中国南京TTV部分基因的克隆及对其扩增物序列的测定

目的 了解中国南京地区有无TT病毒(TTV)感染。方法采用套式聚合酶链反应(PCR)检测病因未明的肝炎患者血清中的TTV-DNA,并对PCR扩增产物进行序列测定。结果 在14例非甲～戊型肝炎患者的血清中,共检出8例TTVDNA阳性者,对其中一株进行序列测定,该序列与日本TTV部分基因(CLON22)和TTV中国株1相对应位置的核苷酸同源性很高,分别达97.65％和98.99％。结论 在中国南京地区的肝炎患者中存在着TTV感染。     

对南京地区各型肝炎患者TTV感染情况的调查

目的 了解南京地区肝炎患者TTV的感染情况。方法 用巢式聚合酶链反应对390例各型肝炎患者进行TTVDNA检测。结果 TTV在154例非甲～庚型肝炎患者和236例甲～庚型肝炎患者中的阳性率分别为11.69％(18/154)和12.71％(30/236);48例TTV阳性者中9例有输注血制品史。结论 TTV感染可能与部分非甲～庚型肝炎有关,TTV感染可能存在输血外的其他传播途径。     

不同人群输血传播病毒感染的检测和传播途径分析

目的 了解深圳地区不同人群TTV感染状况,探讨TTV传播途径。方法建立套式聚合酶链反应方法．对临床病毒性肝炎病人、血液透析病人、静脉吸毒者、性病患者和献血者人群进行TTV DNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定。结果非甲-戊型肝炎病人、血透患者和反复输血病人TFVDNA阳性率分别为41.7％、40.5％和35．7％．明显高于甲-丙型肝炎病人（17．7％,P〈0．01）;静脉吸毒者中TTV DNA阳性率高达39．3％,明显高于献血者人群（20．4％。P〈0．05）：ALT异常献血员中TTV DNA检出率为明显高于无偿献血员人群（P〈0.05）;性病患者生殖道分泌物中TTV DNA检测出率为15．8％。2株TTV分离株与TTV标准株（AB008394）同源性在92．5％以上。结论TTV感染与肝炎有关。可能是非甲-度型肝炎的病原之一;TTV除了经血源途径传播外。性传播可能成为重要传播途径之一。     

贵阳地区不同人群TTV感染情况分析

１９９７年底,日本学者从１名输血后非甲—庚型肝炎病人血清中分离到一种新病毒,称之为输血传播病毒（ＴＴＶ）,该病毒为单股ＤＮＡ病毒。据报道该病毒感染与血清丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）异常有关,且在各型肝炎病人中均有较高的感染率。此后国内较发达地区先后也有有关该病毒感染及发病情况的报道。为了解该病毒在贵阳地区流行情况及致病性,本文对我院１９９８－２０００年门诊及住院病人进行了ＴＴＶ感染状况调查分析。１资料及方法１．１观察对象５０名肝功能正常,ＨＢＶ,ＨＣＶ阴性血清标本来自健康献血员。按１９９５年５月北京第…     

TTV阳性产妇所产婴儿产后的肝炎病毒的感染情况

目的探讨此等婴儿TTV感染的发生率和感染途径.方法对26例TTV阳性的产妇并坚持母乳喂养的婴儿定期进行复查(应用巢式-PCR法).在分娩及随访6个月时进行血清、乳汁、脐血(婴儿血清)的TTV检查.结果26例中的20例得到随访.乳汁TTV阳性率为50%(10/20),脐血TTV检测均为阴性;产后6个月时,母血TTV阳性率为30%(6/20),母乳汁TTV阳性率为90%(18/20),婴儿血清的TTV阳性率为20%(4/20).结论孕产妇血清的TTV阳性率高于正常人群.乳汁及血清之间在TTV感染方面并无严格的对应关系.乳腺有蓄积TTV的作用,母乳可能是婴儿TTV的传播途径.     

粘质沙雷菌中SHV型β-内酰胺酶编码基因的克隆及序列分析

目的研究重庆地区临床分离的粘质沙雷菌E121编码超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因。方法PCR扩增ESBLs编码基因片段，克隆入pUCm—T载体，双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型，等电聚焦测定β-内酰胺酶的等电点（pI）。结果PCR扩增结果显示粘质沙雷菌E121产生的ESBLs为SHV型，其基因片段含756个核苷酸，GenBank查询其核苷酸序列与SHV-28型ESBLs完全相同。该耐药株至少含有等电点pI约为5．4和8．2的两种β-内酰胺酶。结论重庆地区粘质沙雷菌E121所产ESBLs亚型为SHV-28。     

新疆静脉注射毒品者输血传播病毒的检测及部分核苷酸序列分析

目的 :调查新疆维吾尔自治区 (新疆 )静脉注射毒品者中输血传播病毒 (TTV)的感染状况及基因型别。方法 :采用巢式PCR技术检测 10 2例汉族、维吾尔族、回族静脉注射毒品者血清中TTVDNA ,以 38例正常体检者为对照 ,比较静脉注射毒品者中TTVDNA阳性率是否与共用注射器有关。将一例维吾尔族TTV阳性扩增产物插入pGEM -TEasy载体 ,测序并序列分析。结果 :静脉注射毒品者TTVDNA阳性率为 32 35 % ,显著高于正常体检者 (5 2 6 % ) ,P <0 0 5。静脉注射毒品者中汉族、维吾尔族、回族TTVDNA阳性率分别为 32 6 1% (15 4 6 )、35 14 % (13 37) %、2 6 32 % (5 19) ,各民族之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。静脉注射毒品者TTVDNA阳性率与共用注射器有关 (P <0 0 5 )。一例维吾尔族TTVDNA部分核苷酸测序 ,与日本株 (AB0 0 8394 )比较同源性为 98% ,属于G1a型。结论 :静脉注射毒品者是TTV感染的高危人群。一例维吾尔族TTV核酸序列与日本株 (AB0 0 8394 )相比有高度同源性 ,属于同一基因型别     

人类Survivin基因的cDNA克隆及序列分析

目的：克隆Survivin基因的cDNA，为分子信标定量检测其mRNA提供模板标准物。方法：以国人胎脾为材料提取总RNA作为模板，采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法扩增并克隆Survivin cDNA，并将其重组到pUCl8质粒中，用双脱氧末端终止法进行序列分析。结果：克隆的Survivin cDNA序列与Gene Bank中的该基因序列相比较仅有1个碱基出现差别，并导致编码相应氨基酸的改变。结论：成功构建了Survivin基因的cDNA克隆，为建立Survivin基因mRNA的定量检测方法奠定了基础。     

贵州地区不同人群血清庚型肝炎病毒核酸检测和部分核苷酸序列分析

目的了解贵州地区庚型肝炎病毒感染状况,分析庚型肝炎病毒贵州株的基因特点。方法 以庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）的ＮＳ３区两对寡核苷酸为引物,用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测不同人血血清中庚型肝炎病毒核酸（ＨＧＶ ＲＮＡ０,并用ＰＣＲ产物直接测序分析３份阳性血清５’－非编码区的部分核苷酸序列。结果６０例正常人,３７例血液病,８６例肝病患者及１０７例静脉药瘾者血清ＨＧＶ ＲＮＡ阳性率分别为１．７     

慢性萎缩性胃炎患者输血传播病毒感染的流行病学调查

目的探讨慢性萎缩性胃炎(CAG)患者输血传播病毒(TTV)感染的特点.方法以套式聚合酶链反应(Nest-PCR)检测106例CAG患者的血清TTVDNA,并以54例献血员为对照.结果所有患者HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGV6种已知病毒性肝炎的病原学标志均为阴性.106例CAG患者中25例(23.58%)TTVDNA检测阳性,54例献血员中4例(7.41%)TTVDNA阳性(χ2＝6.31,P＜0.05).CAG患者的TTV感染与胃黏膜损伤率有关(χ2＝7.78,P＜0.05).6例TTVDNA检测阳性CAG患者肝活检病理检查均见轻度炎症改变.结论CAG患者属于TTV感染的高危人群,其感染方式可能属粪-口途径传播,这种感染可能引起肝脏损伤.     

C端融合RGD三肽的重组L-门冬酰胺酶基因克隆、表达和对血液系统的影响

利用加端PCR技术构建asnB-RGD工程菌，获得C末端带有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸，ArgGly-Asp)三肽的门冬酰胺酶(AnsB-RGD)，以改进L-门冬酰胺酶的作用。以pUA18为模板，利用pUC18上游普适引物和根据L-门冬酰胺酶Ⅱ基因(ansB)C末端下游序列设计的引物来扩增目标基因。将目标基因连于pMD18-T载体，转化宿主菌JM109，筛选出的阳性克隆通过HindⅢ、NcoⅠ双酶切下目标基因连到含T7启动子的高效表达载体pET28a上，再转化BL21宿主菌。高效表达的工程菌摇瓶发酵，渗透休克法提取AnsB-RGD融合蛋白，12％的SDS-PAGE检测酶蛋白并考察酶的活力、特异性及其对血液系统的影响。2％琼脂糖凝胶电泳、DNA测序鉴定构建的pET28a．ansB．RGD工程菌，奈氏法、SDS-PAGE及免疫学方法检测AnsB-RGD融合蛋白。DNA序列分析证明RGD三肽已经连接在L-门冬酰胺酶的C末端，带有RGD三肽的融合蛋白仍然能与抗L-门冬酰胺酶的抗体结合，初步发现AnsB-RGD融合蛋白有促进血液凝固作用，但酶活力下降。     

粉尘螨2类变应原基因的克隆和序列分析

目的:克隆中国大陆地区粉尘螨2类变应原(Derf2)的cDNA。方法:挑取活的粉尘螨经-70℃冷冻后提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Derf2基因,克隆至pMD18-TSimple平滑载体中测序。结果:筛选出2株长度为436bp的Derf2cDNA片段,核苷酸序列1株与Genbank上的Derf2序列(D10448)碱基有6处不同,同源性为98.6%;另1株有2处不同,同源性为99.7%。结论:粉尘螨2类变应原的基因序列具有多态性,中国大陆地区Derf2的cDNA克隆片段与Genbank上公布的Derf2序列高度同源。     

乙型肝炎病毒感染者HBV DNA与血清病毒标志物的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者HBV DNA检出情况及其与血清病毒标志物的关系。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测200份HBV感染者血清中HBV DNA含量，同时用全自动免疫分析仪检测HBV5项血清标志物。结果 200份血清中，乙型肝炎病毒标志物不同组合组的HBV DNA阳性率有差异，HBsAg、HBeAg和（或）HBcAb阳性组阳性率为98．1％，其中96％以上HBV DNA≥10^4 cope／ml；HBsAg、HBcAb和（或）HBeAb阳性组HBV DNA阳性率约为76，5％，但其中90％以上HBV DNA≤10^4 cope／ml；单纯HBV抗体阳性组HBV DNA阳性率约为13．0％，但均为HBV DNA≤10^3cope／ml。三组间HBV DNA阳性率及分布均有明显差异（P〈0．05）。而且HBV DNA含量与疾病严重程度相关。结论 FQ-PCR检测HBV DNA含量结合血清病毒标志物的检测结果对乙型肝炎的临床诊断与病情判断有重要意义。     

SEN—V非编码区基因的克隆与序列分析

目的：调查TTV阴性的非甲-庚型肝炎患者中SEN-V感染情况。对SEN-V5非编码区部分基因进行克隆与序列分析。方法：采用巢式PCR技术检测40例TTV阴性的非甲-庚型肝炎患者血清SEN-VDNA，对PCR产物进行克隆，测序和分析。结果：40例病例中SEN-VDNA阳性38例（92%），对其中6株SEN-V基因克隆测序，并与基因库中的SEN-V（GenbankNo.AX025677)序列比较，其核苷酸序列同源性在81%-94%。结论：在TTV阴性的非甲-庚型肝炎患者中存在SEN-V感染。SEN-V的致病性及其与非甲-庚型肝炎的关系有待进一步研究。     

肺炎克雷伯氏菌SHV-28编码基因的克隆、测序及基因定位

以临床分离的一株肺炎克雷伯氏菌99-799株为研究对象，对其所产生的一种β-内酰胺酶编码基因的序列、亚型及基因定位进行研究。采用聚合酶链反应(PCR)，用β-内酰胺酶通用引物、blasHv引物扩增获得β-内酰胺酶及SHV型酶编码基因的片段，将SHV型酶PCR扩增产物克隆入pUCm—T载体，以双脱氧链终止法测定核苷酸序列，再通过GeneBank进行同源性检测确定其亚型和基因所在位置。肺炎克雷伯氏菌99—799株所含的一种β-内酰胺酶基因型为SHV型，与SHV-28编码基因序列完全相同，且位于细菌150bp的大质粒上，说明重庆地区有SHV-28亚型的存在。     

肝病患者庚型肝炎病毒感染的临床分析

目的探讨肝病患者庚型肝炎病毒感染情况及致病性。方法应用RT-PCR方法检测312例肝病患者HGV-RNA及甲～戊型肝炎血清学标志。以HGV-RNA阳性为HGV感染判断标准,分析各型肝病患者HGV感染情况。结果312例患者HGV-RNA阳性64例,阳性率为20.51%;单纯HGV感染12例,阳性率为3.85%。结论急性肝炎,乙、丙型慢性肝炎,肝硬化,重型肝炎患者均可检出HGV-RNA。HGV多与乙、丙型肝炎病毒混合或重叠感染,亦可单纯感染引起肝脏炎症,说明HGV可能是肝病患者的致病因素之一。     

输血传播病毒感染状况调查

目的　调查河南省不同人群输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法　采用酶联免疫法 (ELISA)和套式聚合酶链反应(PCR)法对 321例正常人群、正常献血员、急性肝炎、慢性肝炎和肝癌患者血清进行了抗 -TTVIgG和TTVDNA检测。结果　以上人群TTV感染率分别为 5. 0%、0、11. 25%、17. 24%、26. 42%、34. 18%;混合感染中TTV合并HBV、HCV感染率最高,分别为 32. 20%和 30. 51%。结论　河南省不同人群均有TTV的感染;TTV与各型肝炎均有混合感染;ELISA法检测抗-TTVIgG与PCR法检测TTVDNA结果有较好的一致性。