siRNA沉默Ppif基因表达对大鼠肾细胞增殖和凋亡的影响

目的：应用小干扰RNA（smallinterferingRNA,siRNA）抑制大鼠基因Ppif的表达,探讨其对大鼠肾细胞（NRK）增殖和凋亡的影响。方法：体外化学合成针对Ppif基因的siRNA序列,在脂质体介导下转染NRK细胞,RT—PCR检测PpifmRNA表达水平,Westernblot检测Ppif蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡状况,MTT法检测细胞增殖活性。结果：PpifsiRNA转染NRK细胞24h后,所设计的3对针对不同靶点的siRNA与对照组相比,起始于405、556位点的sIRNA在基因水平对Ppif无明显抑制效应（P〉0．05）;起始于198位点的siRNA在基因和蛋白水平均有明显的抑制效应,基因水平下降75．25％（P〈0．05）;蛋白水平下降72．13％（P〈0．05）。MTT结果显示NRK细胞增殖能力显著增加,转染24h后,siRNA1～siRNA4细胞抑制率分别为（68．6±3．6）％、（5．3±4．3）％、（7．6±6．3）％和（4．1±4．5）％,凋亡率明显下降。结论：体外化学合成的PpifsiRNA（起始于198位点）可以有效地抑制NRK细胞Ppif的表达,从而抑制细胞凋亡,促进细胞增殖。     

siRNA沉默高迁移率蛋白A2基因对人膀胱移行细胞癌细胞T24增殖凋亡的影响

目的 观察siRNA靶向沉默HMGA2基因在人膀胱移行细胞癌T24细胞中表达的变化,探讨抑制HMGA2基因对T24细胞增殖、周期和凋亡的影响.方法 针对人HMGA2基因构建siRNA干扰片段,瞬时转染T24细胞后,采用Western-blot方法检测转染siRNA干扰片段48h后T24细胞蛋白表达量的变化,CCK-8法检测T24细胞增殖和流式细胞仪（FCM）检测T24细胞周期和凋亡情况.结果 转染后48h的T24细胞HMGA2蛋白表达水平较空白对照组（CON）和阴性对照组（NC）显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,转染HMGA2-siRNA的实验组抑制T24细胞增殖,T24细胞S期细胞比例（35.47±0.23）％高于CON组和NC组（P＜0.05）,实验组T24细胞凋亡率为（17.25±0.24）％,明显高于CON组和NC组（P＜0.05）.结论 HMGA2基因的特异性siRNA可以抑制T24细胞增殖,细胞周期阻滞在S期,并促进其凋亡.     

Livin基因和Survivin基因联合靶向siRNA诱导结肠癌细胞凋亡的作用

目的探讨Livin基因和Survivin基因联合靶向小干扰（si）RNA对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响。方法构建Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体并转染结肠癌细胞．通过RT—PCR和蛋白质印迹方法分别检测Livin和Survivin的表达．通过MTT法检测siRNA对细胞增殖的抑制作用．利用流式细胞仪检测处理后细胞的凋亡效应。结果经酶切鉴定和测序分析证实Livin和Survivin联合靶向的siRNA重组表达载体构建成功。这种联合靶向SiRNA对Livin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为27．9％和22．3％．对Survivin mRNA及蛋白表达的抑制率分别为32．2％和40．9％。与对照组相比,联合靶向siRNA可降低肿瘤细胞增殖率．增加细胞凋亡率,但其细胞生长抑制作用和促细胞凋亡作用均弱于单独干扰Livin或Survivin基因．结论Livin和Survivin基因联合靶向siRNA能降低结肠癌细胞中Livin和survivin基因的表达．抑制结肠癌细胞的增殖．并诱导结肠癌细胞的凋亡．但此协同抑制作用较单独干扰Livin或survivin基因为弱。     

慢病毒介导的NOB1基因沉默对人结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默人NOB1基因对人结肠癌RKO细胞增殖和凋亡的影响。方法设计靶向NOB1基因的小干扰RNA（siRNA）,构建NOB1基因特异性的RNA干扰慢病毒载体,感染RKO细胞,并设置阴性对照组。实时定量PCR和Westemblot分别检测两组细胞NOB1mRNA及蛋白的表达情况;CellomicsArrayScanVTIHCS高内涵分析仪检测感染细胞的增殖和克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡的变化：裸鼠成瘤实验检测0NOB1-siRNA对肿瘤的抑制作用。结果NOB1-shRNA慢病毒感染RKO细胞3d后．与阴性对照组比较．NOB1mRNA和蛋白的表达明显降低,克隆形成数减少,而细胞凋亡数增加（均P〈0．05）。裸鼠成瘤实验结果显示,NOB1．shRNA感染组裸鼠移植瘤体积为（405±102）mm3,小于阴性对照组的（870±165）mm3（P〈0．05）。结论通过RNA干扰方式沉默NOB1基因的表达．有望作为抑制结肠癌发展的有效手段。     

小干扰RNA特异性沉默c-myc基因对人胰腺癌SW1990细胞生物学影响

目的 观察小干扰RNA(siRNA)沉默c-myc基因的表达对人胰腺癌细胞株SW1990细胞生物学影响.方法 用siRNA沉默胰腺癌SW1990细胞中c-myc基因,用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot技术检测c-myc mRNA及蛋白的表达量;噻唑蓝(MTT)法检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞增殖的影响;膜联蛋白V/碘化丙锭(Annexin V/PI)双染流式细胞术检测沉默c-myc基因细胞凋亡水平;Transwell细胞迁移实验检测siRNA沉默c-myc基因对SW1990细胞迁移能力的影响.结果 靶向c-myc的特异性siRNA可以高效抑制人胰腺癌SW1990细胞c-myc基因表达,在mRNA水平(0.263±0.048)较转染对照质粒组(0.970±0.012)明显降低,c-myc蛋白质表达量及细胞增值率均较转染对照质粒组明显降低;转染后48 h c-myc siRNA组细胞凋亡率为(19.90±2.09)％,明显高于siRNA阴性对照组(4.93±0.25)％和空白对照组(4.40±0.34)％;Transwell实验结果示细胞穿膜数c-myc siRNA组[(34.3±1.2)个]较siRNA-NC组[(68.3±5.8)个]和空白组[(72.3±1.2)个]均明显降低.结论 c-myc siRNA能够显著抑制c-myc基因在人胰腺癌SW1990细胞中的表达,降低细胞的增殖和迁移能力,促进细胞的凋亡.     

RNA干扰技术对大肠癌细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制作用

目的 观察RNA干扰对大肠癌细胞中人端粒酶逆转录酶基因(hTERT gene)的抑制效应.方法 大肠癌细胞株HT-29分为Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组;将靶向于hTERT基因的小干扰RNA,转染大肠癌细胞;分别检测大肠癌细胞转染前后的端粒酶活性,hTERTmRNA和蛋白水平,细胞生长增殖和凋亡情况.结果 sihTERT转染大肠癌细胞效率为60%;sihTERT组的端粒酶活性值、hTERT mRNA表达、hTERT蛋白表达、细胞凋亡率分别为0.73±0.14、0.47±0.08、0.37±0.07、49.5%,sihTERT组与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 靶向于hTERT的siRNA能特异性沉默大肠癌细胞hTERT基因,下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平,降低端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖从而促进大肠癌细胞凋亡.     

利用RNA干扰阻抑膀胱癌细胞Survivin基因表达和诱导凋亡

目的 探讨RNA干扰下调Survivin基因表达后膀胱癌细胞生物学行为变化及Survivin基因抗凋亡机制。方法设计、合成一对Survivin编码基因序列特异的小分子干扰RNA（siRNA），用脂质体包裹转染T24膀胱癌细胞，分不同的浓度组（50～200nmol／L）。噻唑蓝（MTT）法检测细胞生长情况，流式细胞仪测定细胞凋亡率，实时定量聚合酶链反应（PCR）检测Survivin基因和Caspase-3基因mRNA表达。结果 Survivin编码基因序列特异性siRNA能有效下调Survivin基因表达水平，并呈剂量和时间依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时与对照比较Survivin表达水平下调75．91％，并显著的抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P＜0．05）。同时，Caspase-3 mRNA表达水平明显上升达239．80％，细胞凋亡率亦增加至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P＜0．05）。结论RNA干扰显著下调Survivin基因表达后，能明显促进T24膀胱癌细胞凋亡并抑制其增殖；Survivin基因可能是通过下调Caspase-3表达来抑制凋亡。     

小RNA干扰技术沉默Smoothened(Smo)基因表达对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响

目的观察Smo基因在胃癌MGC803细胞中的表达，及其对胃癌MGC803细胞增殖与凋亡的作用。方法半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测胃癌MGC803细胞中Smo基因的表达；化学合成3条针对Smo mRNA的小干扰RNA（siRNA），阳性脂质体介导转染胃癌MGC803细胞，半定量RT-PCR筛选出降解胃癌MGC803细胞Smo mRNA最有效的siRNA；噻唑蓝（MTT）法和流式细胞仪检测胃癌MGC803细胞Smo mRNA被降解后，对细胞增殖和凋亡率的影响。结果胃癌MGC803细胞内有Smo蛋白及Smo mRNA的强表达，siRNA-1、siRNA-2对胃癌MGC803细胞Smo基因表达均有降解作用，siRNA-1降解作用最明显，达61．7％，与隐性对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。siRNA-1转染胃癌MGC803细胞24h后，细胞增殖水平较隐性对照组明显下降（P〈0．05）；转染48h后，细胞凋亡率较隐性对照组明显上升（P〈0．05）。结论胃癌MGCS03细胞内存在Smo基因的高表达，降低Smo基因表达可抑制胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，Smo基因具有调控胃癌细胞增殖和凋亡的作用。     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

小分子干扰RNA抑制CyclinD 1表达诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡研究

目的 探讨RNA干扰阻断细胞周期蛋白DI(CyclinDl)基因表达后,对瘢痕疙瘩成纤维细胞细胞周期和细胞增殖、凋亡的影响.方法 针对CyclinDl基因设计并合成特定的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染入瘢痕疙瘩成纤维细胞,测定CyelinDl mRNA水平,流式细胞术分析细胞周期,FITC-Annexin V/PI细胞平均百分率为凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况.DNA梯型观察凋亡细胞DNA变化.结果 特异性siRNA能在mRNA水平下调成纤维细胞的CyclinDl基因的表达.转染特异性siRNA 24、48、72 h后,Gl期细胞平均百分率分别为(59.80±3.06)%、(66.01±4.03)%和(67.43±5.35)%,高于对照组(54.50±5.35)%;S期细胞平均百分率为(18.40±1.42)%、(17.21±1.76)%和(11.07±1.00)%,低于对照组(22.33±1.49)%.细胞凋亡率分别为(7.82±0.45)%、(15.71±1.06)%、(18.32±1.08)%.均显著高于对照组(0.68±0.12)%,细胞DNA断裂成片段状.结论 特异性siRNA分子能够抑制细胞CyclinDl基因的表达,使细胞阻滞于Gl期,并诱导细胞凋亡,为应用RNA干扰技术治疗瘢痕疙瘩提供了初步实验依据.     

siRNA沉默VEGF基因对肾癌细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨siRNA干扰血管内皮生长因子（VEGF）基因对人肾细胞癌细胞株（ACHN）细胞增殖与凋亡的影响.方法：化学合成针对VEGF的小干扰RNA,通过脂质体转染至ACHN中,利用Western印迹法检测细胞内VEGF的表达,采用台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线,用MTT比色分析法检测细胞增殖抑制率（IR）,用TUNEL方法检测细胞凋亡率（AR）.结果：生长曲线提示,与空白对照组及阴性对照组相比,siRNA1组、siRNA2组ACHN细胞的生长明显减慢 在24 h、48 h、72 h,siRNA1的增殖抑制率为10.6%、18.0%、27.1%,siRNA2增殖抑制率为18.9%、32.7%、40.3%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组的细胞凋亡率为10.7%、15.2%、20.3%,siRNA2组的细胞凋亡率为17.3%、26.2%、37.4%,均高于空白对照组及阴性对照组（P〈0.05） siRNA1组、siRNA2组VEGF蛋白表达水平明显低于空白对照组及阴性对照组,其中siRNA2对ACHN细胞的IR、AR和VEGF蛋白表达的抑制作用均显著高于siRNA1组（P〈0.05）.结论：VEGF在肾癌的发生发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA能特异性抑制肾细胞癌ACHN细胞株中VEGF的表达,抑制细胞生长增殖,促进细胞凋亡.对于VEGF基因高表达的肾细胞癌患者,针对VEGF的RNAi技术有望成为肾细胞癌新的基因治疗手段.     

siRNA端粒酶催化亚单位诱导人膀胱癌BIU-87细胞凋亡的研究

目的：研究siRNA（small interference RNA）对人膀胱癌BIU-87细胞凋亡和端粒酶催化亚单位（hTERT）基因表达的影响。方法：设计并体外转录合成针对hTERT基因的3个特异性siRNA,通过脂质体将siRNA转入BIU-87细胞,分别采用MTT和DNA原位末端标记（TUNEL）法检测siRNA对BIU-87细胞生长抑制率（IR％）和凋亡指数（A100）的影响,半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western Blotting检测siRNA对hTERT mRNA及其蛋白表达的影响。结果：转染后的siRNA 1～3组的B1U-87细胞的IR（34．62％、62．19％、57．43％）和AI（30．62％、54．26％、51．50％）均分别显著高于正常对照组（3．46％和5．03％）（均P〈0．05）,hTERT mRNA及其蛋白表达水平均显著低于对照组;其中siRNA2～3对BIU-87细胞的IR、AI和hTERT表达的抑制作用均显著高于siRNA1。结论：体外转录合成的siRNA可抑制BIU-87细胞hTERT的表达,诱导BIU-87细胞凋亡,从而抑制BIU-87细胞生长,为siRNA介导的膀胱肿瘤基因沉默提供实验依据。     

siRNA沉默Livin基因表达对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的：研究应用siRNA沉默Livin基因表达后肝癌细胞HepG2的生物学功能变化。方法：用脂质体lipofectamineTM2000将携带Livin基因的siRNA载体转染至HepG2细胞内,RT—PCR、Westernblot检测转染前后Livin基因mRNA和蛋白质的表达改变;流式细胞技术（FCM）和TUNEL检测转染前后肝癌细胞凋亡变化。结果：RT—PCR及Westernblot检测发现转染siRNA后Livin基因的mRNA和蛋白质表达均明显下降（P〈0．05）;FCM检测发现实验组、阴性对照组和空白组肝癌细胞HepG2在G1期所占比例分别是（58．994-1173）％、（41．85±2．82）％、（41．25±1．24）％,实验组与其他两组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;TUNEL技术检测表明实验组肝癌细胞HepG2凋亡数目明显增加,细胞凋亡率为（67．56±2．56）％,凋亡率明显高于阴性对照组（27．21±12．58）％和空白组（14．09±5．16）％（P〈0．05）。结论：在肝癌细胞HepG2中,Livin基因沉默具有诱导肝癌细胞凋亡、抑制肝癌细胞生长的作用。【关键词】癌,肝细胞·肝癌细胞,HepG2·siRNA·基因,Livin     

DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒转染对人膀胱癌细胞DNMTs表达的影响及其生物学效应

目的：探讨DNMT1、DNMT3b基因在膀胱癌发生发展中的作用。方法：①将DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒分别单独和共同转入人膀胱癌细胞系Nu87;②半定量RT—PCR和WesternBlot分别检测DNMT1和DNMT3b基因mRNA和蛋白水平的变化;③用MTT法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果：单独和共同转染DNMT1（或DNMT3b）mRNA、蛋白表达量明显下降,能影响BIU一87的生长曲线,使细胞增殖减慢,并使细胞周期阻滞于G1期,明显提高细胞调亡率;转染空质粒和单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。结论：联合转染DNMT1、DNMT3bsiRNA重组质粒,可同时下调DNMT1和DNMT3b在BIU87细胞中的表达,并能在体外抑制BIU-87细胞生长,促进细胞凋亡发生,其效果优于单独转染的重组质粒。单独转染DNMT3bsiRNA重组质粒对BIU-87细胞的生长和增殖无明显影响。     

MTA1基因调控人前列腺癌PC-3细胞失巢凋亡的研究

目的:探讨MTA1基因小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌细胞PC-3增殖和失巢凋亡的影响。方法:应用MTA1 siRNA转染处理人前列腺癌细胞系PC-3后,采用实时定量PCR和W estern印迹检测MTA1基因mRNA和蛋白水平,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测癌细胞失巢凋亡。结果:与对照组比较,MTA1基因siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性(r=0.935,P=0.0001)。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关(r=0.901,P=0.0005)。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导前列腺癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关(r=0.916,P=0.0003)。结论:MTA1 siRNA可抑制人前列腺癌细胞增殖,诱导失巢凋亡是其机制之一。     

miR-124通过靶向调控PKM2基因的表达抑制前列腺癌PC3细胞的增殖

目的:探讨miR-124抑制前列腺癌PC3细胞增殖活性的机制。方法:利用荧光素酶报告基因验证miR-124能否靶向作用于丙酮酸激酶M2型(PKM2)3'端非编码区(UTR)。将miR-124 mimic转染至PC3细胞后,采用实时荧光定量PCR和Western印迹检测前列腺癌PC3细胞PKM2 mRNA和蛋白的表达水平,MTT法检测miR-124 mimic与PKM2 siRNA对PC3细胞生长活性的影响。结果:与人前列腺上皮细胞RWPE-1比较,PC3细胞中PKM2 mRNA和蛋白水平表达分别上调(5.12±0.35)倍和(4.05±0.20)倍(P0.05)。荧光素酶报告基因结果证实,PKM2是miR-124调控的靶基因,miR-124可特异性地结合于PKM2 mRNA的3'-UTR。转染miR-124 mimic 24 h后,PKM2蛋白水平下调至阴性对照组(0.16±0.04)倍(P0.05),但对PKM2 mRNA表达无显著影响(P0.05)。MTT结果显示,转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA都能显著抑制PC3细胞的增殖,但miR-124 mimic对PC3细胞生长活性的抑制能力较PKM2 siRNA强。转染miR-124 mimic和PKM2 siRNA 24 h和48 h后,PC3细胞的增殖率分别为(66.20±5.10)%和(82.10±6.35)%(P0.05)、(49.34±2.37)%和(70.10±5.80)%(P0.05)。结论:miR-124可通过靶向调控PKM2基因的表达而抑制前列腺癌PC3细胞的增殖。     

siRNA沉默肾癌细胞EGFR基因对放疗敏感性影响的研究

目的：探讨siRNA沉默AcHN肾癌细胞的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）对放疗敏感性的影响。方法：免疫组化及细胞免疫荧光技术证明组织水平及细胞水平EGFR的表达,化学合成针对EGFR的小干扰RNA,通过脂质体转染法转染进ACHN肾癌细胞中,利用Westernblot技术检测细胞中EGFR蛋白的表达,然后分别用0、2、4、6、8Gy剂量的x线对5组肾癌细胞（每组包含空白对照组、非异性RNA干扰组、特异性RNA干扰组）进行照射,光学显微镜下观察细胞凋亡情况,采用台盼蓝据染法检测细胞凋亡率。结果：靶向EGFR序列的特异性干扰RNA可明显抑制EGFR蛋白的表达,光学显微镜下观察到RNAi联合放疗组细胞死亡情况明显,台盼蓝拒染法检测特异性干扰EGFR基因组可显著提高AcHN肾癌细胞对放疗的敏感性（P〈O．05）。结论：体外研究表明,siRNA沉默ACHN肾癌细胞的EGFR可明显提高肾癌细胞对放疗的敏感性,为肾癌放射治疗提供了新思路。     

TrkB影响结肠癌细胞SW620侵袭能力及与ERK信号通路活化关系的研究

目的:探讨干扰结肠癌细胞TrkB蛋白表达及抑制ERK活化对细胞增殖、凋亡和侵袭以及细胞内ERK磷酸化水平的影响。方法:应用特异性TrkB-siRNA瞬时转染及ERK特异性抑制剂处理SW620结肠癌细胞,观察SW620细胞增殖、凋亡和侵袭情况以及细胞内ERK磷酸化水平的变化。结果:特异性siRNA转染高表达TrkB的SW620细胞,TrkB蛋白表达减少,ERK的磷酸化水平降低,且转染组细胞数显著低于对照组(P=0.001),转染组的细胞凋亡率显著高于对照组(P=0.000 1),24 h后侵袭至下层小室的细胞数转染组显著低于对照组(P=0.001);ERK抑制剂明显降低SW620细胞ERK磷酸化水平(P=0.001),而对ERK蛋白表达没有影响,且应用ERK抑制剂作用SW620细胞,对照组和处理组中细胞数没有显著差异(P=0.544),对照组和处理组中SW620细胞的凋亡率差异无统计学意义(P=0.103),但对照组24 h后侵袭至下层小室的细胞数显著高于处理组(P=0.0001)。结论:干扰TrkB蛋白表达能够降低高转移结肠腺癌SW620细胞内ERK磷酸化水平,促进细胞凋亡并抑制细胞增殖和侵袭。同时应用ERK特异性抑制剂也显著抑制细胞侵袭。因此ERK信号转导通路可能与TrkB介导的结肠腺癌细胞抗凋亡和侵袭能力的增加相关,沉默TrkB表达可能成为阻断结肠癌转移的新靶点。