E1B缺陷性腺病毒对p53缺失性白血病细胞的作用

目的：研究E1B缺陷性腺病毒（d11520)对3种p53缺失性白血病细胞K562，Jurkat,HL-60的作用。方法：以病毒空斑试验检测d11520在上述3种宿主细胞中的复制情况，用锥虫蓝染色检测d11520的杀细胞作用。结果：d11520在三种白血病细胞中的复制明显低于阳性对照组，且对白细胞没有显著的致死作用。结论：d11520对上述三种血液恶性细胞不能产生有效的抑制作用。     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＩＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化疗药物联合应用的作用机理。研究结果表明：３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ）、三尖杉酯碱（Ｈ）、足叶乙甙（ＶＰ１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异；ＧＭＣＳＦ、ＩＬ３均能增加ＶＰ１６、ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用；ＧＭＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不能增加３种化疗药物的细胞毒性     

嵌合腺病毒体外对人白血病细胞U937的感染及生长抑制作用

目的研究嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP对人白血病细胞U937的感染及生长抑制作用。方法以空载体腺病毒Ad5GFP作为对照,将嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP感染人白血病细胞株U937,通过荧光倒置显微镜、流式细胞术和透射电镜分析病毒对U937细胞的感染性和复制活性;应用细胞计数试剂盒(CCK-8)分析细胞的增殖反映该病毒对细胞的杀伤作用;通过AnnexinV-APC/7-AAD双染流式细胞术分析早期细胞凋亡率,并采用免疫印迹法检测凋亡相关蛋白多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)的裂解。结果嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP能感染人白血病细胞株U937,并能在其中复制产生大量子代病毒;该嵌合腺病毒对U937细胞株的感染效率、生长抑制率均高于空载体腺病毒Ad5GFP,差异有统计学意义(P<0.05);嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP诱导U937细胞发生凋亡的细胞比例较空载体腺病毒Ad5GFP高,差异有统计学意义(P<0.05),并且检测到随时间逐渐增加的PARP裂解蛋白。结论嵌合腺病毒Ad5f11pTPEGFP可有效感染人白血病细胞株U937,并能在其中复制,能显著抑制人白血病细胞株U937生长并诱导其凋亡。     

细胞自噬与病毒感染

自噬是一种高度保守的生理代谢途径,双层膜囊泡将其内容物运送到溶酶体进行降解。因此,自噬是哺乳动物细胞清除胞内病毒等病原体的一种手段。然而,在病毒感染过程中自噬的角色比较复杂,一些病毒已进化出逃逸自噬依赖性降解的方法,甚至利用自噬为自己的复制而服务。本文主要综述了自噬的基本机制和功能、自噬在病毒感染中的角色以及自噬在人类免疫缺陷病毒和T细胞白血病病毒1型等反转录病毒感染过程中的作用。     

维生素C对柯萨奇B_3病毒感染的心肌细胞的保护作用研究

观察维生素Ｃ对柯萨奇Ｂ３（ＣＶＢ３）病毒的复制和对病毒感染心肌细胞的影响，结果表明：维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）对ＣＶＢ３感染的心肌细胞具有保护作用，加ＶｉｔＣ培养２４ｈ后，随时间延长，保护作用越来越明显（Ｐ＜０．０５）；实验结果还表明：ＶｉｔＣ在细胞外并无直接灭活病毒作用，而是作用于细胞，影响病毒的复制，从而使心肌细胞得到保护。     

维生素C对柯萨奇B3病毒的心肌细胞的保护作用研究

观察维生素Ｃ对柯萨奇Ｂ３病毒的复制和对病毒感染心肌细胞的影响，结果表明：维生素Ｃ对ＣＶＢ３感染的心肌细胞具有保护作用，加ＶｉｔＣ培养２４ｈ后，随时间延长，保护作用越来越明显（Ｐ〈０．０５）；实验结果还表明，ＶｉｔＣ在细胞外并无直接灭活病毒作用，而是作用于细胞，影响病毒的复制，从而使心肌细胞得到保护。     

人T细胞白血病1型病毒Tax蛋白、高迁移率组蛋白1及自噬

人T细胞白血病1型病毒(HTLV-1)是引起成人T细胞白血病的病原体,癌蛋白Tax在HTLV-1病毒复制及疾病转归过程中发挥重要的促进作用;自噬是细胞质内一种溶酶体降解途径,可以发挥细胞防御作用,参与病原体的清除。高迁移率组蛋白作为细胞应激的产物,在多种疾病中出现高表达,在细胞自噬、DNA损伤修复、炎症因子释放等生理或病理过程中发挥重要作用,与病原体感染关系密切。本文就Tax、高迁移率组蛋白1及细胞自噬三者之间的相互关系做一综述。     

轮状病毒结构蛋白的研究进展

轮状病毒是引起婴幼儿急性腹泻的主要病原体,由6个结构蛋白和6个非结构蛋白组成。6个非结构蛋白仅在病毒复制过程中发挥作用,而6个结构蛋白架构了整个病毒颗粒,在病毒复制转录及细胞侵入中均发挥重要作用。现对核心蛋白VP1、VP2、VP3在病毒复制和转录中的作用、内壳蛋白VP6在免疫保护中的作用以及外壳蛋白VP4、VP7在细胞侵入及流行病学中的作用进行综述。     

重组人造血生长因子对抗白血病药物作用的影响

采用流式细胞仪及ＮＴ细胞毒检测，研究造血生长因子（ｒｈＨＧＦ）对抗白血病药物细胞毒性的影响，并探讨ＨＧＦ与化闻药物联合应用的作用机理，研究结果表明，３种抗白血病药物柔红霉素（ＤＮＲ），三尖杉酯碱（Ｈ），足叶乙甙（ＶＰ－１６）对白血病细胞敏感性存在较大差异：ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－３均能增加ＶＰ－１６，ＤＮＲ对白血病细胞的杀伤作用：ＧＭ－ＣＳＦ能提高Ｈ的细胞毒性作用，而对正常骨髓细胞，３种ｒｈＨＧＦ均不     

慢病毒介导的猪CD4启动子在白血病Jurkat细胞中的启动作用

目的:研究异种基因启动子在Jurkat细胞中调节外源基因表达的作用,为人类白血病动物模型的建立提供理论依据。方法：利用生物信息学手段预测并克隆出猪CD4基因启动子,然后利用克隆的猪CD4基因启动子构建和包装慢病毒载体。包装的病毒经过滴度检测和侵染293T细胞及Jurkat细胞后进行绿色荧光蛋白检测,比较猪CD4基因启动子与EF-1α启动子启动的外源基因表达情况。结果:成功预测出猪CD4基因启动子,成功构建慢病毒载体并包装出病毒。经过病毒滴度测定及侵染293T细胞和Jurkat细胞表明,2种启动子在细胞中的启动绿色荧光蛋白的效果相近。结论：猪CD4基因启动子在白血病 Jurkat 细胞中没有特异性启动外源基因,猪CD4基因启动子可以作为一种在Jurkat细胞中启动外源基因的不同选择。     

中药"拮新康"对白血病细胞株的作用研究

目的 :观察中药拮新康对白血病细胞株HL - 6 0、K5 6 2、Jurkat增殖的影响 ,为临床治疗白血病提供依据。方法 :采用细胞毒性实验检测拮新康对HL - 6 0、K5 6 2、Jurkat细胞增殖的影响。结果 :拮新康对三种白血病细胞株均有抑制作用 ,拮新康不同剂量对白血病细胞的抑制率有着不同程度的改变 ,随着剂量的增加 ,抑制率逐渐增强 ,且具有一定的量效关系。结论 :拮新康对白血病细胞有抑制作用 ,且具有一定量效关系 ,并有增强化疗的作用。     

柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸对白血病细胞系CYP3A5基因转录及活性的调控

目的 探讨化疗药对白血病细胞系CYP3A5基因转录及活性的调控。方法 采用RT-PCR、高压液相色谱法(HPLC)检测药物干预后白血病细胞系CYP3A5基因的转录及活性。结果 K562／A02细胞经柔红霉素作用后CYP3A5转录增强，HL-60／ADR细胞则经诱导后出现CYP3A5转录。Jurkat细胞经地塞米松作用24h后出现微弱的CYP3A5转录，48h后转录明显增强。NB4细胞经全反式维甲酸作用24～96h均诱导出现CYP3A5转录。K562细胞的CYP3A5活性显著高于HL-60、NB4和Jurkat细胞。柔红霉素作用24h后K562细胞的CYP3A5活性增高，48h后活性显著增高；而NB4和Jurkat细胞在柔红霉素作用24h后CYP3A5活性无改变。地塞米松作用Jurkat细胞、全反式维甲酸作用NB4细胞均能诱导CYP3A5活性显著增高，并呈时间依赖性。结论 柔红霉素、地塞米松、全反式维甲酸的应用可诱导某些白血病细胞株CYP3A5基因的转录及活性。     

丙戊酸诱导耐药白血病细胞凋亡及其机理的研究

目的 观察丙戊酸(VPA)对白血病细胞尤其是耐药白血病细胞的体外抗肿瘤作用,探讨细胞内谷胱甘肽(GSH)水平及抗氧化酶系活性与VPA诱导细胞凋亡之间的关系.方法 采用体外细胞培养,通过MTT细胞活力测定,Caspase-3,8,9活性检测、细胞形态学观察、细胞周期分析及Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,观察VPA对白血病细胞的抗肿瘤作用;通过检测VPA作用前后细胞内总谷胱甘肽(tGSH)与GSH水平、谷胱甘肽还原酶(GSH-Rd)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性改变,以及GSH合成酶抑制剂丁胱亚磺酰亚胺(BSO)、GSH 前体N-乙酰-半胱氨酸(NAC)和过氧化氢酶(CAT)对VPA诱导凋亡的影响,分析谷胱甘肽-氧化还原(GSH-redox)系统在VPA诱导细胞凋亡中的作用.结果 VPA对所有受试细胞株均有增殖抑制作用,其IC50接近VPA抗癫痫有效血药浓度.VPA作用后细胞内Caspase-3,8,9活性增强,细胞出现凋亡形态学改变.VPA可使阿霉素耐药株K562/AO2及糖皮质激素(Gc)耐药株Jurkat细胞周期阻滞于Go/G1期,在VPA作用下,Jurkat和K562/AO2细胞内tGSH和GSH均降低,以GSH降低为主,GSH-Rd和GSH-Px的活性亦显著降低.NAC和CAT减弱VPA诱导的凋亡,而BSO增强VPA诱导的凋亡.结论 VPA抑制耐药白血病细胞增殖、诱导细胞周期阻滞与凋亡,这些作用与细胞内GSH-Rd、GSH-Px活性降低、GSH水平下调所导致的细胞内氧化应激反应激活有关.     

Wnt5a与髓细胞白血病发生关系的研究

目的观察Wnt5a在髓细胞白血病中的表达以及外源性Wnt5a对K562细胞生长的影响。方法RT-PCR检测5例急性髓细胞白血病、6例慢性髓细胞白血病外周血或骨髓标本及白血病细胞系中Wnt5a的表达。用AdWnt5a和AdG-FP腺病毒转染CHO细胞制备的条件培养液分别处理K562细胞1～5d,采用细胞计数、台盼蓝染色、细胞形态等方法观察Wnt5a对K562细胞生长影响。结果6例慢性髓细胞白血病均未表达Wnt5a,5例急性髓细胞白血病中4例不表达或弱表达,仅1例完全缓解的病人高表达Wnt5a。K562、HL-60细胞中Wnt5a也不表达,Jurkat细胞高表达。以GFP条件培养液处理细胞为对照,Wnt5a条件培养液处理K562细胞生长明显受到抑制,但未影响细胞的存活率。与对照相比细胞形态上出现了分化的表型。结论Wnt5a在急慢性髓细胞白血病外周血或骨髓中以及髓系白血病细胞株中均表达缺失或降低,并且外源性的Wnt5a可抑制K562细胞生长并有诱导其分化的现象,提示Wnt5a的表达下调可能与髓细胞白血病的发生有关。     

邻苯二甲酸正丁酯对白血病细胞增殖与凋亡的影响

应用细胞培养、形态学观察、ＤＮＡ断裂百分率测定及ＤＮＡ片段凝胶电泳，观察了邻苯二甲酸正丁酯对ＨＬ－６０与Ｋ５６２细胞增殖与凋亡的影响。结果表明，邻苯二甲酸正丁酯在抑制白血病细胞增殖的同时，也诱导其凋亡，但对Ｋ５６２细胞作用相对较弱。     

中药“拮新康”对白血病细胞凋亡的影响

为探讨中药“拮新康”对白血病细胞凋亡的影响。采用形态学及ＤＮＡ凝胶电泳方法观察其对白血病细胞株ＨＬ－６０及Ｋ５６２细胞凋亡的影响,结果示：①电镜观察可见凋亡细胞和凋亡小体,ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的梯形带改变;②一定浓度范围内的拮新康经适当作用时间后可诱导白血病ＨＬ－６０,Ｋ５６２细胞凋亡,但诱导Ｋ５６２细胞凋亡所需时间较ＨＬ－６０长且剂量较大。提示拮新康可诱导白血病细胞凋亡,与剂量和时间有一定的关     

Effect of WT1 gene expression on cell growth and proliferation in myeloid leukemia cell lines

Ｗｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒ（ＷＴ１）ｇｅｎｅｉｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎＷｉｌｍｓ’ｔｕｍｏｒｐａｔｉｅｎｔｓＩｔｉｓｌｏｃａｔｅｄｏｎｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ１１ｐ１３１　ＴｈｅｌｅｎｇｔｈｏｆＷＴ１ｇｅｎｅｉｓａｂｏｕｔ５０ＫｂＴｈｅｒｅａｒｅ２ｓｐｌｉｃｉｎｇｅｘｏｎｓｏｕｔｏｆｉｔｓ１０ｅｘｏｎｓ：ｅｘｏｎ５（ｓｐｌｉｃｅⅠ）ａｎｄｅｘｏｎ９（ｓｐｌｉｃｅⅡ）Ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｃｅｏｆｔｗｏａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｓｐｌｉｃｅｓｒｅｓｕｌｔｓｉｎｆｏ…     

原位逆转录PCR检测千细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的探索应用原位逆转录PCR(RT-PCR)检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性.方法在普通的PE480型PCR仪进行原位RT-PCR,检测干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达.结果直接法和间接法原位RT-PCR均可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达,而常规的原位杂交则为阴性.结论(1)干细胞因子在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达,但是表达量较低,应用原位RT-PCR可进行检测;(2)在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR.     

原位逆转录PCR检测干细胞因子mRNA在白血病细胞的表达

目的：探索应用原位逆转录PCR（RT－PCR）检测低拷贝的干细胞因子mRNA在白血病细胞表达的可行性。方法：在普通的PE480型PCR仪进行原位RT－PCR，检测干细胞因子mRNA在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞的表达。结果：直接法和间接法原位RT－PCR法可以检测到干细胞因子mRNA在K562、HL-60和慢性粒细胞性白血病细胞表达，而常规的原位杂交则为阴性。结论：（1）干细胞因子在K562、HL－60和慢性粒细胞性白血病细胞均有表达，但是表达量较低，应用原位RT－PCR可进行检测；（2）在普通的PE480型PCR仪上可以进行原位PCR。     

白血病细胞系中WT1基因启动子区域DNA甲基化的研究

目的应用基于聚合酶链反应(PCR)的实验方法,研究白血病细胞系中WT1基因启动子区域的DNA甲基化水平及其与WT1基因表达的关系.方法采用RT-PCR技术及甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术,检测HL-60、Jurkat及KG-1等白血病细胞系中WT1基因mRNA表达水平及其启动子区域的DNA甲基化状态;以5-杂氮脱氧胞嘧啶(5-aza-CdR)对启动子区域DNA高甲基化的U937细胞系进行去甲基化处理后,观察WT1基因表达水平的改变.结果 HL-60、K562、KG-1、NB4及SHI-1细胞系中WT1水平高表达,而Jurkat和U937细胞表达水平极低,同时检测到这两个细胞系存在WT1基因启动子区域DNA高甲基化;经去甲基化处理后,U937细胞系的WT1基因表达水平较未处理者升高.结论 WT1基因启动子区域DNA高甲基化是抑制其表达的机制之一.