免疫PCR法诊断梅毒螺旋体抗原和抗体的方法学研究

目的建立免疫PCR方法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法学,并比较两种方法学的敏感性、特异性和重复性。方法选择2011年我院梅毒血清学ELISA法检测者1520例并梅毒分期;建立免疫PCR法检测梅毒螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗体两种方法,然后对梅毒螺旋体血清学阳性标本10倍系列稀释,比较免疫PCR法敏感性;同时采用正常健康血清标本观察免疫PCR法特异性;最后采集梅毒阳性血液分装成两份标本,监测两种免疫PCR法试验批内和日间重复性。结果1520例患者中,梅毒患者136例。梅毒患者中女性占77．2％（105／136）．孕妇占19．1％（26／136）。梅毒分期以一期梅毒感染为主,与其他期比较具有统计学意义（P〈0．05）。IPCR-Ag法检测梅毒螺旋体抗原敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^6。IPCR-Ab法检测梅毒螺旋体抗体敏感性是ELISA法的10。倍,TPPA和TRUST法的10^5。两种免疫PCR法测检查正常健康人群梅毒螺旋体结果均为阴性。IPCR-Ab法试验批内CV为11．6l％,日间CV为18．12％;IPCR-Ag法试验批内CV为18．61％,日间CV为22．24％,两者相比具有统计学意义（P〈0．05）。结论免疫PCR法检测梅毒螺旋体具有高度的敏感性和特异性,但重复性较差。     

衣原体快速免疫法在检测泌尿生殖道沙眼衣原体中的作用

目的 评价衣原体抗原快速免疫法（C－C快速法）对泌尿生殖道标本中沙眼衣原体的检测效果。方法 将70份待检标本以C－C快速法进行检测,并与聚合酶链反应（PCR）为标准作比较。结果 C－C快速法的敏感性为62％,特异性为96％。结论 C－C快速法检测沙眼衣原体虽有较高的特异性,但敏感性较低。     

巨细胞病毒感染捕获ELISA分析方法的建立和应用

目的：建立CMVIgM抗体捕获ELISA法并用聚合酶链反应（PCR）技术对此方法进行了评价。评价：采用巨细胞病毒（CMV）AD－169株感染人胚肺细胞的方法制备CMV抗原，并采用冻化抗制备法及甘愿酸法制备抗原，羊抗人IgM（μ链）McAb包被酶标板，建立CMVIgM抗体捕获ELISSA法。结果：不同浓度抗μ链McAb包被，包被时间、包被液、封闭液等不同条件，以有抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对此法的建立有不同的影响。PCR法与用最佳条件配合后的本方法CMVIgM抗体检出率无显著差异（P＞0．05）。结论：本法测定CMV－IgM抗体的敏感性和特异性较高，简便、适用，易于推广，可广泛应用于临床。     

羟基磷灰石抽提逆转录套式PCR检测轮状病毒

目的;建立快速、准确、灵敏的检测轮状病毒的方法。方法：用羟基磷灰石抽提轮状病毒RNA,在轮状病毒基因6片段设计引物建立RT－PCR法检测腹泻婴幼儿大便中的轮状病毒。结果：该法重复性好,特异性高,且敏感度比PAGE法至少高1000倍。108例临床标本检测表明该法检测阳性率最高为56．5％。结论：羟基磷灰石抽提RT－PCR法检测轮状病毒,快速、准确、灵敏度高,优于PAGE、ELISA和LA法。     

应用间接ELISA方法检测兔轮状病毒抗体的初步研究

目的 建立间接ELISA方法对兔轮状病毒抗体进行检测。方法 确定抗原和阴、阳性参考血清的最佳工作浓度；进行特异性、敏感性以及中间试验。结果 抗原的最佳工作浓度为1：12000倍；参考血清的最佳工作浓度为1：200倍；本次实验建立的ELISA方法具有很好的敏感性和特异性；中间实验表明，LaRV在兔群中具有很高的感染率。结论 本次试验成功地建立了用于兔轮状病毒抗体检测的ELISA方法。     

核酸扩增-液相杂交法检测沙眼衣原体DNA

目的：探讨用核酸扩增（PCR）－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA的效果。方法：用PCR－液相杂交法对616份临床标本进行了沙眼衣原体检测，并与培养法比较，对与培养法结果不相符合的标本及部分阴性标本进行连接酶链反应（LCR）复检。结果：PCR－液相杂交相法检测沙眼衣原体特异性良好。灵敏度达到0.1fg，临床标本沙眼衣原体DNA阳性检出率为27.6％，显著高于培养法的6.3%（P＜0.001）。以培养法为标准，此法的灵敏度为100％。以LCR法为标准，此法的灵敏度为97.2％,特异度为80.7%，2者具有较好的相符性。结论：PCR－液相杂交法检测沙眼衣原体DNA操作简便，特异性强，灵敏度高，适合临床应用。     

肺癌K—ras基因突变的二步PCR检测及其临床应用

目的 探讨高敏感性Ｋ－ｒａｓ基因点突变检测方法在肺癌临床的应用价值。方法 应用二步（巢式）聚合酶链反应结合限制性片断多态性分析方法（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测临床肺癌标本Ｋ－ｒａｓ基因第１２码子点突变。结果 二步ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法检测Ｋ－ｒａｓ点突变的敏感性较一步法提高约６４倍。５５例肺癌石蜡包埋标本中，Ｋ－ｒａｓ点突变检出率为４７．３％；对另６７例纤支镜标本进行基因检测，以Ｋ－ｒａｓ突变进行基因诊断     

B型流感病毒斑点金免疫渗滤法的建立和临床应用

目的制备和鉴定B型流感病毒单克隆抗体（McAb）,建立斑点金免疫渗滤法（DIGFA）,用于B型流感病毒的临床检测。方法以B型流感病毒抗原免疫BALB/c小鼠制备McAb,利用胶体金标记技术对抗体进行标记,建立快速检测B型流感病毒抗原的斑点金免疫渗滤法,并对实验条件进行探讨。用建立的DIGFA法与酶联免疫吸附试验（ELISA）同时检测128例患者鼻咽部分泌物,比较敏感性、特异性,以评价检测效果。结果 DIGFA法与ELISA法对比检测了128例样本中B型流感病毒抗原,本方法的敏感性为94.4%,特异性为96.4%,两法总符合率为96.1%。结论 DIGFA法操作简单、方便、快速、特异、灵敏,在B型流感病毒感染的辅助诊断中具有较好的应用价值。     

PCR法检测粪便样本溶组织内阿米巴的初步研究

  目的  建立直接检测粪便样本中溶组织内阿米巴的PCR方法。  方法  根据溶组织内阿米巴标准株基因组中小亚基核糖体RNA（small subunit ribosome RNA,SSU rRNA）序列合成4对特异性引物（2对自主设计引物和2对参考引物）,建立PCR检测方法,用该方法对221例临床腹泻患者粪便标本进行检测,同时采用病原学碘染涂片镜检法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗原,对3种方法的阳性率进行比较,并采用Kappa检验进行一致性分析,分析3种检测方法结果的准确性。  结果  4对引物均扩增出溶组织内阿米巴特异的目的片段,建立了粪便样本溶组织内阿米巴检测的PCR法。选择其中2对引物（1对自主设计引物和1对参考引物）对221例粪便样本进行PCR扩增,同时用碘染涂片镜检法查病原体,用ELISA法进行抗原检测,3种方法溶组织内阿米巴阳性检出率分别为2.26%、0.90%和9.50%,差异有统计学意义（χ2=23.34, P<0.01）。PCR法与碘染涂片镜检法比较,Kappa值为0.216,一致性微弱;PCR法与ELISA法比较,一致性差,Kappa值为–0.134。PCR法的结果与临床诊断的一致性最好。  结论  本研究通过自行设计引物建立的粪便样本溶组织内阿米巴PCR检测法在准确性上优于镜检法和ELISA抗原检测法,为该方法用于临床诊断提供了实验基础。     

实验小鼠弓形虫检测方法的建立和应用

目的 建立小鼠弓形虫抗体检测方法。方法 制备抗原片和可溶性抗原，免疫小鼠制备阳性对照血清，确定了IFA和ELISA检测方法的最适工作条件。根据弓形虫B1基因序列，合成一对寡聚脱氧核糖核苷酸片断，建立PCR检测体系。结果 与IHA法相比较，ELISA、IFA的抗体检出率均显著高于IHA，抗体滴度分析，ELISA抗体滴度高于1FA法。对弓形虫感染鼠不同组织进行PCR检测，可检出特异性扩增条带。结论 建立的IFA和ELISA检测方法具有灵敏度高、重复性好，结果判定明确等优点，是比较有效的监测方法。建立了弓形虫PCR检测体系，经对弓形虫DNA及病鼠各组织的初步检测，证明本PCR体系具有较高的敏感性和特异性。     

乙型肝炎表面抗原的免疫PCR检测

目的探讨一种适用性强、敏感性高的乙型肝炎(乙肝)表面抗原检测方法。方法在乙肝表面抗原与相应抗体特异性反应的基础上,逐步加入生物素化抗体、亲合素-DM耦联物,PCR扩增相应的DNA标记,通过检测DNA来反映相应抗原的量。结果免疫PCR检测敏感度为常规酶联免疫试剂盒的300倍。结论免疫PCR是一种适用于乙肝表面抗原的、高度敏感的检测方法。     

HCV核心抗原检测技术的临床应用

目的:探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法:采用丙型肝炎病毒核心抗原ELISA试剂盒对临床丙肝感染者血清进行检测,同时用HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照进行比较。结果:以HCV RNA PCR检测为对照,HCV抗原检测试剂盒的灵敏度为95.65%,特异性为100%,23例HCV RNA PCR检测阳性血清,用HCV抗体检测法进行检测,其中有3例阴性,将这3例阴性标本用HCV核心抗原检测法进行检测,其中2例为阳性。结论:丙型肝炎核心抗原ELISA检测方法能缩短窗口期,敏感性高,特异性好,费用低廉,在临床上具有很好的推广前景。     

乙型肝炎患者血清前S1抗原检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎患者血清乙肝病毒前S1抗原检测的临床意义。方法乙肝患者血清标志物用ELISA法测定，并根据不同的模式分成四组；均用乙肝病毒前S1诊断试剂测定，方法为ELISA；用荧光定量PCR测定上述四组血清标本的HBV—DNA。结果704例乙肝患者血清标本中乙肝病毒前S1抗原阳性491例，阳性率69．7％；乙肝患者血清标本中HBV—DNA阳性511例，阳性率72复制的一个可靠指标。     

检测弓形虫的PCR法和ELISA法的比较

目的:建立快速、敏感、特异的PCR方法,用于检测弓形虫感染。方法:选择弓形虫B1基因194bp片段作为扩增模板,优化反应条件,并测定其敏感性和特异性;以104弓形虫RH株速殖子腹腔接种小鼠,用PCR法检测感染动物全血DNA,并与ELISA法检测血清IgM进行比较。结果:本实验中,PCR方法的检测阈值为0.2pg弓形虫DNA,并且与人、小鼠、疟原虫、旋毛虫等DNA均无交叉反应。用PCR法检测感染动物全血DNA,感染后第2d即可测出阳性,总阳性数为1(313/15);而ELISA法检测血清IgM则到感染后第6d才测出阳性,总阳性数为2(2/15)。经统计学检验,二者存在显著差异(P<0.05)。结论:PCR是一种快速、敏感、特异的检测方法,可用于弓形虫病的早期诊断。     

乙型肝炎表面抗原不同检测方法的优势比较分析

目的：比较化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）用于乙型肝炎（乙肝）表面抗原检测的优势效果。方法选取2011年3月～2013年4月采用ELISA法与CMIA法对386例患者进行了乙肝表面抗原检测的对比研究。结果 CMIA法检测乙肝表面抗原的阳性率为51.3%,ELISA法阳性率为43.5%,CMIA法阳性率明显更高,与ELISA法比较差异有统计学意义（P〈0.05）;CMIA法的灵敏度与特异性均明显高于ELISA法（P〈0.05）。结论与ELISA法比较,CMIA法对乙肝表面抗原检测在阳性率、灵敏度以及特异性等方面均存在有比较明显的优势,故建议将CMIA法作为临床检测乙肝表面抗原的首选方法而推广应用。     

乙型肝炎病毒DNA定量分析的临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒HBV DNA含量与血清标记物的相关性及其对乙型肝炎诊断、预后的意义。方法:采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测1652例乙肝患者血清学标记物(HBV—M),其血清学模型包括以下9种组合;并选取160例HBV M全阴性正常人作为对照。实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测血清中HBV DNA含量。结果:1、2组HBV DNA阳性率为98.4%和96.67%,明显高于其它组。结论:HBV DNA含量与乙肝病毒e抗原具有显著相关性,HBV M和HBV DNA定量检测对于临床乙肝病毒感染、复制及临床治疗有重要意义。     

环介导等温扩增在检测肺炎支原体中的临床应用

目的 探讨一步法可视化环介导等温扩增(LAMP)在检测肺炎支原体中的临床应用价值。方法 用一步法可视化LAMP、聚合酶链反应(PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)同时检测108份儿童支原体肺炎临床标本。 随机选取临床儿科住院患儿108例标本,包括以PCR法诊断肺炎支原体感染患儿73例和临床排除支原体肺炎的其他慢、急性呼吸道感染者35例,于入院的第1天分别采用LAMP、PCR和ELISA法检测同一患者咽拭子标本和血清标本,并分别计算Kappa统计量,评价LAMP 法与PCR法、LAMP 法与ELISA法的一致性。入院第5天重新采集40例患者的样本,用3种方法比较入院第1和5天的检测结果。结果 一步法可视化LAMP方法的敏感度为100%,特异度为94.3%;ELISA法的敏感度为65.8%,特异度为82.9%。一步法可视化LAMP方法与PCR法的Kappa值为0.956;与ELISA法比较,Kappa值为0.38。一步法可视化LAMP方法在第1天就检出阳性的标本例数比ELISA法高。结论 一步法可视化LAMP技术有高敏感度和特异度,在感染早期就可以检测出肺炎支原体。LAMP法与PCR法具有可比性,可用于肺炎支原体的检测。     

表面等离子体共振生物传感器在卵巢肿瘤标志物CA125检测中的应用

目的:运用表面等离子体共振生物传感器(SPR)无标记检测CA125血清抗原,探索卵巢癌无创诊断方法。方法:采用分子自组装技术,在SPR生物传感片表面固定抗CA125单克隆抗体OC125,利用其检测人体血清中CA125抗原的表达。结果:SPR对血清中CA125的测量结果与放射免疫测量结果的变化趋势基本一致,SPR共振峰移动的大小(δλ)相对地反映了血清中CA125抗原表达程度。结论:卵巢癌患者血清的SPR共振峰波长移动值显著大于对照组血清的SPR共振峰波长移动值。与现有检测技术相比,SPR方法具有无需标记,操作简单等优点,便于基层医疗单位使用。