RAPD技术对凝固酶阴性葡萄球菌DNA分析

[目的]对凝固酶阴性葡萄球菌进行DNA分型并分析其多态性,为临床提供流行病学资料。[方法]用随机设计10、17、18bp的三种引物,分别对实验菌株DNA做RAPD。[结果]18bp的引物扩增的产物最理想。以其图谱的差异对临床分离株DNA分析后,20株区分为5个型别,其中属Ⅰ型者含株数多,为16/20占总数的80%。[结论]RAPD技术能在DNA水平上对凝固酶阴性葡萄球菌分型,以其方法快捷、可靠、经济的优点可适用于该菌致医院感染源的追踪及流行病学研究。     

随机引物扩增技术对变形菌DNA多态性分型研究

目的建立变形菌随机扩增DNA多态性分型技术,应用于临床菌株流行病学调查. 方法优化随机扩增DNA多态性指纹技术(RAPD)的实验条件,利用RAPD技术成功地检测21株变形菌DNA指纹图谱. 结果 21株变形菌分为18型别,其中16株奇异变形菌分为13个型,5株普通变形菌分为5个型. 结论 RAPD分型技术可简便、快速为变形菌提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法.     

鲍曼不动杆菌随机扩增多态性DNA的分子流行病学研究

目的:采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法监测鲍曼不动杆菌医院感染。方法:对临床分离的48株医院感染鲍曼不动杆菌进行RAPD基因分型,绘制亲缘关系树状图,分析菌株间的同源性,确证是否存在医院感染的院内流行。结果:48株鲍曼不动杆菌共分得10个型别,鲍曼不动杆菌存在医院感染的院内流行。结论:RAPD技术可对鲍曼不动杆菌进行分子流行病学研究。     

肺炎克雷伯菌随机DNA多态性分型研究

目的 建立肺炎克雷伯菌随机扩增DNA多态性分型技术,以应用于临床菌株流行病学调查。方法 对临床分离的29株肺炎克雷柏菌进行Etest检测,并用酚氯仿法提取其DNA后行RAPD分型。结果 29株临床分离菌有7株ESBL阳性,24株有稳定的RAPD带型,其中ICU分离的5株ESBL阳性株的4株RAPD指纹图谱相同。结论 RAPD基因分型技术不需已知核酸序列,分型率高,分辨力强,简便快捷可为肺炎克雷伯菌株提供分型标志,是分子流行病学研究的有效方法。     

随机扩增DNA多态性技术在粘质沙雷菌分型研究中的应用

目的应用随机扩增DNA多态性(RAPD)技术对医院感染的粘质沙雷菌进行基因分型。方法对心外科ICU病房5例术后发热患者血液中分离出的粘质沙雷菌，用VITEK细菌全自动分析仪进行系统生化鉴定，K-B纸片扩散法进行药敏试验，用2条不同的随机引物进行RAPD基因分型。结果5株粘质沙雷菌药敏谱全部一致，2条随机引物中一条引物未能分型，另一条引物可分为2个基因型。其中，4株菌扩增出相同带谱，为同基因型；1株菌有独特的带谱为另一种基因型。结论本次调查的5株粘质沙雷菌有2种RAPD基因型，其中4株为相同基因型，证实存在感染流行。     

长期住院老年患者铜绿假单胞菌随机扩增DNA多态性分型研究

目的 了解长期住院老年患者肺部感染铜绿假单胞菌（PA）的分子流行病学特征，为临床防治提供依据。方法 建立PA随机扩增DNA多态性（RAPD）指纹图基因分型方法，对与流行病学相关或不相关34株菌株的基因分型。结果 采用同一反应体系，30株临床分离株和2株不相关株产生稳定RAPD特异带型，分型率为94.12%，长期住院的同一患者不同时期或不同患者同一时期PA的RAPD谱型存在差异。结论 RAPD指纹图基因技术分型率高，分辨率强，简便快捷，可在分子水平上对老年人长期住院感染PA提供病原学及流行病学的研究方法。     

白色假丝酵母菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的建立医院感染白色假丝酵母菌的基因多态性DNA分型方法,了解白色假丝酵母菌医院感染的分子流行病学情况,并探讨其基因多态性与真菌药物敏感性检测结果的可能关系。方法收集临床各病区送检的住院患者白色假丝酵母菌感染标本30份和其相应患者资料、抗真菌药物敏感性检测结果,采用经优化的随机扩增多态性(RAPD)DNA方法,对30株白假丝酵母菌进行基因多态性分型,利用Phylip3.67聚类分析软件分别用邻接法和算术平均数的非加权成组配对法,对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果随机引物OPE-03进行RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富,可以作为分型引物;30株不同来源的菌株可大致分为3种亲缘关系;两种聚类分析结果相同,提示该实验结果可靠。结论白色假丝酵母菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关;RAPD多态性可能与其耐药性有关;不同聚类分析方法的RAPD图谱分析结果相同。     

军团菌D-RAPD基因分型研究

〔目的〕建立军团菌的基因分型方法。〔方法〕采用D—RAPD技术 ,应用 6条简并随机引物对 5株军团菌 (包括 3株嗜肺军团菌 )进行基因分型研究。〔结果〕除引物 4 ,其余 5个随机引物均能对军团菌菌株扩增出特异性的DNA条带 ,其中引物 2的分型效果较好。用引物 2、引物 3两引物 ,引物 2、引物 5两引物 ,引物 3、引物 5两引物 ,分别对 5株军团菌DNA进行扩增 ,结果 3对引物在扩增条带的数量和长度上均能有效区分 5株军团菌。〔结论〕D—RAPD技术快速、简便 ,是在分子水平对致病微生物进行检测、发病机理分析、流行病学研究的理想方法。     

RAPD在大肠埃希菌O157同源性分析中的应用

目的:研究腹泻病人和食品中分离出的大肠埃希菌O157的分子特征,为O157菌株的流行病学溯源和疫情控制提供有效手段。方法:采用随机引物扩增多态性DNA分析(randomly amplified polymorphic DNA analysis,RAPD)对10株O157菌株进行基因分型。结果:10株菌聚类为3个类群,分属于三个不同的克隆。结论:RAPD技术可用于O157菌株的流行病学调查和溯源。     

产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的 对产超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的耐药现状进行分析研究，对耐药株进行基因分型流行病学研究。方法 对临床分离的195株肺炎克雷伯菌进行ESBLs检测并采用微量稀释法测定MIC值，判断细菌的耐药性；对产ESBLs菌株以随机扩增多态性DNA分型法（RAPD）进行基因分型。结果 产ESBLs肺炎克雷伯菌占23％，其中51％来源于重症病房（ICU）；ESBLs阳性细菌对12种抗生素的耐药性远远高于ESBLs阴性菌；20株产ESBLs肺炎克雷伯菌分为11型。结论 本院神经外科SICU、呼吸科RICU存在产ESBLs肺炎克雷伯菌的流行；合理使用抗生素，加强重点病区的消毒隔离措施，是控制医院感染流行的重要措施；RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速、可靠的基因分型方法。