非小细胞肺癌p63基因的表达及其与3号染色体位点变化的关系

目的　探讨非小细胞肺癌 p6 3基因的蛋白表达水平及其与定位在 3号染色体 2 7～ 2 9区域改变的关系。 方法　应用比较基因组杂交 (CGH)技术对 70例原发性肺鳞状细胞癌和肺腺癌标本进行染色体不平衡性分析。采用组织芯片技术构建12 2例原发性非小细胞肺癌石蜡包埋标本组织芯片 ,并采用免疫组织化学方法检测p6 3蛋白表达情况。比较 p6 3蛋白表达及其与 3号染色体末端改变的关系。结果　CGH分析结果发现 ,30例鳞状细胞癌 2 4例出现 3q2 7～ 2 9区域DNA拷贝数目的增加 ,4 0例腺癌仅 8例发现 3q2 7～ 2 9区域DNA获得。p6 3免疫组化染色结果显示 :5 0例 (84 75 % )鳞状细胞癌免疫组化染色为阳性 ;3例大细胞肺癌中 2例 (6 6 6 6 % )为阳性反应 ;腺癌中仅有 1例 (1 6 7% )为阳性。p6 3蛋白的阳性表达率与患者的年龄、性别、肿瘤的分级、肿瘤的转移以及生存率无关 (P >0 0 5 )。p6 3免疫组化阳性率与 3q2 7～ 2 9区域的改变比较结果显示 :p6 3免疫组化阳性反应与 3号染色体长臂 2 7～ 2 9区域的DNA扩增呈正相关 (P <0 0 1)。结论　p6 3基因的扩增与肺鳞状细胞癌发生和发展有密切的关系     

比较基因组杂交分析软组织平滑肌肉瘤染色体非平衡性异常

目的：了解软组织平滑肌肉瘤（leiomyosarcoma of soft tissue，LMS）染色体非平衡性异常。方法：应用比较基因组杂交检测了30例LMS DNA序列拷贝数变化。结果：与LMS相关的高频拷贝数增加区为1q、5p、8q、15q、16p、及17p，高频拷贝数减少区为3p、6p、10q、11q、13q及22q。结论：上述染色体区域可能存在与LMS密切相关的癌基因及抑癌基因，其中1q、5p、8q、16p、17p及3p、6p、10q、22q为研究的重点范围。     

声门上喉癌的染色体异常和重要相关基因的研究

目的筛查声门上喉癌发生、发展及转移相关的异常染色体和重要基因。方法应用比较基因组杂交（comparative genomic hybridization，CGH）分析喉声门上鳞状细胞癌（laryngeal squamous cell cancer，LSCC）癌组织和癌旁组织DNA拷贝数的差异。应用cDNA芯片结合聚类分析研究喉声门上癌癌旁组织、癌组织和转移淋巴组织中差异表达的基因。结果CGH结果表明每例喉癌平均涉及12．9个染色体的异常，其中出现高频率扩增的染色体区集中在3q15-21（14／18）、5p12-13（11／18）、8q22-24（6／18）、11q12-13（8／18）、15q21-23（7／18）and 18p11（8／18），而高频率缺失的染色体区集中在1p13-21（8／18）、3p21-23（14／18）、5q21-22（14／18）、9p12-pter（11／18）and 13q21—31（8／18）。聚类分析将表达差异的基因分为3组。表达差异在5倍以上的基因12个，在由癌旁至癌阶段、癌至转移阶段均存在表达异常的基因3个。这15个重要基因是喉癌新的相关基因，其中4个基因cytoehrome C oxidase Va，PPBP，EPHX2 and PONI与喉癌相关性的研究未见报道，而且，SH3GL2位于高频率缺失的染色体区9p12-pter。结论我们发现的特异染色体区和重要基因将为喉癌发生、发展和转移的研究提供重要线索。     

p73：人类非小细胞肺癌细胞株中的肿瘤抑制基因(英文)

目的：p73基因是与p53相类似的基因,在人类神经母细胞瘤中被假定作为肿瘤抑制基因。为了证实p73在非小细胞肺癌中是否也是肿瘤抑制基因，我们应用StyⅠ内切酶多态分析法研究了6株非小细胞肺癌细胞的等位基因表达模式。方法：利用RT-PCR检测p73基因在这6株肺癌细胞中转录水平的表达，同时用免疫组织化学方法检测5株非小细胞肺癌细胞所诱发的裸鼠种植瘤中P73蛋白的表达。结果：p73基因在这6株非小细胞肺癌中均为纯合性等位基因表达，而GC/GC基因型为主要类型。p73基因在转录水平和蛋白水平完全丧失表达。结论：根据实验结果可推测，p73在这6株非小细胞肺癌细胞中仍扮演了肿瘤抑制基因的角色。     

178例儿童急性淋巴细胞白血病细胞与分子遗传学特征研究

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic 1eukemia,ALL）细胞与分子遗传学特征及临床意义。方法应用常规细胞遗传学、实时定量PCR、荧光原位杂交等技术,对178例儿童ALL细胞与分子遗传学特征进行分析,并探讨其临床意义。结果178例儿童ALL遗传学异常者92例占51.69％,其中融合基因TEL-AMLl／t（12;21）（pl3：q22）阳性35例（38.04％）,BCR-ABL／t（9;22）（q34;q11）阳性9例（9.78％）;E2A／PBXl／t（1;19）（q23;p13）阳性9例（9.78％）;MLL-AF4／t（4;11）（q21：q23）阳性3例（3.26％;）,HOXllL2／t（5;14）（q35;q32）阳性7例（7.61％）;SIL-TALl（1p32-）阳性5例（5.43％）、E2A-HLF／t（17;19）（q22;pl3）阳性1例（1.09％）。复杂核型异常4例（4.35％）,包括：t（8;14）（q24;q32）,der（15）t（1;15）（p11;q11）;t（6;10）（p25;p11）,11p＋;t（2;14）（p11;q32）,9p-;t（9;11）（q21;p15）。高超二倍体（48-65）17例（18.48％）,近三倍体（65～78）2例（2.17％）,其它有2p-／5p-／6p＋／9p-／9q-／10p-／1lp＋／17p＋／＋5／＋8等。结论儿童ALL具有其特有的细胞与分子遗传学特征,临床上将常规细胞遗传学、分子生物学、荧光原位杂交等技术等相结合,将对白血病的诊断、治疗选择和预后判断及微小残留病检测等具有十分重要的意义。     

非小细胞肺癌p16基因异常与临床病理相关性研究

目的　探讨抑癌基因p16在非小细胞肺癌中的失活方式、mRNA和p16蛋白表达与临床病理因素的相关性。方法　应用对比性多重聚合酶链式反应检测 6 4例非小细胞肺癌中p16基因启动子的甲基化状况 ,同时应用原位杂交和免疫组织化学方法 [链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法 ]检测p16基因的mRNA和蛋白表达水平 ,并将上述结果与非小细胞肺癌之临床病理因素进行了相关性研究。结果　 5 6 3% (36 / 6 4 )的肺癌标本被检出有p16基因启动子甲基化 ,且甲基化与p16蛋白表达呈负相关 (P <0 0 5 ) ;免疫组织化学检测结果显示 ,5 7 8% (37/ 6 4 )的标本呈现p16蛋白表达缺失 ;原位杂交检测有 2 0 3% (13/ 6 4 )的标本被检出p16mRNA表达 ,且这 13例阳性者的p16蛋白也表达。同时具有p16基因启动子甲基化和蛋白表达缺失的非小细胞肺癌患者淋巴结转移率明显增高 ,术后生存期明显降低 (P <0 0 5 )。结论　启动子甲基化是导致非小细胞肺癌p16基因失活的主要方式 ,同时具有p16基因启动子甲基化及p16蛋白表达异常的患者预后不良     

用比较基因组杂交技术(CGH)检测肾癌染色体畸变

目的应用比较基因组杂交技术(CGH)分析原发性肾癌肿瘤组织中染色体异常变化,探讨肾癌细胞遗传物质的改变,揭示肾癌发生发展的内在本质及其与临床特征之间的关系。方法采用CGH技术对12例肾癌组织提取的全基因组DNA进行检测,以了解肾癌全基因组的变化。结果CGH技术检测的12例肾癌标本中均有染色体的畸变(扩增和/或缺失),常见的扩增区是1p、4p、5q、7p、9p、16p,常见的缺失区是3q、4q、6q、9q、14q、18q。结论原发性肾癌存在广泛的遗传物质不平衡现象,肾癌细胞染色体扩增和/或缺失可能是肾癌发生发展的基础。     

原位双杂交法研究Rb、p16ink4基因在非小细胞肺癌中的转录

目的 :探讨非小细胞肺癌组织中Rb、p1 6INK4 基因的转录。方法 :分别以Bio标记RbcDNA探针、Dig标记p1 6INK4 cDNA探针 ,进行mRNA原位双杂交。结果 :以Bio 辣根过氧化物酶 AEC系统检测Rb基因转录 ,阳性结果为红色 ,阳性率为 83 9% (2 6/3 1 ) ;以Dig 碱性磷酸酸酶 NBT/BCIP系统检测 p1 6INK4 基因转录 ,阳性结果呈蓝色 ,阳性杂交率为 77 4% (2 4/3 1 )。结论 :mRNA原位双杂交法具直观、适合少量细胞、能排除癌组织中混有间质细胞的影响、过程简便等优点 ,Rb、p1 6INK4 基因在非小细胞肺癌发生中起协同调控作用     

河南食管/贲门癌高发区人群食管癌和贲门癌比较基因组杂交分析

目的探讨食管癌/贲门癌高发区人群食管癌和贲门癌染色体基因组变化特征。方法应用比较基因组杂交技术分析37例原发性食管癌和30例贲门癌患者染色体基因组的变化。结果比较基因组杂交发现,食管癌组织染色体8q发生DNA扩增的频率最高(78%),其它依次为3q、5p、6q和7p;3p发生DNA丢失的频率最高(57%),其它依次为8p、9q和11q。贲门癌组织染色体20q发生DNA扩增频率最高(43%),其它依次为6q、8q和6p;17p发生DNA丢失的频率最高(57%),其它依次为19p、1p和4p。结论8q、3q和5pDNA扩增和3p、8p和9qDNA丢失是河南高发区食管癌患者基因组DNA变化特征;而20q、6qDNA扩增和17p、19p、1pDNA丢失可能是河南高发区贲门癌患者基因组DNA变化特征。这些结果为进一步定位筛选和克隆与食管癌/贲门癌相关基因提供了重要的理论信息。     

基于lncRNA AL158206.1-ce RNA-miRNA-19a-3p对FOXP1的调控探索重楼皂苷Ⅶ抑制NSCLC细胞的分子机制

目的：基于lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p对叉头框蛋白P1(forkhead box protein P1,FOXP1)的调控探索重楼皂苷VII(Paris saponin VII,PP7)抑制非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer,NSCLC）细胞的分子机制。方法：Targetscan软件预测miRNA-19a-3p与FOXP1 mRNA 3’非编码区（3’untranslated region,3’UTR）的结合;Starbase软件预测miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1的结合,并通过TCGA数据库阐述miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1在多个肿瘤中的表达关系;Western blot和qPCR实验检测多种NSCLC中FOXP1、lncRNA AL158206.1和miRNA-19a-3p的表达;MTT检测PP7对HCC827活力的影响;选取2、4、8μmol/L浓度的PP7干预HCC827细胞24 h(n=3),同时采用短发卡RNA(short hairpin R...     

应用光谱染色体核型分析技术研究胰腺癌细胞系P2染色体核型

目的 探讨胰腺癌的细胞遗传学特征.方法 采用光谱核型分析技术对中国人胰腺癌细胞系P2的染色体核型进行分析,并选择EGFR/CEP 7双色荧光原位杂交(FISH)探针,对比分析10例胰腺癌和10例慢性胰腺炎石蜡标本的EGFR基因拷贝数,验证光谱核型分析结果.结果 P2细胞系为亚三倍体核型,共发现26种染色体异常,其中重复出现的染色体异常改变为染色体4、9、18、19、22、Y、10p、15p、8p、6q和12p缺失,染色体7和12q增加,以及染色体结构畸变der(9;15)(q10;q10)、der(10)(3;10)(?;q26)和der(12)(8;12)(?;p13).EGFR-FISH阳性为4/10.结论 胰腺癌细胞系的染色体重排非常复杂,进一步扩大样本量进行相关分析,包括了解胰腺癌的EGFR-FISH阳性率非常有必要.     

应用光谱染色体核型分析技术研究胰腺癌细胞系P2染色体核型

目的 探讨胰腺癌的细胞遗传学特征.方法 采用光谱核型分析技术对中国人胰腺癌细胞系P2的染色体核型进行分析,并选择EGFR/CEP 7双色荧光原位杂交(FISH)探针,对比分析10例胰腺癌和10例慢性胰腺炎石蜡标本的EGFR基因拷贝数,验证光谱核型分析结果.结果 P2细胞系为亚三倍体核型,共发现26种染色体异常,其中重复出现的染色体异常改变为染色体4、9、18、19、22、Y、10p、15p、8p、6q和12p缺失,染色体7和12q增加,以及染色体结构畸变der(9;15)(q10;q10)、der(10)(3;10)(?;q26)和der(12)(8;12)(?;p13).EGFR-FISH阳性为4/10.结论 胰腺癌细胞系的染色体重排非常复杂,进一步扩大样本量进行相关分析,包括了解胰腺癌的EGFR-FISH阳性率非常有必要.     

非小细胞肺癌胸水细胞块ROS1融合基因检测分析

目的：探讨非小细胞肺癌胸水细胞块在ROS1(c-ros oncogene 1,receptor tyrosine kinase)融合基因突变检测中的临床价值。方法：采用ARMS-PCR法检测215例非小细胞肺癌胸水细胞块和404例非小细胞肺癌组织块中ROS1基因融合的四种类型,并检测细胞块同时送检组织块的患者74例的一致性。结果：细胞块ROS1融合基因阳性7例,阳性率3.26%(7/215);组织块ROS1融合基因阳性8例,阳性率1.98%(8/404);74例有组织块对照的细胞块ROS1融合基因结果一致性有71例,一致率达95.95%(71/74),其中细胞块ROS1融合基因的阳性率2.70%(2/74),组织块阳性率6.76%(5/74)。结论：非小细胞肺癌胸水细胞块ROS1融合基因的阳性率略高于组织块;有恶性胸水的非小细胞肺癌患者原发灶组织发生ROS1融合基因阳性的概率较高。     

miR-409-3p靶向癌基因ELF2抑制非小细胞肺癌细胞系A549增殖

目的观察miR-409-3p对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的影响及其机制。方法对照组为常规条件下培养的转染阳性对照核苷酸的A549细胞寡核苷酸组。实验组在对照组的基础上采用化学合成miR-409-3p模拟物,脂质体转染构建miR-409-3p高表达A549细胞;经q PCR检测,观察2组48 h后miR-409-3p的表达; MTT法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞凋亡和周期的差异。结果 miR-409-3p模拟物转染后,A549细胞中miR-409-3p表达水平显著升高(P0. 05);细胞总凋亡比例为22. 66%±4. 61%,显著高于对照组的7. 78%±1. 95%(P0. 05); G0/G1期为40. 21%±5. 37%,显著低于对照组细胞56. 09%±5. 22%(P0. 05);双荧光报告系统表明癌基因ELF2是miR-409-3p的靶基因,过表达miR-409-3p模拟物后,内源性ELF2蛋白表达水平显著下降(P0. 05)。结论 miR-409-3p可能通过调控ELF2的转录水平抑制非小细胞肺癌细胞A549增殖并促进其凋亡。     

利用比较基因组杂交技术分析食管癌组织中染色体基因组的变化特征

目的　探讨河南食管癌高发区居民食管癌发生发展的基因组变化特征。方法　应用比较基因组杂交技术分析52例原发性食管癌患者染色体基因组变化,按临床分期、有无淋巴结及远处转移进行分组比较。结果　在食管癌中3q、8q、5p、1q、6q、18p、20q的染色体基因组扩增和3p、1p、9q、19p、4p、8p染色体基因组丢失频繁( >20% )。3q、5p、1q、11q13 14的染色体基因组扩增和4pq、13q染色体基因组丢失与食管癌病理分期相关(P<0 .05)。8q扩增和4p丢失与淋巴结转移相关(P<0. 05)。2p扩增和4pq、l1q14 qter的丢失与远处器官转移相关(P<0 .05)。结论　染色体3q、8q、5p、1q、6q、18p和20q部位可能存在与食管癌变密切相关的癌基因, 3p、1p、9q、19p、4p和8p可能存在与食管癌变密切相关的抑癌基因; 3q、5p、1q、11q13 14扩增和4pq、13q丢失与食管癌的发展相关,而8q、2p扩增和4pq、11q14 qter的丢失是食管癌发展的晚期事件与食管癌转移相关,不同的基因参与了淋巴结转移和远处器官转移。     

p53、p21~(WAF1)蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的　探讨原发性非小细胞肺癌中p5 3、p2 1WAF1蛋白表达与临床病理及预后的关系。方法　应用免疫组织化学 (SP法 )方法。共检测非小细胞肺癌 147例 ,其中腺癌 6 6例 ,鳞癌 6 3例 ,腺鳞癌 14例 ,大细胞癌 4例。结果　p5 3蛋白总阳性率为 6 1.2 % (90 / 147) ,腺癌为 5 7.6 % (38/ 6 6 ) ,鳞癌阳性率为 6 3.5 % (4 0 / 6 3) ,腺鳞癌为 71.4% (10 / 14) ,大细胞癌 2例阳性。p2 1WAF1蛋白总阳性率为40 1% (5 9/ 147) ,腺癌为 42 .4% (2 8/ 6 6 ) ,鳞癌为 41.3% (2 6 / 6 3) ,腺鳞癌 2 8.6 % (4 / 14) ,大细胞癌 1例阳性。肺腺癌p5 3蛋白阳性表达与其预后相关 ,6 6例腺癌中 ,生存率低于 3年组和高于 3年组的p5 3蛋白阳性率分别为 75 % (2 1/ 2 8)和 44 .7% (17/ 38) ,差异有显著性意义 (P <0 .0 2 5 )。p2 1WAF1阳性表达与肺癌预后有关 ,p2 1WAF1阳性表达者 3年生存率 (6 4.4% )高于阴性表达者 (4 6 .6 % ) (P <0 .0 5 )。p5 3阳性而p2 1WAF1阴性的非小细胞肺癌患者的预后比p5 3阴性而p2 1WAF1阳性者差 (P <0 .0 1)。结论　检测p5 3蛋白表达可作为判断肺腺癌预后的指标之一 ;检测p2 1WAF1蛋白表达有利于对非小细胞肺癌预后的判断 ;联合检测p5 3、p2 1WAF1蛋白对判断非小细胞肺癌的预后有重要的意义 ,似可作     

miR-7-5p靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡

目的探讨miR-7-5p是否靶向丝氨酸/苏氨酸激酶11(LKB1)调控非小细胞肺癌细胞A549的凋亡。方法通过TargetScanHuman分析miR-7-5p与LKB1的匹配情况,然后通过荧光素酶报告系统检测miR-7-5p是否靶向LBK1;miR-7-5p mimics过表达或者miR-7-5p inhibitor敲低miR-7-5p的情况下,通过免疫印迹检测凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量,AMPK的总蛋白和是p-AMPK的表达量;通过Annexin-V染色检测非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡水平。结果 miR-7-5p靶向LKB1的3′UTR;过表达miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量上升(P0.05),p-AMPK的表达量减少(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平上升(P0.05),但是此种效应能被AMPK的抑制剂BML-275抑制;敲低miR-7-5p后,LKB1的表达量下降(P0.05),凋亡相关蛋白质Cleaved-caspase3和Bax的表达量下降(P0.05),p-AMPK的表达量上升(P0.05),非小细胞肺癌细胞A549的凋亡水平下降(P0.05)。结论 miR-7-5p通过靶向LKB1的3′UTR通过AMPK通路促进非小细胞肺癌细胞A549的细胞凋亡。     

X染色体倾斜失活人胚胎干细胞的拷贝数变异

背景：倾斜性与随机X染色体失活的人胚胎干细胞拷贝数变异是否存在差异不清楚。 目的：在全基因组水平分析倾斜性X染色体失活的人胚胎干细胞的拷贝数变异情况,分析其涵盖基因及其对细胞功能产生的影响。 方法：3株倾斜性X染色体失活细胞为研究组,两株随机X染色体失活细胞为对照组。运用美国Affymetrix公司Cytogenetics Whole-Genome 2.7M 芯片对其进行全基因组拷贝数变异分析,数据经ChAS软件、OMIM等工具分析,在3株倾斜性X染色体失活细胞中寻找相同拷贝数变异区域及其涵盖基因。 结果与结论：①研究组中大于50 kb的拷贝数变异数均超过130个,高于对照组的平均36个,两组中拷贝数变异改变均以重复为主(> 70%)。②研究组中共发现9个共同拷贝数变异区域,分布于1q22、1p34.1、6q16.3、7q31.32、11q13.1、16q12.2、19p13.12、Xp22.33及Xq26.2,均为3个拷贝的重复,总共涵盖19个基因。对照组中这些区域及基因均为正常2个拷贝。③拷贝数变异涵盖基因多与DNA及核苷酸结合等功能相关,Xq26.2区域的GPC3基因突变与倾斜性X染色体失活可能有关联。结果表明倾斜性X染色体失活细胞相对随机失活细胞具有更多的微小基因组改变,拷贝数变异涵盖的重要基因可能对人胚胎干细胞功能产生不利影响。     

非小细胞肺癌6号染色体长臂的基因扫描分析

目的 探讨6号染色体长臂上与非小细胞肺癌发生相关的微卫星位点。方法 应用多重PCR对41例非小细胞肺癌中6号染色体长臂上的18个微卫星位点进行扩增。PCR产物应用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，电泳结果用Gene Scam^TM,Genotyper^TM软件进行分析，结果 各个位点有明显的不同的杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH）频率，从3.85%到38.45%不等，总LOH频率为58.5%(24/41)。LOH频率超过20％的位点共有8个，主要分布的6q24及6q27。具体范围为6q24-6q25.3[D6S1699(35%)、D6S409(23.33%)、D6S441(33.33%)]及6q26-27[D6S1550(38.45%)、D6S264(20%)、D6S1585(25%)、D6S446(33.33%)、D6S281(30.77%]。结论 6q24及6q27附近可能存在与非小细胞肺癌发生相关的肿瘤抑制基因。     

利用CRISPR/Cas9技术构建22q-Enh3增强子元件敲除型A549稳定细胞系

目的 增强子元件敲除细胞系是探索增强子功能的理想细胞模型,为了探索位于22q12.2肺癌易感染色质区的增强子元件22q-Enh3的生物学功能,建立敲除22q-Enh3增强子元件的纯合细胞系.方法 利用CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/crispr-associated 9)基因敲除技术在非小细胞肺癌A549细胞系中敲除22q-Enh3增强子,并运用流式细胞术、细胞培养以及PCR技术筛选和鉴定敲除型克隆.结果 我们最终获得了3个敲除增强子元件22q-Enh3的纯合子细胞克隆.结论 本研究为进一步研究22q-Enh3增强子元件的生物学功能提供了细胞模型,并为应用CRISPR/Cas9基因敲除技术建立其他增强子元件敲除型纯合子细胞模型积累了宝贵经验.