VEGF受体KDR克隆及其对内皮细胞增殖和血管新生的影响

目的：克隆VEGF受体KDR基因膜外5-7区,探讨其生物学活性。方法：提取脐静脉血管内皮细胞总RNA,克隆KDR基因膜外部分5-7区,并使之在QIA表达系统进行表达;镍柱亲和层析纯化、复性、生物学活性鉴定。结果：该系统能表达KDR基因片段,表达量约占菌体蛋白总量的5%左右。经复性,可溶性蛋白具有与VEGF特异结合功能,并能抑制VEGF促使脐静脉内皮细胞增殖和鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的作用。结论：KDR基因片段能在QIA表达系统中得到表达,复性后表达蛋白具有与VEGF结合的生物学功能。     

人血管抑制因子Vasostatin短片段（120 180 aa）的克隆、表达及功能研究

目的：利用基因工程技术，克隆并表达人血管抑制因子Vasostatin120180 aa功能区片段，探讨其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管抑制的作用。方法：采用PCR技术扩增人血管抑制因子Vasostatin120180 aa功能区基因，并利用pQE30原核表达系统诱导表达Vasostatin120180aa，经镍金属螯合层析法纯化，通过鸡胚绒毛尿囊膜实验验证其抑制新生血管生成的作用。结果：PCR扩增出了长度为180 bp的Vasostatin120180 aa功能区基因，后经pQE30原核表达系统表达并纯化出Vasostatin120180 aa，SDSPAGE显现一条约8 kD的阳性条带，Vasostatin120180aa可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成。结论：原核表达的Vasostatin120180 aa功能区片段具有生物学活性，可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成，在一定范围内呈量效依赖性。     

人血管抑制因子Vasostatin短片段(120-180 aa)的克隆、表达及功能研究

目的:利用基因工程技术,克隆并表达人血管抑制因子Vasostatin120-180aa功能区片段,探讨其对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管抑制的作用.方法:采用PCR技术扩增人血管抑制因子Vasostatin120-180aa功能区基因,并利用pQE30原核表达系统诱导表达Vasostatin120-180aa,经镍金属螯合层析法纯化,通过鸡胚绒毛尿囊膜实验验证其抑制新生血管生成的作用.结果:PCR扩增出了长度为180 bp的Vasostatin120-180aa功能区基因,后经pQE30原核表达系统表达并纯化出Vasostatin120-180aa,SDS-PAGE显现一条约8 kD的阳性条带,Vasostatin120-180aa可显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成.结论:原核表达的Vasosta-tin120-180aa功能区片段具有生物学活性,可明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成,在一定范围内呈量效依赖性.     

重组人canstatin的克隆、表达及其活性鉴定

目的: 克隆并表达canstatin基因，初步检测其抑制血管生成的活性。方法: 采用RTPCR方法从人胚肝组织中钓取canstatin cDNA，克隆入pMD18T载体中，并测序鉴定。在QIA表达系统中表达，Ni柱亲和层析纯化。进行生物学活性鉴定。结果: 经序列分析所获684 bp人canstatin基因与报道一致，重组进pQE30表达载体，IPTG诱导表达并纯化成功，表达产物能明显抑制血管生成。结论: 成功构建人canstatin cDNA克隆和表达载体并在大肠杆菌M15中高效表达。纯化回收产物在鸡胚绒毛尿囊膜（chorioallantoic membrane,CAM）实验中具有明显抑制血管生成活性     

人骨肉瘤细胞系OS—732 CAM移植瘤中VEGF、bFGF的表达及意义

目的：研究人骨肉瘤细胞系OS－732血管生成相关作用。方法：应用鸡胚绒毛尿囊膜模型,通过解剖显微镜及透射电镜观察该细胞系促血管生成特点,并以免疫组化方法检测人骨肉瘤细胞系OS－732鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF),碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达。结果：该细胞系具较强的诱导血管生成能力,解剖显微镜下可见血管辐辏现象,透射电镜下可见新生血管壁由单层内皮细胞构成,内皮细胞裂隙增宽,基底膜不完整,缺乏平滑肌成分,移植瘤组织发VEGF和bFGF均呈阳性表达,其中VEGF呈高表达。结论：肿瘤诱导的新生血管在病理,生理及形态功能方面都具有特征性,其诱导血管生成过程中可能有多种血管生长因子的共同参与,针对血管生长因子为靶点进行抗血管生成治疗对改善骨肉瘤预后可能具有重要意义。     

血管生长抑制因子angiostatin在昆虫细胞中的表达及活性研究

背景与目的:抑制新生血管的形成,有助于抑制肿瘤的生长,减少和预防肿瘤转移的发生。血管抑素(angiostatin)是一种重要的内源性新生血管生成抑制剂,对血管内皮细胞增殖有较强的抑制作用。为获得具有高活性的Angiostatin表达,本研究通过杆状病毒表达系统表达重组的angiostatin,分析其在昆虫细胞中表达和生物活性。方法:用带有angiostatin的杆状病毒转移载体pBlueBacHis2B和病毒DNA共同转染Sf9细胞,构建重组病毒,蚀斑实验筛选,PCR分析确定后扩增产生大量高滴度的病毒贮存液;用SDS-PAGE电泳和Westernblot对感染不同时间后分泌的重组蛋白做时间表达分析;用ProBondTM纯化系统对表达的重组angiostatin进行纯化,分光光度计确定蛋白含量,SDS-PAGE电泳确定蛋白纯度;采用MTT法测定重组蛋白angiostatin对原代培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制作用而后通过鸡胚尿囊膜实验进一步证实其抗血管形成作用。结果:成功构建了滴度为2×108pfu/ml的angiostatin重组杆状病毒,并在昆虫细胞Sf9中高效表达了分子量为53ku的angiostatin重组蛋白,纯度约为90%,重组angiostatin蛋白不仅在体外显著抑制内皮细胞的生长(IC50为2.3μg/ml),而且显著抑制鸡胚尿囊膜血管的生长。结论:此系统可制备高滴度angiostatin重组杆状病毒贮存液,并在Sf9昆虫细胞中高效表达该重组蛋白,经在体和离体细胞学实验验证其对内皮细胞的增殖具有抑制作用。     

血管发生抑制因子 restin的克隆表达及其抗血管活性的初步研究

目的：克隆人血管发生抑制因子restin(hRs)，在E.coli中融合表达，并测定其抗血管活性。方法：用RT-PCR法从中国人胎盘组织中扩增hRs基因，重组人pGEM-T载体中并测定鉴定，构建原核表达载体pGEX-hRS，表达融合蛋白GST-hRS。融合蛋白经亲和纯化及凝血酶切后，采用鸡胚绒毛膜尿囊膜试验检测其抗血管生成活性。结果：RT-PCR产物为564bp，测序结果与Genbank中胶原XV(COL15A1)的C端序列一致，但在21位（TCT→TCG）引起丝氨酸的同义突变，82位（ACA→TCA）引起丝氨酸突变为苏氨酸。诱导表达的人GST-hRS融合蛋白经凝血酶切后，分子量为20kD，具有抗血管生成活性。结论：hRS的成功克隆、表达为抗血管生成治疗实体瘤的研究奠定了实验基础 。     

和厚朴酚抗血管生成作用的实验研究

目的：本研究通过检测和厚朴酚在体内对鸡胚尿囊膜（chicken chorilallantoic membranes，CAM）血管生成的抑制作用及体外对肿瘤血管生成的影响，探讨和厚朴酚的抗血管生成作用及其初步机制。方法：（1）用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测和厚朴酚对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）、人成纤维细胞及人结肠癌RKO细胞增殖的抑制作用；（2）采用鸡胚绒毛尿囊膜模型，观测和厚朴酚对CAM新生血管生成的抑制作用；（3）逆转录聚合酶链反应（RT-RCR）方法检测和厚朴酚对RKO细胞血管内皮生长因子A（VEGF-A）mRNA表达及细胞培养上清液VEGF蛋白分泌的影响。结果：和厚朴酚对血管内皮细胞具有优先抑制作用，对HUVEC的半数抑制剂量（inhibitory concentration 50％，IC50）为14．5μmol/L，而对原代培养的人成纤维细胞的IC50高达150μmol/L，对人结肠癌RKO细胞的IC50为42μmol/L；和厚朴酚0．1μg／只和0．2μg／只剂量时显著抑制CAM新生血管形成，抑制率分别为58％和86％；和厚朴酚在10μmol/L和20μmol/L剂量时显著抑制RKO细胞的VEGF-A mRNA表达及细胞培养上清液中VEGF蛋白的分泌，具有显著性差异。结论：和厚朴酚在非凋亡剂量时具有抗血管形成作用，其机制与抑制血管内皮细胞增殖以及抑制肿瘤细胞表达VEGF有关。     

人血管抑素克隆表达及抑制血管生成的研究

目的　研究并获得重组人血管抑素 (angiostatin) ,探讨其临床应用价值。方法　采用逆转录 -聚合酶链式反应 (RT PCR )方法 ,从人胚胎肝细胞中扩增出人全长血管抑素cDNA片段。用原核细胞表达载体构建 pBV 2 2 0 /angiostatin重组质粒 ,并将其转化大肠杆菌DH 5α进行表达 ,初步纯化。应用鸡胚尿囊膜血管生成实验及脐静脉内皮细胞增殖实验检测其活性。结果　经SDS PAGE分析 ,表达产物相对分子量约 3 8kD ,薄层扫描显示表达产物可达细菌总蛋白的 3 0 %。活性实验显示 ,重组蛋白能够抑制血管形成。结论　重组人Angiostatin在大肠杆菌中实现高效表达 ,并具有很好的生物学活性     

小鼠内皮抑素基因的克隆、表达及其抑瘤效应研究

克隆小鼠内皮抑素（ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ）基因,检测其表达蛋白的生物学活性,应用该蛋白治疗大鼠Ｃ６脑胶质瘤。方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ法,从小鼠肝组织克隆ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ基因,重组入ｐＵＣ１９,测序后构建非融合表达载体ｐＢＶ２２０－ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ,使其在ＤＨ５α内经温度诱导表达,纯经ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ蛋白并用鸡胚绒毛膜尿囊膜实验和内皮细胞抑制实验检测其活性,经荷Ｃ６胶质瘤大鼠皮下注射该蛋白,     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。