p27kip-1和细胞凋亡的研究进展

CDK抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitors，CDKI) p27Kip-1除了参与细胞周期调节，广泛抑制多种细胞周期蛋白CDK复合物的活性外，它还参与细胞的凋亡、分化、细胞细胞间黏附等多种生物功能的调节作用。本文对p27Kip-1和凋亡调节的研究进展作一综述。     

P27kip1在恶性肿瘤中的调控及其作用

P27kip1蛋白属于细胞周期调控蛋白Cip/Kip家族,是细胞周期负性调控因子,在人体多种恶性肿瘤细胞增值、分化及细胞凋亡中起着非常重要的作用,因此与p27kip1蛋白相关的研究成为近年研究热点,目前认为,p27kip1基因是一种抑癌基因,细胞内的许多蛋白及因子可以在各种水平参与p27kip1基因表达的调控.现就p27kip1的生物学功能及在恶性肿瘤中的调控及其作用研究进展进行综述.     

Skp2和p27kip1在浆液性卵巢肿瘤组织中的表达与临床意义

p27基因是近年来发现的一种抑癌基因,目前认为其编码的产物p27kip1蛋白为一种细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂,可以通过多种方式参与细胞周期调控,阻止细胞从G1期到S期的转变,最终抑制细胞分裂、增殖,促进细胞分化、凋亡.Skp2作为泛素蛋白酶体途径的底物识别序列,因能泛素化降解p27kip1而与肿瘤关系密切.二者的异常表达与肿瘤组织发生发展以及生物学行为有着密切的关系,是判断肿瘤恶性程度、转移与预后的重要参考指标.     

EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞周期调节蛋白p27 mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0/G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期调节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

肿瘤标志物JAB1、Akt和p27kip1的表达及对肿瘤细胞增殖的影响

细胞周期调控异常是肿瘤发生发展的重要机制之一,很多肿瘤标志物的异常表达均能影响细胞的正常增殖从而导致肿瘤的发生。C-JUN激活区结合蛋白1（JAB1）通过与多种蛋白相互作用,参与多种信号途径,在人多种癌症中JAB1表达增高,同时介导p27kip1出核转运及泛素化降解从而降低其在胞浆中的水平,促进肿瘤细胞增殖;Akt在细胞浆的表达增高,使p27kip1磷酸化并抑制p27kip1进入细胞核发挥其生物学功能,Akt也可能参与p27kip1的出核转运及蛋白降解,促进p27kip1降解,进而影响细胞周期的调控,促进肿瘤细胞增殖;抑癌基因p27kip1在肿瘤中表达降低,促使肿瘤细胞增殖;在JAB1介导的p27kip1出核转运中可能有Akt的参与;在HER2介导的PI3K/Akt/p27通路中又有JAB1的参与,三者相互作用形成复杂的网络,共同调节信号转导,促进肿瘤的发生发展。     

EGCG对胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用及机制

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCS）对人胰腺癌细胞株PANC-1生长的影响及可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理PANC-1细胞,以四唑氮蓝还原法（MTT）观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术（FCM）检测细胞周期变化情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测细胞周期调节蛋白p27mRNA表达水平的变化;Western-Blot检测p27蛋白水平的表达。结果EGCG处理后PANC-1细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性;G0／G1期的细胞比例明显增高,S期的细胞比例则明显降低;细胞周期调节蛋白p27的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论EGCG可以明显抑制胰腺癌PANC-1细胞的生长;其可能机制为上调细胞周期词节蛋白p27的表达水平,导致细胞周期阻滞在G0／01期,抑制细胞周期从G1期向S期的转化,最终影响细胞增殖。     

对肿瘤细胞中p27kip1蛋白功能的再认识

p27kip1(以下简称p27)蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点.传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子(cyclin dependent kinase inhibitor,CDKI),参与细胞周期的负性调控,在多种肿瘤细胞内存在p27蛋白低水平表达,且错位分布于细胞核外.     

RNA特异性干扰bcr-abl融合基因联合p27基因克隆对K562细胞的影响

本研究旨在探讨RNA干扰抑制慢性髓系白血病bcr-abl融合基因表达,以及RNAi和p27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。以细胞系K562为研究对象,合成并转染针对K562细胞bcr-abl融合基因融合位点的21nt siRNA,应用Northern blot法检测bcr-abl融合基因的表达,Western blot法检测BCR-ABL蛋白及凋亡相关蛋白BCL-xL的表达;同时应用RT-PCR扩增p27基因,构建P27-pcDNA3.1载体,转染p27基因入缺失p27基因的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;经Western blot证实有P27蛋白表达后,联合应用RNA干扰及p27基因克隆,通过MTT法及流式细胞仪等检测联合作用后对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。结果表明,RNA干扰组K562细胞bcr-abl融合基因的表达水平明显下降,转染24小时时有18.4%的K562细胞发生凋亡,细胞凋亡相关蛋白BCL-xL的表达水平下调,出现明显的G1期阻滞;表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株。流式细胞仪检测显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;RNA干扰与p27基因克隆联合作用于K562细胞后,凋亡细胞比例明显上升(33.4%)。MTT法显示,细胞存活率较单纯p27-K562细胞组及RNA干扰-K562细胞组均明显下降(p0.01和p0.05)。结论:特异性siRNA分子可以抑制bcr-abl融合基因的表达,诱导K562细胞分化或凋亡。RNA干扰联合p27基因克隆对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。     

奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制

目的研究奥氮平对肺癌细胞A549增殖凋亡的影响及机制。方法用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平处理A549细胞,MTT测定细胞增殖情况,细胞克隆实验检测细胞克隆形成能力,计算半数抑制浓度。用半数抑制浓度的奥氮平处理A549细胞,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡情况,Western blot测定细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果50μM、100μM、150μM、200μM的奥氮平作用后的A549细胞增殖能力和克隆形成能力均明显低于0μM作用组(P0.05)。A549细胞经半数抑制浓度的奥氮平作用后,细胞G0/G1期比率升高,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、p27蛋白水平升高,CDK4、Cyclin D1蛋白水平降低,与未经奥氮平处理的细胞比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论奥氮平可以在体外抑制肺癌A549细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,作用机制与下调CDK4、Cyclin D1蛋白,促进Cleaved Caspase-3、p27蛋白表达有关。     

RASSF1基因与肿瘤的关系

RASSF1基因位于染色体3p21.3,其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因,在多种实体肿瘤中表达异常,参与细胞周期和细胞凋亡的调控,并抑制细胞生长,但作用机理尚未阐明。     

ASPP家族及其与p53相互作用的研究进展

p53是一个肿瘤抑制蛋白,它通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞,同时还会因为DNA的损伤增多,诱导细胞发生细胞凋亡。p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚,而最近发现的 p53凋亡刺激蛋白 ASPP蛋白家族对 p53 诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。ASPP蛋白家族与 p53 的作用主要是特异性增强 p53 的细胞凋亡功能,而对 p53的细胞生长停滞功能则没有作用。ASPP蛋白家族增强 p53 的细胞凋亡功能是通过增强 p53的促凋亡基因启动子与DNA的结合而促进细胞凋亡,现就此作一综述。     

基因FoxM1介导DFOG抑制人乳腺癌细胞生长和诱导凋亡的研究

目的探讨7-二氟甲氧基-5,4′-二-正辛烷氧基金雀异黄素(DFOG)对人乳腺癌细胞生长、凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞。平皿集落形成法测定DFOG对乳腺癌细胞集落形成率的影响;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及分析细胞周期分布;Western blotting分析转录因子FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin、p27kip1表达。结果 DFOG以浓度依赖的方式抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,并且伴随G2/M期细胞周期阻滞。DFOG能下调FoxM1及其下游蛋白CDK1、cyclin B、survivin表达,上调p27kip1蛋白表达。通过siRNA干扰技术下调FoxM1表达能增强DFOG对乳腺癌细胞的诱导凋亡作用。结论 DFOG显著抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-453细胞生长和诱导凋亡,下调FoxM1表达可能是其作用机制之一。     

超声联合微泡抑制血管平滑肌细胞增殖机制的研究

目的观察超声联合微泡对血管平滑肌细胞(VSMCs)周期分布及细胞周期调节蛋白激酶(CDK2)和抑制物p27表达的影响,探讨超声联合微泡抑制VSMCs增殖的作用机制。方法体外培养的VSMCs经血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激后,以低频连续波超声(频率1MHz、声强为0.3W/cm2)联合脂质微泡(1μl/ml)辐照VSMCs60s。分别用流式细胞仪、免疫细胞化学法检测细胞周期分布和细胞周期调控蛋白CDK2、p27的表达。结果与对照组比较,PDGF-BB刺激组细胞G0～G1期细胞比例下降而S期细胞比例增高(P<0.01),CDK2表达上调而p27表达降低(P<0.01);与PDGF-BB组相比,超声联合微泡组G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低(P<0.01),CDK2表达下调而p27表达增高(P<0.01)。结论超声联合微泡下调CDK2蛋白和上调p27蛋白的表达,阻滞细胞周期进程,可能是抑制VSMCs增殖的机制之一。     

ASPP家族及其与p53相互作用的研究进展

p53是一个肿瘤抑制蛋白，它通过影响编码细胞周期相关蛋白质的基因表达来调控细胞周期的G1停滞，同时还会因为DNA的损伤增多，诱导细胞发生细胞凋亡。p53诱导细胞凋亡的机制多年来一直不太清楚，而最近发现的p53凋亡刺激蛋白-ASPP蛋白家族对p53诱导细胞凋亡的机制的研究有了新的进展。ASPP蛋白家族与p53的作用主要是特异性增强p53的细胞凋亡功能，而对p53的细胞生长停滞功能则没有作用。ASPP蛋白家族增强p53的细胞凋亡功能是通过增强p53的促凋亡基因启动子与DNA的结合而促进细胞凋亡，现就此作一综述。     

RASSF1基因与肿瘤的关系

RASSF1基因位于染色体3p21．3，其转录本RASSF1A已被确认为一种候选肿瘤抑制基因，在多种实体肿瘤中表达异常，参与细胞周期和细胞凋亡的调控，并抑制细胞生长，但作用机理尚未阐明。     

p27^kipl及相关分子Skp2在U937细胞增殖过程中的表达变化及相互关系

p27^kipl为CIP／KIP家族的主要成员，对细胞周期起负调节作用。由于p27^kipl的蛋白水平主要受到S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase—associated protein 2，Skp2）介导的细胞周期依赖性、底物特异性的泛素-蛋白酶体途径调节，因此p27^kipl降解水平的调节对其正常生物学功能的发挥至关重要。Skp2为人类F-box蛋白家族成员，介导p27^kipl的多聚泛素化及随后的蛋白水解。研究发现Skp2在人类多种肿瘤中都有表达，并且与肿瘤组织的分化程度及预后相关。我们旨在对Skp2参与介导的p27^kipl的泛素-蛋白酶体途径降解与p27^kipl的稳定性之间的关系进行探讨，运用目前比较公认的血清饥饿合并释放方法同步化处理U937细胞，结合Western blot、免疫荧光双标记及激光共聚焦技术检测在不同生长状态下p27^kipl、Skp2及其他细胞周期相关分子在U937细胞内的表达和定位情况。     

阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡与细胞周期的影响

目的 探讨阿卡波糖对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡与细胞周期的影响。方法 将处于生长对数期的人脐静脉内皮细胞分为正常组(给予不含任何药物的培养基),模型组(给予33.3 mmol/L葡萄糖),阿卡波糖组(给予33.3 mmol/L葡萄糖+1μg/L,3μg/L,10μg/L阿卡波糖)。MTT法及流式双染检测细胞活力及细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p21及细胞周期蛋白(Cyclin D1)蛋白表达量。结果 与正常组比较,模型组中细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞周期阻滞在G1期,Bax及p21表达量上调,Bcl-2及Cyclin D1表达量下调;与模型组比较,阿卡波糖组中细胞活力提高,细胞凋亡率降低,G1期延长,Bax及p21表达量下调,Bcl-2及Cyclin D1表达量上调,且呈剂量依赖性。结论 阿卡波糖能抑制高糖诱导的HUVEC凋亡,并缩短G1期,与调节细胞凋亡相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。     

miR-224通过调控同源异型盒基因B3表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨miR-224通过调控同源异型盒基因B3(HoxB3)表达对大肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法采用RT-PCR法检测miR-224在大肠癌细胞株及人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC中的表达,大肠癌细胞转染miR-224 inhibitor,并通过双荧光素酶实验、Western blot及RT-PCR证实HoxB3是miR-224的靶基因。MTT及Annexin V-PI法检测miR-224及HoxB3表达量下调后分别对大肠癌细胞活力的影响。流式细胞术检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞周期的影响;Western blot检测miR-224 inhibitor对大肠癌细胞中细胞分裂周期相关蛋白3(CDCA 3)、细胞周期蛋白D1(CyclinD 1)、p21及p27表达的影响。结果大肠癌细胞中miR-224表达量高于人正常结肠直肠黏膜上皮细胞HIEC,且HCT 116中的表达量最高,因此选为后续细胞株。双荧光素酶报告基因证实HoxB3是miR-224下游靶基因,Western blot及RT-PCR结果证实下调miR-244的表达水平后HoxB3蛋白及mRNA表达量均显著下降(P0.01)。下调miR-224及干扰HoxB3表达都能显著降低HCT_116细胞活力(P0.01),促进细胞凋亡(P0.01)。下调miR-224还能使HCT_116细胞周期阻滞在G_1期,抑制CDCA3及CyclinD1表达(P0.01),促进p21及p27表达(P0.01)。结论 miR-224在大肠癌细胞中高表达,并能通过调控靶基因HoxB3的表达及调节细胞周期相关蛋白的表达而参与大肠癌细胞的增殖与凋亡。     

p27/kip1与白血病

p27是一种主要对细胞周期起负性调控作用的周期素依赖性激酶抑制物,它的功能正常与否在细胞周期的调控和肿瘤的发生发展过程中起重要作用。本文就p27的分子特征、p27参与细胞周期调控的机制、p27蛋白水平的调节及p27与白血病的关系作一综述。     

肿瘤细胞分化与凋亡的相关基因与信号传导分子的研究进展

肿瘤发生与发展是一个多因素作用、多基因参与和经过多个阶段才最终形成的极其复杂的生物学现象。癌基因、抑癌基因的发现和细胞信号传导通路的阐明,极大地丰富了人们对细胞癌变机制的认识。目前,研究肿瘤信号传导机制,选择性阻断肿瘤细胞自分泌或旁分泌的信号传导通路,破坏其自控性生长调节机制,正在成为极具吸引力的研究热点。本文就细胞分化相关基因、细胞凋亡相关基因及信号传导分子的研究进展,做一综述。1细胞分化相关基因及信号传导分子p21、p27是调控细胞周期并与细胞分化密切相关的基因,同属于细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制因…