胆道感染大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药分析

目的：探讨胆道感染患者中大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及耐药分析。 方法：采用改良的酶提取物三维试验法检测ESBLs和AmpC酶，采用纸片扩散(K-B)法检测大肠埃希菌对18种抗生素的耐药率。结果： 110株大肠埃希菌中检出单产ESBLs 42株，AmpC酶12株，同时产AmpC酶和ESBLs共6株，检出率分别为38.2％、10.9％和5.5％；产酶菌株对抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论：胆道感染大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs，对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。     

大肠埃希菌AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的 检测大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),并分析其耐药性,以指导临床合理用药。方法 采用改良三维试验法,分别进行AmpC酶和ESBLs测定。结果 300株大肠埃希菌AmpC酶、ESBLs检出率分别为3．7％(11／300)、24．7％(74／300),其中同时产AmpC酶和ESBLs菌株检出率为2．3％(7／300)。产酶菌株对17种抗生素(除亚胺培南全部敏感外)的耐药率均高于平均水平。结论 大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药可选用碳青霉烯类抗生素。     

大肠埃希菌AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶检测及耐药性分析

目的检测大肠埃希菌AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs),并分析其耐药性,以指导临床合理用药。方法采用改良三维试验法,分别进行AmpC酶和ESBLs测定。结果300株大肠埃希菌AmpC酶、ESBLs检出率分别为3.7%(11/300)、24.7%(74/300),其中同时产AmpC酶和ESBLs菌株检出率为2.3%(7/300)。产酶菌株对17种抗生素(除亚胺培南全部敏感外)的耐药率均高于平均水平。结论大肠埃希菌对β内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药可选用碳青霉烯类抗生素。     

大肠埃希菌ESBLs和AmpC酶的检测及耐药性分析

目的 分析大肠埃希菌产ESBLs和AmpC酶的检出情况及其对常用抗生素的耐药性.方法 收集临床无重复分离的161株大肠埃希菌,利用双纸片协同法检测ESBLs,Tris-EDTA纸片法测AmpC酶,K-B法测定细菌对抗生素的耐药性.结果 161株大肠埃希菌共检出产酶菌(包括单产ESBLs、单产AmpC酶、同时产ESBLs和AmpC酶)63株,占39.1%,其中以单产ESBLs为主.产酶菌耐药性明显高于非产酶菌,以产AmpC酶菌更为严重;所有菌株对亚胺培南均敏感.结论 临床分离的大肠埃希菌产酶菌株普遍,耐药率高,应引起临床重视.治疗产酶菌株引起的感染首选碳青霉稀类抗生素.     

尿液标本中大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：分析尿液标本中大肠埃希菌的耐药性及其产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）情况，指导临床用药。方法：对124例泌尿系感染患者尿液标本中的大肠埃希菌用纸片扩散法进行抗生素敏感试验，纸片扩散法表型确证试验检测ESBLs。结果：有58株大肠埃希菌产ESBLs，占46．8％．引起泌尿系感染的大肠埃希菌对亚胺培南的耐药率〈1．7％，对呋喃妥因的耐药率〈12％．可作为治疗泌尿系感染的首选与次选药物。产ESBLs菌株对头孢西丁、头孢哌酮／舒巴坦、环丙沙星、氧氟沙星、左旋氧氟沙星和阿米卡星的耐药率比非产ESBLs菌株明显升高（P〈0．01）。男性患者产ESBLs菌株的检出率明显高于女性患者（P〈0．01）。结论：尿路感染应检测ESBLs并根据抗生素敏感试验选择敏感药物进行合理用药。     

大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的基因型检测

目的 了解大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的现状及其基因型。方法 收集任一第三代头孢菌素和头孢两丁耐药的大肠埃希菌临床分离株42株．以改良三维试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶。用碱裂解法提取质粒，应用多重聚合酶链反应（multiplex polymerase chain reaction，MPCR）对AmpC酶的基因进行检测。对PCR扩增阳性的样本进行基因测序以确定基因型。结果 42株大肠埃希菌中，经三维试验检测，单纯产ESBLs者18株（42．8％），单纯产质粒AmpC酶者4株（9．5％）．同时产质粒AmpC酶与ESBLs者1株（2．3％），5株AmpC酶三维试验阳性菌株，经PCR扩增其中4株扩增到了清晰的条带，1株扩增为阴性，PCR产物经测序分析其基因型均为DHA-1型。结论 大肠埃希菌临床分离株产ESBLs率较高，并己经出现了质粒介导的AmpC酶，其基因型为DHA-1型。     

大肠埃希菌产β-酰胺酶类型及耐药监测

目的了解大肠埃希菌产β-内酰胺酶（BLA）的类型及其耐药特征。方法采用生物梅里埃ATB系统G-5药敏条做药敏试验。用NCCLs确证试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），根据表型检测AmpC BLA、对β-内酰胺酶抑制剂敏感性下降的BLA和水解碳青霉烯类的BLA。结果162株大肠埃希菌产ESBLs74株（45．7％）；表型鉴别产AmpC BLA9株（5．6％）、对β-内酰胺酶抑制剂敏感性下降的BLA2株（1．2％）、未检到水解碳青霉烯类的BLA。药敏结果显示产ESBLs菌对20种抗菌药物的耐药率均显著高于非产酶菌株（亚胺培南、美洛培南除外）。碳青霉烯类、阿米卡星、头孢西丁对产ESBLs菌有较高活性。头孢他定、头孢噻肟的耐药率差异显著分别为25．0％和91．7％。结论大肠埃希菌以产ESBLs为主，筛选时以头孢噻肟为检测底物优于头孢他定。产ESBLs菌耐药率明显高于非产酶株，碳青霉烯类是目前少数对ESBLs高度稳定的抗生素之一。     

大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌AmpC酶的检测

目的了解我院大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌产AmpC酶情况。方法按NCCLS推荐的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)确证试验,对369株大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌进行ESBLs酶的检测,并用改良三维试验、三维试验抑制试验及AmpC酶诱导试验对表型可疑产AmpC酶的菌株进行检测。结果73株表型可疑产AmpC酶的菌株中检出34株产AmpC酶,大肠埃希氏菌24株,肺炎克雷伯氏菌10株,其中有5株大肠埃希氏菌2、株肺炎克雷伯氏菌同时产ESBLs酶。2株肺炎克雷伯氏菌诱导产AmpC酶。结论产生AmpC酶是大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌对头孢类抗生素耐药的又一重要机制,实验室应对其检测和监测给予足够重视,以指导临床合理选用抗生素、减缓对细菌耐药的选择性压力、避免医院感染的发生和流行。     

改良的纸片表型筛选法用于AmpC酶的检测

目的 建立并评价一种检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶的新方法.方法 采用改良的纸片表型筛选法,以头孢西丁三维试验和多重PCR法作为对照,对临床分离的耐第三代头孢菌素的164株大肠埃希菌和40株肺炎克雷伯菌进行AmpC酶的检测.结果 164株大肠埃希菌中,改良的纸片表型筛选法检出8株产AmpC酶的阳性菌株（8/164,4.88%）,其中有2株同时产ESBLs酶;40株肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶菌株,但检出2株（2/40,5.00%）诱导产AmpC酶菌株.头孢西丁三维试验在大肠埃希菌中检出AmpC酶阳性菌株8株（8/164,4.88%）,在肺炎克雷伯菌中未检出产AmpC酶株.多重PCR法检出大肠埃希菌AmpC酶耐药基因阳性9株（9/164,5.49%）,肺炎克雷伯菌阳性2株（2/40,5.00%）.结论 改良的纸片表型筛选法可用于检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产AmpC酶和诱导产酶株,并可同时检测产ESBLs酶菌株,该法操作简便、结果可靠、无需特殊仪器,可在普通临床实验室应用.     

下呼吸道感染细菌产AmpC酶和超广谱β内酰胺酶的检测

目的：了解临床下呼吸道感染标本常见革兰阴性杆菌分离株中AmpC酶和超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检出情况。方法：通过酶提取物三维试验检测单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs菌株；采用美国国家临床实验室标准委员会(NC—CLS)表型筛选和确认试验检测单产ESBLs菌株。结果：从临床下呼吸道标本分离对第一、二代及一种以上第三代头孢菌素耐药的226株常见革兰阴性杆菌，包括阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌中，分别检出单产AmpC酶、同时产AmpC酶和ESBLs及单产ESBLs细菌34株、15株、109株，总检出率分别为15．0％、6．6％、48．2％。AmpC酶检出率在阴沟肠杆菌中最高，为57．9％；ESBLs检出率以肺炎克雷伯菌最高，其次为大肠埃希菌，分别为78．5％、77．8％。结论：下呼吸道产AmpC酶和ESBLs细胞感染常见，前以阴沟肠杆菌为主，后多见于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。     

3-氨基苯酚硼酸增强试验检测同时产AmpC酶和ESBLs菌株

摘要：目的：评价3-氨基苯酚硼酸（APB）增强试验同时检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶的效果。 方法：用加APB的头孢他啶、头孢噻肟、头孢他啶/克拉维酸、头孢噻肟/克拉维酸纸片检测31株产质粒型AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌合并产ESBLs情况,并与仪器法、经典方法(K-B法)检测ESBLs结果进行对比。同时采用此方法检测239株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs酶的情况。并采用加与不加APB的头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁检测其是否高产AmpC酶。 结果：31株产质粒型AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中合并产ESBLs酶的菌株,经典方法漏检ESBLs 6株,漏检率23.08%(6/26)。而Vitek-60微生物仪漏检率达65.38%（17/26）。239株菌中检测出产AmpC酶10株（4.18%）。其中有5株同时产ESBLs 酶和AmpC酶;产ESBLs 酶106株（44.35%）。 结论：目前产ESBLs、高产AmpC酶的菌株检出率较高,APB增强法能快速、简便、较准确检测同时产ESBLs和AmpC酶菌株,适合临床实验室应用。     

产新型广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的筛选和耐药性研究

目的研究我院产新型肛内酰胺酶肺炎克雷伯菌（KP）的耐药现状，为临床用药提供合理依据。方法614株临床分离的无重复肺炎克雷伯菌，采用NCCLS表型筛选和确证试验检测ESBLs，酶提取物改良三维试验检测AmpC酶株，纸片协同试验检测金属p内酰胺酶；KB纸片法检测产酶株对11种抗菌药的体外抗菌活性；琼脂二倍稀释法测定9种抗生素对同时产AmpC酶和ESBLs菌株的最低抑菌浓度（MIC）。结果单产ESBLs的检出率为31．8％，单产AmpC酶的检出率为2．6％，同时产ESBLs和AmpC酶的检出率为1．1％，未检出产金属肛内酰胺酶的肺炎克雷伯菌。产ESBLs菌对多种抗生素的耐药性较非产酶株显著升高；产AmpC酶菌对含酶抑制剂抗生素耐药率比产ESBLs菌高；同时产ESBLs和AmpC酶株对多种抗生素耐药；三种酶型均未见亚胺培南耐药株。结论亚胺培南可作为治疗产ESBLs和AmpC酶肺炎克雷伯菌引起重症感染的首选药物；但产新型肛内酰胺酶菌株的多重耐药和交叉耐药现象十分严重，应高度重视产酶株的监测与控制。     

肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌AmpC β内酰胺酶的表型检测

目的 比较研究临床实验室对AmpCβ内酰胺酶（AmpC酶）的表型检测方法,了解对头孢西丁不敏感的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中产生hmpC酶和超广谱β内酰胺酶（ESBLs）的分布情况。方法 利用加与不加3-氨基苯酚硼酸（APB）的头孢他啶、头孢噻肟和头孢西丁纸片进行APB纸片增强试验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶,并与Tris-EDTA纸片试验检测AmpC酶的结果进行比较。用CLSI纸片确认实验检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产生的ESBLs。结果 APB纸片增强试验与Tris-EDTA纸片法检测结果完全一致。对头孢西丁不敏感的62株肺炎克雷伯菌和74株大肠埃希菌中,分别检测到产AmpC酶41株（66．1％）和33株（45．0％）。AmpC酶和ESBLs同时存在的肺炎克雷伯菌占51．6％,单产AmpC酶和单产ESBLs的肺炎克雷伯菌分别为14．5％和21．0％;而大肠埃希菌则以单产ESBLs为主,占40．5％,单产AmpC酶及同时产生AmpC酶与ESBLs的分别占20．3％和24．3％。结论 APB纸片增强试验和Tris-EDTA纸片试验操作简单,应用方便,成本低廉,均可用于临床实验室检测产AmpC酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌。     

儿科临床分离株中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行

目的了解质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr在儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的流行情况与分布特点。方法琼脂稀释法测定抗生素MIC;PCR检测喹诺酮类药物耐药基因qnrA、qnrB和qnrS及相应ESBLs和AmpC酶基因;接合试验检测qnr基因是否可通过质粒转移;肠杆菌基因间重复一致序列-聚合酶链反应（ERIC—PCR）检测qnr阳性菌株的同源性。结果702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌共检出含qnr基因菌株99株（14．1％）,其中qnrA、qnrB和qnrS的检出率分别为1．1％（8株）、4．0％（28株）和9．5％（67株）,其中3株菌同时含有qnrA和qnrB,1株含qnrB和qnrS。在99株qnr阳性菌株中,有88株（88．9％）检测到至少1种bla基因。20株qnr阳性菌株通过接合试验传递成功。相对于受体菌,接合子对环丙沙星的MIC提高了2～125倍。ERIC—PCR显示99株qnr阳性菌株有不同的DNA条带,提示其可能属于不同的克隆株。结论在702株儿科临床分离产ESBLs或AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中,质粒介导喹诺酮类药物耐药基因qnr携带率为（14．1％）,qnrS为最流行的亚型。88．9％的qnr阳性株携带1种或1种以上bla基因。     

重症监护病房患者大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药性分析

目的 探讨重症监护病房（ICU）患者大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多重耐药性,为临床提供治疗依据.方法 回顾分析ICU病房患者标本中分离的280株大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药性.结果 大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌多数来自痰标本,其中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）136株（48.6%）,产AmpC β-内酰胺酶10株（3.6%）,同时产两种酶2株（1.1%）.抗生素耐药显示：携带产 ESBLs和AmpC酶菌株都有较高耐药性;产 ESBLs菌株对亚胺培南较为敏感（94.8%）,其次是哌拉西林/他唑巴坦（36.1%）;而AmpC酶菌株对亚胺培南的敏感率仅为48.4%.结论 ICU病房大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌均有较高的耐药性,因此必须合理应用抗生素.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的发生及耐药性，为临床抗感染治疗合理使用抗生素提供指导。方法用美国临床实验室标准化研究所推荐的初筛试验和表型确证试验检测ESBLs产生株，使用最低抑菌浓度法和K—B法检测临床各类标本中分离的216株大肠埃希菌对22种抗生素的耐药情况。结果216株大肠埃希菌ESBLs检出率为59．3％，产ESBLs大肠埃希菌对大多数β-内酰胺类药物明显耐药，并对氨基糖苷类、氟喹诺酮类多数耐药，耐药率明显高于非产ESBLs大肠埃希菌，但对亚胺培南100％敏感。结论产ESBLs大肠埃希菌大多为多重耐药菌，其耐药性明显高于非产ESBLs大肠埃希菌，临床微生物实验室应加强对产ESBLs菌株的监测。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性分析

目的：了解产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌在本院的分离率，分布及对15种抗生素的耐药情况，给临床提供相关数据，指导临床合理使用抗生素。方法：试验菌株为2004年我院分离的大肠埃菌。分离培养按照卫生部（全国临床检验操作规程）第二版进行。菌株鉴定采用VITEK-32全自动微生物分析仪。抗生素敏感度验采用纸片扩散法按美国临床实验室标准委员会（NCCLs）推荐标准实施。ESBLs检测采用美国临床实验室标准委员会（NCCLS）的确证实验。结果：2004年产ESBLs大肠埃希菌分离率31．3％，主要分布在尿，痰，分泌物标本中．对15种抗生素中的9种抗生素耐药率在70％以上。结论：产ESBLs大肠埃希菌的分离率比不产ESBLs大肠埃希菌低，对多种抗生素同时耐药，是一种多重耐药菌。     

全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究

目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。     

产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌分布与耐药性分析

目的：了解我院产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的分布和耐药性，为临床合理选用抗生素提供依据。方法：根据ESBLs已知基因序列设计CTX-M通用引物，对36株临床分离产ESBLs大肠埃希菌进行PCR扩增。采用琼脂平皿稀释法进行最低抑菌浓度（MIC）测定。结果：31株大肠埃希菌产CTX-M酶，占产ESBLs菌株的86％。CTX-M-1组13株阳性，CTX-M-9组24株阳性。其中6株二者共同阳性；CTX-M-2组、CTX-M-8组和CTX-M-25组均为0株阳性。产CTX-M酶大肠埃希菌对碳青霉烯类和哌拉西林／他唑巴坦普遍敏感，对哌拉西林和喹诺酮类完全耐药，对头孢曲松和头孢噻肟MIC结果显示耐药明显，对其他三代、四代头孢菌素及头孢西丁耐药率介于45．16％～64．52％之间。结论：我院大部分产ESBLs大肠埃希菌产CTX-M酶，产CTX-M酶大肠埃希菌对头孢曲松和头孢噻肟耐药明显。     

产超广谱β-内酰胺酶菌株的药敏分析

目的了解肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及产酸克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的发生率及耐药特点，指导此类细菌感染的抗菌药物的应用。方法收集2003年6月至2004年6月我院感染患者中分离出来的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和产酸克雷伯菌218株，用表型确认试验检测ESBLs，用美国Microscan negative panel 21反应板作细菌鉴定和药敏试验。结果218株肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及产酸克雷伯菌中，共检出产ESBLs 70株，检出率为32．11％，其中肺炎克雷伯菌为36．7％，大肠埃希菌为33．33％，产酸克雷伯菌为25．45％；除亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢西丁外，产ESBLs菌对其他15种抗生素的耐药率均显著高于非产ESBLs菌；亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢西丁对产ESBLs菌的耐药率最低。结论肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌及产酸克雷伯菌产ESBLs情况严重，产ESBLs菌对大多数抗生素耐药性比非产ESBLs菌严重，亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢西丁是治疗由产ESBLs菌引起感染的有效抗生素。