女性生殖道乳杆菌的分离及鉴定

目的:从正常女性生殖道中分离乳杆菌,为开发复方益生菌制剂提供新型菌株。方法:采用传统方法鉴定出乳杆菌,进一步筛选出产生过氧化氢的优势菌株,并运用分子生物学方法,对其进行基因型鉴定。并对优势菌进行初步的性能鉴定试验。结果:从18名体检女性阴道分泌物内分离纯化得到11株菌,检出率为61.1%。分别为嗜酸乳杆菌4株,格氏乳杆菌3株,詹氏乳杆菌2株,卷曲、唾液乳杆菌各1株。结论:运用传统的细菌学分离方法与分子生物学对分离的菌株进行了鉴定。其中一株为产生过氧化氢的卷曲乳杆菌,经过初步测试,该菌株具有良好的耐酸、耐高温及体外拮抗其他病原微生物的能力。     

一株从酸奶中分离的德氏乳杆菌保加利亚亚种的鉴定和系统发育分析

目的对一株分离自酸奶经表型特征鉴定为德氏乳杆菌保加利亚亚种的菌株(wch9901)进行16S rDNA鉴定和系统发育分析。方法提取wch9901基因组DNA作为模板,以16S rDNA两端的保守序列作为PCR引物,扩增菌株的16S rDNA序列。在T4连接酶的作用下,将扩增得到的16S rDNA序列插入克隆载体pGEM-T,构建重组质粒pGEM-wch990116S rDNA。重组质粒酶切鉴定合格后,交由测序公司对插入的16S rDNA序列进行测序。测序结果于GenBank中Blastn,并用软件Mega3.1构建系统发育树。结果wch9901 16S rDNA序列与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus中所有菌株的16S rDNA序列同源性均达96%以上;在系统发育树上wch9901单独形成一个分枝,位于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝和Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus DL2所在的独立小遗传簇及Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus JSQ所在的独立小遗传簇构成的分枝之间,并与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2遗传分枝距离最近。结论wch9901属于Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus;wch9901与Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LGM2具有最近的亲缘关系。     

河南省市售婴幼儿配方乳粉中芽胞杆菌的分离鉴定及系统进化分析

目的 了解河南省市售婴幼儿乳粉中芽胞杆菌的污染状况,分析芽胞杆菌分离株的种属、表型和基因型.方法 采集河南省市售95份国内外婴幼儿乳粉,按照GB 4789.12-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验》进行芽胞杆菌的分离,根据菌落形态,革兰染色和生理生化反应初步鉴定,扩增16S rRNA序列并...     

柠檬无色藻菌的鉴定方法及体外药敏特点

目的总结临床少见菌柠檬无色藻菌的鉴定过程,认识柠檬无色藻菌的耐药特点,并对该菌感染的临床特征进行分析。方法菌株分离培养后,采用传统的形态、生理生化表型和VITEK-2全自动细菌鉴定仪与16S rRNA序列分析相结合的方法来鉴定菌株。结果多次传代后,综合菌株形态、生理生化表型、VITEK-2全自动细菌鉴定仪以及16S rRNA序列分析的结果,确定该分离株为柠檬无色藻菌;药物敏感定量试验显示红霉素、四环素、复方新诺明、三代头孢菌素及喹诺酮类药物均敏感,唯有万古霉素和替考拉宁耐药。结论柠檬无色藻菌引起的血流感染比较罕见;16S rRNA基因序列分析方法可以较好地鉴定常规方法难以鉴定的不典型及罕见菌株。对万古霉素及替考拉宁耐药可以作为无色藻菌与其他阳性球菌鉴别的重要依据。     

玉树地震受伤患者伤口感染梭状芽胞杆菌培养鉴定分析

目的了解玉树地震受伤患者伤口感染梭状芽胞杆菌情况,为临床诊治及突发公共卫生灾害细菌的感染救治提供参考依据。方法 3例伤口感染的地震受伤患者入院时立即采集伤口分泌物进行细菌厌氧和需氧培养,并采用ATB自动微生物分析仪进行细菌鉴定;鉴定出的梭状芽胞杆菌菌株经PCR扩增细菌16S rRNA基因,DNA测序分析,进一步确定细菌种类。结果 3份标本经自动微生物分析仪鉴定出1株产气荚膜梭菌、4株疑似梭状芽胞杆菌;PCR扩增显示5株菌均出现目的大小条带;测序证实5株菌有1株为产气荚膜梭菌,另4株为需氧芽胞杆菌属细菌。结论自动微生物分析仪鉴定和细菌16S rRNA基因测序分析联合应用可快速、准确为临床提供诊治和预防控制信息。     

鲍曼不动杆菌临床分离株的耐药性分析

目的了解鲍曼不动杆菌的临床分布和检出情况以及对临床常用抗菌药物的耐药性。方法对某院临床分离的142株鲍曼不动杆菌,从标本来源、临床分布以及19种抗菌药物的耐药性进行分析。结果 142株鲍曼不动杆菌主要分离于呼吸道标本,占72.6%;主要分布在ICU(40.8%)和呼吸内科(14.8%);多重耐药鲍曼不动杆菌72株,泛耐药鲍曼不动杆菌24株,检出率分别为50.7%和16.9%;其中多粘菌素B的耐药性为0.0%,美罗培南的耐药性为36.6%,亚胺培南的耐药性为34.5%,其他抗菌药物的耐药性在67.3%~94.5%之间。结论多重耐药鲍曼不动杆菌检出率较高,多重耐药鲍曼不动杆菌是临床呼吸道感染的重要致病菌。     

乳酸杆菌及嗜热链球菌的种水平鉴定——16SrRNA基因PCR扩增及序列分析

目的建立鉴定乳酸杆菌及嗜热链球菌的16SrRNA基因PCR方法。方法优化细菌DNA提取方法及PCR反应条件,将细菌16SrRNA基因的PCR产物克隆到质粒载体上并进行序列分析,以对乳酸杆菌酸奶分离株进行鉴定。结果 16SrRNAPCR鉴定方法将50株益生菌酸奶分离株分为7个种,分别为:保加利亚乳酸杆菌24株、嗜热链球菌12株、嗜酸乳酸杆菌7株、干酪乳酸杆菌3株、德氏乳酸杆菌2株、发酵乳酸杆菌1株及巴黎链球菌1株。结论建立的16SrRNA基因PCR方法灵敏、可靠,适用于乳酸杆菌及嗜热链球菌的鉴定。     

蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的分离鉴定及其毒力基因的检测

目的 了解蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的污染情况及其毒力基因的分布情况.方法 采用国家标准GB 4789.14-2014中MPN计数法对抽检蜂蜜样品的蜡样芽胞杆菌计数,并利用PCR法对分离的16株蜡样芽胞杆菌的毒力基因进行检测.结果 蜂蜜中蜡样芽胞杆菌的检出率为41.0％,分离的16株蜡样芽胞杆菌中至少检出2种毒力基因,非溶血性...     

基于16S rRNA和gyrB基因串联DNA特征序列的副溶血性弧菌鉴定

[目的]建立基于16S核糖体RNA(16S rRNA)和DNA促旋酶亚基B(gyrB)基因串联DNA特征序列的副溶血性弧菌鉴定方法,为菌株鉴定和分类提供研究思路和方法依据.[方法]选择副溶血性弧菌、溶藻弧菌以及弧菌属的其他代表性菌株,分别以16S rRNA和gyrB基因为研究靶点,设计引物进行特异性核酸序列扩增和核酸测...     

某三甲医院临床分离的革兰阴性杆菌分布及耐药性分析

目的了解医院临床分离的常见革兰阴性杆菌分布及耐药变迁,指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性分析2007年1月-2009年12月医院临床标本分离的革兰阴性杆菌分布和耐药性。结果 3年共分离革兰阴性杆菌6643株,主要为铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、鲍氏不动杆菌和肺炎克雷伯菌,分别占24.8%、23.1%、16.6%、10.7%;肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌产ESBLs检出率有增加趋势;对肠杆菌科细菌敏感性较高的抗菌药物有亚胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦,铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌对亚胺培南耐药率显著增加。结论 3年医院临床分离的革兰阴性杆菌耐药率有较快增长,加强耐药性监测,合理使用抗菌药物非常重要。     

河南省45例未经治疗的艾滋病患者蛋白酶和逆转录酶基因型耐药性检测与系统发生分析

目的了解河南省部分未经抗病毒治疗的艾滋病患者蛋白酶和逆转录酶基因耐药性突变发生的频率、类型和临床意义以及系统发生情况。方法采集河南省45例未经抗病毒治疗的艾滋病患者的抗凝全血,分离血浆,用逆转录聚合酶链反应扩增pol区蛋白酶基因全序列与逆转录酶基因部分序列并直接进行序列测定,提交Web站点http://hivdb.stanford.edu分析耐药性突变。用BioEdit和DNAClub软件以及登陆Web站点http://hivweb.lanl.gov进行系统发生分析。结果从36份血浆标本中扩增出pol区基因并进行了序列测定。蛋白酶基因耐药性主要突变的发生率是8.3%(3/36),突变的类型是D30A、V32A、G73C和V82A;次要突变的发生率是100%,突变的类型为L63PS(36/36)、I93L(35/36)、V77IL(34/36)、A71IVT(10/36)和D60E(2/36)。逆转录酶基因耐药性突变的发生率是38.9%(14/36)。通过对耐药性突变进行评分,并依据此分值解释其临床意义,提示蛋白酶耐药率为5.6%(2/36),逆转录酶耐药率为22.2%(8/36);另有1份标本对全部蛋白酶抑制剂、3份对部分逆转录酶抑制剂潜在低度耐药。系统发生分析显示36份标本的pol区基因与B.US.83.RFACCM17451的亲缘关系最为接近,且彼此之间具有高度同源性,推测此36份标本为同一感染来源,其耐药性突变的发生不是源于耐药株感染,     

Prevalence and phylogenetic analysis of spike gene of porcine epidemic diarrhea virus in Henan province,China in 2015–2019

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) causes diarrhea, dehydration and a high morbidity and mortality in piglets. To investigate the prevalence and molecular characteristics of the spike (S) gene of the PEDV strains, 575 faecal and intestinal samples were collected from individual pigs with diarrhea in 18 regions in Henan, China from April 2015 to March 2019. The detection results showed that PEDV infection was high up to 51.65% in Henan pigs. The PEDV positive rate in suckling piglets was the highest (60.47%), and it existed widely both in PEDV-vaccine immunized (25.00%) and non-immunized pigs (62.29%). The complete S gene of twenty-two representative PEDV strains were sequenced and analyzed. Phylogenetic analysis based on the S gene sequences revealed that the sixteen of the sequenced PEDV Henan strains were located in the G2-a clade and more related to the PEDV variant strains. The other six of the sequenced PEDV strains were closely related to S-INDEL strains and grouped within in the G1-b clade. The Recombinant Identification Program (RIP) and Simplot analysis showed PEDV Henan strains were evolved from the epidemic variant strains and there existed potential recombinant points in the S genome. Furthermore, the deduced amino acid sequences analysis of the S protein showed that there existed multiple amino acid mutations in the S protein of PEDV Henan strains, including the neutralizing epitope CO-26 K equivalent (COE) and SS6 when compared with the CV777-based vaccine strain. These amino acid mutations in the S protein may change the antigenicity in the PEDV Henan variants, leading to the failure of immunization with the traditional vaccine based on the CV777 strain. These results would support the understanding of the prevalence and evolution characteristics of PEDV in China and promote the development of novel vaccines based on the current prevalence variant strains.     

河南省大骨节病病情流行现状分析

目的 分析河南省大骨节病流行现状及其原因,提出我省今后的主要防治策略.方法 选择在地形、地貌、生产、生活等特点上具有我省代表性的病区为监测点,连续12年进行儿童大骨节病临床检查和拍摄7～12岁儿童X 线手片调查.结果 12年共拍摄7～12岁儿童X线手片1 928人,X线阳性17人,阳性检出率为0.88 %,其中干骺端7...     

辽宁省乙型脑炎病毒分离及进化树分析

目的 分离鉴定2007年辽宁省蚊虫携带流行型乙型脑炎(乙脑)病毒及基因型别.方法 用细胞培养方法分离病毒,对致金黄色地鼠肾细胞系(BHK-21)细胞病变(CPE)的病毒进行逆转录-聚合酶链式扩增(RTPCR)检测;扩增的目标片段进行序列测定;用Mega3.1软件、以邻位相连法构建进化树.结果 共分离到22株病毒,RT-PCR检测结果表明,均为乙型脑炎病毒;随机选择其中3株病毒的基因序列进行基因型鉴定分析,均为Ⅰ型乙型脑炎病毒.3株病毒E基因编码结构域(Domain)区段分析结果显示,其核苷酸和氨基酸同源性分别为99.3%和100%;与疫苗株SA14-14-2的Domain区相比,共有12个氨基酸位点变异.结论 辽宁省蚊虫标本中分离的病毒均为基因Ⅰ型乙型脑炎病毒,其中E基因所编码Domain区E-327(S→T)位点发生的变异,提示在辽宁省首次分离到乙型脑炎病毒变异株.     

河南省甲肝流行趋势分析和预测

目的　分析河南省甲肝流行特征和发病趋势 ,为制定防治对策提供依据。方法　采用Excel和Spssl0 .0软件对河南省1997～ 2 0 0 3年甲肝疫情资料进行数据统计分析 ,应用灰色模型对甲肝发病率进行预测。结果　 1997～ 2 0 0 3年河南省甲肝发病占传染病总报告发病数的 13.71% ,平均发病率为 10 .2 7/ 10万。甲肝发病男女性别比为 1.78:1;10a以下儿童占甲肝总发病数的 4 4 .14 % ;发病职业构成以农民、学生和散居儿童为主 ,分别占 37.0 8%、2 5 .16 %和 17.0 2 %。地区分布以信阳市发病为多。甲肝发病有明显的秋季高峰。甲肝发病率预测模型为y #t =31.78e0 .2 0 95(t-1) - 2 3.2 7,预测 2 0 0 4年甲肝发病率 13.89/10万 ,发病率呈上升趋势。结论应对 2 0 0 4年甲肝的流行情况加以重视。加强重点人群的防治 ,预防控制甲肝流行。     

河南省流行性乙型脑炎综合监测与防制

目的分析河南省流行性乙型脑炎（乙脑）综合监测资料,为制定防控策略提供科学依据。方法用Excel2003、SPSS12.0和Epi Info2000软件统计分析河南省1995-2008年乙脑病例和国家级乙脑监测点唐河、息县媒介蚊虫、宿主动物的监测资料;用ELISA法检测宿主血清乙脑IgG抗体。结果 1995-2008年河南省乙脑发病呈周期性波动下降;91.75%的病例集中在7-9月;79.80%的病例分布于南部和东南部的信阳、南阳、驻马店、周口和洛阳市;全省发病以0～14岁儿童为主（85.01%）,洛阳市≥15岁组发病明显增多（56.84%）;87.31%的病例无接种史或接种史不详。猪乙脑抗体50%阳转率出现时间比人群发病高峰提前1个月;蚊虫密度高峰较人群发病高峰提前2旬。结论加强乙脑病例、宿主动物和媒介蚊虫的监测,提高乙脑疫苗接种率,重点控制高发区儿童、洛阳市大年龄组人群的发病,是降低河南省乙脑疫情的关键。     

Seroprevalence investigation and genetic analysis of pseudorabies virus within pig populations in Henan province of China during 2018–2019

In late 2011, the outbreak of pseudorabies (PR) occurred in Bartha-K61-vaccinated pig farms and spread rapidly to many provinces of China, causing substantial economic losses to the swine industry. A total of 4708 pig serum samples from Henan province during 2018–2019 were collected to screen for the presence of pseudorabies virus (PRV) gE-specific antibodies, and phylogenetic analysis based on the gE gene of PRV was performed. Of the 4708 serum samples tested, 30.14% (1419/4708) were seropositive for PRV antibodies, based on PRV gE-coated enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), with slaughterhouses having the highest seroprevalence. The seropositive rates of PRV also varied with the region and the season. Phylogenetic analysis showed that three PRV isolates from this study were clustered in an independent branch together with the Chinese variant PRV strains (after 2012), and had a closer genetic relationship with the Chinese variant PRV strains, but differed genetically from the 4 early Chinese PRV strains and 4 European-American strains. This study suggests that three PRV isolates may belong to PRV variants, and the development of a novel vaccine against PRV variants is particularly urgent.     

河南省护士本科学历构成现状与供需分析

目的 通过对河南省护士本科学历构成现状和供需的调查分析,了解本省本科护理人才供给状况.方法 采用自设问卷对河南省12所护理本科院校,27家三级医院、51家二级医院进行横断面调查.结果 河南省各级医院护理本科学历构成有差异,三级医院23.2％、二级医院10.8％;本科护士的学历获得形式多样,全日制19.5％,自学考试22.6％,函授35.0％,夜大2.3％,网络教育20.6％;近几年本科毕业生供应不能满足医院需求,平均每年的缺口是3000多人.结论 河南省需进一步提高护士本科学历构成比例;适当扩大护理本科培养规模,提高护理本科招生比例;鼓励在职护士继续学历教育是提高医院护士学历层次的一个关键途径.     

Immunologic and respiratory findings in workers on a pig farm

The prevalence of respiratory symptoms and ventilatory capacity in relation to immunological status were studied in 32 swine workers and in 39 controls. A large number of swine workers reacted to antigen of swine hair (34%) and to swine confinement antigen (28%) but also to other antigens such as animal food (78%), and corn flour (37%). Control workers showed comparable prevalence in their reaction to these antigens (17%, 25%, 51%, 25%). Increased IgE serum level was determined in three swine workers (9.4%) and in one control worker (2.6%). Swine workers with positive skin tests demonstrated significantly larger acute reductions in FEF50 and FEF25 than those with negative skin tests (P less than 0.01). The ventilatory capacity data measured before shift in swine workers with positive skin tests were significantly lower than the predicted normal values. Swine confinement antigen caused a dose-related contraction of guinea pig smooth muscle in vitro. Our data indicate that non-immunological reactions may be partly responsible for the acute and/or chronic changes in respiratory function.     

河南省一株SARS冠状病毒的分离与鉴定报告

目的细胞培养分离新型“SARS冠状病毒变异株”。方法采用Vero细胞组织培养方法获得河南一株SARS冠状病毒分离株,应用核糖核酸(RNA)和逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)方法进行病毒鉴定。结果在5个PCR扩增物中出现强阳性反映带;该毒株与北京SARS—CoVBJO1株进行DNA序列比较,在相应区域共2170bp的DNA序列比较,序列同源性为99.5%。结论证实该病毒是我省首次成功分离到一株新型SARS冠状病毒变异株。