透骨草体外抑制肺癌A549细胞增殖有效部位研究

目的：筛选透骨草抑制肺癌A549细胞增殖的有效部位,为透骨草药效物质基础研究阐明并提供依据。方法：将透骨草分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取后各部位分别在体外用MTT法检测透骨草对肺癌A。细胞的增殖影响,并根据实验结果确定透骨草的有效部位。结果：透骨草的各部位均有抑制肺癌A549细胞增长的作用,其中乙酸乙酯层提取物抑制肺癌A549细胞增殖的作用最为明显;而石油醚提取物的抑制作用最弱。结论：透骨草具有确切的抑制肺癌A549细胞增殖的作用,其乙酸乙酯层提取物为其有效成分集中部位。     

SOCS7通过抑制细胞凋亡促进肺癌A549细胞增殖的机制研究

目的 研究SOCS7对肺癌A549细胞增殖的影响及可能的作用机制。方法 在肺癌A549细胞中分别采取过表达SOCS7和干扰SOCS7的方法,以细胞计数法(CCK-8)检测各实验组细胞的增殖情况;以Transwell方法检测各实验组细胞的迁移能力;以蛋白质印迹法(Western blot)检测各实验组凋亡相关基因的蛋白表达量情况;以ELISA方法检测各实验组免疫相关基因的蛋白表达情况。结果 干扰SOCS7时,转染96 h后,与对照组和转染controlsiRNA组相比,肺癌A549细胞的增殖力明显降低,迁移能力明显降低。Western blot实验结果显示细胞中Bcl-2表达量显著降低,Cleaved Caspase3表达量升高;干扰SOCS7时,转染12 h后,与对照组和转染controlsiRNA组对比,肺癌A549细胞中人肿瘤坏死因子α(Tnf-α)和IL-1表达量显著升高,IL-6无显著性变化,在转染24 h后,与对照组和转染空载体组对比,IL-6表达量显著升高。结论 干扰SOCS7能够抑制肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,降低Bcl-2蛋白表达量,提高Caspase-3蛋白表达量,Tnf-α和IL-1表达量也显著升高,SOCS7可能通过炎症反应和Caspase-3途径来调节肺癌A549细胞的生长。     

白藜芦醇抑制A549人肺腺癌细胞增殖与IGF-I R的关系

目的 探讨白藜芦醇对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制效应及其与IGF-I R的关系.方法 以人肺腺癌A549细胞株为研究对象,采用MTT方法测定细胞增殖,用RT-PCR与免疫印迹方法测定IGF-I受体mRNA与蛋白表达水平.结果 2.5～15 nmol/L IGF-Ⅰ可显著促进A549细胞增殖(P＜0.05),给予...     

转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的时间相关性

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间充质转化(EMT)的时间相关性。方法:将体外培养的A549细胞分为空白组(加入F-12培养基)、模型组(加入10ng/ml TGF-β1)后继续培养。采用MTT实验检测细胞的增殖能力,光学显微镜下观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR和Western blot法检测E-Cad、Vim、FN mRNA的蛋白表达水平。结果:模型组在48h、72h时与空白组比较,A549细胞显著增殖(均P<0.01)、细胞形态明显改变,72h时几乎所有细胞呈纺锤形;48h、72h时与空白组比较,模型组FN mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。48h时与空白组比较,模型组FN蛋白表达上调(P<0.05),E-Cad蛋白表达显著下调(P<0.01)。在72h时与空白组比较,模型组FN、Vim蛋白表达明显上调(P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:A549细胞发生EMT与TGF-β1刺激的时间长短有关。72h和48h为体外实验EMT发生的时间,72h为EMT的最佳时间点。     

KIAA1456靶向调控Runx1抑制肺癌A549细胞增殖和侵袭

目的探讨KIAA1456靶向调控Runx1对非小细胞肺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法采用免疫组织化学法检测91例肺癌及癌旁组织中KIAA1456表达情况,分析KIAA1456与肺癌患者临床病理特征的相关性,并进行Kaplan-Meier生存分析。用Lipofectamine法将miR-NC KIAA1456 RNAi和pCDNA3.0-HA-KIAA1456质粒转染A549细胞,MTT法和Transwell法检测细胞增殖和侵袭能力,Western blotting法检测细胞KIAA1456、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达。结果KIAA1456在肺癌组织中的高表达率明显低于癌旁组织(P＜0.05);KIAA1456在不同淋巴结转移、TNM分期分层间表达有差异(P＜0.05)。KIAA1456高表达肺癌患者5年总生存率高于KIAA1456低表达者(P＜0.05)。与阴性对照组比较,KIAA1456 RNAi组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1、Runx1和MMP-9表达均增加,KIAA1456表达降低;KIAA1456质粒组A549细胞增殖率、侵袭细胞数、Cyclin D1和MMP-9表达均降低,KIAA1456和Runx1表达增加(P＜0.05)。结论KIAA1456可作为肺癌的抑癌基因,通过靶向调控Runx1表达,抑制A549细胞增殖和侵袭。     

PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人垂体瘤转化基因1(human pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响.方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochemical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况.结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P＜0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异.结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响.     

柴胡皂甙D经mTOR通路抑制A549细胞的上皮间质转化

目的: 探讨柴胡皂甙D（SSd）对人肺腺癌A549细胞上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)的影响及可能机制。方法: 体外培养A549细胞,经TGF β1（10 ng/mL）刺激诱导EMT,观察不同浓度SSd(0.5,1.0,2.0 μmol /L)的抑制作用。采用MTT法检测细胞增殖活性, 蛋白质印迹检测A549细胞mTOR、p70S6、α 平滑肌肌动蛋白（α smooth muscle actin,α SMA）、N 钙黏蛋白、Ⅰ型胶原蛋白、E 钙黏蛋白的表达水平。结果： MTT检测结果显示,TGF β1刺激后A549细胞增殖能力增强,SSd可明显抑制TGF β1 刺激的细胞增殖能力,且呈剂量依赖关系。经SSd作用后,TGF β1刺激的A549细胞mTOR及下游的p70S6蛋白表达明显下调,α SMA、Ⅰ型胶原蛋白、N 钙黏蛋白的表达水平明显降低,而E 钙黏蛋白则明显升高,且呈明显的剂量—时间依赖关系。 结论： SSd可通过mTOR信号通路抑制A549细胞EMT过程。     

斑蝥素通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制的研究

目的：探讨斑蝥素对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用；流式细胞仪检测细胞周期；以蛋白印迹法分析斑蝥素作用后细胞周期蛋白B1（cyelinB1）、p34^cdc2、phos-p34^cdc2、p21、survivin、ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变。结果：斑蝥素能抑制A549细胞的增殖；斑蝥素作用于A549细胞后引起G2／M期阻滞；斑螯素处理后，p34^cdc2、phos-p34^cdc2。表达量没有改变，cyclinB1、survivin蛋白表达量减少，p21蛋白表达量增加。ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2表达量降低。结论：斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1／ERK2、phos-ERK1／phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变引起G2／M期阻滞。     

转化生长因子-β1诱导A549细胞向间充质细胞转化的作用研究

目的:观察重组人转化生长因子-β1(rhTGF-β1)对人肺上皮细胞株(A549)的转化作用。方法:将体外培养的A549用不同浓度的rhTGF-β1干预后,倒置显微镜观察细胞形态学的变化,用MTT法检测rhTGF-β1对A549增殖的影响。48 h收集蛋白用蛋白质印迹和间接免疫化学方法检测间充质细胞表型Fibronectin-EDA(Fn-EDA)表达变化。结果:rhTGF-β1诱导A549向间充质细胞形态转化,在体外对A549增殖无明显影响,上调间充质细胞表型Fn-EDA表达。结论:rhTGF-β1可诱导A549发生上皮细胞-间质转化(ephethlial-mesenchymal transition,EMT),支持肺上皮细胞发生EMT的观点。     

雷帕霉素抑制人肺腺癌细胞A549增殖的实验研究

目的初步探讨雷帕霉素抑制A549细胞增殖及其可能机制。方法将20 nmol/L雷帕霉素作用A549细胞24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达,western blot检测Survivin蛋白的表达。结果对照组和雷帕霉素作用A549细胞24、48、72 h后,生长抑制率分别为(1.61±0.09)%、(12.13±0.68)%、(20.82±1.02)%、(51.68±2.96)%,细胞凋亡率分别为(1.17±0.07)%、(10.01±0.34)%、(16.68±0.52)%、(38.23±1.04)%,Survivin mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.77±0.09)、(0.54±0.13)、(0.33±0.08)、(0.19±0.12)和(0.62±0.06)、(0.46±0.08)、(0.29±0.08)、(0.15±0.11)。雷帕霉素能够呈时间依赖性的抑制A549细胞的增殖及诱导A549细胞的凋亡(P0.05),并能够下调Survivin的表达(P0.05)。结论雷帕霉素能够抑制A549细胞增殖,并诱导其凋亡,其效应与下调Survivin的表达有关。     

槐果碱对肺癌A549细胞增殖凋亡的作用机制

目的 探讨槐果碱对肺癌细胞的体外抑制作用及可能的作用机制.方法 不同浓度(1、2、4、8、16、32、64 mmol/L)槐果碱处理肺癌细胞A549,MTT检测槐果碱对A549的IC50,选择适宜浓度的槐果碱处理肺癌细胞A549(槐果碱组),未作处理的A549细胞作为对照组,克隆形成实验和BrdU实验检测两组细胞增殖,...     

AEG-1表达下调对非小细胞肺癌A549细胞增殖和对顺铂敏感性的影响

目的探讨下调AEG-1表达对非小细胞肺癌A549细胞增殖以及其对顺铂敏感性的影响。方法采用siRNA技术,下调非小细胞肺癌A549细胞AEG-1基因的表达,反转录PCR和免疫细胞化学检测AEG-1表达抑制程度。通过MTT增殖实验、平板克隆形成实验检测AEG-1表达下调对细胞增殖的影响。将转染后的细胞暴露于不同浓度的顺铂中作用48h,通过MTT实验检测AEG-1表达下调后细胞对顺铂敏感性变化。结果 AEG-1表达下调后,细胞增殖受到抑制,48h和72h的抑制率分别达到54.6%和59.7%;细胞克隆形成能力下降,AEG-1表达下调组克隆形成数较阴性对照组降低60.2%;实验组和对照组的IC50分别为4.8μmol/L和20.4μmol/L。结论下调AEG-1基因表达可明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖并增强其对顺铂的敏感性。     

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL）,对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL,200 μL）,隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明,细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01）,且细胞停滞于G1期。与对照组相比,AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制,cleaved PARP表达量升高,且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。     

miR-20a-5p通过下调HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖

目的 探讨miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549增殖的分子机制。方法 转染HOXB13过表达质粒与HOXB13 siRNA到肺癌细胞系A549,通过qRT-PCR及Western blot实验检测HOXB13 mRNA及蛋白的表达水平;CCK-8及EdU实验检测HOXB13对肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;利用生物信息学分析筛选HOXB13可能结合的miRNA;通过qRT-PCR检测转染miR-20a-5p mimic与miR-20a-5p inhibitor到肺癌细胞系后miR-20a-5p的表达水平;Western blot实验检测HOXB13在肺癌细胞系中的表达情况;CCK-8及EdU实验检测miR-20a-5p肺癌细胞系A549细胞增殖的影响;在A549细胞中共转染miR-20a-5p mimic及HOXB13过表达质粒,CCK-8及EdU实验检测A549细胞增殖能力。结果 HOXB13促进了A549细胞的增殖（P<0.05）;生物信息学筛选出HOXB13可能结合的miRNA为miR-20a-5p;在肺癌细胞系中过表达miR-20a-5p后,HOXB13蛋白表达量降低（P<0.05）;而干扰miR-20a-5p表达后,HOXB13蛋白的表达量升高（P<0.05）;细胞增殖实验结果显示,miR-20a-5p与HOXB13对细胞增殖的影响相反,miR-20a-5p及HOXB13同时过表达,细胞增殖情况介于单独过表达miR-20a-5p及单独过表达HOXB13组之间（P<0.05）。结论 miR-20a-5p调控HOXB13基因表达抑制肺癌细胞系A549的增殖。     

miR-205靶定YES1对肺癌细胞A549的增殖抑制作用

目的：利用实时定量RT-PCR技术和双荧光蛋白报告基因分析系统检测miR-205在肺癌组织及A549细胞系中的表达水平以及其直接靶基因YES1,探讨miR-205抑制肺癌细胞A549增殖的可能机制。方法: 实时定量RT-PCR技术检测10例肺癌组织和10例癌旁正常肺组织中miR-205的表达水平;miR-205 mimics和control mimics分别转染A549细胞,利用细胞计数和集落形成实验检测转染后A549细胞的增殖情况。选取表达绿色荧光蛋白的质粒 pcDNA3/EGFP,将YES1 3′UTR的一段特异性序列、YES1 3′UTR（miR-205互补位点）点突变后的序列分别插入该质粒中,构建YES1-3′UTR和mut-YES1-3′UTR的绿色荧光表达质粒。实验分为YES1-3′UTR、YES1-3′UTR与miR-205 mimics、YES1-3′UTR与control mimics、mut-YES1-3′UTR、mut-YES1-3′UTR与miR-205 mimics和mut-YES1-3′UTR与control mimics共6组,均与表达红色荧光蛋白pDsRed2-N1共同转染肺癌细胞系A549,荧光分光光度计进行蛋白定性和定量检测。结果：与癌旁正常肺组织比较,miR-205在肺癌组织及A549细胞中表达水平降低(P<0.05);miR-205mimics 转染组A549细胞增殖率明显低于转染control mimics对照组（P<0.05）;YES1-3′UTR与miR-205 mimics共转实验组荧光蛋白表达水平低于YES1-3′UTR与control mimics共转染组（P<0.01）;YES1蛋白高表达组A549细胞细胞克隆形成数高于细胞对照组（P<0.05）。结论： miR-205可能通过靶定靶基因YES1抑制了肺癌细胞A549的增殖,提示miR-205和YES1有可能成为肿瘤生物治疗的新靶点。     

姜黄素通过Wnt信号转导通路抑制肺癌细胞A549增殖的研究

目的：从研究Wnt信号通路的关键因子-核蛋白β-catenin入手,探讨姜黄素（Curcumin,Cur）可能存在的抑制肺癌细胞增殖的分子学机制。方法：MTT法检测不同浓度的Cur对肺癌细胞A549的生长抑制情况,分析药物浓度和细胞增殖抑制率之间的关系;Westernblot法检测Cur作用后,A549细胞核蛋白B—catenin含量的变化;RT—PCR方法验证Cur对细胞c-myc基因表达的影响;流式细胞仪观察经Cur作用后细胞周期的改变。结果：Cur以浓度依赖方式抑制肺癌细胞A549的增殖,该药物浓度与抑制率之间有明显的线性相关性（r=0．9333）。细胞经Cur干预48h后,核蛋白β-catenin的含量和促癌基因c-myc的表达含量均有所下降。流式细胞仪观察细胞周期的结果提示,Cur能够阻止肺癌细胞A549由G,期进入S期,提高G0／G1期细胞的百分比。结论：Cur能够抑制A549细胞胞浆内β-catenin蛋白进入胞核,阻断Wnt信号转导通路,进而抑制下游靶基因c-myc的表达,阻止肺癌细胞A549由G1期进入S期,有效抑制了A549细胞的增殖。     

IGF1R-shRNA重组慢病毒的构建及对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 构建IGF1R基因的shRNA慢病毒载体,转染A549细胞鉴定沉默效率,观察其对A549细胞增殖能力的影响.方法 设计IGF1R干扰序列,与pGC-LV慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染A549细胞,应用RT-PCR和Western blot检测IGF1R干扰效果;细胞生长抑制实验、克隆形成实验及细胞周期检测评价其对A549细胞增殖的影响. 结果 成功构建了IGF1R-shRNA重组慢病毒并高效感染A549细胞,IGF1R mRNA及蛋白表达量分别下降74.51％,70.53％;细胞群体倍增时间显著延长,克隆形成能力显著降低,细胞周期阻滞于G0/G1期. 结论 本研究构建的重组慢病毒能显著抑制IGF1R表达,抑制A549细胞增殖.     

MicroRNA-433在非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移中的作用

目的 研究microRNA-433（miR-433）对人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖及迁移的作用。方法 采用实时聚合酶链反应（real-time PCR）检测miR-433在A549、NCI-H1299、NCI-H358以及人肺成纤维细胞系HFL1中的表达。不同浓度miR-433?mimic转染A549细胞,选取最佳浓度进行后续实验;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞迁移情况;双荧光素酶报告基因法检测miR-433与p21活化激酶4（PAK4）的靶向关系;Western blotting检测PAK4、单丝氨酸蛋白激酶1（LIMK1）、磷酸化单丝氨酸蛋白激酶1（p-LIMK1）、丝切蛋白（Cofilin）和磷酸化丝切蛋白（p-Cofilin）的表达。结果 与HFL1比较,miR-433 在3种NSCLC中的表达均降低。过表达miR-433 48?h后,A549细胞增殖和迁移能力降低,差异有统计学意义（P?< 0.05）。双荧光素酶报告基因法证明PAK4为miR-433的靶向调节基因,且PAK4在3种NSCLC中的表达均上升。过表达miR-433后细胞中PAK4、p-LIMK1、p-Cofilin的表达均降低,与mimic control组比较,差异有统计学意义（P?<0.05）。结论 miR-433能通过靶向下调PAK4的表达,抑制LIMK1/cofilin信号通路,抑制A549细胞的增殖及迁移。