6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析

目的: 比较6对通用引物检测9种不同型别人乳头瘤病毒（HPV）的效果,为临床提供一种快速简便的HPV检测方法。方法: 收集女性宫颈脱落细胞标本954例,使用HPV分型试剂盒进行HPV DNA检测并分型。分别使用6对通用引物（① GP5/GP6,② GP5+/GP6+,③ CP Ⅰ/CP ⅡS,④ CP I/CP ⅡG,⑤ 外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+,⑥ SPF1/GP6++）对HPV-DNA阳性标本进行PCR检测,比较6对通用引物检测9种不同类型HPV DNA效果。结果： 采用HPV分型试剂盒从954例标本中共检出263例HPV-DNA阳性标本,阳性率为27.57%。在阳性标本中,采用通用引物SPF1/GP6++检出的阳性例数为223例,检出率为84.79%;采用巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检出的阳性例数为207例,检出率为78.71%。上述两对通用引物均可以检出9种型别HPV DNA。结论： 通用引物SPF1/GP6++检测效果最佳,但引物含次黄嘌呤,成本较高;巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检测效果次之,且合成成本较低。在HPV研究中可以根据实际情况选用。     

450例宫颈活检组织中人乳头瘤病毒的分布特征

[目的]了解阴道镜检查患者的宫颈活检组织中HPV的感染率和亚型分布。[方法]对宫颈脱落细胞学异常的患者450例进行阴道镜下定位活检。活检组织同时行HPV基因分型和病理诊断,HPV基因分型采用斑点杂交方法进行。[结果]在450例宫颈活检患者中,其HPV感染率为65.3%。在HPV-DNA阳性患者中,检出率最高的HPV-16占36.7%,依次HPV-58为22.1%、HPV-18为18.7%、HPV-52为16.0%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中HPV-DNA阳性率分别为55.6%、69%、82.7%和88.9%。在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ,CINⅢ组织中均检测到HPV-16、-58、-18和-52。[结论]本研究中的宫颈活检组织中不仅检测到HPV-16和-18,还检测到HPV-58和-52感染,后者的发现为开发宫颈癌多价复合型疫苗提供了事实依据。     

HPV的快速检测与分型

以通用引物PCR初筛158例标本，凡HPV感染阳性标本再用型持异引物PCR作分型检测，结果：疣、乳头瘤等良性病变的HPV检出率为61．1％（55／90），主要检出HPV6和／或HPV11，占阳性例数的89．1％（49／55）；食管癌组织有较高的HPV感染率（66．2％，45／68），以检出HPV6，11，16为主，并明显高于HPV8（X2检验，P＜0．01），提示HPV感染可能与本地区食管癌发生密切用关。本研究建立的HPV快速检测和分型方法，用于临床检测和回顾性研究均可获得满意结果。     

生殖器疣活检标本中HPV多重检测技术的建立

目的探索生殖器疣活检标本中人乳头瘤病毒(HPV)的多重检测分型技术,为我国生殖器疣感染HPV的检测和分型研究的开展提供有效手段。方法针对病毒L1区基因序列自行设计通用引物MY09、MY11、GP5+和GP6+,并对反应条件进行优化,建立基于聚合酶链式反应(PCR)及序列分析的检测生殖器疣活检标本中HPV感染型别的方法。结果采用巢氏PCR方法能够特异扩出140bp的目的条带,实现HPV感染的定性检测;通过对目的基因片段的测序分析能够实现单型别感染/多型别复合感染HPV的分型和鉴定,并可以检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。结论基于HPV病毒L1区基因序列建立的PCR和序列分析检测技术是快速检测和分型生殖器疣活检标本中HPV的一种有效方法。     

昆明地区571例门诊患者HPV感染情况分析

目的探讨昆明地区女性子宫颈感染人乳头瘤病毒(human Papillomavirus,HPV)的基因型分布和感染率情况。为预防HPV感染和宫颈癌防治提供依据。方法以MY09/MY11为外引物,GP5+/GP6+为内引物,通过巢式PCR(n PCR)检测妇科门诊样本571例,并将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,将在150bp处有条带的样本送测序,测序结果通过NCBI网站blast功能开展核酸比对,并进行基因分型。结果 535例门诊患者中阳性病例111例,阳性率20.75%,其中高危型77例,占总阳性率69.37%,低危型34例,占总阳性率30.63%。结论昆明地区女性子宫颈感染HPV最常见的亚型依次为16、58、33、35、18和31。低危型最常见的亚型依次为6、81、11、91。高危型为常见类型,占总阳性率的69.37%,16型和58型为主要高危感染亚型,6型为主要低危感染亚型。     

PCR用于尖锐湿疣诊断的价值

用人乳头瘤病毒基因Ｌ１区通用引物（ＭＹ１１／ＭＹ０ｇ）进行聚合酶链反应，检测５０例尖锐湿疣新鲜组织。其中含３例病变不典型病理活组织检查不能确诊者。ＨＰＶ，ＤＮＡ阳性率１００％ＨＰＶ－６．１１，１６，１８型分别为３６％，７０％，１４％．８％。结果显示：（１）ＰＣＲ检测ＨＰＶ具有灵敏。特异、简单快速等优点，可有助于不典型尖锐湿疣患考的诊断，（２）ＭＹ１１／ＭＹ０９在筛选ＨＰＶ感染时是较理想的引物，（３）尖锐湿疣组织中以ＨＰＶ６、１１为最常见型别。     

HPV与CIN、宫颈癌的关系探讨

目的探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染与宫颈上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelial neoplasia,CIN)、宫颈癌发生之间的关系。方法回顾性分析1 500例已确诊CIN或宫颈癌的患者,采用聚合酶链反应(PCR)进行HPV分型,通过第2代杂交捕获试验法(HCⅡ)对比低危型HPV6/11和高危型HPV-16、18感染者的年龄和宫颈病变程度。结果年龄渐次升高,感染HPV几率愈高,感染高危型HPV-16、18阳性率与宫颈癌高发呈正相关。结论对妇女作HPV筛查对预防宫颈癌有重要意义。     

宫颈癌与癌前病变组织中HPV-16的整合感染状态

目的探讨宫颈癌及宫颈癌前病变中人类乳头瘤病毒16型（HPV-16）整合人宿主基因组的发生情况。方法选取252例宫
颈病变组织,其中宫颈癌48例,宫颈上皮内瘤样病变（CIN）204例,包括CINⅠ125例、CINⅡ46例、CINⅢ33例,另取因子宫肌
瘤行全子宫切除术的正常宫颈上皮20例为对照,采用重叠定量PCR检测HPV-16感染标本中病毒整合状态。结果宫颈癌中
HPV-16阳性感染31例,占宫颈癌患者总数的65.6%（31/ 48）,其中HPV-16整合感染18例,占HPV-16阳性宫颈癌患者的58.1%
（18/31）;在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中,HPV-16阳性感染率分别为19.2%（24/125）、34.8%（16/46）、42.4%（14/33）,整合感染率分别
为16.7%（4/24）、18.8%（3/16）、35.7%（5/14）;与不同级别CIN病变相比,宫颈癌患者的HPV-16整合感染率明显增加,差异具有
统计学意义。结论HPV-16整合感染状态与宫颈病变严重程度呈正相关,在HPV DNA检测基础上联合应用高危HPV感染状
态的检测有利于提高宫颈癌筛查的靶向性并早期预测宫颈病变的转归。
     

Correlation between physical status of human papilloma virus and cervical carcinogenesis

The prevalence of human papilloma virus (HPV)-16 in patients with cervical cancer,the physical status of HPV-16 in patients with cervical lesions,and the role of HPV-16 integration in cervi-cal carcinogenesis were investigated.HPV genotyping was performed by using PCR approach with the primer GP5+/GP6+ and type-specific primer on biopsy specimens taken operatively from 198 women.Multiple PCR was done to detect physical status of HPV-16 in a series of cervical liquid-based cytology samples and biopsy specimens obtained from different cervical lesions with HPV-16 infection,includ-ing 112 specimens with cervical cancer,151 specimens with CINⅠ,246 specimens with CINⅡ and 120 specimens with CINⅢ.The results showed that there were 112 cervical cancer samples (56.57% of total cervical cancer patients) with HPV-16 infection.The frequency of HPV-16 pure integration was 65.18% (73/112),56.57% (47/120),23.58% (58/246) and 7.95% (12/151) in cervical cancer,CINⅢ,CINⅡand CINⅠ patients respectively.In situ hybridization was performed on some paraffin-embedded sections of CINⅡ,CINⅢ and cervical cancer to verify the physical status of HPV-16 infection.Sig-nificant difference was observed between cervical cancer and CINⅠ,CINⅡ,CINⅢ in the frequency of HPV-16 integration (P<0.01).It is suggested that HPV-16 is the most prevalent type and is associated with cervical cancer.In the case of HPV-16 infection there are close associations between the severity of cervical lesions and the frequency of HPV-16 integration.The application of testing HPV genotyping and physical status based on detection of HC-Ⅱ HPV DNA would be in favor of predicting the progno-sis of cervical precancerosis and enhancing the screening accuracy of cervical cancer.     

人乳头状瘤病毒和EB病毒在子宫颈上皮内瘤变中的表达

目的:探讨人乳头状瘤病毒(HPV)和EB病毒(EBV)在子宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达.方法:采用原位杂交对130例CIN(CIN1 50例,CIN2 40例,CIN3 40例)、子宫颈癌10例、子宫颈湿疣样病变10例、子宫颈正常黏膜10例的HPV(高危型16/18、低危型6/11)和EBV进行检测.结果:HPV16/18在CIN1、CIN2、CIN3的阳性表达率分别是44.0%、37.5%和62.5%,子宫颈癌为8/10,子宫颈湿疣样病变为10/10,子宫颈正常黏膜为3/10,差异有统计学意义(P<0.01).HPV6/11在CIN1、CIN 2、CIN3的表达率分别是36.0%、52.5%和70.0%,在子宫颈癌中的表达是6/10,子宫颈湿疣样病变9/10,子宫颈正常黏膜3/10,差异有统计学意义(P<0.01).HPV16/18和HPV6/11在CIN1、CIN2、CIN3中联合表达率分别为26.0%、22.5%和50.0%,子宫颈癌为6/10,子宫颈湿疣样病变为7/10,子宫颈正常黏膜为2/10,差异有统计学意义(P<0.01).EBV在CIN1、CIN2、CIN3的阳性表达率分别是24.0%、12.5%和22.5%,子宫颈癌为3/10,子宫颈湿疣样病变为0/10,子宫颈正常黏膜为0/10,差异无统计学意义(P>0.05).结论:HPV感染是引起CIN的主要致病因子,临床上往往是多种亚型混合感染.EB病毒在CIN和子宫颈癌表达的意义仍有争议.     

HPV感染在尖锐湿疣及外阴和宫颈上皮内瘤变病变中的分布

目的探讨HPV感染在尖锐湿疣和上皮内瘤变(包括外阴和宫颈)病变中的分布情况。方法通过HPV基因分型检测对330例尖锐湿疣和250例上皮内瘤变病变进行了HPV6、11、42等低危型及16、18、31、33、39、45、52、56、58等高危型DNA检测。结果 330例的尖锐湿疣组织中:274例为HPV6/11型(83.0%),46例为HPV16/18型(13.9%);250例上皮内瘤变病变组织中,8例为HPV6/11型(3.2%),167例为HPV16/18型(66.8%)。结论尖锐湿疣感染的HPV类型以HPV6、11为主,上皮内瘤变病变HPV类型以HPV16、18为主。     

Relationship between the Expression of Telomerase and Human Papillomavirus Infection in Invasive Uterine Cervical Carcinoma

Telomerase activity was examined in invasive cervical carcinoma to assess whether it is activated during cervical malignant transformation and to look for its possible association with hu-man papillomavirus(HPV) infection.Histologically confirmed invasive cervical carcinomas and be-nign cervices were assayed for telomerase activity by using a modified telomere repeat amplification protocol(TRAP).The same cases were subjected to polymerase chain reaction(PCR) detection of HPV by using consensus primers and type-specific(HPV types 16 and 18) primers.Telomerase activ-ity was detected in 40 of 45(88.9%) invasive cervical carcinomas and 2(all chronic cervicitis) of 50(4%) benign cervical lesions.HPV was detected in 36(24 HPV-16 and 4 HPV-18 cases) of 45(80%) invasive cervical carcinomas and 20(11 HPV-16 and 1 HPV-18 cases) of 50(40%) benign cervical changes.There was a significant correlation between the expression of telomerase with histological grade(φ=0.44,P<0.005),but no correlation was found between telomerase expression and HPV-18(P>0.05).Although larger sample studies are needed,there seems to be a clear association between telomerase upregulation and HPV status,mainly HPV-16 infection.     

A high throughout assay for human papillomavirus genotypes with fluorescence polarization

Objective To develop a simple, cheap, quick, accurate and practical method for a high throughout genotypes assay of human papillomavirus (HPV) DNA.Methods Crude DNA was extracted by a simplified proteinase K digesting method. HPV common conservative primers: GP5 /6 system was used to amplify HPV DNA in 127 samples of condylomata acuminatum (CA) and cervical scrapes by PCR, then the PCR product was assayed using a template directing terminator incorporation (TDI) and genotypes were detected with fluorescence polarization (FP). Major HPVs type-specific probes (HPV6, 11, 16, 18, 31, 33, 35 and 58) designed by us were hybridized with the specific PCR products and a special fluorescent ddNTP terminator was directly added to the end of the probe under direction of specific PCR products.The results were measured with FP and compared with the results of the DNA sequence.Results Compared with the results of DNA sequencing, the results detected with fluorescence polarization were all correct. The proposed method could detect more than one type of HPV infection,but DNA sequencing method could not. The positive rate of HPV was 100% in 78 CA biopsies.Among them, there were 14 HPV double infections [HPV6B and 11(9 cases), HPV11 and 16(4),HPV11 and 18(1)], 5 HPV triple infections [HPV6B,11 and 16(4), HPV11,16 and 18(1)], and one HPV quadruple infection (HPV6B, 11,16 and 18). The positive rate of HPV was 77% in the 49cervical scrapes. Six HPV double infections [HPV6B and 11(2), HPV11 and 16(1), HPV6B and 16(1), HPV16 and 18(1), HPV18 and 58 (1)], 3 HPV triple infections [HPV6B, 11 and 16(2),HPV11,16 and 18(1)] and one HPV quadruple infection (HPV6B,11,16 and 18) were detected incervical cancer scrapes.Conclusions The proposed method allowed a high throughout, special, simple, rapid, automatic and economical detection of HPV-DNA genotyping without a use of labeling probes. It can detect multiple HPV genotype infection and will be and useful tool in HPV genotype screening.     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV－DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ。结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同：３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ２＝１０．６，Ｐ＜０．０１）。初步结果表明，本地区喉乳头瘤主要与ＨＰＶ－６的感染密切相关。该法具有缩短检测时间、节省一个恒温水浴箱等优点。     

宫颈癌及癌前病变中的HPV-16整合人宿主基因组的发生情况及其在宫颈癌筛查中的应用

目的:探讨人类乳头瘤病毒16型(HP V-16)在宫颈癌及宫颈癌前病变患者中与宿主基因组的整合情况.方法:选取宫颈癌变组织252例,其中48例为宫颈癌组织,204例为宫颈上皮内瘤样病变组织(CIN),其中包括125例CINⅠ,46例CINⅡ,33例CINⅢ作为研究组;另外选取20例因子宫肌瘤行全子宫切除术的正常宫颈上皮组织作为对照组.对各标本采用定量PCR检测法检测HPV-16病毒的整合状态.结果:与正常的宫颈上皮组织相比,宫颈病变组织均发生了HP V-16病毒感染且与宿主基因整合的情况.其中宫颈癌组织的整合率最高,而CIN组织中随着病变程度的加重HPV-16病毒的整合率也增高,差异有统计学意义(χ2=49.7359、12.6033,P均<0.01).结论:宫颈病变的严重程度可能与HP V-16的整合感染有关,在HP V DNA检测的基础上联合对高危HP V整合感染状态进行检测有利于提高宫颈癌筛查准确率并在早期预测宫颈病变的转归.     

新疆不同民族喉乳头状瘤与喉癌组织中不同类型HPV的检测

目的：探讨新疆部分民汉族喉乳头状瘤（LP）和喉癌（LC）与人乳头状瘤病毒（HPV）感染的关系。方法：应用聚合酶链反应的（PCR）技术，对83例喉癌患者（维吾尔族27例，哈萨克族4例，汉族52例），63例喉乳头状瘤患者（维吾尔族33例，汉族30例），20例声带炎性息肉（LIP）患者（维、汉各10名），总共166例分别进行HPV6／11的9．6％（8／83）和LIP的0．0％（0／20）（P＜0．05）；（2）LC组织中HPV16／18感染的阳性率为37．3％（31／83）明显高于LP的6．3％（4／63）和LIP的0．0％（0／20（P＜0．05）；（3）民汉之间的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论：（1）民汉LP的发生主要与HPV6／11感染有关；LC主要与HPV16／18感染关系密切，HPV感染可引起细胞基因的异常调控，可能是喉上皮组织发展成为肿瘤病变的促进因子。     

西安交通大学第一附属医院8581名妇女生殖道人乳头瘤病毒感染筛查

目的 调查陕西地区妇女生殖道人乳头瘤病毒(HPV)感染情况,了解本地区妇女生殖道HPV感染特征。方法 采用PCR+导流杂交技术检测2009年2月至2012年12月在西安交通大学第一附属医院妇科就诊的8581名陕西地区妇女生殖道HPV-DNA,必要时进行宫颈细胞学或组织学检查。结果 8581名陕西地区妇女中,生殖道HPV感染率为33.06%,高危型HPV(HR-HPV)感染率为30.08％,复合型别感染者占27.18%;最常见感染型别依次为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-6和HPV-18。HPV感染存在年龄差异,感染高峰年龄为25岁以下和51岁以上。HR-HPV感染者中宫颈组织学正常、轻度上皮内瘤变(CINⅠ)、中度上皮内瘤变(CINⅡ)、重度上皮内瘤变(CINⅢ)和宫颈癌(CC)组中,感染率分别为88.72%、97.48%、97.35%、95.88%和99.23%;常见致癌型别依次为HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33。HPV-16、18和58共同引起94.62%的宫颈癌。结论 陕西地区妇女生殖道HPV感染比较普遍,最常见的感染型别是HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-6和HPV-18,常见致癌型别依次为HPV-16、HPV-18、HPV-58、HPV-52和HPV-33。HPV-16、18和58引起94.62%的宫颈癌。高危型HPV感染和宫颈病变显著相关,HR-HPV复合感染不是宫颈病变的危险因素。     

液相芯片技术在人乳头瘤病毒分型检测中的应用

目的构建人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的液相芯片,针对中国常见的23种型别的HPV进行分型检测,并探讨其在临床应用中的特异性和敏感性。方法采用HPV通用型引物MY09/11以及一条简并引物对临床样本进行PCR扩增;针对HPV不同型别设计分型探针,并偶联到Luminex微球上,通过LuminexTM平台对PCR产物进行分型检测。同时以测序法作为验证标准,对液相芯片法(Luminex法)检测结果进行评价。结果以测序法作为验证标准,Luminex法对314例HPV样本的分型检测结果为灵敏度98.10%,特异性98.08%,符合率98.09%。Kappa一致性检验结果为0.962。结论 Luminex法用于HPV感染样本中的分型检测具有高灵敏度和特异性,可以用于临床HPV诊断。     

尖锐温疣患者有乳头瘤病毒6,11型的检测及L1基因的序 …

目的 检测尖锐湿疣患者组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６型和１１型的感染率,分析Ｌ１晚期基因序列及其蛋白质的氨基酸序列,为基因工程疫苗的研究提供依据。方法 采用ＰＣＲ方法测定北京和锦州两地区３４例尖锐湿疣患者病损组织中ＨＰＶ６型及１１型的感染率,并扩增Ｌ１晚期基因,构建重组测序质粒,双脱氧法测序观察其变异状况。结果 ＨＰＶ１１型感染率为７３．５％（２５／３４）,６型感染率为４４．１％（１５／３４）,其     

Studies on the interrelationship of Chinese laryngeal carcinoma and human papillomavirus

ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅｉｎｔｅｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｏｆＣｈｉｎｅｓｅｌａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ￥（赵舒薇）（费声重）（郭志祥）（陆书昌）（潘子民）ＺｈａｏＳｈｕｗｅｉ，ＦｅｉＳｈｅｎｇｚｈ...