071±0.019,P＜0.05).对照组0.0500～1.0000mg/L剂量组的细胞凋亡率[(18.88±0.02)%、(17.58±0.01)%、(17.09±0.04)%、(56.00±0.02)%、(57.85±0.03)%]比0 mg/L组[(13.51±0.01)%]增高(P均＜0.05);KBD组,与0 mg/L组[(25.84±0.02)%]比较,0.0250～0.2500 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(13.69±0.02)%、(15.96±0.03)%、(16.68±0.03)%、(16.67±0.02)%]降低,0.5000、1.0000 mg/L剂量组的细胞凋亡率[(59.58±0.03)%、(73.48±0.04)%]明显增高(P均＜0.05).KBD组0.0500～0.2500 mg/L剂量组的Fas表达[(41.2±1.5)%、(40.3±2.0)%、(50.2±2.5)%]低于同剂量硒干预的对照组[(52.4±1.0)%、(67.2±4.0)%、(75.1±5.0)%,P均＜0.05],0.0500、0.1000 mg/L剂量组的Caspase-3表达[(40.8±1.1)%、(45.1±2.1)%]低于同剂量硒干预的对照组[(68.0±3.0)%、(70.6±3.5)%,P均＜0.05].结论 适宜的补硒剂量(0.1000～0.2500 mg/L)具有促进KBD软骨细胞生长的作用,降低细胞凋亡率,但补硒剂量＞0.5000 mg/L时具有损伤作用;促进KBD软骨细胞生长的硒剂量并非也能促进正常人活体软骨细胞的生长.     

利多卡因对体外培养人关节软骨细胞凋亡的影响

目的 通过检测10 mg/ml和20 mg/ml利多卡因干预后体外培养人关节软骨细胞凋亡率的变化,探讨短时间利多卡因对正常软骨细胞是否有毒害作用.方法 正常人关节软骨组织进行消化培养获取软骨细胞,分别用PBS、10 mg,/ml利多卡因和20 mg/ml利多卡因处理24h,然后利用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡率.结果 10 mg/ml和20 mg/ml利多卡因作用后都可使体外培养的软骨细胞凋亡率明显升高,同10 mg/ml利多卡因相比,20 mg/ml更能促进软骨细胞凋亡.结论 利多卡因能够导致体外培养关节软骨细胞凋亡的增加,关节内注射利多卡因有可能加速骨性关节炎发生,临床应慎用.     

氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响

目的 探讨氟对体外培养乳鼠软骨细胞增殖的影响.方法 采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为O(对照)、5、10、20、40 ms/L组,10 d后光、电镜观察软骨细胞形态学变化;采用生长曲线、噻唑蓝(MTT)方法,在染氟24、48、72 h测定细胞数量变化及细胞增殖率.结果 染氟10 d后,镜下0、5、10mg/L组软骨细胞表现为增殖,细胞生长旺盛,均可见部分细胞核中核仁数增加:40mg/L组部分软骨细胞中有染色质固缩或凝结成块状,可见到凋亡细胞.在染氟24 h,细胞增殖活力各染氟组组间比较差异无统计学意义(F=2.313,P＞0.05).在染氟48、72 h,0 mg/L组[(23.5±4.6)%、(29.9±1.7)%]、5mg/L组[(34.6±4.7)%、(45.3±5.9)%]、10mg/L组[(39.9±4.8)%、(56.8±5.5)%]、20mg/L组[(31.8±4.1)%、(38.3±6.5)%]、40 mg/L组[(28.3±4.3)%、(33.4±4.8)%]组问比较差异有统计学意义(F值分别为11.401、25.671,P＜0.05);各染氟组细胞增殖活力与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),其中5、10ms/L组明显高于40mg/L组(P＜0.05).结论 低剂量氟在较短作用时间内可以促进体外培养小鼠软骨细胞的增殖,剂量升高时表现为抑制.     

透明质酸对体外培养大骨节病软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 通过观察透明质酸(HA)对体外培养的大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)软骨细胞增殖、凋亡的影响,为临床上HA治疗KBD提供实验依据.方法 依据<大骨节病诊断标准>(GB 16003-1995)收集KBD患者和遭遇意外事故的病人(对照组)关节软骨,分离、体外培养关节软骨细胞.选用第2代细胞进行实验.两组软骨细胞分别给予不同剂量的HA,按HA剂量分为0、100、500 mg/L组.通过二苯甲唑溴盐(MTT)实验,测定第2、4、6天HA对KBD组、对照组软骨细胞增殖的影响.并通过流式细胞检测观察HA对软骨细胞凋亡的影响.结果 对照组在第4天时,500 mg/L组(0.140 ±0.049)促软骨细胞增殖作用大于0 mg/L组(0.116±0.021);KBD组在第6天时,500 mg/L组(0.179±0.081)与0 mg/L组(0.128 ±0.017)比较,显示了明显的促增殖作用(P<0.05).KBD组细胞凋亡率100、500 mg/L组(10.458±1.143、7.877±1.346)均较0 mg/L组(12.860±2.159)下降(P<0.05);对照组500 ms/L组(4.045±1.204)较0 mg/L组(7.128±1.244)细胞凋亡率下降(P<0.05).结论 HA对KBD软骨细胞具有促进增殖和抑制软骨细胞凋亡的作用,其中500 mg/L的HA改善KBD软骨细胞代谢的作用较100 mg/L明显.     

氟对鸡胚肢软骨细胞毒作用及镁拮抗效应的研究

以鸡胚肢骨为氟中毒模型，通过鸡胚肢软骨细胞超结构观察，研究了氟对鸡胚软骨细胞的毒性作用及镁对其作用的拮抗效应。结果表明；不同剂量氟化物对鸡胚软骨细胞造成不同程度的损伤，且随剂量增加其损伤加重，镁对氟所致鸡胚软骨细胞损伤具有不同程度的保护作用。     

共聚焦激光显微内镜对组织学胃炎的诊断

目的 评价共聚焦激光显微内镜检查对于组织学胃炎的诊断价值.方法 共有149名患者进行共聚焦激光显微内镜检查.对标准部位和局灶性病变进行共聚焦扫描检查,然后对检查部位进行靶向活检.系统评价共聚焦激光显微内镜检查的结果与组织学诊断结果之间的关系.结果 共聚焦激光显微内镜检查对于萎缩诊断的敏感度、特异度、准确度分别为83.6%、99.6%、97.5%.对于中-重度中性粒细胞活动性诊断的敏感度、特异度、准确度分别为81.9%、99.3%、95.8%.对共聚焦图像进行分组观察,观察者间和观察者内一致性的平均Kappa值分别为0.749和0.811.结论 共聚焦激光显微内镜检查对于组织学胃炎的诊断具有很好的真实性和可重复性,对于组织学胃炎的判断具有潜在的临床应用价值.     

氟对软骨细胞与成骨细胞凋亡及H2O2、SOD、NO的影响

目的：研究氟对体外培养的软骨细胞、成骨细胞凋亡及H2O2、SOD、NO的影响。方法：采用流式细胞仪对细胞周期进行分析及测定凋亡细胞的百分比；化学方法检测细胞培养液中的H2O2、SOD、NO；透射电镜观察软骨细胞超微结构。结果：软骨细胞：(1)不同剂量的氟均诱导细胞凋亡，培养基中的H2O2、NO均水平高于对照组，加SOD可使H2O2、细胞凋亡百分率明显下降，NaF2O、160μmol／L可使G2／M期细胞升高。(2)NaF320μmol／L．可使细胞超微结构损伤，加SOD可拮抗氟的损伤作用。成骨细胞：与对照组相比(1)加入不同剂量NaF，培养基中的SOD活性降低。但仅在加入160、240μmol/L，培养基中H2O2升高，NO亦同时升高。(2)NaF400μmol／L可诱导成骨细胞凋亡，同时使G0／G1期细胞增多，240、400μmol／L可使G2/M期细胞减少。结论:(1)低、中剂量的氟可促进软骨细胞、成骨细胞凋亡，损害细胞超微结构。与此同时培养物中H2O2升高，SOD活性降低，表明细胞凋亡及损伤与氧化应激有关。此外，NO也升高，可能也起一定作用。氟对细胞周期的影响：对软骨细胞主要作用于G2／M期，对成骨细胞可同时作用于G0／G1及G2／M期；(2)一定量的SOD可明显拮抗氟促进的H2O2释放及细胞凋亡，对细胞有保护作用。(3)一定剂量的氟促使软骨细胞、成骨细胞凋亡，同时也促进成骨细胞增殖。可能细胞凋亡产物刺激细胞增殖过程，是氟骨症增殖病变发生机制之一，NO可能也在其中起一定作用。     

血红细胞超氧化物歧化酶制备的研究

目的 建立一种从血红细胞制备超氧化物歧化酶(SOD)的方法。方法 由血红细胞自溶液60℃热变性，乙醇—氯仿法除血红蛋白，旋转蒸发法减压浓缩抽取氯仿、乙醇，硫酸铵分级盐析法沉降SOD，SepbadexG—75层析提纯SOD等步骤构成。结果 热对SOD活性稳定性的影响及血细胞自溶液加热操作对SOD收率和纯化有影响，显示在血细胞自溶液这一环节采用热变性法，不仅起到了纯化作用，而且提高了抽提收率。结论 该方法是一条成本低、设计合理、简便实用的分离纯化SOD的路线。     

内质网应激对中性粒细胞趋化作用的影响

目的：探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)诱导脐静脉内皮细胞内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)对中性粒细胞趋化作用的影响。方法实验分4组：正常对照组、CSE刺激组、ERS抑制剂组和阴性对照组。培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs),给予不同浓度的 CSE 刺激24 h,Real time-PCR 法检测糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、趋化因子8(CXCL-8)、细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1, ICAM-1)、E-selectin mRNA 的表达水平;用 ERS 抑制剂4-苯基丁酸(4-phenylbutyrate,4-PBA)干预,ELISA法检测各组 HUVECs 的 CXCL-8蛋白表达水平,Transwell趋化实验检测各组培养上清对正常人外周血中性粒细胞的趋化作用。结果 CSE 增强 GRP78及CXCL-8、ICAM-1、E-selectin mRNA的表达,并在一定范围内具有浓度依赖性;ERS 抑制剂4-PBA减少CXCL-8的分泌(q=8.370,P<0.05),并减弱中性粒细胞的趋化作用(q=4.808,P<0.05)。结论 CSE诱导 HUVECs ERS,并上调 CXCL-8、ICAM-1、E-selectin的基因转录;4-PBA 减弱中性粒细胞的趋化作用,可能与减少CXCL-8分泌作用有关。     

超氧化物歧化酶对实验性糖尿病的预防及治疗作用观察

用国产牛／猪红细胞超氧化物歧化酶对糖尿病进行干预治疗，以期了解使用抗氧化酶能否影响糖尿病的进程。     

替米沙坦对糖尿病大鼠肾脏组织中内质网应激介导相关细胞凋亡的保护作用

探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂对糖尿病大鼠肾脏组织中内质网应激相关的细胞凋亡的影响.31只雄性SD大鼠分为正常对照组、糖尿病组、替米沙坦干预组.12周试验结束后测量大鼠体重、24h尿蛋白量,检测血糖、血胰岛素、血肌酐等.肾脏细胞凋亡用TUNEL法检测;肾脏细胞内质网应激信号通路分子糖调节蛋白78( GRP78)、caspase12和CHOP用免疫组化及实时定量PCR法检测.糖尿病组的血糖、24h尿蛋白量、血肌酐显著高于对照组(P＜0.05);体重和血胰岛素较对照组低(P＜0.05).替米沙坦干预组的24h尿蛋白量、血肌酐较糖尿病组明显减少(P＜0.05),凋亡指数也显著低于糖尿病组(P＜0.05).大鼠内质网应激信号通路分子GRP78、caspase12、CHOP蛋白及其mRNA的表达,糖尿病组显著高于对照组和替米沙坦干预组(P＜0.05).内质网应激参与了糖尿病大鼠肾脏细胞的凋亡,替米沙坦对内质网应激介导相关的肾脏细胞凋亡有保护作用.     

N-乙酰半胱氨酸对内质网应激介导的HepG2细胞凋亡的作用

目的 了解N-乙酰半胱氨酸(NAC)对内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡的阻抑作用,探讨其治疗肝细胞损伤的作用机制.方法 用过氧化氢(H2O2)诱导HepG2细胞,建立内质网氧化应激凋亡模型,用NAC进行干预.通过四甲基偶氮唑盐、DNA梯度分析,Western blot、流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)的产生等方法,了解NAC对H2O2诱导HepG2细胞的凋亡率、凋亡信号蛋白的表达以及ROS产生的影响.结果 用不同浓度H2O2(0、1、3,5 mmol/L)诱导HepG2细胞6 h后,发现随着H2O2浓度增加,细胞活力下降,凋亡率增加,分别为0.7%±0.5%、26.4%±1.8%、29.7%±1.2%、51.2%±9.4%;细胞凋亡信号蛋白表达增加,ROS产生增多,分别为14.0%±0.5%、95.2%±0.1%、97.5%±0.25%、98.3%±0.2%;在3 mmol/L时出现典型内质网氧化应激凋亡形态学改变.用NAC(10、20 mmol/L)干预后发现,NAC可明显提高细胞活力、细胞凋亡率由29.7%±1.2%降至23.3%±4.7%和14.3%±1.2%,细胞凋亡过程中凋亡信号蛋白的表达减少、细胞内ROS的产生率由97.5%±0.2%降至52.2%±0.8%和51.2%±2.9%.结论 NAC能对氧自由基反应有直接抑制作用,阻断内质网氧化应激介导的肝细胞凋亡,减轻肝细胞损伤.     

间歇低氧与内质网应激关系的研究进展

内质网是蛋白质折叠和转运的重要场所,机体受到多种刺激可引起细胞内一系列反应,称为内质网应激(ERS)。OSAHS特征性的间歇低氧可引起 ERS,而 ERS在 OSAHS造成多系统损害中发挥的作用受到越来越多的关注,本文就间歇低氧与 ERS相互关系作一综述。     

超氧化物歧化酶对链脲佐菌素诱发糖尿病自由基代谢的影响

给链脲佐菌素诱导的糖尿病模型大鼠以超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），观察其自由基代谢改变，结果表明，ＳＯＤ对改善糖尿病模型大鼠自由基代谢异常有作用。     

deltaPKC participates in the endoplasmic reticulum stress-induced response in cultured cardiac myocytes and ischemic heart

The cellular response to excessive endoplasmic reticulum (ER) stress includes the activation of signaling pathways, which lead to apoptotic cell death. Here we show that treatment of cultured cardiac myocytes with tunicamycin, an agent that induces ER stress, causes the rapid translocation of deltaPKC to the ER. We further demonstrate that inhibition of deltaPKC using the deltaPKC-specific antagonist peptide, deltaV1-1, reduces tunicamycin-induced apoptotic cell death, and inhibits expression of specific ER stress response markers such as CHOP, GRP78 and phosphorylation of JNK. The physiological importance of deltaPKC in this event is further supported by our findings that the ER stress response is also induced in hearts subjected to ischemia and reperfusion injury and that this response also involves deltaPKC translocation to the ER. We found that the levels of the ER chaperone, GRP78, the spliced XBP-1 and the phosphorylation of JNK are all increased following ischemia and reperfusion and that deltaPKC inhibition by deltaV1-1 blocks these events. Therefore, ischemia-reperfusion injury induces ER stress in the myocardium in a mechanism that requires deltaPKC activity. Taken together, our data show for the first time that deltaPKC activation plays a critical role in the ER stress-mediated response and the resultant cell death.     

内质网应激在高脂血症相关性大鼠急性胰腺炎发病中的作用

目的探讨内质网应激在高脂血症大鼠合并急性胰腺炎（AP）发病中的作用。方法48只大鼠分为单纯AP组（n=18，正常大鼠腹腔内注射雨蛙肽40μg／kg×2次，间隔2h）、正常组（n=6）、高脂血症组（n=6，普通饲料＋3％胆固醇＋20％猪油）和高脂血症性AP组（n=18，高脂血症大鼠腹腔内注射雨蛙肽40μg／kg×2次，间隔2h）。单纯AP组和高脂血症性AP组大鼠均于造模后9、12、24h分批处死（n=6），测定血淀粉酶活性，评价胰腺病理变化；TUNEL法评价胰腺组织凋亡指数；免疫组化法检测胰腺内葡萄糖调节蛋白（GRP）78／Bip的蛋白表达；PT-PCR法检测胰腺组织内内质网应激过程中的重要分子GRP78／Bip、X结合蛋白（XBP）-1、CHOP／GADD153（C／EBP-homolo-gous protein，or growth arrest and DNA-damage-inducible gene 153）、caspase-12的基因动态表达；Western印迹法检测GRP78、caspase-12蛋白的动态表达。结果大鼠喂饲高脂饮食8周后，三酰甘油[（0、99±0．38）mmol／L]和胆固醇[（3．17±0．18）mmol／L]明显升高，且较正常组高281％和96％（P〈0．05）；高脂血症性AP组血清淀粉酶活性较单纯AP组高，胰腺病理变化亦较单纯AP组严重（P〈0、05），尤其在造模后9h最为显著。高脂血症AP大鼠造模后9、12、24h，胰腺腺泡细胞凋亡均较正常组明显（P〈0.05）；GRP78／Bip表达明显；CH（）P／GADD153在造膜12、24h时表达与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）；在造模后12、24h时胰腺组织发生XBP-1和caspase-12分裂，而正常组则无。结论内质网应激参与了高脂血症性AP的发病，并可通过caspase-12通路诱导胰腺腺泡细胞发生凋亡，加重AP病程。