浙江地区无精子症和少弱精子症患者DAZL基因A260G和A386G单核苷酸多态性分析

目的:探讨浙江地区人群中DAZL基因A260G和A386G单核苷酸多态性(SNP)与无精子症和少弱精子症的关系。方法:收集浙江地区无精子症和少弱精子症患者317例和正常生育男性246例外周血标本,利用SNa Pshot SNP分型技术对样本DAZL基因Q260G和A386G多态性位点进行分型。结果:DAZL基因A260G在浙江地区汉族人群中具有多态性,其基因频率与基因型频率分布在病例组和对照组中均符合Hardy-Weinberg平衡。AA、AG和GG的基因型频率在对照组中分别为92.3%、7.3%和0.4%,而病例组中分别为94.3%、5.7%和0%,统计学分析无显著性差异(P=0.430,OR=0.780,95%CI=0.413~1.46)。A386G突变只在正常对照组中出现1例杂合子AG,两组中都没有发现纯合子GG突变,两组之间亦无显著性差异(P=0.259,OR=0.698,59%CI:0.374~1.306)。结论:DAZL基因Q260G和A386G多态性与中国浙江地区无精子症和少弱精子症无相关性,两者都不能作为无精子症和少弱精子症遗传诊断的分子标志。     

无创胚胎染色体筛查在男性严重少弱畸精子症不育患者的临床应用

目的:探讨无创胚胎染色体筛查技术(NICS)对男性严重少弱畸精子症辅助生殖妊娠结局的应用价值.方法:随机选取2017年1月至2020年12月因男方严重少弱畸形精症行辅助生殖助孕的男性不育患者共计170例,接受NICS治疗的85对夫妻作为试验组,接受卵胞质内单精子注射(ICSI)85对夫妇作为对照组,比较两组女方年龄、女...     

mtND4基因突变与弱精子症精子的相关分析

目的 分析弱精子症精子mtND4基因突变与弱精子症的相关性,探索弱精子症的分子病因.方法 按WHO标准收集56例弱精子症精液标本和44例精子活力正常精液标本,用3对引物PCR扩增mtND4基因,纯化测序,分析mtND4基因突变,比较2组标本mtND4基因突变及多重单核苷酸多态性(SNP)的差异. 结果发现31个同义突变位点和12个错义突变位点,其中6个核苷酸变异位点未报道过,分别为A11026G、C11215T、A11488G、C11713T、C12908T、T10908C.对照组mtND4基因T10873C和T11944C变异率分别为61.4%(27/44)和11.4%(5/44),显著高于弱精子症组的39.3%(22/56)和0%(P＜0.05);除T10873C和T11944C变异外,错义突变分析发现,对照组10例中与T10873C或T11944C组成多重SNP 8例,而弱精子症组10例标本中仅2例,2组间比较差异有统计学意义(P＜0.05);上述20例错义突变标本分成多重SNP组(与T10873C或T11944C)和非多重SNP组,多重SNP组a级精子百分率和a+b级精子百分率均显著高于非多重SNP组(P＜0.05). 结论 mtND4基因错义突变可能影响精子活动力,T10873C和T11944C多态性变异对精子活动力可能是一个有益因子,两者同时存在组成多重SNP时,两者的作用可能具有相互抵消的效应.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between mtND4 point mutation in sperms and asthenospermia. Methods Fifty-six asthenospermia cases and 44 control cases were collected using the WHO criterion for defining asthenospermia, the regions of mtND4 gene were amplified by using PCR of 3 pairs primers. Consequently, the point mutation, missense mutation and multiple single nucleotide polymorphisms (SNP) were analyzed by employing sequencing technology and bioinformatics tools. Results Six mutations never before identified were found. The frequency of single point mutation T10873C and T11944C in the control group were significantly higher than those in the asthenospermia group (P＜0.05). Eight cases involved T10873C or T11944C among the 10 cases in control groups with missense mutations were found. But, there were only 2 cases with such mutation in the 10 asthenospermia cases with missense mutations (P＜0.05). The previous 20 cases of missense mutations can be described as either multiple SNP group (with T10873C or T11944C) or nonmultiple SNP group. The percentage of a range and a plus b range of multiple SNP group of sperm was significantly higher than the non-multiple SNP group(P＜0.05). Conclusions mtND4 gene mutation, especially the missense mutation may induce loss of sperm motility. The mutations of T10873C and T11944C may be useful for sperm motility or counteract the influence for the sperm motility caused by these harmful mutations.     

无精子症和严重少精子症DYS240基因位点的分析

无精子因子的缺乏将导致无精子症和严重少精子症。本研究应用ＰＣＲ方法分析了６５例核型正常的无精子症和２５例核型正常的严重少精子症病人的ＤＹＳ２４０基因位点，结果显示，无精子症病人中６例缺乏ＤＹＳ２４０基因位点，严重少精子症病人中４例缺乏ＤＹＳ２４０基因位点，提示ＤＹＳ２４０基因是ＡＺＦ的一个重要的候选成分。     

原因不明性无精症和少精症Y染色体微缺失的筛查分析

目的 探讨原因不明性无精症和少精症不男性与Y染色体微缺失的关系。方法 应用多重PCR技术,对38例原因不明性无精症和少精症者（无精症11例、严重少精症9例、少精症18例）基因组DNA进行Y染色体连锁的18个序列标记位点缺失检测。结果 38例中发现Y染色体微缺失6例,缺失率为16％,其中无精症2例,严重少精症1例,少精症3例。缺失形式前两者为AZFd(DYS 237) AZFc(DAZ DYS240),后者为AZFd(DYS237)。结论 Y染色体微缺失是原因不明性无精症和少精症的重要原因之一。采用多重PCR技术进行缺失检测,是一种非常有效的方法。     

应用PCR扩增技术对男性不育症患者中YRRM2基因缺损进行筛查的研究

为了探讨男性不育的发病原因，采用直接加热白细胞提取基因组ＤＮＡ，并以此作为模板对ＹＲＲＭ２基因进行ＰＣＲ基因扩增，对３４０例男性不育患者的外周血标本进行了扩增筛查，结果发现７例为该基因缺损，占２％。证实在中国人群中ＹＲＲＭ２的缺损也是造成男性不育的原因之一。该方法可用于临床作为常规检查，为医生采用正确治疗方法提供了新的可靠指标。     

无精子症患者中MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因多态性分析

目的 探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR) C677T、A1298C及蛋氨酸合成酶还原酶(MTRR) A66G基因多态性在男性无精子症患者中的分布情况。方法 选取于2020年1月至2023年8月就诊于新疆佳音医院不孕不育门诊的97名无精子症患者,所有患者进行睾丸组织活检并基因测序MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因的多态性。按照手术中是否找到精子将患者分为有精子组(n=70)和无精子组(n=27),比较两组患者的基本资料以及MTHFR C677T、A1298C及MTRR A66G基因型多态性的频率及等位基因频率分布。结果 两组患者间年龄、体质量指数(BMI)以及是否伴随精索静脉曲张的差异均无统计学意义(P>0.05)。MTHFR C677T包括CC、CT、TT三个基因型及C、T两个等位基因,A1298C包括AA、AC、CC三个基因型及A、C等位基因;MTRR A66G包括AA、AG、GG三个基因型,A、G两个等位基因。有精子组和无精子组患者的MTHFR基因677位点TT基因型频率分别为18.6%、18.5%,T等位基因频率分别为42.1%、40.7%;M...     

DAZL基因多态性位点(A260G、A386G)与无精子症和少精子症的关联性Meta分析

目的:探讨DAZL基因多态性位点(A260G,A386G)与无精子症和少精子症导致男性不育的关联性。方法:计算机检索Pub Med、Science direct、Wiley online library、中国知网、维普中文科技期刊数据库、万方数据库,查找并筛选出研究DAZL基因多态性位点A260G和A386G与男性不育关系的病例对照研究,同时查阅检索结果中所附相似文献及参考文献,检索时限均为各数据库建库至2013年11月30日。由2名评价员单独进行文献筛选及资料提取,采用Stata SE12.0软件进行Meta分析以及其他相关统计学分析。结果:共纳入文献13篇(A260G位点多态性10篇,A386G位点多态性11篇);男性不育患者共2 715例,其中少精子症或无精子症患者共2 500例,健康对照1 835例。Meta分析结果显示,DAZL A260G位点多态性在等位基因模型、显性基因模型、隐性基因模型、共显性基因模型、超显性基因模型差异无统计学意义(P0.05)。而DAZL A386G位点多态性的分析表明,亚洲人中DAZL A386G位点多态性与少精子症或无精子症在等位基因模型、显性基因模型、共显性基因模型(AA/AG)和超显性基因模型下整体效应差异有统计学意义:等位基因模型优势比(OR)=0.15,95%可信区间(CI)0.07~0.34,P0.05;显性基因模型OR=0.16,95%CI 0.07~0.35,P0.05;共显性基因模型(AA/AG)OR=0.15,95%CI0.06~0.33,P0.05;超显性基因模型OR=0.15,95%CI 0.06~0.33,P0.05。地区亚组分析结果显示,中国A386G位点多态性与少精子症或无精子症患者在等位基因模型、显性基因模型和超显性基因模型下总效应差异有统计学意义:等位基因模型OR=0.11,95%CI 0.04~0.28,P0.05;显性基因模型OR=0.11,95%CI 0.04~0.28,P0.05;共显性基因模型(AA/AG)OR=0.09,95%CI 0.03~0.26,P0.05;超显性基因模型OR=0.09,95%CI 0.03~0.26,P0.05。结论:DAZL A260G位点多态性与精子生成或精子数量下降无相关性,而DAZL A386G位点多态性与精子生成或精子数量下降有相关性,而在地区亚种分析和人种亚组分析中这种相关性只在中国存在,因此探求DAZL A260G和A386G基因多态性与无精子症或少精子症导致的男性不育之间的相关性需要更多高质量的研究。     

骨桥蛋白基因多态性与弱精子症的相关性分析

目的:探究骨桥蛋白(OPN)基因单核苷酸多态性(rs1126772、rs117291487、rs11730582、rs142608941、rs6813526)与男性弱精子症的关系.方法:选取135例弱精子症不育男性为病例组,239例有生育史的健康男性作为对照组,运用多重单碱基延伸PCR技术(SNaPshot)对OPN基...     

非梗阻性无精子症患者TSG23基因的单核苷酸变异分析

目的分析TSG23基因在非梗阻性无精子症患者中单核苷酸变异。方法采用第二代高通量测序方法对临床收集的776例非梗阻性无精子症患者和709例已正常生育男性的外周血DNA进行TSG23基因外显子捕获测序;采用传统的Sanger测序技术对第二代高通量测序发现的新的突变位点进行验证。结果经过对测序质量控制和外显子测序结果分析筛选,有757例患者和709例的测序结果纳入生物信息学分析,共获得7个突变位点,其中3个为同义突变,4个为错义突变,有4个位点为新发现突变位点;所有位点中非梗阻性无精子症患者特有的突变位点1个,为同义突变,已育正常男性特有的突变位点2个,均为错义突变。结论现有的检测结果显示,TSG23基因的单核苷酸变异与非梗阻性无精子症的发生无明显的相关性。     

陕西地区不明原因无精子症和少精子症患者Y染色体长臂微缺失分析

目的: 评估陕西地区不明原因无精子症和少精子症不育男性患者Y染色体长臂微缺失的频率,探讨精子密度与Y染色体微缺失发生率的相关性。　方法: 以Y染色体特异性无精子症因子区STS AZFa、AZFb、AZFc和SRY4个基因 5个片段设计引物,采用PCR方法对 64例无精子症和少精子症患者以及 20例正常生育男性进行微缺失检测,并比较不同精子密度患者Y染色体微缺失的发生率。　结果: 20例精子密度正常的生育男性未检出Y染色体微缺失,而 64例特发性无精子症 /少精子症患者AZFc区的缺失率为17. 2% (11 /64),AZFc和AZFb联合缺失 1例,未发现AZFa区缺失,SRY基因均为阳性。其中无精子症组缺失率为21. 43% ( 3 /14 );精子密度 <1×106 /ml组,缺失率为 20. 0% (2 /10);精子密度 (1 ~5)×106 /ml组缺失率为17. 9% (5 /28);精子密度 (5 ~10 )×106 /ml组缺失率为8. 3% (1 /12)。各组缺失率经卡方检验差异有显著性 (χ2 =70. 144,P<0. 005 )。　结论: 无精子症和少精子症不育患者Y染色体AZFc缺失率明显较高,PCR扩增AZF基因是诊断Y染色体微缺失的简单方法。     

特发性无精子症和少精子症患者谷胱甘肽S-转移酶T1基因的遗传多态性

目的:探讨谷胱甘肽S-转移酶T1基因多态性(GSTT1)与特发性无精子症和少精子症的关系。方法:按WHO手册标准,采用WLJY-9000伟力彩色精子质量检测系统对研究对象进行精液分析,根据精液检测结果将研究对象分成特发性无精子症组(n=34)、少精子症组(n=40)和正常对照组(n=53),各组研究对象年龄、吸烟史、饮酒史无统计学差异。基因组DNA来自研究对象提供的外周血有核细胞,采用聚合酶链反应(PCR)方法对研究对象GSTT1基因进行分型。结果:特发性无精子症组、少精子症组GSTT1缺失型基因频率分别为76.5%和72.5%,明显高于正常对照组(49.1%),差异有统计学意义(无精子症组vs正常对照组,OR=3.13,95%CI为1.20～8.16,P=0.020;少精子症组vs正常对照组,OR=2.53,95%CI为1.06～6.11,P=0.038)。结论:GSTT1基因多态性与特发性无精子症、少精子症有相关性;GSTT1缺失基因型是特发性无精子症和少精子症发病的危险因素。     

Single nucleotide polymorphism C677T in the methylenetetrahydrofolate reductase gene might be a genetic risk factor for infertility for Chinese men with azoospermia or severe oligozoospermia

Aim： To analyze the distribution of the single nucleotide polymorphism （SNP） C677T in the methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） gene in 355 infertile Chinese patients with idiopathic azoospermia or severe oligozoospermia and 252 fertile Chinese men as controls to explore the possible association of the SNP and male infertility. Methods： Using the polymerase chain reaction （PCR）-restriction fragment length polymorphism technique, the allele and genotype distribution of SNP C677T in the MTHFR gene were investigated in both patients and controls. Results： The frequencies of allele T （40.9% vs 30.4%, P = 0.002, odds ration [OR] = 1.58, 95% confidence interval [CI]： 1.24-2.02） and mutant homozygote （TT） （18.3% vs. 11.5%, P = 0.023, OR = 1.72, 95% CI： 1.07-2.76） as well as carrier with allele （TT ＋ CT） （63.4% vs. 49.2%, P = 0.0005, OR = 1.79, 95% CI： 1.29-2.48） in infertile patients were significantly higher than those in controls. After patient stratification, the significant differences in distribution of the SNP between each patient subgroup and control group still remained. Conclusion： Our findings indicate that there is an association of SNP C677T in the MTHFR gene with male infertility, suggesting that this polymorphism might be a genetic risk factor for male infertility in Chinese men.     

DAZL基因与男性不育关系的研究进展

DAZL基因为DAZ基因家族成员之一,在人类精子发生的过程中,DAZL基因发挥着至关重要的调控作用。基因DAZL通过其表观遗传学修饰作用,主要是DAZ的甲基化,调控基因启动子来实现DAZL基因在生殖细胞中的表达。DAZL基因多态性位点分析(SNP)与男性不育依旧是一个值得探讨的研究方向,目前认为与地域和种族有关。本文通过总结近来的相关研究资料,阐述精子发生过程中的DAZL基因甲基化状态的改变以及DAZL的SNPs与男性不育之间的联系,为男性不育的治疗提供新的理论基础和临床思路。     

生精障碍相关基因单核苷酸多态性研究进展

生精相关基因遗传多态性是生精障碍的一个重要的遗传病因.通过基因敲除技术现已鉴定出大量与精子发生密切相关基因.此类生精障碍基因包括表达酶类、受体类、细胞凋亡类、转录调控类等基因.上述基因的遗传易感性、感染和环境等因素共同作用导致男性非梗阻性无精子症和少精子症.生精障碍相关基因单核苷酸多态性(SNP)分析可从分子水平上阐述...     

金冷法治疗少、弱精子症的疗效及安全性临床观察

目的:金冷法可通过低温和中药外用(透皮吸收)两种途径作用于睾丸。本研究目的旨在评价金冷法治疗少、弱精子症的疗效及安全性。方法:将符合纳入标准的39例少、弱精子症的男性不育患者用金冷内裤(金冷法)治疗,每天早、晚各1次,每次30 min,共3个月。观察治疗前后精液参数指标变化以及患者配偶的妊娠结局。结果:按要求完成治疗36例,其中31例精液质量有改善,总有效率为86.1%。少弱精子症组精子密度、前向运动精子百分率、精子活动率、精子总数、活动精子总数等精液参数指标在治疗后均有显著改善(P均<0.05),弱精子症组前向运动精子百分率、精子活动率、活动精子总数等精液参数指标在治疗后均有显著改善(P均<0.05)。治疗期间及治疗后随访2个月有5例配偶怀孕。治疗期间无明显不良反应发生。结论:金冷法治疗少、弱精子症具有疗效确切、使用方便、安全性好的特点,可作为男性少、弱精子症不育患者的一种新的治疗选择推广应用。     

A single-nucleotide polymorphism in TP53 may be a genetic risk factor for Iranian patients with idiopathic male infertility

Male infertility is a heterogeneous disorder that contributes to the impairment of spermatogenesis. The purpose of this study was to assess whether tumour suppressor p53 gene (Tp53) polymorphism is associated with idiopathic male infertility in the Iranian population. The prevalence of G → C substitution at codon 72 in exon 4 was determined in 110 idiopathic infertile azoo-/oligospermic patients and 180 fertile healthy control men. PCR-restriction fragment polymorphism analysis was employed to determine the genotypes. PCR amplicons were subjected to restriction digestion with Bstu1 and separated by gel electrophoresis. The Arg/Arg genotype was found more frequently among men with idiopathic infertility (32.7%) than among controls (17.7%). No significant difference was observed between Pro/Pro genotype and Arg/Arg + Arg/Pro genotypes among men with idiopathic infertility and controls (P = 0.11; OR: 0.36; 95% CI: 0.36-1.10). In contrast, a significant difference was observed in the comparison of the Arg/Arg genotype and Arg/Pro + Pro/Pro genotypes among patients and controls (P = 0.004; OR: 2.25; 95% CI: 1.29-3.90). Allele frequency evaluation suggested a significantly higher incidence of the Arg allele among infertile men compared with controls (56% versus 44%; OR: 1.6; 95% CI: 0.92-2.80). In conclusion, arginine allele appears to be at greater risk of developing idiopathic infertility in Iranian men.