神经干细胞移植对老年痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元及学习记忆能力的影响.方法:利用无血清培养技术获得新生SD鼠的基底前脑神经干细胞,切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射神经干细胞.4周后行Y迷宫测试学习记忆能力,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑胆碱能神经元变化.结果:损伤组损伤侧的内侧隔核(MS)和斜角带核(VDB)的NGFR阳性神经元大量减少,分别减少59.7%和5 1.4%.NSC移植组损伤侧的NGFR阳性神经元得到补充和保护,MS和VDB细胞数分别下降22.0%和26.1%.同时,NSC移植组损伤侧MS的NGFR阳性神经元的面积、周长显著增大(P＜0.01),灰度显著增加(P＜0.01);损伤侧VDB的NGFR阳性神经元的面积明显增大且灰度明显增加(P＜0.05),周长显著增大(P＜0.01).Y迷宫测试结果显示,NSC移植组大鼠的空间学习能力得到明显改善(P＜0.05),记忆能力得到显著提高(P＜0.01),基底前脑NGFR阳性细胞数与大鼠的空间学习记忆能力呈正相关.结论:神经干细胞移植对老年性痴呆模型鼠基底前脑胆碱能神经元有明显的补充和保护作用,同时大鼠的学习记忆能力得到明显的改善.     

免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射建立阿尔茨海默病动物模型的实验研究

目的建立大鼠阿尔茨海默病(Alzheimer′sdisease,AD)动物模型,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元改变。方法采用SD大鼠侧脑室注射192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),21d后行Y迷宫检测,28d后处死大鼠,免疫组化观察基底前脑神经生长因子受体(NGFR)阳性神经元细胞数的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠的学习次数、记忆能力(107.38±9.34、3.75±0.71)较正常组明显下降(P<0.01)。免疫组化显示模型组损伤侧在内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)的NGFR阳性神经元细胞数(7.50±1.77、15.00±2.27)与正常组对应侧比较分别减少81.96%和84.23%(P<0.01),MS和VDB的NGFR阳性神经元面积和周长降低(P<0.05),灰度值升高(P<0.05)。结论免疫毒素192-IgG-saporin侧脑室注射可以模拟AD行为学改变和部分病理学特征。     

神经生长因子缓释微球移植对AD模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的保护作用

目的观察神经生长因子微球对AD模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的保护作用。方法采用双乳化技术制备神经生长因子缓释微球;切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射神经生长因子缓释微球;4周后,利用免疫组化法观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元变化。结果损伤组损伤侧的MS和VDB的ChAT阳性神经元大量减少,分别减少61.9%和51.4%;神经生长因子缓释微球治疗组损伤侧的ChAT阳性神经元得到明显的保护,MS和VDB细胞数分别下降20.60%和20.9%,明显高于损伤组损伤侧的ChAT阳性神经元存活数。结论神经生长因子缓释微球能够成功地将神经生长因子运载到脑内,神经生长因子缓释微球移植对AD模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元有明显的保护作用。     

NGF/GDNF基因修饰神经干细胞移植对AD模型鼠前脑胆碱能神经元的保护作用

目的　观察NGF GDNF基因修饰神经干细胞 (NSC)单独和联合移植对穹窿海马伞 (FF)切断后胆碱能神经元的保护作用。　方法　将两种基因修饰的NSC单独和联合移植入FF切断的大鼠侧脑室。移植后 3周取脑行ChAT免疫组织化学染色 ,用Student NewmanKaels方法对内侧隔核 (MS)和斜角带垂直支 (VDB)的ChAT阳性细胞数 (损伤侧与正常侧的百分比 )进行计数分析。　结果　NGF组伤侧MS的ChAT阳性神经元数为 81% ,明显高于损伤组 (34% )、NSC组 (36 % )和GDNF组 (5 0 % ) ,P <0 0 1;NGF GDNF组为 6 8% ,明显高于损伤组和NSC组 (P <0 0 1) ,亦高于GDNF组 (P <0 0 5 ) ;GDNF组与损伤组和NSC组相比 ,有统计学意义 (P <0 0 5 )。NGF组和NGF GD NF组伤侧VDB的ChAT阳性神经元数分别为 80 %和 72 % ,明显高于损伤组 (5 6 % )和NSC组 (5 2 % ) ,P <0 0 1,亦高于GDNF组 (5 9% ) ,P <0 0 5 ;GDNF组与损害组和NSC组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。　结论　NGF GDNF基因修饰NSC单独和联合移植均能不同程度地保护损伤的ChAT阳性神经元 ,NGF组和NGF GDNF组作用较大 ,GDNF组作用较小。     

BDNF和神经干细胞联用对老年痴呆鼠基底前脑 胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)联合应用对老年痴呆大鼠基底前脑胆碱能神经元及大鼠学习记忆能力的影响。利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSCs,行BrdU标记。切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射NSCs,同时侧脑室注射BDNF,2周后行nestin和BrdU/NF、BrdU/GFAP免疫荧光双标染色,4周后行Y迷宫测试,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑神经营养因子受体(NGFR)阳性神经元数目变化。结果发现,移植后NSCs能够在宿主体内存活且分化成神经元和胶质细胞;免疫组化结果显示损伤组大鼠胆碱能神经元数在内侧隔阂(MS)和斜角带(VDB)分别减少64.3%和49.3%,较正常组明显下降(P<0.01);移植组神经元数下降34.1%和27.6%较损伤组有改善(P<0.05),但与正常组比较有显著性差异(P<0.05);联合组神经元数减少15.1%和18.6%,与正常组无显著性差异(P>0.05)。Y迷宫测试结果显示,大鼠的学习记忆能力与基底前脑NGFR阳性细胞数呈正相关。提示,BDNF和NSCs移植的联用较单独使用NSCs或BDNF更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

神经干细胞与脑源性神经营养因子联合治疗对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与脑源性神经营养因子（BDNF）联合应用对老年性痴呆鼠基底前脑一氧化氮合酶（NOS）阳性神经元的影响.方法切断成年SD大鼠左侧穹窿海马伞（FF）,基底前脑行神经干细胞移植,同时持续侧脑室注射BDNF,4周后行组织化学染色结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数量和形态学参数的变化.结果损伤后1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核（MS）和斜角带垂直支（VDB）内可观察到NOS阳性神经元明显减少,分别为正常组的35.5%和55.8%,（与正常组相比P＜0.01）;移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的74.7%和95.7%,（与损伤组相比P＜0.01）;联合组NOS阳性神经元数达到正常组的115.2%和151.3%,（与移植组相比P＜0.05及P＜0.01）.细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含部分中等大小的未成熟细胞;联合组中该中等大小的细胞更多.结论神经干细胞移植与BDNF联合治疗,对AD模型鼠基底前脑MS、VDB的NOS阳性神经元有明显的补充和保护作用,并且联合治疗效果比单纯神经干细胞移植效果更佳.     

Neurturin对体外培养的GABA阳性神经元生长发育的作用

为探讨neurturin(NRTN)、神经生长因子(NGF)对新生大鼠海马的γ氨基丁酸能神经元生长发育的影响,本研究用免疫组化结合图像分析技术观察neurturin和NGF对体外培养海马的γ氨基丁酸能阳性神经元生长发育的作用。结果显示:培养4d时,NRTN组的γ氨基丁酸能阳性神经元细胞数目、突起数、胞体面积和最长突起长度均与对照组有显著性差异(P<0.05),NGF组各项指标与对照组均无显著性差异(P>0.05),NGF+NRTN组突起数多于NRTN组(P<0.05);培养8 d时,NRTN组各项指标均与对照组仍有明显差异(P<0.05),NGF+NRTN组突起数仍多于NRTN组(P>0.05)。上述结果提示,neurturin对体外培养的新生大鼠γ氨基丁酸能阳性神经元生长发育有营养作用,但NGF对体外培养的新生大鼠γ氨基丁酸能阳性神经元无神经营养作用;neurturin和NGF的联合应用并不比单独使用neurturin好。     

Neurturin和神经生长因子对体外培养的神经生长因子受体阳性神经元生长发育的影响

目的探讨Neurturin(NTN)、神经生长因子(NGF)对新生大鼠基底前脑胆碱能神经元生长发育的影响。方法用免疫组化结合图象分析技术观察Neurturin和NGF对培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育的作用。结果培养4d时,NTN组的NGF-R阳性神经元细胞数目、突起数、胞体面积和最长突起长度均与对照组有显著性差异(P<0.05),NGF+NTN组各项指标均优于NGF组或NTN组(P<0.05);培养8d时,NTN组除突起数目外其他各项指标均与对照组无显著性差异(P>0.05),NGF+NTN组各项指标仍然均优于NGF组或NTN组(P<0.05);NTN组NGF-R阳性神经元突起数多于NGF组(P<0.05)。结论Neurturin对体外培养的新生大鼠基底前脑NGF-R阳性神经元生长发育有营养作用,但作用时间较短,而且增加突起数的作用较NGF强;Neurturin和NGF的联合作用较单独使用Neurturin或NGF为好。     

侧脑室注射192-IgG-saporin致痴呆动物模型的实验研究

建立老年性痴呆模型大鼠,并观察其学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元数目的变化。在成年SD大鼠左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin(2.5μg/5μl),3周后行Y迷宫检测其学习和记忆能力;4周后处死大鼠,采用免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数目的变化。结果显示:模型组大鼠的学习记忆能力与正常组相比明显下降(P<0.01);模型组基底前脑的内侧隔核(MS)和斜角带垂直部(VDB)胆碱能神经元数目分别减少至正常组的9.70%和14.09%,与正常组相比均明显下降(P<0.01);学习、记忆能力与基底前脑胆碱能神经元数目密切相关。上述结果表明应用192-IgG-saporin免疫毒素能成功建立AD大鼠动物模型,该模型可用于抗痴呆药物的筛选及药效的评价。     

神经生长因子的研究现状

<正> 神经生长因子(Nerve Growth Factor, NGF)对周围神经系统的感觉和交感神经细胞的生存、分化及功能活动至关重要。近来有证据说明神经生长因子对中枢神经系统胆碱能神经元的发育及功能也有重要作用。神经生长因子及神经生长因子信使核糖核酸(NGF mRNA)在脑内海马及皮质中的含量最高。切断大鼠隔-海马通路后,将神经生长因子引入脑内可防止损伤引起的基底前脑胆碱能神经元的萎缩及坏死,这提示神经生长因子对累及胆     

神经生长因子（NGF）对基底前脑NGF－受体阳性神经元损伤后的保护作用

切断老年鼠（２４月龄）左侧穹窿海马伞，造成隔海马胆碱能系统损伤模型。用免疫组化方法分析脑室注射ＮＧＦ对基底前脑神经生长因子受体（ＮＧＦ－Ｒ）阳性神经元损伤的影响、实验证明损伤一个月后，损伤对照组损伤例内侧隔核和斜角带核垂直支ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量分别减少了５９．４％和３７．２４％，残存的神经元发生萎缩及表面受体含量增加。ＮＧＦ治疗组，损伤侧的内侧隔核和斜角带核垂直支的ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元数量只减少４．４７％和２．３６％，细胞形态学参数及受体灰度值都类似于正常。提示ＮＧＦ对基底前脑ＮＧＦ－Ｒ阳性神经元损伤后有较好的保护作用。     

Bone mesenchymal stem cells for gene transfer of NGF to the adult rat brain: rescue the NGFR p75 positive neurons from fimbria-fornix lesion-induced degeneration

The study was to evaluate the therapeutic benefit of transplanted bone mesenchymal stem cells (BMSCs) transfected never growth factor (NGF) gene and GFP gene (as a reporter gene), in treating the rat with fimbria-fornix lesion. After transduction of NGF gene via recombinant retroviral vectors into the rat BMSCs, BMSCs were therefore transformed into the GFP-NGF positive BMSCs, nearly 100% of BMSCs expressed NGF, and then transplanted into basal forebrain of rat with fimbria-fornix lesion. After 2 weeks post-transplantation, the GFP-NGF positive BMSCs survive and fuse in vivo with astroglia or NGFR p75 positive neurons in the basal forebrain, no evidence of transdifferentiation was observed in this study. The number of NGFR p75 positive neurons in basal forebrain of NGF group was significantly higher than those of the void plasmid group (p < 0.05) or the PBS group (p < 0.01). These results indicate that the GFP-NGF positive BMSCs provide, by way of paracrine, NGF that effectively perform the functions of neuroprotection, which cell fusion may be also contribute to.     

神经干细胞移植对注射192-IgG-saporin致AD动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响

目的探讨神经干细胞(NSCs)移植对注射192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元的影响。方法将24只成年SD大鼠随机分为正常组、模型组和移植组,每组8只。模型组:左侧侧脑室注射免疫毒素192-IgG-saporin2.5μg/5μL,建立192-IgG-saporin致老年性痴呆动物模型;移植组:动物模型建立后,于基底前脑行神经干细胞移植,4周后行免疫组织化学染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑ChAT阳性神经元数量和形态学参数的变化。结果模型组注射192-IgG-saporin后1个月,观察到注射侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)ChAT阳性神经元明显减少,分别为正常组的9.70%和14.10%(与正常组相比,P<0.01);移植组ChAT阳性神经元恢复到正常组的71.51%和73.52%(与模型组相比,P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组ChAT阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。结论神经干细胞移植对192-IgG-saporin致痴呆模型鼠基底前脑ChAT阳性神经元有明显补充和保护作用。     

穹窿海马伞损伤对前脑NOS阳性神经元的影响

本研究用NADPH－d组织化学方法，对成年大鼠一侧穹窿海马个切断后前脑NOS阳性神经元的变化进行了计量学分析。结果表明：损伤1周后，损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支的NOS阳性神经元数分别减少到71．79％和85．86％，细胞面积缩小到86．34％和92．71％，细胞灰度值增大到111．86％和120．37％；损伤后2周，损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支的NOS阳性神经元数量持续下降，分别减少到63．95％和73．56％，细胞面积缩小到61．78％和89．77％，灰度值增大到116．78％和128．96％；损伤后3、4周，损伤侧两核的NOS阳性神经元的变化和第2周时类似，数值保持在较稳定的水平。提示受损的前脑NOS阳性神经元发生退变。     

Neurturin和NGF对老年性痴呆模型鼠海马突触素表达的影响

为了探讨联合应用 Neurturin和神经生长因子对老年性痴呆模型鼠海马突触素的影响 ,本研究采用切断成年 SD大鼠左侧穹窿海马伞 ,建立隔 -海马胆碱能系统损害的痴呆模型 ,损伤 4周后 ,用免疫组化和图象分析技术等方法对大鼠海马突触素进行定量分析。结果显示 ,损伤对照组损伤侧海马 CA1 区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别减少了42 .60 %、46.0 4%、5 7.3 6%和 5 5 .2 2 % ,损伤对照组与正常对照组之间有高度显著性差异 ( P<0 .0 1) ;NGF治疗组损伤侧海马CA1 区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别只减少了 3 3 .64 %、3 8.2 5 %、3 8.42 %和 2 7.64 % ,NGF治疗组与损伤对照组之间有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ;联合治疗组损伤侧海马 CA1 区多形层、辐射层、腔隙分子层和齿状回分子层突触素含量分别只减少了 9.97%、8.0 5 %、14 .70 %和 4.2 8% ,联合治疗组与损伤对照组之间有高度显著性差异 ( P<0 .0 1)。结论 :联合应用 neurturin和 NGF促使老年性痴呆模型鼠海马突触素含量增多的效果较单用 NGF治疗好     

Recombinant human NGF-loaded microspheres promote survival of basal forebrain cholinergic neurons and improve memory impairments of spatial learning in the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion

Neurotrophic factors are used for the experimental treatment of neurological disorders, such as Alzheimer's disease. However, delivery of the neurotrophic factors into the brain remains a big challenge. Recombinant human nerve growth factor (NGF)-loaded microspheres were fabricated and characterized in vitro and in vivo in our previous study. The present study was to assess the therapeutic benefit of rhNGF-loaded microspheres in treating the rat model of Alzheimer's disease with fimbria-fornix lesion. Recombinant human NGF-loaded microspheres were implanted into the basal forebrain of the rats with fimbria-fornix lesion. Four weeks after implantation in the basal forebrain, immunohistochemical analysis showed that rhNGF-loaded microspheres had a significant effect on the survival of axotomized cholinergic neurons in the medial septum (MS) and vertical diagonal branch (VDB) (p < 0.05). Y-maze tests showed rhNGF-loaded microspheres can significantly improve the ability of spatial learning and memory of the rats with fimbria-fornix lesion (p < 0.05). These results indicate that rhNGF-loaded microspheres are an effective means for the treatment of Alzheimer's disease.