用抗溴脱氧尿苷单克隆抗体检测小鼠各种器官内S期细胞分布的研究

用溴脱氧尿苷（ＢｒｄＵ）腹腔注入正常小鼠（０．１５ｍｇ／ｇ体重），１ｈ后处死，取出多种器官的组织用Ｃａｒｎｏｙ液固定，石蜡包埋切片。用免疫组织化学技术，以抗－ＢｒｄＵ的单克隆抗体检测不同器官内被ＢｒｄＵ标记的Ｓ期细胞。结果证明，ＢｒｄＵ阳性细胞主要分布在细胞增殖活跃的组织，如舌与食管的基底层细胞、胃小凹处的颈粘液细胞，小、大肠的肠腺细胞和睾丸曲细精管内的精原细胞等。ＢｒｄＵ阳性细胞在淋巴器官内主要分布于胸腺皮质、脾脏的动脉周围淋巴鞘和脾小结的生发中心以及淋巴结的生发中心等。高度分化的细胞如舌与食管上皮的角化层或肝、肾等处的细胞呈阴性。     

小鼠胸腺基质细胞单克隆抗体PF18—3的特性研究

用免疫组织化学及流式细胞计(FACS)对抗小鼠胸腺基质细胞(Thymic stromal cells,TSC)的单克隆抗体PF18-3进行了系统研究。免疫组织化学结果:PF18-3与小鼠胸腺髓质TSC和皮质胸腺细胞呈阳性反应;FACS分析显示,在活细胞染色时,PF18-3不能与膜表面分子结合,经甲醛固定丙酮增加细胞膜通透性后才能使各免疫细胞亚群呈阳性反应,固定后细胞染色结果为:胸腺细胞中,PF18-3~ 细胞为84.4％;在分离的CD4~-8~-、CD4~ 8~-、CD4~-8~ 胸腺细胞中,PF18-3~ 细胞分别为2％,69.3％,62％;在脾、颌下淋巴结、外周血淋巴细胞中,PF18-3~ 细胞分别为37.9％,51.5％,26.7％;PF18-3~ CD3~ 双阳性细胞在总T淋巴细胞中分别占54.6％,59.8％,20.2％;PF18-3~ B220~ 细胞在总B细胞中分别占35.1％,38.1％,37.6％;PF18-3对大部分巨噬细胞(71.6％)和极少数粒细胞(6.1％)也呈阳性反应。以上结果说明PF18-3识别的抗原主要分布于胸腺基质细胞膜表面和胸腺及外周免疫细胞的胞浆。提示它可能介导了TSC诱导的T细胞发育;可能也参与了免疫反应中不同种类细胞间的相互作用。     

抗同系小鼠白血病细胞单克隆抗体的研究

用可移植性小鼠淋巴细胞性白血病腹水瘤细胞克隆株(LAC-1)细胞免疫同系小鼠,常规方法融合、筛选获得四株分泌特异抗体杂交瘤株。所得McAb能特异地与LAC—1细胞结合,但不能与正常或经ConA转化的小鼠胸腺细胞以及其它多种小鼠瘤细胞起结合反应。ELISA检测显示,McAb与LAC—1细胞培养上清液中提取的病毒作用时未发现阳性反应。细胞介导的细胞毒实验表明,将McAb预先与LAC—1细胞孵育后能显著抑制T杀伤细胞对靶细胞的特异性杀伤作用,免疫印迹试验分析发现McAb识别的LAC—1细胞靶抗原分子量为41KD。     

用细胞-ELISA法检测抗CEA抗体

目的以高表达CEA的人结肠癌细胞系LoVo作为抗原,建立检测抗CEA抗体的细胞-ELISA法.方法将1.0×106/mL浓度200μL的LoVo加入培养板培养24h,用0.025%戊二醛固定,加入经CEA基因疫苗免疫小鼠血清,亲和素-生物素复合物,酶标仪检测OD值.结果建立了ABGC-CELISA检测抗CEA抗体,2套基因疫苗诱导抗CEA抗体效价不同.结论ABC-CELISA法简便,敏感度高,为研究CEA体液免疫提供了方法.     

钙调素拮抗剂对HeLa细胞S期进程的影响

目的　探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）对ＨｅＬａ细胞Ｓ期进程的影响及其分子机理。　方法　通过ＴｄＲ双阻断法获得同步化的Ｓ期ＨｅＬａ细胞,以３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和Ｗｅｓｔｅｒｎ 技术分别观察了ＴＦＰ对ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程和胸苷激酶（ｔｈｙｍ ｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ,ＴＫ）活性及细胞周期引擎分子ＣｙｃｌｉｎＡ、Ｃｄｋ２ 和细胞周期调节蛋白ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ＰＣＮＡ、ｐ２１ 蛋白表达水平的影响。　结果　ＴＦＰ（２０μｍ ｏｌ／Ｌ）能使３ Ｈ－ＴｄＲ的掺入峰值后移,并抑制了Ｃｙ－ｃｌｉｎＡ、ＰＣＮＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ的表达和提高了ｐ２１ 蛋白的水平,但对Ｃｄｋ２的表达几乎无影响。　结论　ＣａＭ 除了能通过影响ＰＣＮＡ的水平直接作用于ＤＮＡ 合成,同时又可通过作用于ＣｙｃｌｉｎＡ、ｐ８０ｃｄｃ２５Ｂ、ｐ２１ 等周期引擎分子和调控因子水平正调ＨｅＬａ 细胞Ｓ期进程。     

HEP-2细胞A蛋白酶免疫法检测抗核抗体

<正> 抗核抗体(ANA)对系统性红斑狼疮(SLE)和硬皮病(SD)等自身免疫性结缔组织病的诊断、鉴别诊断、预后估计等都有十分重要的意义。目前测定方法甚多,采用的核基质也各不相同,特异性、敏感性差异甚大。本文报道以HEP-2细胞为基质的A蛋白酶免疫法检测结果及其与间接荧光法(IF)检测结果的比较。     

用细胞-ELISA法检测抗P185抗体

以高表达P185蛋白的人乳腺癌细胞（SKBR-3）作为抗原,用固相-ELISA法检测抗P185单抗和免疫小鼠抗血清。比较了不同方法处理的固相细胞和待测血清经低表达P185的人乳腺癌细胞（MCF-7）吸收与未吸收对实验的影响。结果显示:待测样本用MCF-7预吸收后及用1％乙醛处理固相细胞组所得结果较理想。     

前列腺上皮内瘤基底细胞变化的形态学观察

目的 探讨前列腺上皮内瘤基底细胞的病变特点,为前列腺良恶性上皮病变的诊断及鉴别诊断提供依据.方法 收集28例前列腺(高级别)上皮内瘤标本,应用光镜、免疫组化EliVision Plus二步法,选择34βE12、p63、P504S、PSA、PSAP抗体检测,观察前列腺上皮内瘤中基底细胞的缺失情况.结果 HE切片中28例前列腺上皮内瘤的基底细胞变化难以确定,但免疫组化显示6例前列腺上皮内瘤病灶周围基底细胞几乎完全缺失,14例基底细胞断续存在,8例病灶周围基底细胞完整.6例基底细胞几乎完全缺失病例P504S阴性.肿瘤细胞P504S阳性4例,均为基底细胞断续存在病例.结论 前列腺上皮内瘤中的基底细胞尽管多数较完整存在,但也存在一定比例的缺失,提示在日益增多的前列腺穿刺标本中,基底细胞完整并非是前列腺上皮内瘤诊断的最重要指标.     

用BA—ELISA斑点法检测痢疾杆菌免疫小鼠GALT中的特异性抗体分…

改进的ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法使免疫酶斑更为清晰，保存时间延，用此法检测了痢杆杆菌福氏２ａ经口及腹腔免疫后，小鼠伊尔氏（ＰＰ）淋巴结，肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）及脾脏（ＳＰＬ）中特异性ＩｇＡ，ＩｇＧ，ＩｇＭ抗体分泌细胞（ＡｎｔｉｂｏｄｙＳｅｃｒｅｔｉｎｇＣｅｌｌ，ＡＳＣ）的动态变化，得到有规律的结果，两种免疫途径均能在ＰＰ及ＭＬＮ中诱导出３类特异ＡＳＣ的显著升高，但口服导致的升高其持续时间较腹腔途径为短     

抗激活小鼠T细胞抗原单克隆抗体(2H3)的免疫生物学特性分析

2H3为一株抗激活小鼠T细胞表面抗原的单克隆抗体。间接ELISA法所进行的免疫球蛋白属性分析实验表明:2H3属于IgG_1型抗体。同位素H~3-TdR掺入实验表明:2H3能以剂量依赖的方式明显抑制小鼠激活T细胞及CTLL-2细胞依赖IL-2的增殖;能够明显抑制ConA诱导小鼠脾细胞转化早期(12h内)的非特异性淋巴细胞增殖反应。对不同品系小鼠间的双向混合淋巴细胞反应(MLR),2H3也表现出明显的抑制作用,且这种抑制作用具有剂量相关性和无H-2限制性。实验结果提示:2H3具有抗小鼠细胞膜表面IL-2R单克隆抗体的免疫生物学特征。     

肾怡对狼疮小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用

目的：探讨复方中药肾怡对MRL/lpr小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用。方法：将MRL/lpr狼疮小鼠随机分成对照组和中药治疗组，从12周观察到28周后于实验终点处死小鼠。通过流式细胞术分别检测胸腺和脾脏中CD4^ CD30^-(Th1)、CD4^ CD30^ (Th2)淋巴细胞所占百分比，进一步对脾细胞进行CD^ T淋巴细胞分选，并于体外利用PHA—P进行刺激后，通过RT—PCR方法检测IL-4(Th2细胞因子)和IFN—γ(Th1细胞因子)的表达丰度，比较二者的比值在对照组和中药治疗组之间的差别。结果：胸腺中几乎检测不到CD4^ CD30^ T淋巴细胞；脾脏中虽可检测到CD4^ CD30^ T淋巴细胞，但在未加入PHA-P的条件下，CD4^ CD30^ T淋巴细胞在对照组和中药治疗组中所占的比例没有显著差异；经PHAP刺激后对照组和治疗组脾细胞中CD4^ CD30^ T淋巴细胞所占百分比均明显增加，但治疗组中CD4^ CD30^ T淋巴细胞所占百分比的增加程度明显低于对照组；将脾细胞中CD4^ T淋巴细胞分选出来后进行RT-PCR检测，结果显示中药治疗组CD^ T淋巴细胞所表达IL-4／IFN—γ(Th2／Th1)比值明显低于对照组。结论：复方中药肾怡能够纠正MRL/lpr狼疮小鼠脾脏中CD^ T淋巴细胞在PHA-P刺激的条件下朝向Th2过度分化的倾向性。     

用BA－ELISA斑点法检测痢疾杆菌免疫小鼠GALT中的特异性抗体分泌细胞（ASC）

改进的ＢＡ－ＥＬＩＳＰＯＴ法使免疫酶斑更为清晰，保存时间延长。用此法检测了痢疾杆菌福氏２ａ经口及腹腔免疫后，小鼠派伊尔氏（ＰＰ）淋巴结、肠系膜淋巴结（ＭＬＮ）及脾脏（ＳＰＬ）中特异性ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ抗体分泌细胞（ＡｎｔｉｂｏｄｙＳｅｃｒｅｔｉｎｇｃｅｌｌ，ＡＳＣ）的动态变化，得到有规律的结果：两种免疫途径均能在ＰＰ及ＭＬＮ中诱导出３类特异ＡＳＣ的显著升高，但口服导致的升高其持续时间较腹腔途径为短。此外，腹腔途径还能诱导ＳＰＬ中３种ＡＳＣ升高。     

小鼠2—细胞,4—细胞胚胎G1期检测及同步化的研究

目的 研究小鼠２－细胞、４－细胞胚胎同步化的方法,并检测其Ｇ１期的持续时间。方法 先用低温仰制和噻胺酯哒唑阻断的方法分别将小鼠２－细胞和４－细胞胚胎同步化于Ｇ１期,然后利用放射自显影技术检测胚胎ＤＮＡ的合成。结果 （１）小鼠２－细胞胚胎Ｇ１期的持续时间短于３ｈ。（２）噻胺酯哒唑对胚胎细胞的抑制作用及对胚胎发育的影响有浓度依赖性。（３）小鼠４－细胞胚胎的Ｇ１期约为３～４ｈ。结论 小鼠早期胚胎细胞周期的Ｇ１期持续时间都很短,利用噻胺酯哒唑阻断和低温控制的方法能够得到大量同步于Ｇ１期的胚胎细胞。     

用显示非特异性酯酶的半透膜技术对小鼠胸腺基质细胞的观察

成年BALB/c小鼠胸腺,新鲜组织恒冷箱切片,用半透膜技术显示非特异性酯酶。由于该技术能保存全部酶活性,故可显示各类基质细胞及其分布。上皮网状细胞、胸腺哺育细胞及交错突细胞的酶活性呈弱阳性,巨噬细胞呈强阳性。胸腺T细胞呈微弱阳性或阴性。皮质的上皮网状细胞形成海绵状支架;髓质上皮网状细胞可分为低酶活性和高酶活性细胞两种类型,后者可呈灶状分布。皮、髓质内均可见巨噬细胞,皮-髓交界区尤多,并可见与胸腺T细胞形成玫瑰花环状。同时用大鼠抗小鼠基质细胞的单克隆抗体进行了免疫组织化学观察。本文结果有助于在光镜下研究胸腺微环境的结构和功能。     

吸入高浓度氢气增强四氯化碳损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶的表达

目的探讨吸入3%氢气对四氯化碳(CCl4)损伤性大鼠生精细胞核糖体蛋白S6激酶(p70s6k)表达及其增殖功能的影响。方法将18只健康雄性SD大鼠随机分成对照组、CCl4组和氢气治疗组。对照组每周一、四背部皮下注射橄榄油(0.12ml/100g),CCl4组和氢气组每周一、周四皮下注射体积分数60%的CCl4-橄榄油(0.3ml/100g),连续4周。氢气组自实验的第22天吸入3%氢气,1h/d,连续7d。取右侧睾丸和附睾,行石蜡包埋切片,苏木素伊红染色和免疫组织化学染色。取左侧睾丸组织,行Western blotting检测。结果对照组睾丸生精小管内可见多层生精细胞,排列有续,结构完整。CCl4组睾丸生精小管细胞层数减少,结构紊乱,附睾管柱状上皮变薄;氢气组生精细胞数量和附睾管高柱状上皮细胞明显改善。CCl4组大鼠附睾精子密度较对照组降低,氢气组的精子密度明显高于CCl4组(t=4.91,P0.05)。免疫组织化学染色显示,氢气组生精细胞质中p70s6k(t=7.63,P0.05)和PCNA(t=20.08,P0.05)的表达明显强于CCl4组。Western blotting检测显示,氢气组睾丸组织中p70s6k的表达与CCl4组相比明显增强(t=3.64,P0.05)。结论吸入高浓度氢气能明显增强CCl4损伤性大鼠睾丸生精细胞p70s6k的表达,改善CCl4损伤引起的的生精细胞的增殖功能。     

鸡肠神经胶质细胞超微结构特征及钙结合蛋白S100β在小肠中的分布

目的观察10只健康黄羽肉鸡肠神经胶质细胞(EGCs)结构特征及钙结合蛋白S100β(S100β)蛋白在鸡小肠的分布特点,为探讨鸡肠神经胶质细胞的形态学特征提供实验依据。方法采用透射电子显微镜技术观察神经胶质细胞的超微结构特点,免疫组织化学SABC-AP法研究S100β蛋白的分布特征。结果电子显微镜下观察表明,鸡肠神经胶质细胞在小肠各段均呈星形,形态上属于星形胶质细胞,细胞核不规则,胞质中分布有大小不一的圆形或椭圆形无髓神经纤维。免疫组织化学显示,S100β在鸡小肠各段黏膜上皮细胞、肠腺表达较强,其中上皮细胞基膜和肠腺上皮细胞顶端为强阳性,固有膜为阴性,在黏膜下神经丛和肌间神经丛均呈强阳性表达。结论鸡肠神经胶质细胞属于星形胶质细胞,其在小肠的分布较为广泛,除具有营养、保护神经节细胞的功能外,可能还参与调节肠腺细胞分泌及黏膜免疫屏障功能。     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。     

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用

目的 探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法 收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting 和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用pEGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA 转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-BeWo 共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting 和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF)-α及白细胞介素（IL)-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-BeWo 共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。 结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。