局灶脑缺血恢复期半影区小胶质细胞可塑性变化和bFGF表达规律探讨

目的观察Wistar大鼠大脑中动脉永久性闭塞后不同时段,缺血半影区小胶质细胞和神经元形态学变化及bFGF在皮层和海马的表达规律。方法将雄性Wistar大鼠48只,随机分为假手术对照组和永久性局灶性脑缺血组,后者再根据缺血时间不同分5个亚组。假手术组:仅暴露大脑中动脉,2h后断头取脑。永久性局灶性脑缺血组:建立大鼠大脑中动脉闭塞模型,分别于缺血后3d、7d、14d、28d、42d断头取脑,行HE和免疫组化染色。观察梗死灶周围半影区的小胶质细胞和神经元的形态学变化和bFGF在皮层及海马部位的表达规律。结果HE染色可见脑缺血3d时半影区有少量小胶质细胞出现,14d小胶质细胞增多达高峰,42d趋于稳定。脑缺血3d梗死灶周围皮质神经元和胶质细胞开始表达bFGF,7d表达增强,14d达高峰,28d表达开始减弱,42d仍有一定表达,bFGF在海马的表达也有相同规律。结论小胶质细胞的肥大和增生性变化以及bFGF的表达,不仅发生于脑缺血早期,晚期仍显示持续性变化,表明小胶质细胞活动以及bFGF的表达贯穿于脑缺血的整个病理过程。     

老年大鼠局灶脑缺血半影区小胶质细胞可塑性变化和bFGF表达规律的实验研究

目的观察青年大鼠和老年大鼠局灶性脑缺血半影区小胶质细胞形态学变化及bFGF的表达规律。方法老年(20~22月龄)雄性SD大鼠36只,青年(4~5月龄)雄性SD大鼠36只;假手术组12只(老年、青年大鼠各6只),脑缺血组60只(老年大鼠和青年大鼠各30只),采用大鼠大脑中动脉闭塞(middlecerebral artery occlusion,MCAO)模型,根据缺血的时间不同分为缺血后3、7、14、21、32d5个亚组,毎亚组各6只;分别取脑,行HE染色和免疫组化染色,观察小胶质细胞的变化和BFGF的表达水平。结果在局灶脑缺血的不同时期老年大鼠半影区小胶质细胞和bFGF的表达水平均低于青年大鼠,且表达高峰延迟。结论与青年大鼠比较,老年大鼠脑缺血后局部损伤严重,修复缓慢。     

大鼠局灶性脑缺血脑内 bFGF基因表达的实验研究

目的　了解局灶性脑缺血病灶周围组织碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)mRNA表达水平 ,探讨bFGF在脑缺血病理过程中的作用机制。方法　采用“线栓法”建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型 ,运用NorthernBlot杂交技术并结合图像处理对杂交信号密度扫描以反映bFGFmRNA相对水平。结果　缺血 6小时病灶周期组织即出现bFGFmRNA表达增强 ,1天后达到高峰 (P <0 .0 1)。 1周左右降至对照组水平 ,2周后再次呈现表达增高趋势 ,第 3周时与对照组相比增加约 5 0 % (P <0 .0 5 )。结论　局灶性脑缺血可诱发脑内bFGF基因表达 ,它在保护病灶周围神经元、促进细胞增殖和组织修复中可能发挥着重要作用。     

局灶性脑缺血耐受和星形胶质细胞反应

目的　研究短暂性局灶性脑缺血预处理对永久性局灶性脑缺血的保护作用 ,及最佳预处理时间剂量 ,并探讨星形胶质细胞在脑缺血耐受中的反应。方法　采用开颅方法阻断大鼠大脑中动脉 ,通过观察大鼠脑梗死后神经功能损伤状况、脑梗死体积分析及病理形态学变化 ,评价不同的缺血预处理时间剂量 (10分钟、2 0分钟、30分钟 )对永久性局灶性脑缺血的保护作用。采用胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化法观察星形胶质细胞在脑缺血耐受中的反应。结果　与对照组相比 ,缺血预处理 2 0分钟未引起明显的神经元损伤 ,但使永久性局灶性脑缺血后神经功能损伤减轻 ,梗死体积明显减小 (P <0 .0 1)。免疫组化显示 ,2 0分钟缺血预处理组及重复缺血组星形胶质细胞在损伤预处理侧广泛激活。结论　 2 0分钟局灶性脑缺血预处理能够有效诱导脑缺血耐受。星形胶质细胞的激活可能与脑缺血耐受中神经元的存活相关。     

氟美松对大鼠局灶性脑缺血后小胶质细胞变化及转化生长因子β1蛋白表达的作用

目的 从缺血后小胶质细胞变化和转化生长因子β1（TGFβ1）蛋白表达等方面,研究糖皮质激素对持续性局灶性脑缺血的影响及其机制。方法 健康成年雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组、生理盐水组及氟美松组,采用左侧大脑中动脉近端电凝术制备模型。术后1h,生理盐水组静脉注射0．5ml生理盐水,氟美松组静注射氟美松（0．5mg.kg^-1.d^-1）。常规HE染色,计算并比较氟美松组和生理盐水组的硬死灶体积。免疫组织化学SP法检测TGFβ1蛋白表达。凝集素法检测小胶质细胞。半定量分析阳性细胞的数量。结果氟美松处理组与生理盐水组比较,缺血6h至5d的梗质灶体积显著增加;缺血12h、24h及3d等时间点,小胶质细胞密度明显低于生理盐水组;5d时未见凝集素阳性的小胶质细胞;缺血6h、24h及3d,TGFβ1阳性细胞密度比生理盐水组减少。结论 氟美松可抑制缺血梗死灶边缘区域小胶质细胞反应和TGFβ1蛋白表达,这可能是氟美松加重成年大鼠持续性局灶性缺血性脑损伤的机制之一。     

bFGF,bFGFR及Egr-1基因蛋白在大鼠局灶性脑缺血后的表达

观察持续性局灶性脑缺血(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)损伤后表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的细胞种类、时相与不同细胞之间的相互影响,并探讨Egr-1基因蛋白对bFGF表达的影响.结果表明:在持续性局灶性脑缺血后,缺血梗死灶周边区免疫组化结果显示bFGF表达出现双相增强.缺血1 h缺血边缘区主要在星形胶质细胞(Astrocyte,As)中bFGF出现一过性增强,并见细胞外基质中出现bFGF点状着色.缺血6 h～1 d时bFGF染色再次增强,神经元及各类胶质细胞中的表达均有增强.但是经Western-blot定量测定发现脑组织bFGF含量仅在缺血后6 h～1 d时出现增强.缺血1h时,bFGF可能经缺血细胞受损的细胞膜到达细胞外,与细胞外硫酸肝素或相关分子结合,内化进入缺血边缘区细胞,从而造成bFGF免疫组化染色一过性增强.第二次增强可能是缺血损伤刺激及内化的bFGF诱导的蛋白合成的增加.缺血2～6 h bFGFR在神经元及各类胶质细胞中的表达均增强,主要位于缺血区的边缘.由于bFGFR表达时程早于bFGF转录合成增加,因此限制了内源性bFGF发挥保护缺血损伤神经元的作用,这使得外源应用bFGF成为必要.Egr-1基因蛋白的表达在缺血损伤后1～6 h增强,其表达增高的时相早于bFGF蛋白转录合成的增加,并且因为其能够促进bFGF启动子的活性,因而可能在bFGF自分泌机制中发挥重要作用.     

bFGF，bFGFR及Egr—1基因蛋白在大鼠局灶性脑缺血后的表达

观察持续性局灶性脑缺血（permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）损伤后表达碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的细胞种类、时相与不同细胞之间的相互影响，并探讨Egr-1基因蛋白对bFGF表达的影响。结果表明：在持续性局灶性脑缺血后，缺血梗死灶周边区免疫组化结果显示bFGF表达出现双相增强。缺血1h缺血边缘区主要在星形胶质细胞（Astrocyte,As）中bFGF出现一过性增强，并见细胞外基质中出现bFGF点状着色。缺血6h-1d时bFGF染色再次增强，神经元及各类胶质细胞中的表达均有增强。但是经Western-blot定量测定发现脑组织bFGF含量仅在缺血后6h-1d时出现增强。缺血1h时，bFGF可能经缺血细胞受损的细胞膜到达细胞外，与细胞外硫酸肝素或相关分子结合，内化进入缺血边缘区细胞，从而造成bFGF免疫组化染色一过性增强。第二次增强可能是缺血损伤刺激及内化的bFGF诱导的蛋白合成的增加。缺血2-6h bFGFR在神经元及各类胶质细胞中的表达均增强，主要位于缺血区的边缘。位于bFGFR表达时程早于bFGF转录合成增加，因此限制了内源性bFGF发挥保护缺血损伤神经元的作用，这使得外源应用bFGF成为必要。Egr-1基因蛋白的表达在缺血损伤后1－6h增强，其表达增高的时相早于bFGF蛋白转录合成的增加，并且因为其能够促进bFGF启动子的活性，因而可能在bFGF自分泌机制中发挥重要作用。     

氟美松对大鼠局灶性脑缺血后小胶质细胞变化及转化生长因子β_1蛋白表达的作用

目的　从缺血后小胶质细胞变化和转化生长因子 β1 (TGFβ1 )蛋白表达等方面 ,研究糖皮质激素对持续性局灶性脑缺血的影响及其机制。方法　健康成年雄性SD大鼠 90只 ,随机分为假手术组、生理盐水组及氟美松组 ,采用左侧大脑中动脉近端电凝术制备模型。术后 1h ,生理盐水组静脉注射 0 5ml生理盐水 ,氟美松组静脉注射氟美松 (0 5mg·kg- 1 ·d- 1 )。常规HE染色 ,计算并比较氟美松组和生理盐水组的梗死灶体积。免疫组织化学SP法检测TGFβ1 蛋白表达。凝集素法检测小胶质细胞。半定量分析阳性细胞的数量。结果　氟美松处理组与生理盐水组比较 ,缺血 6h至 5d的梗死灶体积显著增加 ;缺血 12h、2 4h及 3d等时间点 ,小胶质细胞密度明显低于生理盐水组 ;5d时未见凝集素阳性的小胶质细胞 ;缺血 6h、2 4h及 3d ,TGFβ1 阳性细胞密度比生理盐水组减少。结论　氟美松可抑制缺血梗死灶边缘区域小胶质细胞反应和TGFβ1 蛋白表达 ,这可能是氟美松加重成年大鼠持续性局灶性缺血性脑损伤的机制之一。     

骨髓基质细胞移植治疗局灶性脑缺血

骨髓基质细胞 (ｍａｒｒｏｗｓｔｒｏｍａｌｃｅｌｌｓ,ＭＳＣｓ)是一种非造血组织干细胞 ,它易粘附、易增殖 ,有自我更新的能力和多向分化的潜能。将一定数量的骨髓基质细胞通过脑立体定向术、静脉或颈内动脉注射移植到脑内后 ,能够明显改善局灶性脑缺血动物的神经行为功能。但是有关骨髓基质细胞移植治疗局灶性脑缺血的机制尚有待研究。一、骨髓基质细胞的生物学特性目前发现至少存在 3种形态的ＭＳＣｓ。Ｗｏｏｄｂｕｒｙ等发现 ,以低密度种植的大鼠ＭＳＣｓ为大而扁平的细胞 ;当接近汇合时 ,它们即转变成小的梭形细胞[1] 。Ｃｏｌｔｅｒ…     

bFGF对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响

目的探讨bFGF对缺血后神经细胞的保护作用。方法用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型,于术前1h、术后第1天、第2天连续3天侧脑室注射bFGF,分1μg／d、2μg／d、4μg／d3组,观察缺血程度、梗塞体积、Bcl-2、Bax蛋白的合成。结果;bFGF能减轻脑缺血程度,减少梗塞体积(25．2％)及凋亡细胞数,提高半暗带内Bcl-2蛋白的合成,减低缺血灶内Bax蛋白的合成,各剂量组间无显著差异。结论bFGF可作为一种有效的神经细胞保护剂,保护神经细胞免受缺血的损害。     

Production of platelet-activating factor during focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat

Platelet-activating factor (PAF) is a phospholipid mediator implicated in a diverse range of pathological processes. Beneficial effects of PAF antagonists have been shown in various models of central nervous system ischemia. In this study, we evaluated the production of PAF during focal cerebral ischemia and reperfusion in the rat. Ischemia was induced by occlusion of the middle cerebral artery with a thread. Quantification of PAF was performed with the radioimmunoassay technique. PAF was detected in the brain under normal conditions. Tissue PAF level in the ischemic cerebral hemisphere significantly decreased by prolonged ischemia (P<.05). Conversely, the decreased tissue PAF level during ischemia was significantly increased again by reperfusion (P<.05), but was still low compared with the control. This study indicates that the production of PAF in the brain tissue decreased by prolonged ischemia, and suggests the role of PAF in the reperfusion phase rather than during ischemia in the pathophysiology of ischemic brain injury.     

Time course of microglia activation and apoptosis in various brain regions after permanent focal cerebral ischemia in mice

We investigated the temporal course of microglia activation in different brain regions after permanent middle cerebral artery (MCA) occlusion in mice and compared this microglia response with the appearance of apoptotic cells, Microglia activation and morphological changes of microglial cells were visualized using an immunohistochemical method with a polyclonal antibody recognizing the mouse CR3 complement receptor. Cells showing morphological and biochemical features of apoptosis were identified using the terminal deoxynucleotidyl transferase nick end-labeling (TUNEL) method and light microscopy. As early as 30 min after onset of MCA occlusion activated microglia with hypertrophic cell bodies and stout processes were detected in the periphery of the ischemic lesion as identified by diffusion-weighted magnetic resonance imaging. A wider distribution and a progressive increase in the number of activated microglia was found with increasing time. Only few TUNEL-positive cells with apoptotic features were observed within the lesion area at 6 h after onset of cerebral ischemia. From 12 h after MCA occlusion onward a tremendous increase in the number of TUNEL-positive cells was found. Within the thalamus from 24 h onward microglia cells with few processes, irregular morphology and fragmented appearance were detected. Microglia activation in the thalamus progressed up to 4 weeks after MCA occlusion, but had declined after 90 days. Neuronal degeneration in the thalamus as determined by anti-neuronal nuclei immunohistochemistry progressed from 6 days after MCA occlusion onward. Only a few TUNEL-positive cells were found in the thalamus. In summary, microglia activation both in the primary cortical lesion area and in the secondarily affected thalamus preceded the manifestation of tissue injury. These observations encourage further studies on the role of microglia in focal cerebral ischemia. Received: 31 July 1997 / Revised, accepted: 12 January 1998     

腺苷预处理对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用和机制

目的探讨腺苷预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用和机制。方法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。将大鼠随机分为3组:假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),用Zeal Longa 5级评分法进行神经功能评分;免疫组织化学法检测脑组织内碱性成纤维细胞因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达。结果 (1)神经功能评分AP组各亚组均小于IR组各亚组(P均<0.05),但大于F组各亚组(P均<0.05);(2)F组bFGF阳性表达极弱,IR组和AP组在脑缺血再灌注后2 h开始出现bFGF弱阳性表达并逐渐增强,24 h达高峰,72 h略有下降,6 h2、4 h、72 h时AP组bF-GF阳性表达较IR组相应各亚组增强(P<0.05)。结论 (1)腺苷预处理能减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤所引起的神经功能缺损症状;(2)腺苷预处理能增强中枢神经系统内bFGF的分泌,进而起到保护脑组织的作用。     

局灶缺血诱导大鼠脑肝细胞生长因子表达的动态观察

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)在局灶脑缺血边缘区表达的动态变化及其意义。方法:采取线栓法建立局灶脑缺血模型,根据缺血时间分为1h、3h、12h、24h组,RT-PCR法检测HGF的表达及其动态变化。结果:缺血1h脑缺血边缘区即有HGF的表达,且随着缺血时间的延长其表达逐渐增强,24h尤为明显。结论:HGF在局灶脑缺血诱导的高表达可能在脑缺血损伤组织的保护及修复过程中起重要作用。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 探讨缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法 将30只雄性SD大鼠随机分为假手术组、缺血组和缺血预处理组,每组10只。使用改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型。采用Longa-Bederson（LB）评分法评估缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血后神经功能的影响,采用TTC染色方法分析大鼠海马区梗死面积,采用TUNEL染色法分析大鼠海马区细胞凋亡,使用气相色谱方法分析缺血预处理后大鼠海马区域丙酮酸含量。结果 缺血预处理组大鼠LB评分[（1.67±0.21）分}明显优于缺血组[（3.17±0.31）分;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区梗死面积[（154±8.1）mm2]明显少于缺血组[（221.20±5.86）mm2;P<0.05]。缺血预处理组大鼠海马区域丙酮酸含量[（3.70±0.20）μmol/g]明显高于缺血组[（2.58±0.17）μmol/g;P<0.05]。结论 缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血具有显著神经保护作用,其机制可能与明显减少大鼠脑组织梗死、增加海马丙酮酸含量、减少细胞凋亡有关。     

神经生长因子对兔局灶性脑缺血再灌注神经功能修复的影响和MR影像学评价

目的:研究神经生长因子(NGF)对兔局灶性脑缺血再灌注损伤神经功能修复的影响,并利用MR成像技术进行评价。方法:采用兔大脑中动脉阻断(MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,分别在缺血2h再灌注损伤后0、1、3和6h应用微量进样器将NGF立体定向导入梗死灶周,于再灌注72h,应用MR影像学、TTC染色和流式细胞术评价兔梗死体积、水肿体积、表观弥散系数(ADC)及神经功能缺损和凋亡状态。结果:缺血再灌注0h、1h、3h和6h灶周给予NGF,梗死体积分别比对照组下降50.1%、48.4%、37.6%和13.7%。同时再灌注3h内应用NGF水肿体积、神经功能缺损评分、灶周凋亡率及caspase-3含量明显下降,梗死中心区及灶周ADC比率(ADCR)升高;再灌注6h后给药,则无明显作用。相关分析显示各组灶周ADCR与灶周凋亡率具有明显负相关。结论:NGF对兔局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,抑制caspase-3活性的表达和细胞凋亡是其保护机制之一,MR影像学检查可作为定量评价基因疗效的可靠指标。