Box-Behnken效应面法优化京尼平脂质体处方研究

目的采用Box-Behnken效应面法,优化京尼平脂质体处方。方法采用乙醚注入法制备京尼平脂质体,以大豆卵磷脂(PC)与胆固醇质量比(X1)、脂类与京尼平质量比(X2)、磷脂质量浓度(X3)为考察对象,包封率(Y1)为评价指标,筛选京尼平脂质体的最佳处方。结果京尼平脂质体最佳工艺处方为X1=6.65,X2=11.75,X3=6.67。包封率为63.37%,载药量为5.11%。结论 Box-Behnken效应面法建立的模型预测性良好,可用于京尼平脂质体处方优化筛选。     

白花蛇舌草化学成分及其抗肿瘤活性

目的研究白花蛇舌草Hedyotis diffusa Willd.的化学成分及其抗肿瘤活性。方法白花蛇舌草90%乙醇提取物采用大孔树脂、硅胶柱、TLC、HPLC制备柱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。CCK-8法测定体外抑制鼻咽癌细胞株CNE1、结肠癌细胞HT-29的活性。结果从中分离得到9个化合物,分别鉴定为香草酸(1)、对香豆酸(2)、2-羟基-3-甲基蒽醌(3)、6α-O-反式-对香豆酰京尼平苷(4)、槲皮素-3-O-[2″-O-(E-6-O-阿魏酰基)-β-D-葡萄糖]-β-D-葡萄糖苷(5)、3,4-二羟基苯甲酸(6)、2-羟基-7-甲基-3-甲氧基蒽醌(7)、10-去氢京尼平苷(8)、1-甲醛-4-羟基蒽醌(9)。1、3、7、9体外能抑制CNE1、HT-29肿瘤细胞生长。结论化合物9为新的天然产物,1、3、7、9为白花蛇舌草的抗肿瘤成分。     

热毒宁注射液化学成分研究(Ⅳ)

目的对中药复方热毒宁注射液的解热抗炎活性成分进行研究。方法采用脂多糖(LPS)诱导小鼠内毒素休克模型对热毒宁注射液解热抗炎活性部位进行筛选,综合应用HP-20大孔树脂、硅胶、MCI、ODS和Sephadex LH-20柱色谱以及反相MPLC、HPLC等各种现代色谱技术对解热抗炎活性部位进行系统地分离纯化,根据化合物的光谱数据和理化性质进行结构鉴定。结果经活性筛选,热毒宁注射液经大孔吸附树脂95%乙醇洗脱部位为解热抗炎活性部位,从中分离鉴定了14个化合物,分别鉴定为邻苯二甲酸二丁酯(1)、异香草酸(2)、香草乙酮(3)、苯丙酸(4)、京尼平苷(5)、jasmigeniposide B(6)、京尼平苷酸(7)、京尼平龙胆二糖苷(8)、6″-O-反-对香豆酰基京尼平龙胆二糖(9)、6″-O-反-阿魏酰基京尼平龙胆二糖苷(10)、6″-O-反-芥子酰基京尼平龙胆二糖苷(11)、jasmigeniposide A(12)、6″-O-反-桂皮酰基京尼平龙胆二糖苷(13)、2′-O-反-咖啡酰基栀子新苷(14)。结论化合物1~4、13均为首次从热毒宁注射液中分离得到;经UPLC定性分析及文献对照,化合物5、7~13均为来源于栀子中的化学成分。     

京尼平苷在大鼠体内药代动力学性别差异研究

目的:建立大鼠血浆中京尼平苷和京尼平快速液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法,考察毒性剂量下,性别差异对京尼平苷在大鼠体内的药代动力学特征的影响。方法:将大鼠分为雌雄两组,分别灌胃给与700 mg/kg的京尼平苷水溶液,收集各时间点的大鼠血浆,采用LC-MS/MS法测定血浆京尼平苷和京尼平浓度,通过DAS 2.1.1软件计算主要药代动力学参数。结果:大鼠灌胃京尼平苷后,体内京尼平苷主要的药代动力学参数为:雄性组AUC(0-t)为(17860±6886)μg·h/L,Cmax为(3059±1499)ng/ml,t1/2为(7.4±3.4)h;雌性组AUC(0-t)为(17197±7576)μg·h/L,Cmax为(3904±1062)ng/ml,t1/2为(5.3±2.9)h。结论:灌胃700mg/kg京尼平苷后,京尼平苷药动学特征不具性别差异,而京尼平的药动学特征可能存在性别差异。     

杜仲中京尼平苷酸的提取工艺研究及应用

目的 :用正交试验法对杜仲中的活性成分京尼平苷酸的提取工艺进行了优选研究。方法 :采用正交表L₁₆ (4⁵ ) ,以提取时间、提取温度、提取次数、料液比以及提取有机溶剂乙醇含量为因素 ,以京尼平苷酸提取率为指标进行试验。采用反相高效液相色谱法 (RP-HPLC)测定京尼平苷酸提取率。结果 :最佳提取参数为 ,温度为 50℃ ,时间 1h ,提取 1次 ,80 %的乙醇 ,料液比为 1∶12。应用最佳提取工艺对杜仲原料进行了筛选。结论 :该工艺为杜仲中京尼平苷酸的大规模提取提供理论依据。     

黄连解毒汤化学成分及其神经细胞保护作用研究

目的 研究黄连解毒汤的化学成分,并探索该复方及其代表性成分的神经细胞保护作用.方法 运用大孔树脂、硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20制备液相等色谱技术对黄连解毒汤进行化学成分的分离;应用UV、MS、NMR等技术对所得化合物的结构进行鉴定;并运用体外神经细胞保护的药理模型,对黄连解毒汤和其中京尼平苷、小檗碱、黄芩苷进行了神经保护作用的筛选.结果 从黄连解毒汤中分离鉴定了19个化合物,分别为小檗碱(1),巴马亭(2),黄芩苷(3),黄芩素(4),汉黄芩素(5),千层纸素A(6),京尼平苷(7),鸡屎藤次苷甲酯(8),京尼平-1-O-β-D龙胆双糖苷(9),6'-O-对香豆酰京尼平龙胆双糖苷(10),黄柏内酯(11),蔗糖(12),D-甘露醇(13),粘毛黄芩素Ⅲ(14),栀子苷(15),羟异栀子苷(16),Jasminosides B(17),藏红花酸(18),5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(19);研究了黄连解毒汤和其中主成分京尼平苷、小檗碱、黄芩苷对PC12细胞和原代神经元细胞的损伤保护作用.结论 化合物15 ～ 19为首次从该复方中分离得到,5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯在组成该复方的四种单味药中均未见报道;神经细胞保护实验结果表明黄连解毒汤和其中京尼平苷、小檗碱、黄芩苷单体均具有神经细胞保护作用趋势,但没有统计学显著性.     

栀子药材中京尼平苷含量的薄层-紫外分光光度法测定

目的建立薄层-紫外分光光度(TLC-UV)法测定栀子药材中京尼平苷的含量。方法在25℃测定京尼平苷在最大吸收波长238 nm处的吸光度。结果此法线性范围6.4～38.4μg/ml内,r=0.999 1,平均回收率为97.68%,RSD=2.72%(n=6)。结论用此方法可测定栀子中京尼平苷的含量。方法简便,灵敏和准确,结果可靠。     

走马胎三萜皂苷衍生物的生物转化制备及其抗肿瘤活性研究

目的利用走马胎内生菌Sphingomonas yabuuchiae GTC 868T(AB071955)和果胶酶Ultra AFP对走马胎三萜皂苷Ag3进行生物转化,制备具有抗肿瘤活性的三萜皂苷衍生物。方法采用硅胶柱色谱分离技术对转化产物进行分离;采用波谱技术进行化合物结构鉴定;采用CCK法进行细胞毒活性测试。结果制备得到5个三萜皂苷衍生物:3β-O-{α-L-吡喃鼠李糖基-(1→3)-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(1)、3β-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)]-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(2)、3β-O-{β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基}-西克拉敏A(3)、3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基-西克拉敏A(4)和西克拉敏皂苷元A(5)。结论化合物2~5为首次从走马胎三萜皂苷生物转化产物中分离得到,所得部分产物具有一定的抗肿瘤活性,其中化合物2对肝癌细胞的抑制活性强于底物和阳性药顺铂。     

活性炭联合大孔树脂分离纯化京尼平苷的研究

目的从栀子黄废液中分离纯化京尼平苷。方法采用两步吸附分离法,即先采用活性炭从栀子黄废液中吸附分离京尼平苷,纯度可达17.56%,然后再用HPD100大孔树脂进一步纯化京尼平苷。结果纯度可达58.42%。结论该项工艺操作简单,为工业化生产京尼平苷打下基础。     

大叶水团花茎枝的化学成分研究

目的:研究茜草科水团花属植物大叶水团花茎枝的化学成分并对其在多种体外药理模型上进行随机活性筛选。方法:运用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱和制备型高效液相色谱等技术进行成分分离,通过NMR,MS等波谱数据和理化性质分析鉴定化合物的结构;在细胞水平的多种药理模型上,筛选化合物的体外肿瘤细胞毒、抗炎、抗氧化、抗HIV和神经细胞保护等活性。结果:从95%乙醇提取物中,分离并鉴定28个化合物,分别为5个芳香苷类化合物,clemochinenoside B(1),3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-呋喃芹糖氧基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(2),2-(4-羟基苯)乙基-β-D-呋喃芹糖氧基-(1→6)-β-D-葡萄糖苷(3),4-羟基-3-甲氧基苯酚1-O-β-D-[6-O-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯甲酰基)]-吡喃葡萄糖苷(4)和β-D-吡喃葡萄糖氧基丁香酸酯(5);10个环烯醚萜苷,京尼平苷酸(6),京尼平苷(7),6β-羟基京尼平苷(8),6α-羟基京尼平苷(9),ixoside(10),ixoside 11-methyl ester(11),11-methyl forsythide(12),7β-hydroxysplendoside(13),栀子苷(14)和玉叶金花苷酸(15);5个木脂素,(+)-松脂醇(16),(+)-5′-甲氧基-松脂素(17),(+)-丁香树脂酚(18),(-)-落叶脂素(19)和evofolin-B(20);5个简单芳香类化合物,α-羟基乙酰香草酮(21),丁香酸(22),香草醛(23),3,4,5-三甲氧基苯酚(24)和2,6-二甲氧基对苯醌(25),以及3个常见的植物代谢产物β-谷甾醇(26)、甘露醇(27)和胡萝卜苷(28)。在1.0×10-5mol.L-1浓度下,它们在肿瘤细胞毒(MTT法,HCT-8,Bel-7402,BGC-823,A549和A2780细胞株)、抗炎(PAF,TNF-α和PGE2模型)、抗氧化(Fe2+-Cys诱导大鼠肝微粒体脂质过氧化模型)、抗HIV(VSVG/HIV模型)、神经保护(去血清和谷氨酸损伤模型)和抗糖尿病(PTPIB酶抑制模型)体外模型上均未显示出显著药理活性。结论:化合物1～20均为首次从水团花属植物中分得,它们的药理活性尚待在其他模型上进一步筛选评价。此外,通过2D NMR数据分析,对文献中报道的化合物10和11碳谱数据的错误归属进行了修正。     

一个新颖的人参皂苷元衍生物及其抗HL-60肿瘤细胞活性

目的研究人参皂苷元衍生物及其抗HL-60肿瘤细胞活性。方法利用Smith降解处理人参总皂苷,采用硅胶柱色谱、制备型高效液相色谱技术分离、纯化人参皂苷元等产物。通过波谱数据分析产物结构。采用MTT法测试产物抗HL-60肿瘤细胞活性。结果分离鉴定了原人参二醇(PD)、原人参三醇(PT)和24,25-烯-3β,6α-二羟基-12,20-(1′-羟基)双氧乙基-达玛烷(1),化合物1为新化合物命名为1′-羟基双氧乙基原人参三醇。结论化合物1为新型人参皂苷元衍生物,其抑制HL-60细胞增殖的作用强于PD和PT。     

通络救脑注射液对Aβ_(1-40)致脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨通络救脑注射液及其有效成分对脑微血管内皮细胞的保护作用及机制。方法建立β淀粉样蛋白(Aβ_(1-40))致人脑微血管内皮细胞(h BMECs)损伤模型,用通络救脑注射液及其有效单体成分京尼平苷、人参皂苷Rg1干预,采用CCK-8染色法测定细胞活性,检测条件培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,Western blot法检测h BMECs高度糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果通络救脑注射液及其有效单体成分京尼平苷、人参皂苷Rg1可显著提高Aβ_(1-40)损伤的h BMECs活性,减少细胞损伤后LDH的漏出和h BMECs RAGE的表达,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论通络救脑注射液及其有效单体成分京尼平苷、人参皂苷Rg1可提高Aβ_(1-40)损伤的h BMECs的活性,对其具有保护作用,其机制可能与减少血管内皮细胞RAGE的表达有关。     

栀子中京尼平苷的微生物转化研究

目的通过筛选一株高产β-葡萄糖苷酶菌株对栀子进行发酵,使得其中的京尼平苷转化为京尼平。方法通过底物特异显色筛选模型筛选菌株,并使用正交实验对发酵条件进行优化。结果筛选到一株产β-葡萄糖苷酶酶活可达到8.2 u/ml的青霉Penicillium nigricans,并优化了发酵转化条件,使得京尼平苷的转化率可达到95%以上。利用波谱法对发酵产物进行了结构鉴定,证明转化产物为京尼平。结论通过微生物转化的方法可以使栀子中主要成分京尼平苷转化成具直接作用的有效成分京尼平。     

栀子化学成分研究

目的：研究栀子的化学成分。方法：用各种现代色谱方法分离栀子化学成分,用波谱技术(IR,UV,MS,1D和2D-NMR)鉴定结构。结果：从焦栀子中分离得到9个化合物,分别鉴定为欧前胡素(imperatorin,1),异欧前胡素(isoimperatorin,2),藏红花酸(crocetin,3),5-羟基-7,3′,4′,5′-四甲氧基黄酮(5-hydroxy-7,3′,4′,5′-tetramethoxyflavone,4),2-甲基-3,5-二羟基色原酮(2-methyl-3,5-dihydroxychromone,5),苏丹Ⅲ(sudanⅢ,6),京尼平苷(geniposide,7),藏红花素(crocin,8),藏红花酸糖苷-3(crocin-3,9)。结论：其中化合物1～6为首次从该植物中分离。     

冬凌草甲素衍生物的制备和评价

目的 为研究冬凌草甲素的构效关系,对冬凌草甲素进行结构修饰,合成其衍生物,并评价其细胞毒活性.方法 经常规提取分离得到冬凌草甲素(Ⅰ);通过氧化和酰基化,制备冬凌草甲素衍生物,所获产物采用NMR和MS确证结构;采用MTT法观察衍生物的细胞毒活性.结果 制备了6个冬凌草甲素的衍生物,分别为14-乙酰基冬凌草甲素(Ⅱ)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(Ⅲ)、14一对甲苯磺酰基冬凌草甲素(Ⅳ)、1-氧代冬凌草甲素(Ⅴ),14-乙酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅵ)、14-对甲苯磺酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅶ),其中化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为3个新化合物.初步药理实验表明部分衍生物细胞毒活性高于冬凌草甲素.结论 首次评价了1-氧代冬凌草甲素衍生物的细胞毒活性,其活性高于冬凌草甲素.     

高速逆流色谱法分离制备沉香中的沉香四醇和4'-甲氧基沉香四醇

目的:研究高速逆流色谱分离制备沉香中2-(2-苯乙基)色酮类活性成分的方法。方法:采用氯仿-甲醇-水(4∶2.6∶2.4)为两相溶剂体系,上相为固定相,流速1.2 mL/min,正向转速900 rpm。结果:利用高速逆流色谱法从沉香95%乙醇粗提物中一次性分离得到两个2-(2-苯乙基)色酮衍生物——沉香四醇(agarotetrol,AH1)和4′-甲氧基沉香四醇。所得两分离峰经EI-MS、1H-NMR和13C-NMR鉴定确认。HPLC检测纯度可达99.0%以上。结论:高速逆流色谱法对于沉香中结构相近的2-(2-苯乙基)色酮衍生物具有理想的分离效果,产物纯度高。     

球孢白僵菌、少根根霉和产黄青霉对广藿香醇生物转化的作用研究

目的应用生物转化法对广藿香醇的进行羟基化修饰。方法选择真菌球孢白僵菌、少根根霉和产黄青霉对广藿香醇进行生物转化。转化产物经过凝胶、硅胶柱层析及制备型高效液相色谱法分离纯化,进而采用MS、NMR技术鉴定转化产物结构。结果广藿香醇经球孢白僵菌转化得到3个产物,分别为12-羟基广藿香醇(1)、8S-羟基广藿香醇(2)以及5R-羟基广藿香醇(3);经少根根霉转化得到3个产物,分别为3R-羟基广藿香醇(4)、8S-羟基广藿香醇(2)以及5R-羟基广藿香醇(3);经产黄青霉转化得到2个产物,分别为6R-羟基广藿香醇(5)和7S-羟基广藿香醇(6)。结论化合物1~6均为广藿香醇的羟基化衍生物。     

京尼平苷乳膏的制备和稳定性考察

 目的 制备京尼平苷乳膏并考察稳定性。方法 利用正交试验设计法筛选适宜基质,筛选了不同的促渗剂、防腐剂制成o/w型的乳膏,采用Franz 扩散池对纳米乳的体外透皮特性进行了考察,然后对乳膏的流变学和稳定性进行考察。结果 最终处方结果是油相体积分数占33%、乳化剂用量为6%、防腐剂用量为0.3%、京尼平苷占0.5%,乳化温度为80 ℃。此条件制备的乳膏色泽均匀、质地细腻、渗透性良好、便于涂布; 12 h累积渗透量为（212.73±22.76）μg·cm^-2。药品在常温(25 ℃)下连续放置6个月,高温（40 ℃）和低温（4 ℃）放置3个月,京尼平苷含量和制剂pH值均符合规定。结论 京尼平苷乳膏渗透性良好,性质稳定可靠,可以作为京尼平苷经皮给药新剂型。     

栀子化学成分(Ⅳ)

目的:研究栀子的干燥成熟果实中的化学成分。方法:采用各种柱色谱方法分离纯化,通过理化常数测定和光谱分析鉴定化合物的结构。结果:从栀子的果实中分离鉴定了10个化合物,分别为6″-O-[(E)-p-香豆酰基]京尼平龙胆二糖苷(1),3-O-咖啡酰基-4-O-芥子酰基奎宁酸(2),6″-O-反式-芥子酰基京尼平龙胆二糖苷(3),绿原酸(4),3-甲氧基-4-羟基苯酚(5),东莨菪内酯(6),滨蒿内酯(7),2-(3-甲氧基-4-羟基苯)乙基-β-D-呋喃芹糖氧基-(1→6)-β-D-葡萄糖苷(8),中脂素(9),5’-甲氧基异落叶松脂醇-3α-O-β-D-葡萄糖苷(10)。结论:化合物5~10为首次从该植物中分离得到。     

改良溶剂挥发法制备姜黄素衍生物mPEG5000-PLGA纳米粒的研究

目的 对改良溶剂挥发法制备姜黄素衍生物Cur(OA)2的聚乙二醇单甲醚-聚乳酸-乙醇酸共聚物[poly-1 actide-coglycolide-co-poly-(ethylene-glycol),mPEG5000-PLGA]纳米粒[Cur(OA)2-NPs]的工艺进行优化,并对Cur(OA)2-NPs加以表征.方法 以包封率、形态、粒径为指标,采用正交设计筛选优化制备工艺.以激光粒度仪和透射电子显微镜分别对Cur(OA)2-NPs的粒径、Zeta电位和形貌进行表征.结果 优化的制备方案:药物Cur(OA)2与载体mPEG5000-PLGA的用量(质量)比为1∶4,有机相与水相溶剂体积比为1∶2;搅拌速率为1 200 r/min,泊洛沙姆188 (F68)的用量为0.3％.所得Cur(OA)2-NPs为球形粒子,分布较均匀,平均粒径86.23nm(粒径范围80～100nm),Zeta电位为-23.8 mV.结论 改良溶剂挥发法适于载姜黄素衍生物的mPEG5000-PLGA纳米粒子的制备.