补肾柔肝方治疗大鼠肝纤维化的实验研究

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine, DMN)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用.方法: 雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组及治疗组.模型组和治疗组大鼠以10 mg/kg的剂量腹腔注射0.5%DMN,1次/d,每周连续3 d,共4周.模型组在造模结束后给予生理盐水灌胃,而治疗组在造模结束后灌胃补肾柔肝方(10 ml·kg-1·d-1)进行治疗干预,共用药4周.第8周末处死全部大鼠,采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素(total bilirubin, TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)、白蛋白(albumin, A)及球蛋白(globulin, G)等;用放射免疫法检测血清透明质酸(hyaluronic acid, HA)、层黏连蛋白(laminin, LN)及Ⅳ型胶原(collagen Ⅳ, Ⅳ-C)的含量.结果:治疗组大鼠一般状态明显好于模型组;正常组大鼠无死亡,而模型组大鼠病死率为40%(6/15),治疗组病死率为20%(3/15);与正常组比较,模型组大鼠的血清TBIL、ALT及AST显著升高(P<0.01),治疗组较模型组有显著改善(P<0.01);模型组大鼠血清的A/G严重倒置,达到0.62±0.07,较正常组差异显著(P<0.01),而治疗组的A/G有一定程度的改善,为0.77±0.04(P<0.05),但是仍倒置比较明显.血清胶原成分检测结果表明,模型组血清胶原成分HA、LN及Ⅳ-C的含量均较正常组显著增高,分别为正常组的1.72、1.86、3.71倍;治疗组HA、LN、Ⅳ-C均较模型组显著下降,分别为正常组的1.26、1.18、2.47倍.结论:补肾柔肝方对大鼠具有较好的抗肝纤维化作用,可用于肝纤维化的治疗.     

补肾柔肝方对二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的预防作用及其机制研究

目的：探讨补肾柔肝方对二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine，DMN）诱导大鼠肝纤维化的预防作用及初步机制。方法：雄性Wistar大鼠40只，随机分为正常对照组（n=10）、模型组（n=15）及补肾柔肝方预防组（n=15）。模型组和补肾柔肝方预防组以10mg／kgDMN腹腔注射，1次／d，每周连续3d，共4周。模型组在造模同时给予生理盐水灌胃，补肾柔肝方预防组在造模同时给予补肾柔肝方灌胃，共4周；第4周末处死全部大鼠，留取血清及肝组织标本。采用全自动生化分析仪检测血清总胆红素（total bilirubin．Tbil）、丙氨酸氧基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、白蛋白等；应用逆转录聚合酶链式反应法检测肝组织结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）和Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果：补肾柔肝方预防组大鼠一般状态明显好于模型组；模型组大鼠死亡率为13．33％（2／15），补肾柔肝方预防组死亡率为6．67％（1／15）；模型组大鼠腹水发生率为46．67％（7／15），补肾柔肝方预防组大鼠腹水发生率为20％（3/15）·雨组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；补肾柔肝方组肝功能较模型组有显著改善（P〈0.01）。模型组肝组织CTGF和Ⅰ型胶啄mRNA表达明显增强，补肾柔肝方预防组与模型组相比明显减弱（P〈0．01）。结论：补肾柔肝方可通过抑制大鼠盱组织CTGF和Ⅰ型胶原mRNA的表达．达到抗肝纤维化的作用。     

补肾柔肝方抑制血管新生的抗小鼠肝纤维化作用机制

目的：从血管新生角度探讨补肾柔肝方抗小鼠肝纤维化作用机制。方法：雄性C57小鼠按体质量分层随机分为正常组、模型组、补肾柔肝方组、索拉非尼（Sorafenib）组。模型组、补肾柔肝方组、索拉非尼组以0.4%二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射,1次/d,每周3次,共8周,诱导肝纤维化模型。造模第5周开始给药,8周后处死留取血清、肝组织样本。记录小鼠体质量变化及死亡情况;取材后检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及白蛋白（ALB）含量。以天狼猩红胶原染色和肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量评估肝纤维化程度;以肝组织血小板内皮细胞粘附分子-1(CD31)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)蛋白表达情况评价肝脏血管新生情况。结果：模型组小鼠死亡率为15.4%(2/13),补肾柔肝方组无小鼠死亡,索拉非尼组小鼠死亡率7.7%(1/13)。补肾柔肝方组及索拉非尼组小鼠血清ALT、AST含量较模型组降低（P<0.05）,血清ALB含量升高（P<0.05）;补肾柔肝方组和索拉非尼组小鼠肝组织Hyp含量较模型组显著降低（P<0.05）。天狼星红染色显示,补肾柔肝方组和索拉非...     

补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化临床对照研究

目的:探讨补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化的临床疗效。方法:采用随机对照的方法,将60例患者分为治疗组30例和对照组30例。治疗组给予补肾柔肝方,对照组给予复方鳖甲软肝片治疗,疗程为24周。观察两组患者的临床疗效及血清肝功能、肝纤维化指标及Fibroscan的变化。结果:治疗后治疗组和对照组相比,症状和体征改善显著,两组比较有统计学意义(P0.05);治疗组患者的HA、PШP下降幅度明显大于对照组(P0.05)。结论:补肾柔肝方治疗乙肝后肝纤维化具有较好的临床疗效,其降低肝纤维化指标HA、PШP及改善肝弹力的效果优于复方鳖甲软肝片。     

肝纤维化大鼠TGF-β1与TIMP-1 mRNA的表达及补肾柔肝方的治疗作用

目的:探讨中药复方补肾柔肝方对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)诱导大鼠肝纤维化后肝脏组织金属蛋白酶抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)的影响,以了解其对肝纤维化的治疗作用和分子机制.方法:雄性Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组、模型组和治疗组,对模型组和治疗组运用DMN诱导大鼠肝纤维化.治疗组在造模4周后给予补肾柔肝方灌胃,剂量10 g·kg-1·d,共治疗4周.第8周末处死全部大鼠,对肝组织进行HE和天狼猩红染色观察,并采用RT-PCR半定量方法,检测大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1mRNA的表达水平.结果:肝组织病理学研究结果显示DMN可以成功诱导大鼠肝纤维化,模型组肝组织TIMP-1和TGF-β1mRNA表达明显增强,中药复方治疗组与模型组相比明显减弱,而正常对照组表达较少.结论:TIMP-1与TGF-β1mRNA的表达与肝纤维化的发生密切相关,中药复方补肾柔肝方对肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1及TGF-β1具有明显的抑制作用,可达到抗肝纤维化的作用.     

柔肝抗纤方对活动性和非活动性肝纤维化大鼠作用的实验研究

活血化瘀与扶正补虚组成的柔肝抗纤复方对ＤＭＮ造模的纤维化大鼠有明显的保肝降酶和抗纤维化作用，其治疗处理优于预防（防治）处理；柔肝抗纤复方对活动性和非活动性肝纤维化的不同作用，显示出活血化瘀药对活动性肝纤维化没有良好的防治作用；ＤＭＮ造模制作的肝纤维化模型具有较多的优越性，此模型在防治肝纤维化的研究中，有实际意义。     

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝组织超微结构的影响

目的:观察柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效,分析并探讨其抗肝纤维化的机制。方法:建立Wistar大鼠CCl4损伤性肝纤维化模型,HE染色半定量、Masson三色胶原染色半定量,电镜进行肝组织病理学观察。同时检测血清肝功能指标(ALT、TP、ALB、GLB、A/G)。结果:经柔肝抑纤饮治疗后,实验性肝纤维化大鼠肝功能指标明显改善。治疗组降低GLB水平好于预防组(P<0.05),可明显降低血清中异常升高的ALT水平,提高A/G比值;电镜观察发现,治疗组肝细胞变性程度明显减轻,综合积分与模型组比较差异具有显著性意义;胶原半定量积分优于模型组;治疗组肝细胞变性程度、形态、功能均优于模型组,肝窦基底膜部分保持完整性、连续性,毛细血管化程度轻于模型组。结论:柔肝抑纤饮具有保护肝细胞、拮抗肝星状细胞的活化增殖、增加胶原降解、增加纤维化逆转因素、维持肝窦的完整性及通透性等作用,从而发挥抗肝纤维化作用。     

柔肝煎冲剂抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的观察柔肝煎冲剂治疗大鼠肝纤维化的效果，探讨其作用机制。方法对照组正常喂养大鼠，采用复合因子法造大鼠肝纤维化模型，模型组不进行治疗，治疗组用柔肝煎冲剂治疗。结果柔肝煎冲剂可使肝纤维化大鼠血清中HA、LN明显降低，FAK、α—SMA表达水平明显降低。结论柔肝煎冲剂治疗肝纤维化疗效显著，对肝纤维化的发展具有一定的阻断作用。     

中药正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响

目的:观察正肝化瘀方对肝纤维化大鼠肝组织胶原代谢的影响。方法:采用四氯化碳+高脂低蛋白饮食制备大鼠肝纤维化模型,治疗组以正肝化瘀方灌胃,正常组、模型组予以等量生理盐水灌胃,6 w后取材检测。用Jamall氏法测定各组大鼠肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,Western blot法检测各组大鼠肝组织α-SMA、Ⅰ型、Ⅳ型胶原蛋白的表达。结果:与模型组比较,治疗组大鼠肝组织Hyp含量及α-SMA、Ⅰ/Ⅳ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01)。结论:正肝化瘀方的抗肝纤维化机制与减少肝组织胶原合成与沉积有关。     

补肾调肝方对更年期雌性大鼠性激素及生殖器官的影响

目的：探讨补肾调肝方治疗更年期综合征的机理。方法：将40只更年期大鼠，随机分成治疗组（分高、低剂量组）、西药组及模型组，与青年组对照，8周后观察性激素及子宫卵巢变化。结果：中、西药治疗组血清E2含量较空白组升高，FSH、LH含量降低（除低剂量组LH含量外），高剂量组及西药组子宫重量系数增加（P＜0.05）。结论：补肾调肝方能提高更年期大鼠血清E2水平，降低FSH、LH含量，改善卵巢功能；补肾调肝方的作用与剂量的相关性有待进一步研究。     

柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:观察柔肝抑纤饮对实验性肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响,探讨其抗肝纤维化机制。方法:用CCl4制备实验性肝纤维化大鼠模型,采用DNA片断琼脂糖凝胶电泳结合透射电镜观察检测肝细胞凋亡情况,并检测血清纤维化指标水平和半定量肝组织胶原增生情况。结果:柔肝抑纤饮可明显抑制肝细胞凋亡,降低血清纤维化指标水平和肝组织胶原增生程度。结论:柔肝抑纤饮抗肝纤维化的作用途径之一是抑制肝细胞的凋亡。     

柔肝抗纤饮对肝硬化肝纤维化指标的影响

目的观察柔肝抗纤饮对肝硬化患者肝纤维化指标的影响。方法将63例肝硬化患者随机分为治疗组和对照组,观察用药前后各项肝纤维化指标的变化。结果治疗组治疗后血清HAI、VC、PcIII、LN水平与治疗前相比有显著性降低（P〈0.01）,与对照组相比有显著性差异（P〈0.01）。结论柔肝抗纤饮可降低血清肝纤维化指标。     

甘草酸对大鼠肝纤维化过程中肝组织基因表达的影响

目的 研究甘草酸抗肝纤维化作用的分子机制。方法 建立四氯化碳诱导肝纤维化和甘草酸治疗大鼠模型;选取正常组、造模组、治疗组大鼠肝脏各1只进行cDNA微阵列研究;从cDNA微阵列结果中选取一个在造模大鼠肝脏中表达明显异常、但经甘草酸治疗后表达正常的基因（smurf2),用半定量RT-PCR检测此基因在不同实验阶段(第1、2、4、8周)3组大鼠中的表达变化。结果 通过cDNA微阵列发现smurt2、PTAFR、CYP2D6、FGG等多种与炎症、代谢有关的基因在造模大鼠肝脏中表达上调,甘草酸治疗后恢复正常表达。通过半定量RT-PCR研究发现,经四氯化碳处理第1周时smurt2在3组大鼠肝脏中表达无异常变化,第2周时在造模和治疗组中表达均下调,第4周时在造模组中表达上调、治疗组中表达下调,第8周时在造模组表达下调,治疗组上调。结论 调控smurf2基因转录水平可能是甘草酸抗肝纤维化作用的分子机制之一。     

柔肝泻脂方对脂肪肝大鼠主动脉脂质的影响

目的:探讨柔肝泻脂方对脂肪肝大鼠主动脉脂质的影响.方法:以高脂饮食建立大鼠脂肪肝模型,然后用柔肝泻脂方进行治疗,实验结束进行主动脉匀浆脂质的检测.结果:柔肝泻脂方能明显降低高脂饮食大鼠的主动脉匀浆胆固醇的含量(P＜0.01).结论:柔肝泻脂方具有降低主动脉脂质沉积的作用,提示对防治血管粥样斑块具有一定作用.     

扶正健肝方对免疫性肝纤维化大鼠胶原代谢的影响

目的观察扶正健肝方对白蛋白诱导的肝纤维化大鼠胶原代谢的影响。方法采用人血白蛋白(HSA)诱导大鼠肝纤维化,并随机分为扶正健肝方大、小剂量组(生药39.4、9.85g/kg)、秋水仙碱组(0.0001g/kg)、模型组、对照组等5组。放射免疫分析法测定层粘连蛋白(laminin,LN)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)和Ⅳ型胶原(collagen type Ⅳ,Ⅳ-C)的含量,化学法测定肝脏羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)的含量。采用HE染色及VonGieson胶原纤维特殊染色观察肝组织结构改变及肝纤维化程度。图像分析系统定量分析肝内胶原纤维含量。结果扶正健肝方能明显降低人血白蛋白诱导肝纤维化大鼠血清层粘连蛋白、透明质酸和Ⅳ型胶原的含量(P<0.05,P<0.01),同时可降低大鼠肝脏中羟脯氨酸的含量。病理学观察,扶正健肝方能使大鼠胶原纤维沉积明显减轻,假小叶结构明显减少。图像定量分析显示扶正健肝方能明显降低肝脏胶原纤维的含量。结论扶正健肝方能通过对肝脏胶原物质代谢的影响而抑制人血白蛋白诱导的大鼠肝纤维化形成和发展。     

健脾柔肝方治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的观察健脾柔肝方治疗慢性乙型肝炎（简称慢性乙肝）肝纤维化的临床疗效。方法将52例患者随机分为两组,两组皆以口服拉米夫定作为抗病毒基础治疗,治疗组28例以健脾柔肝方治疗,对照组24例以大黄蛰虫丸治疗,疗程为3个月。观察两组患者的肝功能、血清肝纤维化指标及腹部肝脾B超的改变。结果治疗组总有效率为89.2%,对照组总有效率为70.8%,两组比较（P〈0.05）。结论健脾柔肝方具有良好的抗慢性乙肝肝纤维化的作用。     

强肝丸对肝纤维化大鼠肝组织胶原表达的影响

目的 初步探讨强肝丸抗肝纤维化的药理作用.方法 Wistar大鼠随机分成3组,即正常对照组、模型组、强肝丸治疗组.采用腹腔注射四氯化碳(CCl4)橄榄油混合液的方法 制备肝纤维化动物模型.治疗组采用预防给药的方式,造模结束后持续治疗4周.治疗结束后,动物麻醉,取肝组织,进行羟脯氨酸含量检测、HE染色、Mallory染色及Ⅰ型胶原(CoL Ⅰ)免疫组织化学染色.结果 与模型组比较,强肝丸能显著降低肝组织中羟脯氨酸水平(P<0.01),减少肝组织中总胶原的合成和沉积(P<0.05),下调肝组织中Ⅰ型胶原(CoL Ⅰ)的表达(P<0.05).结论 强肝丸对肝组织中胶原蛋白的合成过程有显著抑制作用,从而阻断肝纤维化的病理过程.     

补肾柔肝法防治骨性关节炎作用机制探讨

骨性关节炎(osteoarthritis,OA)是生物学因素和力学因素共同作用下软骨细胞、细胞外基质、软骨下骨三者降解和合成正常偶联失衡的结果,是中老年人常见的慢性、进展性骨关节疾病.随着人口的老龄化发病率逐渐增加,已成为严重的公共健康问题.目前,骨性关节炎的确切病因病机尚不清楚,治疗方法虽多,但主要以对症治疗为主,缺乏特效疗法.     

扶正化瘀方对肝纤维化大鼠间质性基质金属蛋白酶活性的影响

为探讨扶正化瘀方影响间质性基质金属蛋白酶活性的抗肝纤维化作用机制。采用二甲基亚硝胺腹腔注射4w诱导大鼠肝纤维化模型。随机分为正常组、模型组与治疗组;治疗组成模后以扶正化瘀方灌胃4w。模型组予以等量生理盐水;检测血清肝功能与肝组织羟脯氨酸含量。蛋白印迹法分析肝组织α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原、基质金属蛋白酶-13和纤溶酶原激活物抑制剂-1蛋白表达,同位素标记底物凝胶法检测间质性基质金属蛋白酶活性。结果：扶正化瘀方显改善模型大鼠肝功能与肝组织胶原沉积;明显降低肝组织羟脯氨酸含量。抑制肝组织α-SMA、I型胶原蛋白表达;对基质金属蛋白酶-13蛋白表达无影响,但明显降低PAI-1蛋白表达。促进间质性基质金属蛋白酶活性。提示扶正化瘀方可促进肝纤维化大鼠间质性基质金属蛋白酶酶原的激活与活性水平。该作用是扶正化瘀方逆转肝纤维化的重要机制之一。