血小板免疫粘附功能研究方法简介

最近国外报道血小板在免疫反应中起着一定的作用。为了研究血小板兔疫粘附功能,我们建立了“血小板免疫粘附酵母菌凝集试验”,效果满意。其原理是人血小板膜上C1q受体能粘附酵母菌。具体方法:将1ml肝素抗凝血Ficoll分离液水平离心提取血小板悬液,再离心(3000转/分,15分钟),倒尽上清,加Hank液冼涤离心一次,用Hank液恢复原体积。用毛滴管取3滴血小板悬液加等体积补体致敏酵母(浓度2×10~7/ml)悬液37℃孵育30’混匀,显微镜低倍观察酵母菌凝集程度(分-、±、+、++、+++、++++),同时设血小板加补体未致敏酵母组,血浆加补体致敏酵母菌组、血浆加补体未致敏酵母菌对照组。共测52例各种疾病患者标本。实验组凝集阳     

染色体组型对人体肿瘤性渗出液的诊断价值

作者对人类肿瘤性渗出液中有丝分裂细胞的染色体组型变化的研究,认为可能有助于诊断的确立,因为在静止期中,无论是间皮细胞抑或是肿瘤细胞都是形态变化多端,要鉴别它们是有困难的。在研究的过程中,作者还采用了一种改进的方法,具体操作步骤如下:将溶出液收集于含有肝素的离心管中,在37℃中,用水稀释5倍。保温20分钟后,离心10分钟(约1200转/分)。弃去上清液,用3份纯木醇和1份冰醋酸的新鲜冷混合液固定细胞沉淀,加固定液时切勿摇动沉淀物。在4℃保持1小时后离心,弃去上清液,再加固定液并振荡管子一段时间。用 Pasteur 氏     

中性粒细胞和淋巴细胞的一步分离法

我们参照English等(J ImmunolMethods 1974 5:249)方法,用不连续密度梯度离心一步法分离中性粒细胞(PMN)和淋巴细胞。试验取自15例正常献血员外周血,分离细胞并作PMN分离效果的检查。细胞分离方法:向试管加入约2ml分层液Ⅱ(比重1.115),然后再叠加2ml分层液Ⅰ(比重1.077)。取2ml肝素抗凝血(20μ/ml)加等量Hank＇s液稀释后,小心叠加在分层液Ⅰ上,2200rpm离心20分钟。结果在分层液Ⅰ界面上为单个核细胞层,在分层液Ⅰ、Ⅱ交界处及分层     

α1酸性糖蛋白对中性多形核粒细胞吞噬和杀菌功能的影响

目的:探讨急性期反应质α1酸性糖蛋白(AGP)对中性多形核粒细胞(PMNs)吞噬和杀菌功能的影响.方法:大鼠静脉注射AGP,以大鼠游移型和非游移型PMNs在吞噬过程中的化学发光为检测指标,并将经AGP调理后的PMNs与酵母聚糖混和进行体外实验检测.结果:AGP组PMNs的化学发光值大大强于对照组,AGP对PMNs氧化发光的增强作用随剂量的增加而增加,但用AGP调理的酵母聚糖组,其PMNs化学发光值明显低于用正常大鼠血清调理的酵母聚糖组.结论:应用AGP可以明显增加游移型和非游移型PMN的吞噬和杀菌活性,其机制是直接作用于PMNs而非对被吞噬物的调理.     

91例皮肤病淋巴细胞亚群检测的初步探讨

本文采用混合花环法检测成人4种不同皮肤病91例,进行了淋巴细胞亚群分类,观介绍如下。材料与方法1.健康人组:30例均为本院健康献血员,肝功能正常,无上述观察皮肤病,HBsAg 阴性,HBeAg 阴性。2.患者组:30例湿疹,28例荨麻疹。25例银屑病,8例带状疱疹。均为来我院皮肤科就诊病人。3.方法:混合花环试验法:取肝素抗凝血2ml 加3倍量 Hanks 液(pH7.2～7.4)混匀,用淋巴细胞分离液分离提取淋巴细胞。(分离液比重为1.077±0.002,上海试剂二厂生产)将提取的淋巴细胞用 Hanks 液洗涤两次,每次1500rpm 离心10分钟,最后配成1万/微升的细胞浓度,取100微升淋巴细胞悬液加入1%SRBC 和10万/微升的白色念珠菌悬液各100微升,放37℃水浴10分钟,取出     

用Fura-2/AM检测皮层神经细胞〔Ca~(2+)〕_i的方法

脑缺血再灌流损伤或迟发性神经元死亡的发生与神经的细 胞内游离钙离子浓度〔Ca2+〕i超负荷紧密相关,通过测定神细胞内游离Ca2+ 的含量 及在药物、毒物影响下的含量改变,可提供Ca2+与缺血再灌流脑细胞损伤间关联的直 接证据,并可阐明药物、毒物作用的机理与环节。因此,建立合适的检测神经细胞内游离钙 离子浓度的方法,对于深入分析脑缺血再灌流损伤或迟发性神经元死亡的分子机理有着十分 重要的意义。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　Fura-2/AM为中科院生理研究所产品,用二甲基亚砜(DM SO)配成1 mmol/L浓度,分装后置于-20℃备用。EGTA和Triton X-100均为Sigma公司产品 ,其余试剂均为国产分析纯产品。Wistar大鼠由本校动物部饲养。 　　1.2　大脑皮层神经细胞的准备　参照Dildy和Leslie［1］方法 ,略有改进。取新生0～1 d Wistar大鼠乳鼠,生理盐水冲洗和75%酒精灭菌后,断头置冰上 ,小心快速地剥离双侧大脑半球上部外表面,立即置于冷Hank氏液(mmol/L：NaCl 137,KCl 5.0,CaCl2 1.3,MgSO4 0.8,Na2HPO4 0.6,KH2PO4 0.4,NaHCO3 3.0 ,葡萄 糖5.6,pH7.4)中洗2次后剪碎,置于0.125%胰酶液中37℃轻轻搅拌20 min,加入冷DMEM 培养基(含10%小牛血清)中止消化。200目过筛,3 000 r/min离心5 min,再以Hank氏液洗一 次,最后用DMEM培养基(含10%小牛血清)制备成2×106* ml-1细胞悬液。台盼兰排斥试验检查神经细胞存活率。     

克隆氏病:由分支杆菌引起

克隆氏病在组织学上与结核病很相似,但早期学者未能发现抗酸杆菌,常被误认为是肠结核病。在1982年10月,作者报导从患克隆氏病女孩体内分离出来分类的分支杆菌菌株,并经羔羊接种产生慢性回肠炎。其方法是用手术刚切下的人体胃肠组织,经无菌、去脂处理后放在pH7.2的无菌Bulerfield缓冲剂中,保持3～5℃一夜。次日,从表面刮除无菌粘膜约20g,置25％1:250pH7.5无菌的胰旦白酶液中搅拌30～50分钟。过滤并置试管内离心30分钟,将沉淀物悬浮于无菌的0.1％氯化钾烃铵液40ml中,置室温内18～24小时后,将0.1～0.2ml沉淀     

体外贮存对人富血小板血浆生物学活性的影响

目的:探索各种贮存条件对人富血小板血浆(human platelet-rich plasma,hPRP)生物学活性的影响,研究hPRP释放生长因子的浓度作为评价hPRP生物学活性指标的可行性,为最终确定一整套应用hPRP的标准化方法奠定基础.方法:制备健康志愿者的hPRP,记录血小板计数.将每份hPRP释放生长因子分为3组,分别贮存在4 ℃,-20 ℃和-70 ℃,在制备后0,2,4,6,8,10 d测定3组标本中转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)和血小板衍生生长因子AB(platelet-derived growth factor AB,PDGF-AB)的浓度.同时,应用不同温度(4 ℃,-20 ℃,-70 ℃)贮存10 d的hPRP释放生长因子培养人脂肪基质细胞,以MTT法比较各组标本促进细胞增殖的生物学活性.结果:在体外贮存过程中,hPRP释放生长因子TGF-β1和PDGF-AB的浓度下降很快.低温是保存hPRP释放生长因子相对适宜的环境.当贮存10 d后,在-20 ℃和-70 ℃贮存的标本其TGF-β1的浓度分别为(238.55±36.00)μg/L和(261.12±55.10)μg/L,PDGF-AB的浓度分别为(46.03±17.67)μg/L和(50.78±18.70)μg/L,显著高于贮存在4 ℃时两种生长因子的浓度[(113.03±16.29)μg/L和(23.27±8.22)μg/L(P＜0.01)].MTT实验结果显示,不同温度贮存hPRP,其生物学活性也有显著差异,且与生长因子浓度差异基本一致.结论:hPRP释放生长因子只能在低温环境中短时间贮存,生长因子定量分析是评价hPRP生物学活性较为可靠的指标.     

中性粒细胞碱性磷酸酶钙钴染色法的实验条件探讨

本文对钙钴法染色的实验条件进行了全面观察。结果表明:(1)用95％乙醇和10％甲醇乙醇作固定液是最佳选择。(2)血片经37℃、45℃、50℃孵育不同时间的染色结果有差异。(3)PH9.60的基质液染色明显高于其他PH值时的染色结果。(4)用0.2MT_(ris)代替巴比妥缓冲液(Ca~(++))=0.06M的基质液的染色效果最佳。(5)改进后的钙钴法孵育时间缩短为30分钟。     

用扁桃体细胞制备临床级α干扰素

人血白细胞干扰素(α-IFN)需用新鲜人血活白细胞制备,我们首先应用新鲜切除的正常人扁桃体淋巴细胞代替人血白细胞,取得满意的结果,成品质量达到国际临床级的水平。材料与方法一、人扁桃体细胞干扰素的制备(一) 细胞悬液的制备:取刚用外科手术(挤切法)切除的新鲜扁桃体放入无菌小瓶,并放冰壶中带回实验室,如不能立即试验,可加适量Hank′s液保存于4℃,一般于4～8小时之内用于制备细胞悬液。1.处理扁桃体:首先将扁桃体用每ml含200u卡那霉素的生理盐水冲洗3～5次,至无血液和粘液为止,继而用每毫升含200 u卡那霉素的Hank′s液洗1次,放入无菌平皿内,剥除包膜等结缔组织,再用上述Hank′s液洗涤3～5次,至洗出的Hank′s液透明澄清为止,然后将扁桃体组织剪碎至糊状,组织块约为直径1～2mm。     

ELISA检测肝炎病区与居民区蚊体中HBsAg

为了进一步了解乙型肝炎病毒在蚊体内携带情况,探讨其传播作用,于1984年8～10月份,在肝炎病区和居民区共捕捉蚊虫920只。将蚊虫按不同捕捉地点,不同蚊种及有无胃血等情况进行分组。每组10只,放入乳钵内研磨,加入1.0ml生理盐水成悬液,置-30℃冰箱中反复冻融3次,3000转/分钟,30分钟离心沉淀,取上清液置-30℃冰箱保存待检,用ELISA双抗体夹心法检测。结果:共检测标本92组,检出HBsAg阳性者22组,占捕捉蚊虫的23.9%。92组蚊虫检出HBsAg的阳性率中,从捕捉地点看,肝炎     

温度和时间对血氨酶法测定影响的对照分析

目的分析了解血液标本的放置温度和时间对血氨酶法测定结果的影响。方法将血液标本放置于2℃、24℃、37℃,分别于5分钟、30分钟、60分钟、90分钟测定血氨浓度,第一次血氨测定要检测r-GT水平,比较血氨标本放置后浓度升高百分率及观察r-GT对血氨标本放置后浓度升高的影响。结果标本放置在2℃冰水浴30分钟、60分钟、90分钟后血氨升高为2.37%、4.01%、5.34%;24℃室温放置,30分钟、60分钟、90分钟后血氨升高为8.46%、22.24%、34.26%;37℃水浴放置30分钟,60分钟、90分钟后血氨升高为14.42%、32.1%、47.04%。24℃和37℃差异非常显著(P<0.01)。高r-GT组较低r-GT组血氨在24℃和37℃时升高差异显著(P<0.01)。结论标本的放置随着时间的延长,温度的升高有显著差异,因此血氨标本采集后应立即测定,不能立即测定的应置2℃￣4℃冰水浴保存。     

急性白血病患者外周血或骨髓中单个核细胞内钙离子浓度的测定

应用Fura-2测定急性白血病(急白)骨髓或外周血中单个核细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]i)。肝素化血或骨髓液与RPMI1640混合后,滴入淋巴细胞分层液,离心。分离出的单个核细胞与Fura-2 AM,BSA,37℃温育40min。按激发波长350nm,发射波长500nm,测量其荧光强度F,Fmax,Fmin。用本法测定35例急白患者(51例次),结果表明[Ca~(2+)]i变化可作为一项反映化疗药物敏感性、预测化疗疗效的参考指标。     

孕妇淋巴细胞腺苷酸脱氨酶活性观察

<正> 腺苷酸脱氨酶(Adenosine Deaminase ADA)是嘌呤核苷代谢中的关键酶,在血液中,以淋巴细胞内活性最高。我们对正常及病理妊娠妇女的淋巴细胞ADA活性进行观察,结果如下。 1 材料与方法 1.1 测定对象:正常孕妇21例(年龄22—32岁,孕龄从6周—40周):病理妊娠妇女19例(年龄24—30岁,孕龄8—38周:21例健康未婚妇女(年龄24—30岁),为正常对照组。 1.2 方法:(1)取EDTA抗凝新鲜血3ml加等量Hank’s液稀释,用Hypaque—Ficoll分离液分离淋巴细胞,经显微镜下计数,用Hank's液调整淋巴细胞浓度为5.0×10~9/L,取该淋巴细胞悬液0.5—1.     

铟~(111)标记白细胞扫描确诊腹腔脓肿

腹腔脓肿的死亡率仍较高,约30%,用铟标记白细胞扫描可以早期确诊定位。方法:取患者静脉血17ml加入枸橼酸液3ml,轻轻混匀,室温下沉淀5分钟,移去含有白细胞及血小板的上清液。以20%Tyrode氏缓冲液稀释。以640g离心10分钟。移除     

健康新生儿末梢血锌浓度的测定

小儿缺锌的问题在我国已引起了广泛的重视。已经有很多文献报导过有关血锌浓度的正常值,但多数报道用的是静脉血标本,虽准确可靠,但不仅血量需要较多(血清500μl),且增加了小儿的痛苦和医务人员的工作量,不适宜于大面积筛查。如采用发锌作为判断缺锌的手段,则由于测定结果受较多因素影响,可靠性欠佳。曾有文献报道用末梢血进行该实验,为了验证其效果,我们对30例正常新生儿也进行了同样的试验,现报导如下:一、材料本文任意选取了中日友好医院产科婴儿室30例由健康孕妇顺产生下的新生儿,其中男婴19例、女婴11例,无产伤、窒息,评分(Apgar)10分,胎龄37～40周,出生体重2500～3999g,无临床异常体征。取血时间为出生后3～7天。取血方法是,常规消毒后用毛细管采足跟末稍血150μl,然后用橡皮泥封住毛细管一端离心5分钟(1400rpm)。折断毛细管留血清于尖底带盖试管中,贮存于—4℃冰箱待用。     

注射器内的气泡及延期测定对血气分析的影响

本文研究了血液 pH 和血气分析中两种常见的误差来源。对10名志愿受试者及40名患者研究了延期测定的影响。装有血样的注射器分别贮存于0℃(碎冰中)、4℃(冰箱中)及22℃(室温)。在4℃及22℃存放20分钟,氧分压(Po2)显著降低,但在0℃存放了30分钟仍无明显改变。在4℃和22℃存放30分钟或在0℃存放60分钟,血液pH、二氧化碳分压(Pco2)、碳酸氢盐,二氧化碳总量(Tco2)和碱过剩(BE)均无明显改变。对40名患者通过在注射器中保留一个气泡或一些泡沫,使其和血液接触1—5分钟的办法研究了注射器中的气泡对测定的影响。血液和泡沫或与气泡接触2分钟后,Po2显著升高;和气泡接触3分钟后 Pco2显著降低。气泡的大小对变化速度几乎没有影响。血液 pH、碳酸氢盐、TCo2及 BE 在接触5分钟后仍无明显改变。为了准确测定 Po2和 Pco2,采血时必须防止产生泡沫,必须在2分钟内排出一切气泡,并要在10分钟内将血样注入血气分析仪中,或将注射器贮存于冰水之中。对于血液pH 及 BE 的测定,要求没有那么严格。     

从末梢血分离淋巴类细胞一些变异因素的试验观察

1971年我们制成右旋糖酐-泛影葡胺液分离血中淋巴细胞取得满意效果。随后用Ficcoll-Hypaque和聚甘露醇-泛影葡胺也取得同样效果。脱纤维使血的粒细胞显著降低,本文报告无空调试验室在深秋低温10～15℃和盛夏高温30～35℃时分离淋巴细胞的技术。 我们设计了控制离心筒内微环境的温度,深秋时将离心筒预热至25℃,盛夏时10℃冰箱预冷2小时,再加脱纤维血于分离液面,离心后可得满意的分离效果。     

对灭活乙肝病毒的HBsAg测定

<正> 乙型肝炎病毒(HBV)在外界环境中具有较强的抵抗力,对热、低温、干燥、紫外线和一般消毒浓度的化学消毒剂均较耐受。由于各种化学消毒剂对HBV的灭活机制不同,HBV的传染性和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的抗原活性在对外界的抵抗力方面并非一致。据文献报道:100℃加热10分钟,可使HBV的传染性消失而保留其表面抗原活性;0.5％HCi作用3分钟、0.5％过氧乙酸和10,000ppm氯作用30分钟,可破坏其抗原性和感染性;另外,HBV对2％酚(1天)、3％漂白粉液     

过滤去除白细胞过程中的红细胞溶血

目的　探讨过滤去除白细胞过程中红细胞溶血的原因 ,寻找解决方案。方法　采用不同处理模式 :先过滤后离心 /先离心后过滤、用 /不用生理盐水预浸润滤器制备红细胞悬液。 4 8u全血 ,其中 30u全血 ,每单位分为 3份 (A、B、C袋 )。按A、B、C袋将 30u全血分为 3组 ,并分别给予不同处理。A组为对照组不过滤 ,B组为先离心后过滤组 ,C组为先过滤后离心组。B ,C两组过滤前均未用生理盐水浸润滤器。另外 1 8u全血在过滤前用生理盐水浸润滤器 ,然后采用先过滤后离心模式处理。测定各组RBCs的游离血红蛋白和K+ 浓度。结果　在不用生理盐水预浸润滤器的条件下 ,过滤后的红细胞悬液Hb和K+ 的浓度明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,其中先过滤后离心模式制备的红细胞悬液Hb和K+ 的浓度明显高于先离心后过滤的红细胞悬液 (P <0 .0 5 ) ,采用生理盐水预浸润处理后过滤的红细胞悬液Hb和K+ 的浓度与对照组无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论　现用的滤器过滤去除白细胞能引起一定程度的红细胞溶血 ,先过滤后离心模式较先离心后过滤模式更容易导致红细胞溶血 ,预先用生理盐水浸润滤盘 ,能有效地减少过滤引起的溶血