TT病毒感染与输血关系的研究

为了解TT病毒 (TTV)感染与输血的关系 ,我们根据Okamoto( 1 ) 报道的TTV全序列设计两对引物 ,采用巢式聚合酶链反应 (NestedPCR)检测了 84例血液病患者输血前后血清中的TTV -DNA ,并以 12 0例健康献血员作为正常对照。结果血液病患者输血前后TTV阳性率 2 6%和 65 %有显著性差异 (P <0 .0 0 1) ,而健康献血员TTV阳性率也达 19% ( 2 3 /12 0 ) ,提示输血可使TTV感染增多 ,但输血后TTV感染是否会引起急性肝炎 ,TTV -DNA阳性与肝功能损伤是否有相关性 ,有待进一步的研究。     

肝病患者中TT病毒的检测

目的：在153例肝病患中分析新型肝炎病毒TTV的感染状况。方法：通过设计特异引物采用半巢式PCR反应进行血清标本的TTV DNA检测。结果：在153例肝病患中,第1轮PCR未见明显的扩增带,在第2轮PCR中33例具扩增带,阳性率为21．6％。其中31例慢性肝炎中6例呈阳性,24例肝硬化中2例阳性,6例肝癌和4例急性肝炎中各1例呈阳性,88例不明原因的肝功能异常中23例呈阳性。而8例肝功能正常无1例呈阳性。结论：通过检测在肝病患中存在TTV感染,这可能是另一种新型的肝炎病原。     

TT病毒在各型肝病患者中的感染状况及临床意义

采用套式聚合酶链反应 (Nest -PCR)分别检测 2 5 0例各型肝病患者和 15 8例献血员血清的TTV -DNA ,旨在了解太仓地区各型肝病患者人群中TT病毒 (TTV)的感染情况 ,以及TTV与肝脏疾病的相关性。结果显示本地区各型肝病患者中均有较高的检测率 ,其阳性率显著高于献血员 (P <0 .0 5 ) ,提示TTV与肝脏疾病有相关性     

TT病毒感染者外周血单个核细胞中TT病毒的研究

目的 了解ＴＴＶ阳性肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况。方法 采用巢式ＰＣＲ（ｎＰＣＲ）技术和绿豆芽核酸酶消化单链ＤＮＡ方法研究在ＰＢＭＣ中的ＴＴＶ ＤＮＡ存在及复制情况，并克隆测序分析证实。１６例血标本（血清和ＰＢＭＣ）和粪便标本来自北京地坛医院１９９７年１０月～１９９８年１０月住院患者。结果 １６ＴＴＶ阳性肝炎患者ＰＢＭＣ中有１４例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，粪便中有５例     

海口市吸毒人群TT病毒感染情况的调查

目的：了解TT病毒在吸毒人群中的感染情况和传播途径。方法：对海口市公安局戒毒所收容的221例吸毒进行不同因素分析，采用巢式PCR法检测血清中的TTV DNA，同时检测血清中的甲型肝炎病毒（HAV）、庚型肝炎病毒（HGV）、艾滋病（HIV）和梅毒。结果：211例吸毒血清中TTV DNA阳性检出率为31．6％（70／221），HAV、HBV、HCV、HEV、HGV、HIV和梅毒阳性检出率分别为0．4％（1／221）、45．7％（101／221）、11．8％（26／221）、2．2％（5／221）、10．4％（23／221）、0（0／221）、5．9％（13／221）。结论：吸毒人群是TT病毒感染的高危人群；静脉注射毒品、有非固定婚外性伴侣等因素与TT病毒感染密切相关；TT病毒与甲－庚型肝炎病毒的存在合并感染，其中乙型及丙型肝炎重叠TT病毒感染较常见。另外，我们在1例HAV阳性的血清中也检出TTV DNA，提示TT病毒除存在血液传播途径外，还可能存在非血源性的感染传播途径。     

TT病毒在人类肝病中的感染状况分析

目的了解各类肝病患者TT病毒（transfusion-transmitted virus，TTV）的感染率，分析TT病毒与已知肝炎病毒的交叉感染情况，探讨TT病毒与肝硬化、肝癌的关系以及是否是非甲～非庚型肝炎患者的主要致病因子。方法采用微板双探针核酸杂交酶免疫方法对TTV基因扩增产物进行定性检测。结果东营地区不同人群TT病毒阳性率分别为，甲肝患者37.50%（6/16），乙肝患者40.00%（18/45），丙肝患者44.44%（24/54），戊肝患者31.25%（10/32），不明原因转氨酶升高患者25.93%（7/27），肝硬化患者47.06%（24/51），肝癌患者31.91%（15/41）。结论东营地区TT病毒存在与已知病毒性肝炎的合并感染，并且血源性传播肝炎的TT病毒感染率明显高于健康志愿人群。是已知肝炎病毒的辅助因子，并可能是肝硬化潜在的致病因子。     

TT病毒核酸和抗体在肝病患者中的检测及临床意义

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,分别检测１３２例各型肝病患者和１２０例献血员血清ＴＴＶ－ＤＮＡ和抗ＴＴＶ－ＩｇＧ。结果两种方法的检出率有较大的差异。ＰＣＲ法的敏感度和重复性均优于ＥＬＩＳＡ法。病毒在肝病患者中的阳性率显著高于献血员（Ｐ〈０．０５）,提示ＴＴ病毒可能与肝脏疾病有相关性。     

太原地区TT病毒感染的分子流行病学研究

目的：了解太原地区不同人群TT病毒（TTV）感染状况及基因型的分布情况。方法：采用聚合酶链反应（PCR）法对本地区不同人群血清标本进行检测,并分析其基因型。结果：196例中非甲-庚型肝炎患者31例;职业献血员53例,健康产妇112例,其血清TTV DNA阳性率分别为29.03%、58.49%、8.93%。10例TTV DNA阳性产妇的脐血TTV DNA为阴性。对4株TTV进行部分基因序列检测,结果表明其同源性在90%以上,均属同一基因型。结论：太原地区存在TTV感染,很可能是非甲-庚型肝炎的重要病原,且在职业献血员和慢性肝病患者中存在较高的感染率,本地区TTV主要为1a基因型。     

400例献血员TT病毒检测与分析

目的探讨靖江地区献血员中TT病毒(TTV)感染情况。方法用套式-聚合酶链反应(nested—PCR)对400名职业献血员作TT病毒检测。结果发现阳性36名，阳性率为9％。从中随机取10名作序列分析，并与日本报道的N22克隆核苷酸序列相比较，发现同源性为89％-99．5％。结论TTV检测对保障输血安全至为重要。     

聚合酶链反应对输血后丙型肝炎的诊断研究

为研究丙型肝炎病毒血症的诊断,以三组与病毒不同区段互补的引物进行反转录巢式聚合酶链反应检测输血后肝炎17例(急性期14例)。按日本毒株的引物检出35％,按非编码区序列的引物检出76％的HCV RNA,两组引物共检出94％,而按Chiron原型的引物检测6例均阴性。HCV多变异,且血清水平极低,用几组不同保守区段的引物,进行巢式PCR,可以获得较高的检出率。     

TTV核酸模板快速制备方法

目的 寻求建立适合大批量临床标本检测TT病毒（TTV）核酸快速制备方法,直接用于PCR扩增。方法 应用蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法与直接快速裂解法,分别制备TTV核酸做PCR模板,用于TTV的聚合酶链反应的快速检测。结果 在30例非甲－非庚型肝炎血清和50例慢性乙型肝炎患血清,应用经典的蛋白酶K裂解酚氯仿抽取法和直接快速裂解法,分别制备TTV核酸模板,在相同条件下进行PCR扩增,结果两种制备方法的符合率为89％。结论 TTV是一种新发现的肝炎病毒,目前主要以实验室检测病毒核酸的存在为诊断依据,建立了具有快速、简便、适合大批量临床标本中TTV核酸制备方法,对TTV肝炎的快速诊断,具有重要的意义。     

湖南地区输血传播肝炎病毒感染者的初步观察

为观察湖南地区输血传播病毒（ＴＴＶ）的感染情况,合成了特异性引物,采用巢式聚合酶链反应两次扩增血清ＴＴＶＤＮＡ。共检测７０例肝炎病人血清和４３例献血员血清。结果显示：在３８例血清ＨＢｓＡｇ阳性、ＨＢｅＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ阴性的病人中,１０例ＴＴＶＤＮＡ阳性（２６３％）,ＡＬＴ平均为（４５２±２３６）Ｕ·Ｌ－１;３２例血清甲～戊型和庚型肝炎标志物阴性的病人中,１２例ＴＴＶＤＮＡ阳性（３７５％）,ＡＬＴ平均为（５８２±２５９）Ｕ·Ｌ－１;４３例献血员中,４例ＴＴＶＤＮＡ阳性（９３％）,ＡＬＴ在正常范围。提示湖南地区首次发现ＴＴＶ感染者。本资料与日本首次报道者相近;不能排除ＴＴＶ感染与ＡＬＴ升高的关系。     

西安地区病毒性肝炎患者TTV DNA的检测及临床意义

目的 调查西安地区不同类型肝炎患者输血传播病毒（ＴＴＶ）感染状况并探讨其临床意义。方法 在病毒ＯＲＦ１区设计内／外两对引物,采取ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ方法,检测病毒性肝炎患者１４７例和非病毒性肝炎患者１２８全血清中ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 在肝炎组中,ＴＴＶ基因检测阳性率分别淡非甲非戊型肝炎６０．０％（９／１５）,庚型肝炎５０．０％（６／１２）,乙型肝炎２６．２％（２１／８０）,丙型肝炎１１．１％（３／     

两例TTV感染者不同TTV克隆的DNA序列分析

目的探讨TTV的基因变异及其与致病性的关系。方法在ORF1区的高变区设计特异性引物建立巢式多聚酶链反应（PCR），扩增献血员与慢性非甲-庚型重型肝炎患者血清中的TTV DNA。PCR产物纯化回收后进行分子克隆，每例挑选10个不同TTV DNA克隆进行测序。不同们TTV DNA克隆之间及其与日本株TA278之间进行序列比较并进行进化树分析。结果成功地构建了TTV DNA克隆。与G1a亚型TA278的序列相比较有74％～95％的同源。献血员存在2种不同的TTV病毒株，其序列有7％的差异，都为G1a亚型。慢性非甲-庚型重型肝炎患者中存在7种不同的TTV病毒株，彼此之间序列有5％～24％不同，分别属于G1a和G1b亚型。结论慢性非甲-庚型重型肝炎患者中TTV的基因变异比献血员中的复杂得多。TTV基因变异的复杂性及其基因变异过程中可能产生的强毒力病毒株均有可能在其致病机制中起一定作用。G1b亚型可能有一定的致病性。     

输血传播病毒TTV致病性的探讨

目的　通过病例对比 ,进一步研究 TTV是否有致病性 ;对 1例西安地区非甲 -非戊型肝炎但血清 TTV阳性患者套式 PCR终产物纯化测序 ,在验证我们 TTV DNA检测正确性的同时初步研究西安地区 TTV流行株部分分子生物学特点 .方法　在 TTV ORF1区参照文献 [1]设计一套套式 PCR引物 ,并建立稳定的套式 PCR检测法 ,对西安地区 119例非甲 -非戊型肝炎患者及 16 2例健康有偿献血员进行 TTV对比检测和统计学处理 ;对 1例患者套式 PCR终产物纯化测序 ,用 DNAsis软件在计算机上与中国 1株做同源性比较阳性 .结果　 119例非甲 -非戊型肝炎患者中 37例 TTV DNA阳性 ,阳性率 31.1% ;16 2例健康有偿献血员中 TTV DNA阳性 30例 ,阳性率 18.5 % ;两组有明显的统计学差异 (P<0 .0 5 ,χ2 =5 .2 5 1) .对 1例非甲 -非戊型肝炎患者血清 TTV套式 PCR终产物纯化直接测序 ,测得 143bp序列 ,经计算机比较 ,其与中国 1株同源性为 6 5 .0 % ,差异率为 35 .0 % (>30 .0 % ) .其中6 2 bp序列同源性高达 75 .8% .结论　 TTV可能有致病性 ;西安地区可能存在新的 TTV流行株     

输血传播病毒在原发性肝癌患者中的感染状况研究

目的 了解新型肝炎病毒输血传播病毒（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ，ＴＴＶ）在原发性肝癌（ＰＬＣ）患者中的感染状况。方法 在ＴＴＶ长的ＯＲＦ保守区设计引物，建立巢式聚合酴链反应（ＰＣＲ）技术，检测了１５１例原发性肝癌患者血清中ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 １５１例原发性肝癌患者中有２８例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性，阳性率为１８．５％；而同时检测１２５例正常人血清只３例ＴＴＶ阳性，阳性率     

应用熔点曲线分析输血传播病毒的基因变异

目的研究输血传播病毒(TTV)的基因变异及其临床意义。方法采用巢式荧光实时多聚酶链式反应(PCR)扩增TTVDNA,收集TTVDNA阳性病例142例。其中献血员4例;非甲-非庚型慢性肝炎患者16例;乙型肝炎病毒携带者(ASC)7例;慢性乙型肝炎患者(CHB)39例;慢性重型乙型肝炎患者(CSHB)76例。采用熔点曲线方法进行TTV基因变异检测。结果非甲-非庚型肝炎患者熔点曲线波峰数量显著多于献血员(P<0.05);重型与重度肝炎患者组中熔点曲线波峰数量显著多于中度患者(P<0.05),重度肝炎患者熔点曲线波峰数量与重型患者比较差异无显著(P>0.05)。乙型肝炎病毒感染者中CHB和CSHB组中熔点曲线波峰数量显著多于献血员及ASC组(P<0.05),CSHB和CHB重度熔点曲线波峰数量显著多于CHB中度患者(P<0.05)。但CHB重度患者TTVDNA熔点曲线波峰数量与CSHB相比较差异无显著(P>0.05)。结论TTV存在基因变异;TTV基因变异株的复杂性或称准种感染的复杂性可能是TTV与HBV感染者重叠感染使病情加重的因素之一;熔点曲线可以用于基因变异分析。     

HBV感染者重叠感染TTV的研究

目的 研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者重叠感染输血传播病毒（ＴＴＶ）的状况。方法 采用斑点杂交法检测乙型肝炎病毒感染者血清ＴＴＶ ＤＮＡ。结果 在１６９例乙型肝炎病毒感染者中检出血清ＴＴＶ ＤＮＡ阳性者２３例,阳性率１３．６１％。其中,急性乙型肝炎患者组阳性率１３．４６％,慢性乙型肝炎患者组和阳性率１５．０７％,ＨＢｓＡｇ携带者组阳性率１１．３６％,三者之间的差异无统计学意义Ｐ〉０．０５。结论 在     

微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒

目的 寻找一种快速、准确、简便的丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）RNA逆转录-聚合酶链反应产物的检测方法。方法 所有标本均作逆转录-套式聚合酶链反应，其产物分别以微孔板固相杂交法及聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，对结果可凝及阴性者均以HCV Amplification KIT对其血清再作扩增并检测，并以此为金标准进行比较。结果 144份血清（其中抗-HCV阳性64例），微孔板固相杂交法阳性70例，灵敏度97.18%，特异度98.63%，聚丙烯酰胺凝胶电泳法阳性61例，灵敏度81.69%，特异度95.89%，取同一份产物倍比长稀释后再作检测，前者可检测出2^-9稀释度，后者检测出2^-7稀释度。结论 微孔板固相杂交法检测丙型肝炎病毒快速、准确、简便，并且可定量，尤其适用于大批量标本的检测，但于基层推广。     

肝炎患者TTV感染情况及部分基因序列分析的研究

目的 :新发现的DNA病毒 (transfusiontransmittedvirus简称TTV)被认为是一种新的肝炎病毒。为了研究肝炎患者中TTV的感染情况 ,对 10 8例肝炎患者 (ALT >2 0 0IU/L)进行了TTVDNA的检测。方法 :利用巢式PCR方法扩增TTV基因 ,并对两例TTV分离株的部分基因进行克隆和序列分析。结果 :10 8中有 2 4例TTVDNA阳性 ,阳性率为 2 2 2 % ;在非甲～非庚型肝炎中TTV的阳性率为 3 4 6% ( 9/ 2 6) ;甲型肝炎病例中TTVDNA的阳性率为 9 1%( 1/ 11) ;乙型肝炎病例为 2 3 2 % ( 13 / 5 6) ;丙型肝炎病例 7 1% ( 1/ 14 )。两个TTV分离株 (TTVHN 1AF15 15 3 2 ,TTVHN 2AF15 1683 )的核酸序列与GenBank资料中TTV对应序列的核酸同源性高于 90 %。结论 :TTV病毒可能是非甲～非庚型肝炎的重要致病因子 ,并且能够与甲、乙、丙型肝炎病毒发生重叠感染