复方鳖甲软肝方对活化肝星形细胞细胞因子分泌的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cell，HSC)活化时分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)和血小板源性生长因子(platelet derived growth factor，PDGF)的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养、药物血清制备，免疫组化检测各实验组血清对肝星形细胞分泌TGF-β1。PDGF的影响，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养48h模型组TGF-β1，PDGF阳性反应物A值分别为733．58&;#177;189．73和659．45&;#177;76．56；72h分别为1509．87&;#177;77．50和1208．02&;#177;132．21。与对照组(48h：570．78&;#177;57．61和479．65&;#177;38．49；72h：1279．30&;#177;147．78和805．30&;#177;121．04)比较，差异显著有显著性意义(F=5．833～21．250，P&;lt;0．05)。培养48，72h。高、中剂量药物组与模型组TGF-β1，PDGF表达比较，差异也有显著性意义(F=5．833～21．250，P&;lt;0．05)，可显著抑制TGF-β1。PDGF表达。并呈量效关系。结论：复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时活化肝星形细胞分泌TGF-β1和PDGF。从而达到抑制肝星形细胞增殖、活化的抗肝纤维化防治作用。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)结蛋白、突触素表达的影响，以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48，72h后，免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达，并经图像分析系统作定量分析。结果：培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78．93&;#177;18．56，396．29&;#177;78．56；58．95&;#177;5．21，138．92&;#177;20．21；63．83&;#177;12．97，190．87&;#177;52．97；75．46&;#177;26．72，284．54&;#177;66．72)与模型组(119．69&;#177;23．84，528．79&;#177;26．84)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；培养48，72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较。差异也有显著性意义(P&;lt;0．05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)增殖的影响，以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响，酶标仪波长为450 nm。结果：培养24h，各组HSC增殖比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；培养48，72h，高、中、低剂量药物组HSCA值(0．47&;#177;0．02，0．55&;#177;0.07：0．46&;#177;0．02,0．58&;#177;0．08；0．51&;#177;0．03，0．69&;#177;0．07)与模型组(0．66&;#177;0．05和0．96&;#177;0.05)比较。差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；高、中剂量组药物组与对照组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48，72h后均能降低或抑制HSC的增殖，尤以高、中剂量作用明显。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞中细胞核因子κB活化的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)中细胞核因子κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)活化的影响,以探讨其防治肝纤维化作用机制与核转录因子之间的相关性。方法:实验选用成年健康雄性SD大鼠75只,随机将75只大鼠分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,免疫组化检测实验各组血清对肝星形细胞中NF-κB活化的影响,并经图像分析系统定量分析。结果:HSC培养24,48,72h,模型组NF-κB表达的速率(NF-κB阳性染色A值分别为:217.36±29.02,429.23±25.48,627.31±37.68)与正常对照组(127.30±15.31,240.65±38.49,321.27±121.04)比较,差异有显著性意义(P<0.05)。高、中剂量药物组NF-κB表达的速率与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。表明HSC培养24h,NF-κB即可在核内发生活化并表达;而复方鳖甲软肝方高、中剂量药物血清组均可有效抑制HSC中NF-κB的活化和表达。结论:复方鳖甲软肝方能有效抑制HSC中NF-κB的活化和表达。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cells，HSC)转型的影响，以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法：将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用大鼠HS分离技术，将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24，48h后，免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)表达，经图像分析系统定量分析。结果：培养24，48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h：高、中、低剂量分别为110．95&;#177;45．21，243．82&;#177;62．97，417．46&;#177;126．72；48h分别为：333．71&;#177;57．90，345．08&;#177;51．85，675．35&;#177;202．20)与模型组(24h：778．93&;#177;190．26；48h：1032．69&;#177;106．6_4)比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-sMA表达，其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞胶原表达及降解的影响

目的：观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepatic stellate cell，HSC)中Ⅰ，Ⅲ型胶原及组织金属蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMPs)表达的影响，以探讨防治肝纤维化作用机制。方法：将成年健康雄性SD大鼠75只，随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组，并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养，药物血清制备，免疫组化检测实验各组肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达经图像分析系统定量分析。结果：培养72h，高、中、低剂量药物组Ⅲ型胶原的表达[Ⅲ型胶原反应物吸光度(A值)为178．364-5．82，182．274-20．32，220．38&;#177;19．32]早于Ⅰ型胶原(Ⅰ型胶原反应物A值为300．23&;#177;25．80。329．37&;#177;45．98，425．38&;#177;19．32)，与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。高、中剂量药物组均可有效抑制Ⅰ，Ⅲ型胶原的表达，并呈药物量效关系；培养24k实验各组均无TIMPs的表达，培养48h后TIMPs开始表达，培养72h时，高、中、低药物组与模型组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)，可显著抑制TIMPs的表达。结论：复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时肝星形细胞中Ⅰ，Ⅲ型胶原及TIMPs的表达，其抗肝纤维化作用机制可能与减少细胞外基质生成的同时，加速已生成的细胞外基质降解有关。     

复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠心肌纤维化的抑制作用

目的：评价复方鳖甲软肝方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化、左室重构及血浆中血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，AngⅡ)、醛同酮的效应。方法：实验选用12周龄SHR50只，随机将其分为5组，即空白对照组、依那普利组、小、中、小剂量复方鳖甲组(小、中、大剂量药物组)，每组各10只。另取正常SD大鼠10只作为正常对照组。测定治疗10周后各组大鼠收缩压、心脏质量指数(heart weight index，HWI)、左室质量指数(left ventricular mass index，LVMI)、胶原蛋白含量，血浆中血管紧张素Ⅱ、醛固酮含量，心肌胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)和血管周围胶原面积(perivascular circuferential area，PVCA)。结果:治疗10周后，空白对照组大鼠收缩压，HWI，LVMI，胶原蛋白含量【(195&;#177;9)mmHg，(5．38&;#177;0．25)，(3．81&;#177;0．09)，(6．13&;#177;0．93)mg／g，1mmHg=0．133kPa】均明显高于正常对照组【(127&;#177;10)mmHg．(3．88&;#177;0．28)，(2．57&;#177;0．17)，(4．19&;#177;0．72)mg／g】(P&;lt;0．01)。依那普利组大鼠收缩压明显低于与空白对照组(P&;lt;0．01)，而复方鳖甲软肝方各组收缩压比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；依那普利组大鼠HWI，LVMI明显低于空白对照组(P&;lt;0．01)，而复方鳖甲软肝方各组差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；依那普利组，复方鳖甲软肝方中、大剂量组大鼠心肌组织胶原蛋白含量明显低于空白对照组(P&;lt;0．05-0.01)。空白对照组AngⅡ，醛固酮和CVF，PVCA均明显高于正常对照组(P&;lt;0．01)。依那普利、中、大剂量药物组AngⅡ明显低于空白对照组(P&;lt;0．01)；依那普利组醛固酮明显低于空白对照组(P&;lt;0．01)，小剂量药物组有所降低(P&;lt;0．05)，中剂量药物组，大剂量药物组亦有明显降低(P&;lt;0．01)，且各复方鳖甲软肝方组比较，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)；依那普利组CVF明显低于空白对照组(P&;lt;0．01)，中、大剂量药物组亦有明显低于空白对照组(P&;lt;0．01)；依那普利组、各剂量复方鳖甲软肝方组大鼠PVCA明显低于空白对照组(P&;lt;0．05-0．01)。结论：复方鳖甲软肝方无明显降压、逆转左室肥厚等功能，但可能通过影响肾素血管紧张素-醛固酮系统的机制，抑制心肌纤维化。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞结蛋白、突触素表达的影响

目的观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体SD大鼠肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)结蛋白、突触素表达的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48,72h后,免疫组化检测各组HSC的结蛋白、突触素表达,并经图像分析系统作定量分析。结果培养24h正常对照组、高、中、低剂量药物组大鼠HSC结蛋白、突触素的表达(A值)(78.93±18.56,396.29±78.56;58.95±5.21,138.92±20.21;63.83±12.97,190.87±52.97;75.46±26.72,284.54±66.72)与模型组(119.69±23.84,528.79±26.84)比较,差异有显著性意义(P<0.05);培养48,72h各组结蛋白、突触素的表达(A值)与模型组比较,差异也有显著性意义(P<0.05)。除低剂量药物组外的其余各组大鼠HSC结蛋白、突触素表达与正常对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论复方鳖甲软肝方能显著抑制HSC结蛋白、突触素的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物抑制HSC活化有关。     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景：严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱，活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质。烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚。目的：观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF—κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB活性、IκB—α的表达及肿瘤坏死因子(TNF—α)的变化，从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制。设计：随机对照的实验研究。单位：创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室。材料：实验于1999—01／06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成。实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只。干预：以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15％Ⅲ度烫伤实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组，即0(正常对照组)，2，6，12，24，48h组。收集腹腔巨噬细胞采用放射免疫法检测TNF—α的含量，电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，免疫印迹法测IκB—α的表达，反转录—PCR测TNF—α mRNA的表达。主要观察指标：①检测TNF—α的含量，②测定NF—κB的活性，③检测IκB-α的表达。④测TNF—α mRNA的表达。结果：烫伤后巨噬细胞分泌TNF—α亢进，于伤后12h达到高峰，为(1085．65&;#177;122．99)ng／L，较正常对照组明显增高(t=14.92，P&;lt;0．01)。NF—κB活性于伤后明显活化，于2h达到了高峰(t=13．31，P&;lt;0．01)，为(56．8&;#177;73)RDU，早于TNF—α的增多。与正常对照组相比．IκB—α的表达于烫伤后2h显著下降(t=4．23，P&;lt;0．01)，达到0．632&;#177;0.086，以后上升，至24h达到高峰(t=7．06，P&;lt;0．01)，为1．161&;#177;0．097，48h稍降(t=4．82，P&;lt;0．01)，为1．149&;#177;0.167以伤后12h为调控点，予PDTC后NF—κB活性及TNF—α mRNA表达量均显著下降(P&;lt;0．01)。结论：烫伤后NF—κB活性及TNF—α表达明显增强，IκB—α对NF—κB在高水平上维持着一种制约关系。烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF—κB信号途径参与TNF—α表达的调控。     

鳖甲和三七对心肌成纤维细胞增殖影响的实验研究

目的：观察以鳖甲和三七为主要成分的复方鳖甲软肝片和氯沙坦对心肌成纤维细胞(cardiac fibmblasts，CFs)增殖的影响。方法：取生后1～3d的雄性SD仔鼠心脏原代培养心肌成纤维细胞、传代，将第3代心肌成纤维细随机分为3组：空白对照组、氯沙坦组、复方鳖甲软肝片组。并根据血清药理学理论，分别以蒸馏水、10mg／kg氯沙坦、0．7g／kg复方鳖甲软肝片喂养新西兰兔获得血清，制备相应培养液干预培养的心肌成纤维细胞。结果：鳖甲片和氯沙坦能明显抑制CFs增殖(空白对照组、氯沙坦组、鳖甲片组的A值分别为0．387&;#177;0．0539，0．181&;#177;0．044，0．212&;#177;0．038，F=5．805，P=0．016)，并将细胞周期阻抑在G1期[(74．32&;#177;1．76)％，(81．02&;#177;4．15)％，(81．62&;#177;3．83)％，F=7．041，P=0．009]，处于分裂期(S期)的细胞比例减少[(18．36&;#177;2．15)％，(13．18&;#177;3．26)％，(11．60&;#177;2．23)％，F=9．290，P=0．004]，对CFs增殖和细胞周期影响的作用强度与氯沙坦相近(A值：95％CI：-0．180—1．118，P=0．662；G1和S期：95％Cl:-5．306—4．106，P=0．768；95％Cl:-1．995—5．515．P=0．355)。结论：复方鳖甲软肝片具有防治心肌纤维化的作用。     

复方鳖甲软肝方对活化肝星形细胞细胞因子分泌的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecell,HSC)活化时分泌转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)和血小板源性生长因子(plateletderivedgrowthfactor,PDGF)的影响,以探讨其抗肝纤维化作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养、药物血清制备,免疫组化检测各实验组血清对肝星形细胞分泌TGF-β1,PDGF的影响,并经图像分析系统作定量分析。结果:培养48h模型组TGF-β1,PDGF阳性反应物A值分别为733.58±189.73和659.45±76.56;72h分别为1509.87±77.50和1208.02±132.21,与对照组(48h:570.78±57.61和479.65±38.49;72h:1279.30±147.78和805.30±121.04)比较,差异显著有显著性意义(F=5.833～21.250,P<0.05)。培养48,72h,高、中剂量药物组与模型组TGF-β1,PDGF表达比较,差异也有显著性意义(F=5.833～21.250,P<0.05),可显著抑制TGF-β1,PDGF表达,并呈量效关系。结论:复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时活化肝星形细胞分泌TGF-β1和PDGF,从而达到抑制肝星形细胞增殖、活化的抗肝纤维化防治作用。     

糖尿病视网膜病变与核因子—κB活性的关系

目的：探讨糖尿病患者外周血单核细胞中核因子—κB的活性与视网膜损害的关系。方法：应用凝胶电泳迁移率实验测定了46例糖尿病患者和15例健康正常人(正常对照组)外周血单核细胞中NF-κB的活性，并根据有无视网膜病变将糖尿病患者分为糖尿病无视网膜病变组和糖尿病视网膜病变组。结果：正常对照组、糖尿病无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变组NF—κB相对活性分别为15．79&;#177;3．64，26．94&;#177;6．47，57．62&;#177;8．35。与正常对照组(15例)比较，糖尿病无视网膜病变组(17例)、糖尿病视网膜病变组(29例)NF—κB活性显著增强(t=2．74，2．64；P&;lt;0．05)，其中糖尿病视网膜病变组活性最高；糖尿病无视网膜病变组、糖尿病视网膜病变组两组间NF—κB活性也有差别(t=2．09，P&;lt;0．05)。结论：糖尿病患者外周血单核细胞中NF—κB活性显著增强，尤其是伴有视网膜病变的患者，NF—κB与糖尿病视网膜病变的发生、发展有关。     

实验性病毒性心肌炎小鼠中核因子κB、单核细胞趋化蛋白-1的表达及意义

目的：探讨核因子κB(nuclear factor kappaB，NF-κB)活化、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoatlxactant protein-1，MCP-1)表达在小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditls，VMC)中的作用。方法：Balb／c小鼠40只随机分为2组：柯萨奇病毒B3(the coxsackievirus B3,CVB3)感染组和对照组。分别在实验第7，14和21天处死动物。免疫组化检测心肌组织中NF-κB活化和MCP-1表达，反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织中MCP-1mRNA的表达，双抗体夹心ELISA法检测血清MCP-1含量。结果：①感染组小鼠心肌组织中NF-κB活化、MCP-1表达均较对照组明显增强(P&;lt;0．01)，第14天达高峰，阳性信号指数分别为(38．28&;#177;8．25)和(2s．47&;#177;4．36)，且与心肌病变呈正相关。②感染组小鼠MCP-1mRNA的表达量明显增加，且第14天的表达量(0．74&;#177;0．17)大于第7天(0．55&;#177;0．13)和21 d(0．24&;#177;0．06)。③感染组小鼠MCP-1表达增加与NF-κB活化呈正相关(r=0．685，P&;lt;0．05)。④与对照组比较，感染组小鼠血清MCP-1含量明显增加(P&;lt;0．001)，第14天达高峰(20．464&;#177;3．347)，且与心肌组织中MCP-1的表达水平一致。结论：MCP-1能调节炎性细胞至受损心肌组织中，降低了心脏功能，可能在VMC发病机制中发挥了重要作用，且其表达至少部分通过NF-κB的活化来调控。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞增殖的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)增殖的影响,以探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠CCl4造模后肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,MTT法检测法各组血清对HSC不同时相增殖的影响,酶标仪波长为450nm。结果:培养24h,各组HSC增殖比较,差异无显著性意义(P>0.05);培养48,72h,高、中、低剂量药物组HSCA值(0.47±0.02,0.55±0.07;0.46±0.02,0.58±0.08;0.51±0.03,0.69±0.07)与模型组(0.66±0.05和0.96±0.05)比较,差异有显著性意义(P<0.05);高、中剂量组药物组与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:不同剂量的复方鳖甲软肝方药物血清作用48,72h后均能降低或抑制HSC的增殖,尤以高、中剂量作用明显。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞核因子κB信号转导的影响及其机制

背景：青藤碱是从中药青风藤中提取的生物碱单体。在治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)方面，具有较明确的疗效，但其治疗机制尚不清楚。目的：观察不同剂量的青藤碱体外作用对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠滑膜细胞核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子(TNF—α mRNA、白细胞介素1β(IL—1β)mRNA、白细胞介素10(IL-10)mRNA的影响，以阐明该药治疗RA的可能机制。设计：以细胞为研究对象，分组对照的重复测量设计、单位：一所军医大学医院的中医科和烧伤研究所。材料：实验于2002—03／2002—10在全军烧伤研究所实验室完成。实验动物为健康清洁级雄性Wistar大鼠25只。以AA大鼠为模型，收集滑膜细胞，依次作如下分组：正常对照组，AA组，AA+青藤碱30mg／L组，AA+青藤碱60mg／L组，AA+青藤碱120mg／L组。电泳迁移率改变分析法测NF—κB的活性，反转录PCR检测TNF-α mRNA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达。主要观察指标：不同剂量的青藤碱体外作用对后佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞NF—κB活性，TNF—1β mRNA，IL—1β mRNA及IL—10 mRNA的对比结果。结果：与正常对照组相比，AA后滑膜细胞内NF—κB活性与TNF—α mR—NA，IL—1β mRNA，IL—10 mRNA的表达均显著升高，分别为17&;#177;6，0．570&;#177;0．047，0．730&;#177;0．093，0．683&;#177;0．081(t=2．71—4．07，P&;lt;0．05)。经青藤碱作用后，NF—κB活性的变化趋势与TNF—α mRNA，IL-1 mRNA的相关性较好(r=0．810，P&;lt;0．001；r=0．562，P&;lt;0．05)，与IL-10 mRNA无统计学上的相关性，青藤碱在一定的浓度范围(30～120mg／L)内呈浓度依赖性抑制NF—κB活性与TNF—α mRNA，IL—1β mRNA的表达，而对IL—10 mRNA的抑制效应与浓度无关。结论：青藤碱可能通过抑制NF—κB活性而降低滑膜细胞内TNF-α mRNA及IL—1βmRNA的表达。     

复方鳖甲软肝方对离体肝星形细胞向肌成纤维细胞转型的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecells,HSC)转型的影响,以探讨该药物血清防治肝纤维化作用的机制。方法:将成年的健康雄性SD大鼠75只随机分为对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用大鼠HSC分离技术,将分离得到的HSC分别添加各组血清培养24,48h后,免疫组化ABC法检测各组HSC的α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)表达,经图像分析系统定量分析。结果:培养24,48h各药物血清组血清对HSC中α-SMA阳性染色不同时相吸光度(A值)(24h:高、中、低剂量分别为110.95±45.21,243.82±62.97,417.46±126.72;48h分别为:333.71±57.90,345.08±51.85,675.35±202.20)与模型组(24h:778.93±190.26;48h:1032.69±106.64)比较,差异有显著性意义(P<0.05);模型组、高、中剂量药物血清组与正常组比,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:高、中剂量复方鳖甲软肝方药物血清能抑制HSC的α-SMA表达,其抗肝纤维化作用机制可能与药物能抑制HSC向α-SMA的转型有关。     

复方鳖甲软肝方对肝星形细胞胶原表达及降解的影响

目的:观察复方鳖甲软肝方药物血清对离体肝星形细胞(hepaticstellatecell,HSC)中Ⅰ,Ⅲ型胶原及组织金属蛋白酶抑制物(tissueinhibitorofmetalloproteinases,TIMPs)表达的影响,以探讨防治肝纤维化作用机制。方法:将成年健康雄性SD大鼠75只,随机分为正常对照组、模型组、高、中、低剂量药物组共5组,并制备各组血清。采用SD大鼠肝星形细胞分离、培养,药物血清制备,免疫组化检测实验各组肝星形细胞中Ⅰ,Ⅲ型胶原及TIMPs的表达经图像分析系统定量分析。结果:培养72h,高、中、低剂量药物组Ⅲ型胶原的表达犤Ⅲ型胶原反应物吸光度(A值)为178.36±5.82,182.27±20.32,220.38±19.32犦早于Ⅰ型胶原(I型胶原反应物A值为300.23±25.80,329.37±45.98,425.38±19.32),与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。高、中剂量药物组均可有效抑制Ⅰ,Ⅲ型胶原的表达,并呈药物量效关系;培养24h,实验各组均无TIMPs的表达,培养48h后TIMPs开始表达,培养72h时,高、中、低药物组与模型组比较,差异有显著性意义(P<0.05),可显著抑制TIMPs的表达。结论:复方鳖甲软肝方药物血清能有效抑制肝纤维化时肝星形细胞中Ⅰ,Ⅲ型胶原及TIMPs的表达,其抗肝纤维化作用机制可能与减少细胞外基质生成的同时,加速已生成的细胞外基质降解有关。     

蒺藜总皂苷对动脉粥样硬化家兔细胞核因子κB及血清炎症标志物水平的影响

目的：观察蒺藜总皂苷对动脉粥样硬化家兔组织细胞核因子κB、血清炎症标志物水平的影响。方法：实验于2004-12／2005-05在中国中医研究院西苑医院心血管实验室完成。50只健康雄性日本大耳白兔，随机取10只作为正常对照组，喂普通饲料，其余40只给予高脂饮食喂养4周后，再随机分为4组：①模型组10只，继续喂高脂饲料。②小剂量组10只，喂以高脂饲料和蒺藜总皂苷6．3mg／（kg&;#183;d）。③大剂量组10只，喂高脂饲料和蒺藜总皂苷12．6mg／（kg&;#183;d）。④阳性药物对照组10只，喂以高脂饲料和辛伐他汀2．35mg／（kg&;#183;d）。2周后，测定血脂、组织中细胞核因子κB及ELISA法测定血清炎症标志物血清C-反应蛋白、单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1水平。结果：50只家兔均进入结果分析。①与正常对照组相比，模型组、小剂量组、大剂量组、阳性药物对照组血清胆固醇及三酰甘油均升高[（1．03&;#177;0．50），（24．33&;#177;6．08），（17．10&;#177;1．94），（14．81&;#177;5．03），（16．81&;#177;2．73）mmol/L．P〈0．01；（0．87&;#177;0．43），（5．27&;#177;0．06），（2．83&;#177;0．16），（1．84&;#177;0．40）．（2．20&;#177;0．74）mmol／L，P〈0．011；与模型组相比，小剂量组、大剂量组、阳性药物对照组血清胆固醇及三酰甘油水平均明显降低（P〈0．05）。②正常对照组细胞核因子κB呈现低表达状态，阳性表达出现在胞浆中；模型组细胞核因子κB活化，表达增强，阳性颗粒出现在胞浆及胞核中，小剂量、大剂量组、阳性药物对照组细胞核因子κB表达的活性较模型组低[（15.47&;#177;6.32）％，（8．54&;#177;2．67）％，（4．36&;#177;3．65）％，（4．70&;#177;3．69）0／9，P〈0．051，胞核阳性表达减少。小剂量、大剂量组比较差异不显著。③与模型组比较，小、大剂量组及阳性药物对照组C反应蛋白、血管细胞黏附分子1水平显著降低[（57．09&;#177;8．03），（40．07&;#177;4．65），（42．04&;#177;8．57），（26．07&;#177;5．15）ng／L，P〈0．01；（51．74&;#177;9．29），（43．38&;#177;4．09），（36．04&;#177;2．57）．（35．09&;#177;2．49）ng／L，P〈0．01]，大剂量组血清单核细胞趋化蛋白-1明显降低[（38．77&;#177;8．30），（29．47&;#177;10．25）ng／L，P〈0．05），小剂量组及阳性药物对照组血清单核细胞趋化蛋白-1无明显变化。结论：蒺藜总皂苷能够降低血脂、减少动脉粥样硬化病灶中细胞核因子κB的激活，降低血清中C反应蛋白、单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1的含量，蒺藜总皂苷具有抗动脉粥样硬化作用。     

粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α及血管壁细胞核因子-κB表达的影响

目的：观察中药粉防己碱对高脂饮食兔血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管壁细胞核因子-κB表达的影响，进一步探讨粉防己碱抗动脉粥样硬化的机制。方法：将18只雄性日本大耳白兔随机分为正常对照组(普通饲料)、高脂模型组(高脂饲料)和粉防己碱组(高脂饲料+粉防己碱)。喂养12周后处死动物，放射免疫法检测血清IL-1β，TNF-α含量；采用逆转录聚合酶链式反应对血管壁细胞核因子-κB mRNA表达定量分析：Western杂交定量分析血管壁细胞核因子-κB p65蛋白亚基。结果：高脂模型组血清IL-1β，TNF-α显著高于正常对照组和粉防己碱组(P&;lt;0．05)，正常对照组和粉防己碱组差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；高脂模型组(1．414&;#177;0．106)NF-κB mRNA显著高于正常对照组(0．085&;#177;0．062)和粉防己碱组(0．453&;#177;0．034)，而高脂模型组NF-κB蛋白亚基p65(10．08&;#177;5．75)显著低于正常对照组(35．90&;#177;3．07)和粉防己碱组(35．91&;#177;4．38)(P&;lt;0．001)。结论：粉防己碱有抑制炎症因子IL-1β，TNF-α合成和分泌的作用；高血脂激活NF-κB，p65易位人胞核促进转录而降解，而粉防己碱对其有抑制作用，这可能是粉防己碱抗AS作用的机制。     

肺损伤机制研究：脂多糖结合蛋白抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株核转录因子κB活性的影响

目的：探讨肺损伤机制和脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide-binding protein，LBP)抑制肽对脂多糖诱导的人单核细胞株U937细胞核转录因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)活性的影响，研究LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤的作用。方法：佛波脂诱导U937成熟后分为5组。即正常对照组；脂多糖组(10μg／L脂多糖+100μg／L重组人LBP)；低剂量抑制肽组；中剂量抑制肽组；高剂量抑制肽组(后3组分别给予10，100和1000μg／L抑制肽)。用免疫细胞化学染色图像分析法和蛋白质定量分析法(Western blot)测定U937细胞NFKB的活性；ELISA测定培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF—α)水平。结果：脂多糖刺激后NFκB P65进入核内，抑制肽组核易位明显减少。低、中、高剂量抑制肽组P65核浆灰度比分别为0．59&;#177;0．06，1．02&;#177;0．12和1．08&;#177;0．10，明显低于脂多糖组(1．34&;#177;0．12)(t=4．756，P&;lt;0．01；t=2．235，2．308，P&;lt;0．05)。低、中、高剂量抑制肽组TNF—α水平分别为(93．66&;#177;2．30)，(75．78&;#177;6．55)和(71．50&;#177;7．75)pg／L，明显低于脂多糖组[(128．67&;#177;39．67)pg／L](t=2．216，P&;lt;0．05；t=2．423，2．389，P&;lt;0．01)。结论：LBP抑制肽抑制了U937细胞NFκB的活性和TNF—α的释放；LBP抑制肽对脂多糖所致肺损伤可能具有潜在的预防作用。