液化低熔点琼脂糖凝胶直接消化DNA法在构建突变体中的应用

用多级多聚酶链反应与液化低熔点琼脂糖凝胶中直接消化ＤＮＡ相结合方法构建了８个突变体，经证实其重组ＤＮＡ的阳性率为１００％。从低熔点琼脂糖凝胶中切下目的ＤＮＡ，在６８℃完全熔化后用５倍体积的双蒸水稀释，该化合物即可直接用于酶解反应。混合物中凝胶比例以１０ｇ／Ｌ为宜。因而克服了凝胶中因目的ＤＮＡ量少而纯化后回收率低无法进一步实验的弱点。     

质粒DNA提取方法的比较研究

采用琼脂糖凝胶电脉对质粒 DNA 提取的三种方法进行比较,结果表明:煮沸法较为快速简便,提取质粒 DNA 含量较高;强碱法作用猛烈,质粒的共价、闭合、环状 DNA 构象容易破坏;SDS 裂解法作用较为温和,适合分子量大于10kbp 的质粒,大量提取时,煮沸法尤佳。     

DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果

目的：摸索在DNA检测中琼脂糖凝胶多次重复使用的效果。方法：按常规制备琼脂糖凝胶,胶不离框,上样、电泳,电泳后胶连框一起放于饭盒内,盖好盒盖,于4℃冰箱保存。下次使用时保证电泳方向与前次相反,即把胶调转方向加样、电泳。结果：重复使用6~7次,DNA条带仍清晰可见。结论：这是一种简便易行、效率高、节省实验经费并易于推广的好方法。     

琼脂糖凝胶厚度对DNA电泳的影响

目的 研究不同厚度的琼脂糖凝胶对电泳的影响。方法 用扩增得到的产物进行不同厚度的琼脂糖凝胶电泳．溴化已锭染色成像并求出进行相对迁移率等相关分析。结果迁移距离5～7m厚度凝胶时最大；10mm以内相对迁移率随着凝胶厚度的增加而增大，10mm以上相对迁移率反而降低；电泳图像以3～10mm较好。结论 5～7mm厚度的琼脂糖凝胶进行电泳较合适。     

一种提取肠道细菌总基因组DNA的方法

目的:尝试提取人体肠道菌群总DNA,为研究肠道菌群结构提供依据。方法:以人体粪便为样本,使用PBS多次清洗,离心样品,沉淀粪便中的菌体。使用裂解液、溶菌酶和蛋白酶K等裂解菌体,用酚/氯仿方法抽提DNA,以提取到的肠道细菌总DNA为模板进行ERIC-PCR扩增。结果:电泳显示样品DNA条带明亮,少数样品DNA存在降解现象;ERIC-PCR扩增得到较清晰的指纹图谱。结论:经改进后的方法操作简单、实用、经济,适用于肠道菌群结构的研究。     

琼脂糖凝胶中DNA的回收

用冻结压榨法、玻璃粉吸附洗脱法和透析袋电洗脱法，分别从琼脂糖凝胶中回收日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，经ＢａｍＨ Ｉ及ＥｃｏＲ Ｉ双酶切的线状质粒载体ｐＴｒｃＨｉｓ Ａ，以及碱裂解法制备的质粒载体，均取得较为满意的回收率。冻结压榨法适于回收少量的ＤＮＡ，透析袋电洗脱法适于回收较大量ＤＮＡ，玻璃粉吸附洗脱法则应用范围较宽。     

DNA提取技术在法医学的应用与进展

DNA鉴定技术在现代法医物证检验中有着广泛的应用,其应用分子生物学的方法,对犯罪现场遗留的生物物证所含的DNA与犯罪嫌疑人的DNA样本进行比对,鉴定DNA结构是否相同,从而对生物物证是否来自于犯罪嫌疑人作出评价.不过大多犯罪现场遗留的生物样本存在着许多不利于法医提取的因素,比如腐败、变质、污染等.本文就现场DNA提取纯化技术方面来介绍当今法医学的技术进展.     

三种全血基因组DNA提取方法的比较

目的：比较三种不同的DNA提取方法提取人全血基因组DNA对DNA提取效率、纯度以及PCR扩增的效果影响。方法：分别应用中山医科大学达安公司：DNA提取液，珠海黑马医学仪器有限公司DNA提取液，胍盐酸法三种不同的方法提取人全血基因组DNA。结果：三种方法提取的DNA纯度平均分别为：1．48，1．51，1．56，各组间差异无显著性。200μL全血中所提取DNA总量平均分别为1．6μg，2．3μg，4．1μg。用0．8％琼脂糖凝胶电泳鉴定胍盐酸法制备的DNA效果较其它两种方法好，PCR扩增效果差异不明显。结论：胍盐酸法提取的DNA总量明显高于其它两种方法，提取效率高，为三种全血基因组DNA提取方法中之首诜。     

广西巴马小型猪和贵州小型香猪的DNA指纹分析

目的　应用DNA指纹分析的方法研究广西巴马小型猪和贵州小型猪的遗传背景。方法　采用ECL核酸直接标记和检测系统 ,以HRP标记JL 0 2多位点小卫星探针 ,对广西巴马小型猪和贵州小型猪基因组DNA的HinfⅠ或HaeⅢ酶切DNA片段进行Southern杂交 ,以化学发光法进行检测 ,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图。结果　广西巴马小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数为 11 7和 2 4 5 ;贵州小型猪大于 2kb的HinfⅠ和HaeⅢ酶切DNA指纹图带数则为 15 8和 17 6。另外 ,广西巴马小型猪HinfⅠ和HaeⅢ酶切产生的不同个体DNA指纹的相似系数分别为 0 5 4± 0 0 7和 0 5 5± 0 0 8;而贵州小型猪则分别为 0 5 3± 0 0 4和 0 5 3± 0 0 7。结论　该探针适用于这两种猪的DNA指纹分析 ,不同酶切产生的DNA指纹图带数不同 ,但不同个体间相似系数的分析结果一致。同时说明这两种猪具有相当程度的种质均质性 ,符合封闭群动物的要求     

改良单细胞凝胶电泳技术在DNA损伤与修复检测中的应用

目的单细胞凝胶电泳技术是检测细胞DNA损伤与修复的一种快速、简便、灵敏方法，但影响因素很多，为此对该技术进行了改进，并对操作中易出现的问题进行了总结。方法在singh等人的方法基础上，根据本实验室条件进行改进，以获得更好、更稳定的结果。结果改进后技术检测H2O2对K562细胞损伤具有良好的剂量效应关系。结论改进方法不影响结果的正确性，更易于掌握和操作，减少了影响因素，试验更具实用性，可以广泛应用于离子射线损伤、自由基损伤、癌症放化疗、生物监测等领域。     

应用MALDI-TOF-MS分析大肠癌血浆相关蛋白差异表达

目的 通过对大肠癌患者血浆蛋白质组学表达差异的研究,以期寻找大肠癌早期诊断及新相关特异的性标志物.方法 采用弱阳离子(MB-WCX)磁珠结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)技术检测样品血浆蛋白质质谱,运用Ciphergen ProtemChip Software 3.2.1软件及Biomark Wizard 5.0软件进行数据分析筛选,并对差异表达显著的质谱峰于Swiss-Prot及TrEMBL蛋白数据库进行检索.结果 通过对比研究大肠癌组、大肠腺瘤组及正常对照组血浆差异表达质谱峰,共发现23个差异表达蛋白质谱峰,其中在大肠癌组中4个显著差异高表达(P＜0.05),荷质比(M/Z)分别为6 683、8 700、9 187、9 342;虽在大肠腺瘤组与正常组蛋白质谱峰表达无显著性差异(P＞0.05),但三组间荷质比为6 683、8 700蛋白表达呈一定递进性趋势;检索Swiss Prot蛋白质数据库结果:M/Z 6 683是成纤维细胞生长因子受体-l(FGFRl),其余均为未知蛋白,有待进一步鉴定.本研究通过表达差异蛋白建立诊断模型对大肠癌预测的准确率、敏感性、特异性分别为89.19％、83.33％、84％.结论 运用MALDI-TOF-MS技术分析大肠癌血浆蛋白质差异表达对大肠癌早期诊断以及发现或寻找新的肿瘤标志物可能具有一定的临床价值.     

版纳微型猪血清蛋白多态性研究

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳法对 2 6头版纳微型猪的前白蛋白 (PA)、酯酶(ES)、淀粉酶 (AM)和碱性磷酸酶 (AKP) 4个血清蛋白 (或酶 )座位的多态性进行了检则 ,计算了各座位的基因型频率、基因频率和遗传多样性指数。结果表明 ,上述 4个座位的优势基因分别为 PAB、ESA、AMA 和 AKPC,遗传多样性指数分别为 0 .2 60 3、0 .4970、0 .3 5 5 1和 0 .2 0 42 ,各座位的纯合子比例均较高     

线粒体单核苷酸多态性复合扩增体系在疑难检材中的法医学应用研究

目的应用线粒体单核苷酸多态性(SNPs)的复合PCR扩增体系应用于法医检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞检材、腐败降解检材及骨组织等疑难检材,为解决法医学检验疑难检材的难题提供一种新的方法。方法用IdentifilerTM试剂盒进行目前使用的STR分型及已建立的18个线粒体SNPs(16个位于编码区和2个控制区)位点复合扩增毛细管电泳荧光检测体系,并行对照检验案件中的陈旧血痕、脱落细胞、腐败肌肉、软骨以及牙齿、骨等各种疑难检材。结果对于上述检材,STR与线粒体SNPs的检验成功率均达到80%以上,线粒体SNPs高于STR。对于高度腐败的肌肉及软骨、骨骼检材,线粒体SNPs的检验成功率明显高于STR。结论所建立的线粒体SNPs复合PCR扩增体系在疑难检材检验中具有良好的应用前景。     

影响短链DNA电泳结果的有关因素分析

在电泳制备Ｎ－ｒａｓ第一外显子ＤＮＡ（０．８ｋｂ）的实验中发现：在环境温度为６℃左右时，２ｋｂ以下的ＤＮＡ电泳带出现明显的弥散及拖尾现象。在排除诸多因素后我们最终证实：较短的线性ＤＮＡ在进行琼脂糖电泳时，除了受文献中所述的样品加样浓度、电泳缓冲液的类型、电泳电压的高低以及溴乙锭的嵌入等因素影响外，电泳时的温度也是影响电泳结果的一条重要因素。将电泳温度提高至２０℃时，电泳带弥散及拖尾的现象即可消除。     

洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄

目的研究洛伐他汀在巴马香猪体内的分布和排泄特点。方法以抗动脉粥样硬化药物洛伐他汀为模型药,选择健康6月龄雄性巴马香猪为实验对象,经灌胃途径给药(45 mg/kg或2.4 mg/kg),采用RP-HPLC方法测定各组织及体液中的药物浓度,并对其分布和排泄过程进行研究。血浆蛋白结合率通过透析法测定。结果给药后,洛伐他汀快速分布到贲门、胃、小肠、肝、大肠、胰、前列腺、肺、肾、心、肌肉、睾丸、肾上腺、膀胱、脑和脾。以胃、肠、肝组织中药物浓度较高。单次给药4h后,贲门、胃、小肠、肝、心、肾上腺、膀胱药物浓度同给药后1h相比略有下降,其余组织均高于1 h。血浆蛋白结合率为95%以上,同正常人血浆非常一致。96 h尿中累积排泄量为给药量的7.4%,原形药经胆汁及粪排泄量达到80%以上。结论洛伐他汀在巴马香猪体内同人的分布排泄和血浆蛋白结合率相似,均在组织中广泛分布,血浆结合率达到95%以上,主要经胆汁和粪排泄。     

介绍一种滤纸片快速回收DNA片段的方法

采用置于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中的滤纸片，快速离心的方法回收ＤＮＡ片段。实验表明，该方法是一种简便、快速、可靠的回收ＤＮＡ片段的方法，回收率高。回收的ＤＮＡ片段可进一步用于基因工程中克隆连接、酶切和探针标记。     

贵州小香猪超氧化物歧化酶和过氧化物酶同工酶的组织分布

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定贵州小香猪心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、卵巢、子宫等９种组织中超氧化物歧化酶和过氧化物酶同工酶。超氧化物歧化酶同工酶在Ｒｆ０．２２和０．２６处分别各有一条共有谱带，而过氧化物酶同工酶在Ｒｒ０．３９处有一条共有谱带。肝、肺、肾中两种酶活力较高，脑中未测得过氧化物酶。     

锰对小鼠淋巴细胞DNA损伤的研究

目的:研究不同剂量染锰小鼠淋巴细胞 DNA损伤的情况。 方法:随机分为正常对照组和 3个剂量组(低、中、高剂量组 ) ,给小鼠腹腔注射氯化锰 ,6周后采用单细胞凝胶电泳实验检测染锰小鼠外周血淋巴细胞 DNA链断裂情况 ,并进行对比分析。 结果:低、中、高剂量组小鼠淋巴细胞 DNA损伤率明显高于正常对照组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论:氯化锰可引起小鼠淋巴细胞 DNA的损伤