维生素E琥珀酸酯处理人胃癌细胞过程中自噬与活性氧蓄积的交互作用

目的：探讨维生素E琥珀酸酯（VES）处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬与活性氧（ROS）蓄积是否存在交互作用。方法：不同剂量（0、5、10、15、20 μg/mL）VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,采用免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白微管相关蛋白l轻链3（LC3）的荧光强度和分布情况,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,流式细胞术检测细胞内ROS水平;用ROS淬灭剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理2 h后以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,免疫荧光染色观察细胞内LC3荧光强度和分布情况,Western blot检测LC3和Beclin-1的表达情况;RNA瞬时干扰阻断BECN-1基因的表达后,以20 μg/mL VES处理人胃癌SGC-7901细胞24 h,流式细胞术检测细胞内ROS水平。结果：与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,LC3的荧光强度逐渐增强;LC3和Beclin-1蛋白表达均逐渐升高;流式细胞术检测结果显示胞内ROS水平逐渐增强;淬灭ROS之后LC3荧光强度以及LC3和Beclin-1蛋白表达水平均明显低于VES单独处理组（P<0.05）;阻断自噬关键基因BECN-1后细胞内ROS水平高于VES单独处理组（P<0.05）。结论：VES可诱导人胃癌细胞发生自噬及ROS蓄积,并且VES处理人胃癌细胞过程中自噬与ROS水平可以相互调节,具有交互作用。     

维生素E琥珀酸酯诱导内质网应激激活JNK的表达对人胃癌SGC-7901细胞自噬的影响

目的:研究c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)激活内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞自噬过程中发挥的作用.方法:用不同剂量VES(5、10、15、20μg/ml)分别处理SGC-7901细胞24 h,采...     

AMPK在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞自噬中的作用研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）是否影响人胃癌SGC-7901细胞中腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）活性,并探讨AMPK在VES诱导自噬中的作用。方法：用不同剂量（5、10、15、20 μg/mL）VES处理SGC-7901细胞24 h,以及20 μg/mL VES分别处理SGC-7901细胞3、6、12、24 h后,Western blot法检测SGC-7901细胞中自噬标志蛋白LC3、Beclin-1及AMPK、ACC及其磷酸化蛋白的表达。用RNAi技术沉默AMPK,20 μg/mLVES处理SGC-7901细胞24 h,Western blot法检测LC3、Beclin-1蛋白以及AMPK、mTOR、p70S6K与4EBP-1及其磷酸化蛋白表达,并采用荧光定量PCR法检测LC3 mRNA表达情况。结果：VES处理SGC-7901细胞后,与对照组比较,随着VES剂量的增加、作用时间的增长,AMPK磷酸化水平上升,LC3、Beclin-1蛋白表达增加（P<0.05）。RNAi沉默AMPK后,与单纯VES处理组比较,LC3、Beclin-1蛋白表达降低,LC3 mRNA表达下降（P<0.05）;mTOR、p70S6K及4EBP-1磷酸化活性升高（P<0.05）。结论：VES可诱导SGC-7901细胞中AMPK活化,AMPK活化后影响mTOR及其下游分子活性,继而诱导自噬的发生。     

维生素E琥珀酸酯通过内质网应激诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的:探讨内质网应激在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用。方法:分别采用Western blotting和RT-PCR检测VES不同剂量(0、5、10和20μg/ml)处理SGC-7901细胞24 h和20μg/ml VES处理SGC-7901细胞不同时间对内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白(glucose regulative protein,GRP)GRP78、GRP94和内质网应激凋亡途径关键因子C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,CHOP)的蛋白和mRNA表达的影响;进一步采用RNA瞬时干扰阻断CHOP的表达后用20μg/ml VES作用SGC-7901细胞24 h,采用DAPI染色法观察细胞凋亡的改变。结果:20μg/ml VES组在mRNA水平卜均诱导GRP78、GRP94和CHOP的表达增加;在蛋白水平上20μg/ml VES显著增加GRP78和CHOP的表达,GRP94表达先降低,而后又升高;阻断CHOP后VES诱导的细胞凋亡由46.3%降低为27.9%(P0.05)。结论:内质网应激可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生未折叠蛋白反应的研究

目的：探讨维生素E琥珀酸酯（VES）对人胃癌细胞未折叠蛋白反应的影响。方法：采用Western blot法分析VES不同剂量（0、5、10和20 μg/mL）处理人胃癌SGC-7901细胞24 h和20 μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间（0、6、12、18和24 h）对内质网膜上的跨膜蛋白PKR样内质网蛋白激酶（PERK）磷酸化和活化转录因子6（ATF6）活化的影响;采用RT-PCR法检测VES不同剂量（0、5、10和20 μg/mL）处理SGC-7901细胞24 h和20 μg/mL VES处理SGC-7901细胞不同时间（0、3、6、9、12、15、18和24 h）对活化转录因子4（ATF4）mRNA表达和X盒结合蛋白1（XBP1）mRNA剪切的影响。结果：在翻译水平上VES对磷酸化PERK的诱导作用具有时间依赖关系,与阴性对照组比较,10 μg/mL VES的诱导作用最强（P < 0.05）;在翻译水平上VES对ATF6活化片段的诱导作用具有时间依赖关系和剂量依赖关系;在转录水平上,随着作用时间的延长,VES对ATF4 mRNA的诱导作用也不断增强,18 h达到高峰,而XBP1 mRNA从VES作用6 h即开始出现剪切。结论：VES诱导人胃癌SGC-7901细胞发生内质网应激过程中,未折叠蛋白反应相关信号分子被活化。     

维生素E琥珀酸酯通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞SGC-7901发生保护性自噬

目的： 观察维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)处理SGC-7901细胞后是否发生自噬,并探讨自噬在VES抑制细胞增殖中的作用。方法：用不同浓度 (0、5、10、15、20 μg/mL)VES处理SGC-7901细胞24 h后,电子显微镜观察自噬体形态;VES处理转染GFP-LC3质粒后的SGC-7901细胞,荧光显微镜观察自噬情况;Western blot检测自噬标志蛋白LC3,以及Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR活性变化;采用自噬抑制剂氯喹 (chloroquine,CQ)和3-甲基腺苷 (3-methyladenine,3-MA)处理细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。结果：电子显微镜观察显示经不同浓度VES处理后,细胞中出现了典型的自噬囊泡以及自噬溶酶体等自噬各阶段的形态变化;荧光显微镜观察显示GFP-LC3质粒转染后随VES处理剂量的增加,绿色点状荧光逐渐聚集增强;Western blot结果显示,VES可使LC3-Ⅱ蛋白表达增强;并下调Akt/mTOR通路关键分子Akt,mTOR的活性;MTT结果显示VES+CQ组和VES+3-MA组的细胞增殖抑制率均明显高于VES单独处理组 (P均 <0.05),即自噬抑制剂CQ与3-MA预处理使细胞增殖率进一步下降,提示VES诱导的肿瘤细胞自噬对肿瘤细胞增殖具有保护作用。结论：VES可以通过抑制Akt/mTOR通路活性诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞发生自噬,且此种自噬为保护性自噬。     

酸性神经磷脂酶在维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响

目的： 探讨酸性神经磷脂酶 (acid sphingomyelinase,ASMase)在维生素E琥珀酸酯 (vitamin E succinate,VES)诱导胃癌细胞凋亡过程中对内质网应激的影响。方法：常规体外培养人低分化胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为ASMase抑制剂地昔帕明 (desipramine,DES)处理组 (12.5 μmol/L DES作用2 h),对照组 (含2％胎牛血清的RPMI-1640培养液),VES+DES组 (用12.5 μmol/L DES抑制ASMase活性2 h后加20 μg/mL VES)以及VES处理组 (20 μg/mL)。以ASMase活性试剂盒检测0、1.5、3、6 h时VES+DES组及VES处理组细胞中ASMase活性。MTT法分别检测12、24和48 h时各组细胞的增殖情况。再在处理细胞24 h后,采用倒置显微镜观察各组细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、Perk、p-Perk、Chop和Caspase-4的表达。结果：VES (20 μg/mL)处理能够诱导细胞中ASMase活性增加,在3 h时细胞中ASMase活性达到最高,随后逐渐降低;VES+DES组细胞中ASMase活性始终维持在较低的水平。与对照组相比,DES组在各项检测中均无明显变化,而VES组与VES+DES组在处理细胞12、24与48 h后,细胞的增殖受到明显抑制 (P均<0.05),并呈时间-效应趋势,且VES+DES组细胞不同时间点的相对增殖率均明显高于VES组 (P均<0.05);细胞形态学显示20 μg/mL VES处理细胞后,镜下死细胞明显增多,而VES+DES组死亡细胞数量较VES组减少;流式细胞术检测凋亡率显示VES处理组为 39.21%±1.90%,明显高于空白对照组(3.91%±1.68%)与DES组(4.07%±1.39%) (P均<0.05),VES+DES组 (19.47%±4.46%)较VES组明显降低 (P<0.05);Western blot结果显示VES+DES组细胞中内质网应激相关蛋白GRP78、GRP94、p-Perk、Chop以及c-Caspase-4表达水平较单纯VES处理组降低 (P均<0.05)。结论：ASMase参与VES通过内质网应激诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的过程,起促进凋亡的作用。     

淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧对维生素E琥珀酸脂诱导内质网应激的影响

目的：探讨淬灭胃癌SGC-7901细胞内活性氧（ROS）对维生素E琥珀酸脂（VES）诱导内质网应激的影响。方法：将不同浓度（1、5、10和20 mmol/L）N-乙酰半胱氨酸（NAC）作用胃癌SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理12 h,经2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠（DCFH-DA）染色后,采用激光共聚焦显微镜观察细胞内ROS水平。另将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES处理细胞12 h,经DCFH-DA染色后,流式细胞术进一步检测细胞内ROS水平。将20 mmol/L NAC作用SGC-7901细胞2 h,再加入20 μg/mL VES分别处理15和24 h后,分别采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting法检测内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达。结果：与单纯VES处理组相比,20 mmol/L NAC预处理组胃癌细胞内ROS下降最为明显（P < 0.05）。与对照组相比,20 μg/mL VES能够诱导胃癌细胞内GRP78和CHOP mRNA及蛋白的表达明显增加（P < 0.05）;而与单纯20 μg/mL VES处理组相比,20 mmol/L NAC对VES诱导GRP78和CHOP mRNA及蛋白表达具有显著的抑制作用（P < 0.05）。结论：在体外,淬灭胃癌细胞内ROS能够抑制VES诱导的内质网应激反应。     

维生素E琥珀酸酯抑制胃癌作用研究进展

维生素E琥珀酸酯(VES)是一种有效的肿瘤预防／治疗剂，可通过多种作用抑制肿瘤的发生发展。本文主要阐述了VES对人胃腺癌SGC-7901细胞生长和B(a)P诱导的小鼠前胃癌的抑制作用及其机制。     

BaX在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用

背景与目的:探讨Bax蛋白在维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用.材料与方法:用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡的形态学改变;Westem Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞中Bax蛋白表达量的影响和VES对Bax蛋白与细胞色素c(cytochrome c,Cyt c)蛋白在细胞内分布的影响;用Mito Tracker RedCMXRos荧光染色观察线粒体膜电位(△Ψm)的变化.结果:VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡,提高Bax蛋白表达水平,并使Bax蛋白从胞浆转移到线粒体;VES作用后发生线粒体膜电位下降,Cyt c从线粒体释放到胞浆.结论:VES可能通过Bax蛋白来启动线粒体凋亡途径,诱导SGC-7901细胞发生凋亡.     

Osthole induces apoptosis of the HT-29 cells via endoplasmic reticulum stress and autophagy

Endoplasmic reticulum stress (ERS) and autophagy are important pathways, which induce apoptosis of tumor cells. Osthole has been demonstrated to exert anticancer effects via the induction of apoptosis in several human colon cancer lines, but the mechanism underlying its involvement in the induction of ERS and autophagy in the human HT-29 colorectal cancer cell line remains unknown. The present study aimed to identify the possible signaling pathways involved in osthole-induced apoptosis of HT29 cells. Methodologically, colony formation and Cell Counting Kit-8 assays were used to assess cell proliferation and viability, respectively, while flow cytometry was performed to investigate apoptosis. Signaling pathways, including apoptosis, autophagy and ERS, were also investigated in the HT-29 cell line using western blot analysis. The results demonstrated that osthole inhibited cellular proliferation and viability in a dose-dependent manner. In addition, osthole induced the expression level of proteins associated with mitochondria-mediated cell apoptosis, autophagy and ERS. The association between autophagy and ERS in osthole-induced apoptosis in the HT-29 cell line was further clarified. Inhibiting cell autophagy with the inhibitor, 3-methyladenine, suppressed osthole-induced cell apoptosis and enhanced osthole-induced ERS. By contrast, alleviating ERS with the inhibitor, 4-phenylbutyric acid attenuated osthole-induced cell apoptosis and autophagy. In conclusion, osthole could significantly suppress the proliferation and viability of the HT-29 colorectal cancer cell line and induce cell apoptosis via autophagy and ERS. Furthermore, ERS may play a more important role in osthole-induced cell apoptosis.     

小檗胺通过内质网应激通路诱导胃癌细胞A GS凋亡

目的:研究小檗胺对人胃癌细胞AGS增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:应用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定细胞活力;膜联蛋白V/碘化丙啶(An-nexin V/PI)细胞凋亡法测定细胞凋亡;Western blot法测定Bcl-2、Bax、chop、GRP78和cle...     

Ampelopsin‐induced autophagy protects breast cancer cells from apoptosis through Akt‐mTOR pathway via endoplasmic reticulum stress

Our previous study has shown that ampelopsin (AMP), a flavonol mainly found in Ampelopsis grossedentata, could induce cell death in human breast cancer cells via reactive oxygen species generation and endoplasmic reticulum (ER) stress pathway. Here, we examined whether autophagy is activated in AMP‐treated breast cancer cells and, if so, sought to find the exact role and underlying molecular profile of autophagy in AMP‐induced cell death. Our results showed that AMP treatment activated autophagy in MDA‐MB‐231 and MCF‐7 breast cancer cells, as evidenced by the accumulation of autophagosomes, an increase of microtubule‐associated protein 1 light chain 3 beta‐2 (LC3B‐II) and the conversion of LC3B‐I to LC3B‐II, the degradation of the selective autophagic target p62/SQSTM1, and the formation of green fluorescent protein (GFP)‐LC3 puncta. Blockage of autophagy augmented AMP‐induced cell death, suggesting that autophagy has cytoprotective effects. Meanwhile, AMP treatment suppressed Akt‐mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway as evidenced by dose‐ and time‐dependent decrease of the phosphorylation of Akt, mTOR and ribosomal protein S6 kinase (p70S6K), whereas Akt activator insulin‐like growth factor‐1 (IGF‐1) pretreatment partially restored Akt‐mTOR pathway inhibited by AMP and decreased AMP‐inuduced autophagy, signifying that AMP activated autophagy via inhibition of the Akt‐mTOR pathway. Additionally, blocking ER stress not only reduced autophagy induction, but also alleviated inhibition of the Akt‐mTOR pathway induced by AMP, suggesting that activation of ER stress was involved in induction of autophagy and inhibition of the Akt‐mTOR pathway. Taken together, these findings indicate that AMP induces protective autophagy in human breast cancer cells through Akt‐mTOR pathway via ER stress.