福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ ２０,ＮＰ ４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二乙酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ－２０,ＮＰ－４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

关于甲醛固定石蜡包埋组织提取DNA质量的探讨

目的:探讨甲醛固定石蜡包埋组织(FFPET)提取DNA后PCR扩增产物检测率的提高。方法:应用从FFPET提取的DNA,PCR反应扩增β-Globin(110bp),分析纯化前后DNAPCR产物的检测率。结果:纯化后的DNA模板PCR反应取得高质量目的基因。结论:纯化后能有效去除不能通过蛋白酶K消化和有机萃取法去除的PCR反应抑制因子,利于PCR反应成功。     

不同方法提取石蜡包埋组织DNA的比较分析

目的:比较福尔马林固定石蜡包埋组织(FFPET)中3种提取DNA的方法对DNA质量和回收率的影响,探讨一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法. 方法:选取新疆医科大学第一附属医院2004～2007年手术切除的10%甲醛固定石蜡包埋甲状腺癌组织标本,分别以试剂盒法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿法、改良TES水浴脱蜡-试剂盒法提取其DNA,然后进行电泳分析. 结果:改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得样本DNA的OD260/OD280比值为(1.82±0.15),改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法为(1.86±0.17),两者比较无明显差异(P>0.05);分别与试剂盒法(1.75±0.14)相比,差异有统计学意义(P<0.01).改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯DNA法、改良TES水浴脱蜡-酚氯仿提纯DNA法所得 DNA产量和质量均高于试剂盒法. 结论:改良TES水浴脱蜡-试剂盒提纯法简单快捷,是较理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

石蜡标本DNA提取优化方案

目的 :探索从福尔马林固定石蜡包埋组织中提取出高纯度、高浓度DNA的优化方案,为临床DNA的常规检测提供快速、经济、实用的方法。方法 :选取2011年~2013年间于湖南省某大型医院收集的598例卵巢组织石蜡标本进行切片、脱蜡、DNA提取、PCR扩增、凝胶电泳及分析。结果 :提取的DNA中,69.4%的纯度能达到标准值,99%以上标本能扩增出内参。结论 :选择适合的切片厚度,脱蜡时间和方法,合理的消化酶浓度及时间,试剂的选取等均可改善提取DNA的质量。     

四种微量石蜡组织DNA提取方法的比较

目的:探讨从微量福尔马林固定石蜡包埋组织(formalinfixation and paraffin embeddedtissues,FFPET)中提取DNA的简单而高效的方法。方法:采用Chelex-100提取法、酚氯仿抽提法、单纯消化法、水煮法4种方法提取组织DNA;应用聚合酶链反应扩增100~500bp长度DNA片段,然后进行电泳分析,1年后重复PCR电泳分析。结果:小于200bp长度DNA片段扩增,Chelex-100提取法、单纯消化法阳性率分别为88.8%、78.8%,明显优于酚氯仿抽提法(15.0%)(P<0.01)及水煮法(21.3%)(P<0.01)。随着扩增长度的增加,PCR扩增效率逐渐降低,Chelex-100提取法PCR反应总阳性率为82.5%,单纯消化法为66.5%,水煮法为13.4%,酚氯仿抽提法为13.4%。1年后重复PCR总阳性率分别为80.1%、31.7%、2.5%、9.2%。结论:Chelex-100提取法方便简单,适用于微量石蜡组织DNA扩增分析;单纯消化法及水煮法在一定条件下适用于微量石蜡组织短片段DNA的扩增。     

石蜡包埋皮肤组织DNA提取方法的改进

医学研究中,有时新鲜材料取材困难,故常选择石蜡包埋组织用于回顾性研究。从石蜡包埋组织中提取基因组DNA有一定难度,尤其像皮肤这样纤维成分含量较高的组织DNA提取更加困难。传统的酚氯仿抽提DNA,其弊端是过程长、标本损失量相对     

改良一步法从甲醛固定-石蜡包埋组织中提取RNA

作者利用自行改良的一步法(异硫氰酸胍方法),从甲醛固定石蜡包埋组织提取ＲＮＡ并获得成功,现报道如下。一、材料与方法1组织材料及细胞:35例胆囊组织石蜡包埋标本在手术中切下后常规10%甲醛固定2～10ｈ,石蜡包埋。标本在常温下已保存1～7年。ＫＢＶ1细胞株是人类Ｈｅｌａ细胞的子代细胞。从ＫＢＶ1细胞抽提的ＲＮＡ用作逆转录聚合酶链式反应(ＲＴＰＣＲ)实验的对照组。2.从石蜡包埋组织中分离ＲＮＡ:实验过程从一步法[1]中改良得来。根据蜡块中组织块的大小取40～100μｍ组织切片。经脱蜡、离心和梯度乙醇清洗后获取组织。组织干燥后加入0.…     

简易提取石蜡包埋组织DNA

DNA的提取是 PCR成功与否的关键 ,而 DNA提取最好是用新鲜标本 ,但对回顾性研究只能从石蜡包埋组织中提取。传统的石蜡包埋组织 DNA提取是用二甲苯脱蜡 ,酚 -氯仿反复多次的抽提 ,这样使得 DNA不断破坏 ,大量丢失 ,操作非常繁琐 ,费时费试剂 ,不适宜处理大量标本 ,且试剂对人体有毒害作用 ,而得到的 PCR反应的结果阳性率低 ,污染严重。为此 ,本室将传统的石蜡包埋组织 DNA提取法进行改良 ,介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　本室 1996～ 2 0 0 0年存档的手术切除的甲状腺癌标本 41例。水浴恒温振摇器 (SHA- C型 ,深圳天南海北实…     

减小Chelex-100体积提取全血DNA的研究

应用Chelex-100法提取全血DNA,由于具有快速、简便、不易污染等特点,并且其DNA纯度可以满足常规PCR需要,因此在分子生物学实验、临床科研与诊断,特别是司法实践中应用广泛。而对于司法实践中经常遇到的提取微量DNA时,按照常规Chelex-100法提取,得到的DNA模板浓度很低,很可能会出现扩增不均衡,甚至扩增失败。     

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA的研究

从福尔马林固定、石蜡包埋组织中提取DNA可望解决分子生物学研究中难以得到大量标本的难题。本文对几种不成熟的从石蜡包埋组织中提取DNA的方法进行了比较,建立了一种简单、有效的方法;并对石蜡包埋组织中的DNA进行了ras基因点突变的分析。     

石蜡包埋宫颈组织中三种DNA提取方法的比较

目的:通过比较了三种不同的DNA提取方法对DNA质量的影响,旨在寻找一种高效、简便、实用的石蜡组织中DNA提取方法.方法:取10%甲醛固定石蜡包埋的宫颈组织标本(宫颈癌及宫颈上皮内瘤变标本),分别以二甲苯脱蜡及酚氯仿法提纯DNA(方法1)、,IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA(方法2)、IES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA(方法3),然后进行电泳和聚合酶链反应扩增分析.结果:TES;水浴脱蜡及酚氯仿法提纯DNA所得样本·DNA的0D260/0D280比值为1.85±0.22,TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法为1.81±0.12,两者比较无显著差异(P>0.05);桓分别和二甲苯脱蜡及酚氯仿提纯DNA法相比较有显著差异(P>0.01).DNA电泳和PGR扩增结果示IES水浴脱蜡及酚氯仿提纯DNA、TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA所得DNA质量均高于二甲苯脱蜡酚氯仿提纯DNA法.结论:TES水浴脱蜡及试剂盒提纯DNA法简便快捷,是理想的石蜡包埋组织DNA提纯方法.     

用Chelex-100方法提取肋软骨DNA105例

目的研究尸体所处环境、死亡时间的条件下,用Chelex-100方法提取肋软骨DNA。方法对案件中不同条件腐败尸体，采用Chelex-100方法提取肋软骨DNA，进行PCR扩增及STR分型。结果提取肋软骨均可获得STR分型。结论肋软骨是法医检案中的一类具有实用价值的检材。     

石蜡包埋组织显微切割后快速DNA提取技术

肿瘤的分子病理和分子遗传学研究常受到肿瘤组织成分多样性和取材准确性的影响 ,如瘤组织间质成分以及出血、坏死物等。这些非肿瘤组织的细胞基因组ＤＮＡ将影响肿瘤的分子生物学研究结果。本文以半巢式ＰＣＲ技术扩增胰腺癌组织Ｋ -ｒａｓ基因为例 ,探讨一种不经过复杂的酚 -氯仿抽提 ,而利用组织细胞显微切割技术快速、准确提取石蜡包埋组织ＤＮＡ的方法。1　材料与方法1.1　仪器　ＰＣＲ扩增仪 (Ｈｙｂｒｉｄ公司 ) ;低温高速离心机 (Ｓｉｇｍａ公司 ,3Ｋ30型 ) ;凝胶图像成像仪 (ＢＩＯ -ＲＡＤ公司 ,ＧＥＬ -Ｄｏｃ2 0 0 0型 ) ;立体镜…     

石蜡组织存放时间对提取DNA质量的影响

目的探讨储存时间对石蜡包埋组织提取DNA质量的影响。方法采用试剂盒方法,分别提取10例保存1~3a的石蜡组织样品DNA,NanoDrop-2000分光光度仪检测DNA浓度和OD260/OD280比值,质量分数2%琼脂糖进行电泳检测,采用单因素方差分析比较DNA质量。结果琼脂糖凝胶电泳显示:石蜡包埋组织提取DNA降解明显。储存1~3a的石蜡包埋组织提取DNA的浓度有明显差异(P=0.04),储存时间越长,DNA浓度越低,但提取DNA的纯度无明显差异(P>0.05)。结论石蜡包埋组织储存时间越长,提取DNA浓度越低,但纯度无明显差异。     

从石蜡包埋的组织中提取DNA的研究

我们将Ｓｈｉｂａｔａ制备ＤＮＡ的方法加以改进，采用二甲苯脱蜡，酚－氯仿－异戊醇抽提、乙醇沉淀等步骤，成功地从经甲醛固定，石蜡包埋的食管癌组织中提取出ＤＮＡ，用于聚合酶链式反应。结果从与新鲜冷冻组织提取的ＤＮＡ结果相似，解决了分子生物学研究中在短时间内难以得到大量新鲜肿瘤组织标本的难题。     

PCR-RFLP技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用

目的:探讨mtDNA分析技术在甲醛固定石蜡包埋组织中的应用.方法:应用限制酶RsaI和MnlI消化mtDNA D-LOOP区(HVI16106-16297)PCR扩增产物,聚丙烯凝胶电泳进行RFLP分型的方法,对随机个体血液样品150例.正常组织10例和甲醛固定石蜡包埋组织5例进行检验.结果:在150例随机个体中,Rs...     

用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

目的 观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果。方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5％Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA。提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带。结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27.5％样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5％样品纯度比值在1.08～1.54之间;提取液DNA浓度:80％样品小于100μg/mL,20％样品在100～166μg/mL之间。微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带。结论 用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA。     

两种石蜡包埋组织DNA提取方法的比较

目的 比较两种不同的DNA提取方法 对DNA质量的影响.方法 选取石蜡包埋的病理组织24例,采用二甲苯脱蜡法和改良TES水浴法提取DNA.通过对所提DNA的浓度、纯度及完整性的检测,比较两种DNA提取方法 的优劣.结果 二甲苯脱蜡法提取样品D260/D280比值在1.6～1.8之间的为62.5%,电泳条带清晰可见;改良TES水浴法提取样品D2eo/D280比值在1.6～1.8之间的为41.2%,电泳条带模糊不清.结论 二甲苯脱蜡法提取DNA简单快速,需要的组织样品少,是一个值得推荐的石蜡包埋组织DNA的提取方法 .     

从石蜡包埋的组织中提取DNA的研究

我们将Ｓｈｉｂａｔａ制备ＤＮＡ的方法加以改进，采用二甲苯脱蜡、酚—氯仿—异戊醇抽提、乙醇沉淀等步骤，成功地从经甲醛固定、石蜡包埋的食管癌组织中提取出ＤＮＡ，用于聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）。结果与从新鲜冷冻组织提取的ＤＮＡ结果相似，解决了分子生物学研究中在短时间内难以得到大量新鲜肿瘤组织标本的难题。