骨髓间充质干细胞分离培养和应用

一、骨髓间充质干细胞概述 骨髓间充质干细胞(MMSC)具有较强的自我增殖能力和多向分化潜能.早期分离培养时,发现其形状呈成纤维细胞样而称其为"成纤维细胞集落形成单位(colony-forming unitfibroblastic,CFU-F)"或"骨髓基质成纤维细胞(marrow stromal fibroblasts, MSF)" .     

骨髓间充质干细胞的免疫特性

骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,BMSCs)是骨髓中的非造血干细胞,早期分离培养时,其外观呈成纤维细胞样而被称为"成纤维细胞集落形成单位(Colony-forming unit-fibroblastic,CUFF)"或"骨髓基质成纤维细胞(Marrow stromal fibroblasts,MSF)".     

骨髓间充质干细胞在骨髓移植中的应用

间充质干细胞（Mesenehymal Stem Cells，MSC）是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞，是成体干细胞的一种，主要存在于结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富。由于骨髓是其主要来源，因此统称为骨髓间充质干细胞（bone marrow meschymal stem cell，BM—MSC）。也因其比较容易贴壁和形成成纤维样的克隆，又可称为贴壁细胞或者成纤维细胞集落形成单位（CFU—F）、骨髓基质细胞（MSC）或间充质干细胞或间充质祖细胞（MPC）。许多研究发现，BM—MSC在骨髓移植中有着极其重要的应用价值，一方面在骨髓微环境中支持造血；另一方面，对移植免疫有一定的影响，能够在某些方面减轻移植物抗宿主效应。     

骨髓间充质干细胞的研究进展

骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是骨髓中的非造血干细胞,又称为"成纤维细胞集落形成单位(Colony-forming unit fibroblastic,CUF-F)"、"骨髓基质成纤维细胞(Marrow stromal fibroblasts,MSF)"或"骨髓基质细胞(Bonemarrow stromal cells,BMSCs)".     

骨髓基质细胞迁移机制研究进展

骨髓基质细胞(BMSC)是骨髓细胞中除去造血干细胞(非黏附细胞)之外的黏附细胞部分,也称为塑料黏附细胞、克隆形成单位成纤维细胞或骨髓间充质干细胞(MSC).     

骨髓间充质干细胞抑制肾癌A498细胞增殖及侵袭能力

目的 探讨骨髓间充质干细胞对肾癌细胞系A498增殖和侵袭能力的影响.方法 将骨髓间充质干细胞及人成纤维细胞分别与肾癌A498细胞共培养,利用流式细胞仪测定细胞周期,检测骨髓间充质干细胞及人成纤维细胞对A498细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验分析肾癌A498细胞体外侵袭能力;qRT-PCR检测共培养后肾癌A498细胞Snail和E-cadherin基因的表达.结果 骨髓间充质干细胞可明显抑制A498细胞的增殖及侵袭能力(P＜0.05);qRT-PCR结果表明,与骨髓间充质干细胞共培养后,A498细胞中Snail基因表达下调(P＜0.05),而E-cadherin基因表达上调(P＜0.05).成纤维细胞对A498细胞所起的作用与骨髓间充质干细胞相反.结论 骨髓间充质干细胞体外可抑制A498细胞的增殖和侵袭.     

骨髓间充质干细胞向成骨细胞的定向诱导分化

骨髓由非贴壁的造血细胞和贴壁的基质细胞部分组成.这些贴壁的基质细胞部分包括多能间充质干细胞和分化的骨髓间充质基质细胞.间充质干细胞(mesenchymal stemce lls,MSCs)系统依靠增殖来自我更新,但是能够保持其干细胞的表型而引起成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、成纤维细胞的分化[1].     

骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的：通过体外细胞的培养方法将骨髓间充质干细胞由骨髓血中分离出来并加以纯化，进一步在体外培养条件下研究其增殖及生长特征，从而为探讨后续利用组织工程学方法修复肌肉骨骼系统组织缺损的可能性提供实验基础。方法：从骨髓血中提取间充质干细胞，体外培养扩增，再以相差显微镜、电镜观察并绘制生长曲线。结果：（1）通过离体培养，可以使体内环境下低丰度的骨髓间充质干细胞实现数目扩增。（2）体外培养条件下骨髓间充质干细胞具有成纤维细胞的生长特性。（3）体外单层培养条件下贴壁生长的骨髓间充质干细胞会出现“返祖现象”。（4）骨髓间充质干细胞内细胞器与其生物活性变化相一致。结论：骨髓间充质干细胞体外培养成功为今后利用自体间充质干细胞通过组织工程学方法修复肌肉骨骼系统的组织缺损提供功能细胞奠定了基础。     

骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的相关研究

骨髓由非贴壁的造血细胞和贴壁的基质细胞部分组成。这些贴壁的基质细胞部分包括多能间充质干细胞和分化的骨髓间充质基质细胞。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)系统依靠增殖来自我更新,但是能够保持其干细胞的表型而引起成骨细胞、成软骨细胞、成脂肪细胞、成纤维细胞的分化[1]。如何定向诱导其成骨分化可为研究骨组织工程、骨折修复和骨质疏松等难题提供理论基础,具有重要的意义。本综述讨论了骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向诱导分化的相关研究。     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞成骨活性的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为广泛的具有较高生物活性的生长因子之一,对骨髓间充质干细胞有广泛的作用.该文就bFGF促进间充质干细胞向成骨细胞分化方面的研究进展做一综述.     

碱性成纤维细胞生长因子对间充质干细胞成骨活性的影响

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是近年来研究较为广泛的具有较高生物活性的生长因子之一,对骨髓间充质干细胞有广泛的作用。该文就bFGF促进间充质干细胞向成骨细胞分化方面的研究进展做一综述。     

兔骨髓间充质干细胞的体外培养及形态学观察

目的：对兔骨髓间充质干细胞进行体外分离培养,观察其形态学特征。方法：通过密度梯度离心联合贴壁培养法,对兔骨髓间充质干细胞进行体外分离、扩增、纯化,倒置相差显微镜观察其形态学特点。结果：体外培养的兔骨髓间充质干细胞为贴壁生长,长梭形成纤维细胞样细胞,可增殖形成克隆。结论：兔骨髓间充质干细胞通过密度梯度离心联合贴壁培养法可大量扩增、纯化,并表现为一定的形态学生长特征。     

骨髓间充质干细胞在临床应用方面的研究进展

骨髓内的结缔组织干细胞被称为骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），在分离培养的早期，其形状呈成纤维细胞样，所以又称之为“成纤维细胞集落形成单位（colony-forming unitfibroblastic，CFU-F）”。许多研究显示，骨髓以外的其他器官中也广泛存在着结缔组织干细胞，体内所有这类干细胞统称为间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs），骨髓基质内的MSCs是MSCs大家族的主要成员亚类。随着MSCs在组织工程、细胞移植、基因治疗等临床应用方面的深入研究，以下几个问题是应当受到重视的：MSCs的快速分离及纯化、宿主免疫反应、归巢及体内分化过程，现就此作一简要综述。     

大鼠骨髓间充质干细胞原代培养及成骨成脂分化能力染色鉴定

目的：实验旨在建立一套简便有效的骨髓间充质干细胞原代培养、诱导分化及染色方法,观测骨髓间充质干细胞生物学特性,及其成骨、成脂分化潜能,为后续进行骨髓间充质干细胞基因修饰实验做好准备。方法本实验通过全骨髓培养法分离骨髓间充质干细胞,并用诱导分化培养液做定向诱导培养,观察骨髓间充质干细胞向成骨及成脂肪细胞分化过程中的细胞形态学变化,进行成骨成脂细胞染色鉴定,以探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法、生长规律及向成骨成脂细胞分化的条件。结果(1)通过全贴壁法成功进行了骨髓间充质干细胞原代及传代培养并绘制出第4代细胞生长曲线;(2)通过茜素红染色验证了骨髓间充质干细胞的成骨分化能力;(3)通过油红O染色验证骨髓间充质干细胞的成脂分化能力。结论全贴壁法提取的大鼠骨髓间充质干细胞经传代4次左右可达到一定纯度,在一定诱导条件下,经特定染色方法鉴定,可分化为成骨细胞,成脂细胞。     

骨髓间充质干细胞的分离培养及定向诱导软骨细胞的实验研究

目的　体外培养大鼠骨髓间充质干细胞并向软骨细胞表型分化 ,探讨其作为组织工程软骨种子细胞的可行性。方法　取成年大鼠股骨骨髓 ,体外培养、纯化。取第三代成年大鼠骨髓间充质干细胞 ,实验组用HG DMEM无血清培养液诱导 ;对照组用含 1 0 %胎牛血清的HG DMEM培养液自然分化。形态学观察 ,免疫组化检测Ⅱ型胶原分泌。结果　大鼠骨髓间充质干细胞为均一的成纤维细胞样。实验组与对照组Ⅱ型胶原免疫组化阳性率有显著差异 (P <0 .0 1 )。结论　成年大鼠骨髓间充质干细胞在特定的培养基能向软骨细胞方向转化 ,作为软骨组织工程种子细胞具有可行性     

间充质干细胞免疫调节作用的研究进展

自Friedenstein等1976年报道了骨髓中存在克隆性生长的基质细胞以来，关于基质细胞的研究不断深入，1991年Caplan正式将这类细胞命名为间充质干细胞（mesenchymal stem cell，MSC）。间充质干细胞目前有多种名称，如骨髓基质干细胞（marrow strmal stem cell），成纤维细胞集落形成单位（CFU-F），多功能成体祖细胞（multipotent adult progenitor cell，MAPC），中胚层祖细胞（mesodermal progenitor cell，MPC）。至今命名仍有争议。     

兔骨髓间充质干细胞体外培养生长特性的初步观察

①目的从形态学角度观察兔骨髓间充质干细胞体外培养的生长特性,建立一套体外分离、培养骨髓问充质干细胞的可靠方法。②方法取兔骨髓后,通过离心,贴壁培养,分离出问充质干细胞。在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化并记录其特点。③结果随时间的推移可见细胞由贴壁前的圆形变成椭圆彤、梭形,少部分呈多角形,细胞呈漩涡样生长。同时可见脂肪细胞出现,部分细胞由梭形变为圆形,周围可见光强反射基质形成,类似软骨细胞。然后细胞增殖由快变慢,更换特制培养液细胞增殖速度加快。④结论兔骨髓间充质干细胞在体外可向成纤维细胞、脂肪细胞、软骨细胞和成骨细胞转化。细胞生长因子可增强及加速骨髓间充质干细胞的多向分化潜能。     

创面微环境对植入骨髓间充质干细胞的影响研究

目的 探讨创面局部微环境对植入的骨髓间充质干细胞(MSC)的影响。方法 采用常规的细胞培养传代技术、超微结构观察、免疫组化、RT-PCR和细胞增殖活性检测等方法。结果 将MSC植入到创面后，可见肉芽组织中有大量成纤维细胞形成，排列成“瀑布”状，成纤维细胞胞浆中有大量原胶原颗粒形成；免疫组化显示碱性成纤维因子(bFGF)、Ⅰ型胶原在新生的成纤维细胞中表达增强；伤口液促进MSC的增殖活性和迁移能力；局部微环境促进MSC基质源性因子(SDF-1)、IL-8、Ⅰ型胶原的基因表达。结论 MSC在创面局部微环境的作用下MSC表现出向成纤维细胞分化的表型。     

骨髓间充质干细胞和猪去细胞瓣膜支架构建组织工程瓣膜

目的 探讨运用组织工程技术以骨髓间充质干细胞和去细胞猪心脏瓣膜支架构建组织工程心脏瓣膜的方法.方法 体外培养、扩增自体骨髓间充质干细胞并鉴定,接种于以曲拉通-脱氧胆酸钠、RnaseⅠ和DnaseⅠ去细胞的猪心脏瓣膜支架上,形成细胞材料复合物,体外培养7 d,将该复合物移植于裸鼠腹腔,4周后行组织学检测.结果 骨髓间充质干细胞具有与成纤维细胞相似的生物学特性,表达ASMA,Vimentin抗原,去细胞瓣膜去细胞彻底,骨髓间充质干细胞可在支架表面良好生长,形成表面光滑的细胞层,分泌细胞外基质,生长好.在裸鼠体内可继续扩增,形成多层细胞.结论 运用组织工程技术以骨髓间充质干细胞和去细胞猪心脏瓣膜可生成初级组织工程瓣膜.     

超声辅助VEGF165转染骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞定向分化血管内皮细胞的可行性研究。方法：采用超声辅助电穿法，将VEGF165基因的质粒PEGFP—Cl转染至骨髓间充质干细胞，转染后于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)表达情况。结果：超声辅助转染5h后可见细胞内有GFP表达，10h后可达高峰。结论：VEGF基因转染骨髓间充质干细胞后，骨髓间充质干细胞内有GFP表达，提示细胞转染成功，骨髓间充质干细胞定向分化为血管内皮细胞具有可行性。