间隙连接蛋白43与自杀基因系统旁观者效应的关系

目的 观察胞嘧啶脱氨酶(CD)基因和单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因对胆管癌细胞和胆管癌移植瘤的作用以及转染间隙连接蛋白43(Cx43)基因对旁观者效应的影响.方法 MTT法比较双自杀基因系统作用下和(或)Cx43基因转染后QBC939细胞的细胞抑制率及旁观者效应. 前体药物应用前、后测量移植瘤的大小,判断自杀基因系统的作用和Cx43蛋白对旁观者效应的影响.结果 CD和HSV-tk基因在转染细胞中获稳定表达. mRNA和蛋白水平均显示CD tk Cx 细胞中Cx43的表达量增加. 自杀基因系统对CD tk Cx 细胞组和它生成的移植瘤组的抑制作用均比CD tk 细胞组高.结论 双自杀基因系统在体内、外对胆管癌细胞和移植瘤均有明显的抑制作用,Cx43基因导入可明显增强旁观者效应和对肿瘤的抑制作用.     

自杀基因旁观者效应的研究进展

目前世界上威胁人类健康常见的疾病之一仍然是肿瘤,人类针对肿瘤进行着孜孜不倦的研究,目前在肿瘤治疗方面,基因治疗是一个较为有前途的治疗手段,其中肿瘤自杀基因疗法是研究最为广泛的,而旁观者效应在肿瘤自杀基因疗法中起着相当重要的作用,因此,为提高自杀基因杀伤肿瘤效果,部分研究者从增强旁观者效应方面做了许多研究.故本文从增强自杀基因旁观者效应治疗肿瘤方面做一综述.     

缝隙连接蛋白基因43在胃癌腹膜转移中的作用

目的 探讨缝隙连接蛋白基因43(Cx43)与胃癌临床病理特征的关系及在胃癌腹膜转移中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法检测2000年1月至2008年12月第三军医大学西南医院收治的32例诊断为胃癌合并腹膜转移患者的胃癌、癌旁及腹膜转移组织中Cx43的表达,并分析其与临床病理因素的关系.采用Spearman等级相关分析,Fisher确切概率法、X~2检验对结果进行分析.结果 Cx43主要定位于细胞膜和细胞质,Cx43在胃癌组织中的阳性表达率为34%(11/32),在癌旁组织中为100%(32/32),在腹膜转移组织中为94%(30/32),胃癌组织与癌旁组织Cx43的阳性表达率比较,差异有统计学意义(X2=28.350,P<0.01),胃癌组织与腹膜转移组织Cx43的阳性表达率比较,差异有统计学意义(X~2=21.989,P<0.01);胃癌组织Cx43表达与患者性别、年龄无关(r=-0.030,-0.169,P>0.05),与肿瘤分化程度、组织学分型和淋巴结转移有关(r=0.750,0.642,-0.357,P<0.05).结论 胃癌组织中Cx43表达下调,腹膜转移组织中Cx43表达明显上调,可能是Cx43在胃癌腹膜转移中发挥正性促进作用.     

腺病毒介导的HSV—tk／GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察

目的：观察腺病毒介导的HSV－tk/GCV自杀基因系统的体外,体内接触及体内远端旁观者效应。方法：采用向体外培养的tk阴性人肝部BEL－7402细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞;向荷tk阴性BEL－7402小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应。结果：体外组中观察到明显旁观者效应,当tk阳性细胞占10％时,混合细胞存活率为36．6％,体内接触组中也观察到旁观者效应,实验组瘤体生长明显受到抑制（P＜0．05）;体内远端组中,未观察到旁观者效应（P＞0．05）。结论：腺病毒介导的HSV－tk/GCV自杀基因系统在体外及体内接触时均存在旁观者效应。     

腺病毒介导的HSV-tk/GCV自杀基因系统体内外旁观者效应的观察

目的　观察腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统的体外、体内接触及体内远端旁观者效应。　方法　采用向体外培养的tk阴性人肝癌BEL 74 0 2细胞中加入不同比例tk阳性同种细胞 ;向荷tk阴性BEL 74 0 2瘤小鼠瘤体内注射不同数量tk阳性同种细胞 ;向双侧荷瘤小鼠一侧瘤体内注射重组腺病毒 ,GCV作用后用不同方法来观察不同情况下的旁观者效应。　结果　体外组中观察到明显旁观者效应 ,当tk阳性细胞占 10 %时 ,混合细胞存活率为 36 6 % ;体内接触组中也观察到旁观者效应 ,实验组瘤体生长明显受到抑制 (P <0 0 5 ) ;体内远端组中 ,未观察到旁观者效应 (P >0 0 5 )。结论　腺病毒介导的HSV tk/GCV自杀基因系统在体外及体内接触时均存在旁观者效应     

双自杀基因HSV-tk/CD对胆管癌体内体外旁观者效应的研究

目的研究双自杀基因HSV鄄tk/CD的体内外旁观者效应。方法在体外将tk/CD阳性的胆管癌QBC939细胞与亲本细胞按不同的比例混合,并与单自杀基因组对照,观察给予前体药物后对混合细胞的生长抑制情况。建立荷瘤裸鼠模型,在瘤体内注入不同数量的tk/CD阳性胆管癌细胞,观察给予前药后的旁观者效应。结果融合基因组在体外产生明显强于单基因组的BSE,tk组的BSE出现较晚,阳性细胞的比例需达到40%,而CD组和融合基因组中,阳性细胞仅占20%时,就可观察到明显的BSE。体内实验也观察到BSE,强度与注入阳性细胞数有关(P<0.05);本研究没有观察到“远处旁观者效应”。结论腺病毒介导的双自杀基因HSV鄄tk/CD在体外和体内均可产生旁观者效应。     

全反式维甲酸提高激素非依赖性前列腺癌自杀基因治疗的旁观者效应

目的：观察全反式维甲酸（ATRA）提高单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-TK）／N氧鸟苷（GCV）系统体内外抗激素非依赖性前列腺癌的旁观者效应。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率来反映ATRA处理前后HSV-TK／C,CV系统治疗PC-3细胞的旁观者效应；荷前列腺癌裸鼠模型随机分为4组，观察各组移植瘤生长状态和组织病理学改变。结果：在达到明显旁观者效应时，HSV-TK／GCV需要TK^＋ PC-3细胞数为50％，而ATRA联合HSV-TK／GCV需要TK^＋ PC-3细胞数仅为30％，两者比较差异显著（P〈0．05）。HSV-TK可以抑制移植瘤生长，但ATRA＋HSV-TK抗前列腺癌发生显效可提前1周，而且效果更显著（P〈0．05）。结论：ATRA可增强HSV-TK／GCV系统治疗激素非依赖性前列腺癌的旁观者效应。     

全反式维甲酸提高激素非依赖性前列腺癌自杀基因治疗的旁观者效应

目的:观察全反式维甲酸(ATRA)提高单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统体内外抗激素非依赖性前列腺癌的旁观者效应。方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率来反映ATRA处理前后HSV-TK/GCV系统治疗PC-3细胞的旁观者效应;荷前列腺癌裸鼠模型随机分为4组,观察各组移植瘤生长状态和组织病理学改变。结果:在达到明显旁观者效应时,HSV-TK/GCV需要TK+PC-3细胞数为50%,而ATRA联合HSV-TK/GCV需要TK+PC-3细胞数仅为30%,两者比较差异显著(P<0.05)。HSV-TK可以抑制移植瘤生长,但ATRA+HSV-TK抗前列腺癌发生显效可提前1周,而且效果更显著(P<0.05)。结论:ATRA可增强HSV-TK/GCV系统治疗激素非依赖性前列腺癌的旁观者效应。     

自杀基因联合全反式维甲酸治疗对前列腺癌PC-3细胞旁观者效应的影响

目的 观察单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)系统联合全反式维甲酸(ATRA)对人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞旁观者效应的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测HSV-TK(Ad-TK)/GCV系统对PC-3细胞的杀伤力.流式细胞仪检查连接蛋白(Cx)43阳性细胞数.结果 单纯Ad-TK/GCV系统对PC-3细胞旁观者效应在TK+:TK-细胞混合比例为5:5时明显出现(P<0.05),而联合ATRA后,在TK+:TK-细胞混合比例为3:7时就明显出现(P<0.05).Ad-TK/GCV联合ATRA处理PC-3细胞后,在细胞抑制率均达到约50%时,其TK+PC-3细胞混合比例可降低20%.ATRA(10-6 moL/L)处理PC-3细胞1、3、5 d后,Cx43阳性细胞率由10.5%分别升高为25.8%、50.8%和62.4%(P<0.01).结论 ATRA可能通过增强基于Cx43的旁观者效应,从而提高Ad-TK/GCV系统对前列腺癌的杀伤效应.     

联合应用双自杀基因对SW1990细胞的杀伤作用

目的:研究双自杀基因(胞嘧啶脱氨酶基因CD和胸苷激酶基因HSV-tk)的应用对 SW1990细胞的杀伤作用和旁观者效应.方法:脂质体法将CD和HSV-tk双自杀基因转染入PA317细胞,用其病毒上清转染胰腺癌细胞SW1990,G418筛选出阳性细胞SW1990/CD tk,然后加入不同浓度的5-Fc或/和GCV,MTT法观察其杀伤作用;将不同比例的SW1990/CD tk和SW1990细胞混合,联合应用5-Fc和GCV杀伤,观察其旁观者的效应.结果:单独应用5-Fc或GCV均能对转染阳性的胰腺癌细胞产生明显的杀伤效应,联合应用可以在较小的剂量下产生更大的杀伤作用;当阳性细胞比例达到20%时即可对半数细胞产生杀伤作用.结论:双自杀基因的应用对胰腺癌细胞具有明显的杀伤作用,其旁观者效应明显.     

Biological responses of osteocytic connexin 43 hemichannels to simulated microgravity

Connexin 43 (Cx43) hemichannels and gap junctions in osteocytes are responsive to mechanical loading, which is important for bone formation and remodeling. However, the mechanism of these Cx43‐forming channels in the process of mechanical unloading is still not very clear. In this study, unloading caused by weightlessness was simulated by using a random position machine (RPM). Osteocytic MLO‐Y4 cells were subjected to 2 h of RPM treatment, and levels of Cx43 mRNA and total and cell surface expressed protein were determined by quantitative real‐time PCR, western blotting, and biotinylation analysis. Although mRNA was elevated by RPM, total protein level of Cx43 was not altered; however, surface biotinylated Cx43 was significantly reduced. Interestingly, RPM promoted the retention of Cx43 in the Golgi apparatus detected by co‐immunofluorescence with antibodies against Cx43 and 58 K Golgi marker protein. Dye uptake assay showed that hemichannels were induced open after RPM for 2 h. Consistently, prostaglandin E₂ release was increased and this increase was completely attenuated with the treatment of a Cx43 hemichannel blocking antibody. Together, this study demonstrates increased activity of Cx43 hemichannels to RPM, and active Cx43 hemichannels with prostaglandin E₂ release are likely to module biological function under simulated weightless conditions. © 2017 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J Orthop Res 35:1195–1202, 2017.

     

棉酚对睾丸支持细胞间隙连接蛋白表达的影响

目的:探讨药物棉酚对睾丸Sertoli细胞间隙连接蛋白Cx43表达的影响。方法:培养TM4睾丸Sertoli细胞,用1.25、2.5、5、10μmol/L的棉酚分别染毒细胞6、12、24、48 h。CCk-8试剂盒检测细胞毒性,应用细胞免疫荧光化学、RT-PCR检测Cx43在正常TM4细胞和在不同浓度及不同染毒时间的TM4细胞中的表达情况。结果:半定量RT-PCR及免疫荧光结果显示,正常TM4细胞中有较多的Cx43表达;棉酚染毒24 h后,Cx43 mRNA水平开始随时间增加而逐渐下降(P<0.05),且随剂量增加Cx43蛋白表达强度逐渐减弱(P<0.05)。结论:棉酚可抑制TM4细胞表达Cx43,可能是其抗生育的机制之一。     

腺病毒载体介导的双自杀基因对人胆管癌细胞QBC939的体外杀伤实验

目的观察腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶(CD/TK)双自杀基因对人胆管癌细胞 QBC939的体外杀伤作用。方法 CD/TK 克隆入穿梭载体成为 pAdtrack-CMV-CD/TK,与骨架载体 pAdeasy-1在细菌内同源重组为 pAd-CD/TK,经 PacⅠ酶切,293细胞包装、扩增、纯化后,体外转染人胆管癌细胞 QBC939,并给予前药5-FC 或 GCV,观察其体外杀伤效果。结果含 CD/TK 基因的重组腺病毒鉴定正确,扩增纯化后,病毒滴度为1×10~(11)颗粒/ml。重组腺病毒对 QBC939细胞在感染倍数(m.o.i)为100时的转染效率为90%,在 m.o.i50感染时,0.1mmool/L的5-FC 及10 μmol/L 的 GCV 对 QBC939细胞的杀伤率为80%,明显高于单用5-FC 与 GCV 的效应。结论双自杀基因以腺病毒为载体对人胆管癌细胞转染效率高,体外杀伤效应明显。腺病毒介导的双自杀基因治疗有望成为治疗胆管癌的有效方法。     

AdVEGF-CDglyTK融合基因系统靶向治疗大肠癌的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CDglyTK融合双自杀基因系统(以下简称为AdVEGF-CDglyTK)对大肠癌的治疗作用,并结合研究结果进行作用机制的分析.方法 采用培养细胞移植法,将人大肠癌细胞系Lovo细胞接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人大肠癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组,注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK与前药5氟胞嘧啶(5-FC)/丙氧鸟苷(GCV);Ⅱ组,仅注射前药5-FC/GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdVEGF-CDglyTK;Ⅳ组,空白对照,不施加任何处理.结果 RT-PCR结果显示:仅在Ⅰ组、Ⅲ组扩增出融合双自杀基因CDglyTK的片段.表型及各项病理指标的检测均显示第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长较其他3组显著受到抑制,而第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组移植瘤的生长情况无明显差异;第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为38.65%±4.20%,较其他3组显著增加(F=397.530,P=0.000);第Ⅰ组肿瘤组织微血管密度计数为3.08±0.79,较其他3组显著减少(F=34.081,P=0.000).结论 AdVEGF-CDglyTK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制大肠癌肿瘤的生长.其机制有二:首先该治疗系统可诱导裸鼠体内人大肠癌Lovo细胞的凋亡;其次该治疗系统在体内可明显抑制裸鼠体内大肠癌血管形成.     

良恶性前列腺组织中Cx43蛋白表达的差异及其与ILK蛋白表达的关系

目的探讨细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)43在良、恶性前列腺组织中的表达和分布情况,以及与整合素连接激酶(Integrin-1inked Kinase,ILK)表达的相互关系.方法采用免疫组织化学SP法检测Cx43、ILK在7例正常前列腺组织(NP)、16例BPH及52例前列腺癌(Pca)组织中的表达.结果Cx43既定位于细胞膜上,又在细胞质中表达.Cx43的阳性表达率在Pca组织中为32.7%(17/52)显著低于NP组织的85.7%(6/7)、BPH组织的87.5%(14/16)(P＜0.01;P＜0.005).Cx43在Pca细胞中的阳性表达率与肿瘤细胞的分化程度呈正相关(P＜0.05),C D期显著低于A B期(P＜0.05).Cx43阳性表达与ILK的表达呈负相关(P＜0.001).结论Cx43异常表达于BPH、Pca细胞的胞浆.Cx43表达的增加或下降在BPH的增殖过程中或Pca的分化、进展中起重要作用.Cx43和ILK蛋白在Pca组织中呈现相反的的表达方式,提示在Pca细胞增殖动力学调节中协同促进了肿瘤的恶性进展.