5-氮杂-2’-脱氧胞苷诱导CDX2基因表达对人胃癌细胞株MKN45增殖和凋亡的影响

背景：DNA甲基化导致基因表达沉默是胃癌发生的重要步骤。近年发现肠表型调节因子CDX2在胃癌中具有抑癌基因的作用。目的：探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-aza—CdR）对人胃癌细胞株MKN45中CDX2基因表达的影响及其对细胞增殖和凋亡的作用。方法：以不同浓度5-aza—CdR（2．5、5、10μmo]／L）处理胃癌细胞株MKN45,甲基化特异性PCR（MSP）检测CDX2启动子区甲基化状态;实时荧光定量RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测CDX2mRNA和蛋白表达：CCK8法检测MKN45细胞增殖活性,AnnexinV．FITC／PI检测细胞凋亡和Hoechst33258染色观察其凋亡形态：比色法检测caspase-3活性。结果：MKN45细胞中CDX2基因启动子区高甲基化．CDX2mRNA表达极低且蛋白不表达：经3种浓度5-aza-CdR处理72h后．MKN45细胞CDX2基因启动子区高甲基化发生逆转．CDX2mRNA和蛋白表达均上调。与对照组相比,5-aza-CdR呈剂量依赖性地抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡（P〈0．05）：Hoechst33258染色示细胞核致密浓染、细胞核碎裂;caspase-3活性随着5．aza．CdR浓度的增加而升高（P〈0．05）。结论：MKN45细胞中CDX2基因表达缺失可能与其启动子区CpG岛高甲基化有关;5-aza—CdR能有效逆转CDX2基因的异常甲基化．诱导其再表达．并抑制MKN45细胞增殖和促进凋亡．该作用可能与caspase-3活性有关．     

runt相关转录因子3及其甲基化在人胃癌细胞中的表达及调节因素的初步研究

目的检测不同分化程度胃癌细胞株runt相关转录因子3（RUNX3）基因及其甲基化表达，观察RUNX3 mRNA再表达对胃癌细胞株生物学特性的影响。方法5-氮杂脱氧胞苷（5-AZA-dC）化学处理法和甲基化敏感性聚合酶链反应（MSP法）检测胃癌细胞RUNx3基因的甲基化状态；采用四甲基偶氮唑盐（MTT）实验检测5-氟尿嘧啶（5-FU）对5-AZA-dC处理前、后细胞株的生长抑制率，流式细胞术检测转化生长因子p1（TGF-p1）诱导凋亡的作用。结果①RUNX3在人胃癌细胞SGC7901、MKN45、BGC823中表达，而在MKN28中表达沉默，DNA异常甲基化仅存在于MKN28细胞；②5-AZA-dC处理后，MKN28细胞生长速度显著慢于未处理组，不同浓度5-FU对5-AZA-dC处理后MKN28的生长抑制率显著高于未处理组（P〈0．05）；③TGF-β1诱导5-AZA-dC处理前后MKN28细胞的早期凋亡具有时效性（P〈0．05），两者联用具有协同凋亡作用（P〈0．05）。结论DNA异常甲基化是MKN28细胞RUNX3表达沉默的重要机制；RUNX3甲基化可被去甲基化剂5-AZA-dC有效逆转；RUNx3mRNA的再表达可增强MKN28细胞对5-FU的敏感性和对TGF-β1诱导细胞凋亡的能力。     

胃癌组织Runx3基因甲基化的检测及意义

目的探讨胃癌组织中Runx3基因甲基化情况及其意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR技术（MSP）对35例胃癌患者手术切除的肿瘤组织及癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用RT—PCR检测Runx3mRNA的表达。结果胃癌及癌旁组织Runx3基因的甲基化发生率分别为40．0％和8．5％;胃癌组织Runx3mRNA表达较癌旁正常组织下调（P〈0．05）;Runx3mRNA的表达与胃癌分化程度及淋巴结转移有关。结论Runx3基因甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关。     

丁酸钠对小鼠大肠癌的防治作用及其对甲基化酶的影响

目的通过观察丁酸钠（NaBu）对二甲肼（DMH）诱发小鼠大肠癌的防治作用及其对抑癌基因p21^WAF1甲基化酶的影响，探讨乙酰化酶抑制剂防治肿瘤的分子机制。方法80只S-ICR小鼠随机均分4组：空白对照组、DMH造模组、NaBu对照组、DMH＋NaBu组。记录小鼠一般情况，分别于造模后18周、20周、22周每组处死小鼠2只，24周时全部处死。大体及镜下观察肠道肿瘤发生情况和组织学变化，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测p21^WAF1 mRNA表达，定量PCR检测Dnmtl、Dnmt3a、Dnmt3b基因的表达。结果NaBu对小鼠无毒副作用；DMH＋NaBu组小鼠大肠癌发生率（25％）较DMH造模组（95％）明显降低（P〈0．05），肿瘤大小和数目亦显著低于造模组，且大肠癌的病理进展慢。DMH造模组肿瘤组织中较正常对照组甲基化酶水平升高3～4倍，抑癌基因p21^WAF1低表达；与造模组比较NaB组p21^WAF1表达增加，并伴有甲基化酶Dnmt1和Dnmt 3b mRNA降低（P〈0．05）。结论NaBu对DMH诱发的小鼠大肠癌具有一定防治作用，这与激活抑癌基因p21^WAF1表达、降低甲基化酶Dnmtl和Dnmt3b表达有关。     

5-脱氧杂氮胞苷预防二甲基肼诱发小鼠大肠癌的研究

目的探讨二甲基肼（DMH）诱导小鼠大肠癌模型中5-脱氧杂氮胞苷（5-aza—dC）预防肿瘤发生的作用机制。方法80只ICR小鼠分为4组，每组20只。包括空白对照组、5-aza—dC对照组、DMH诱癌组和5-aza-dC干预组。处理20周后观察其对肿瘤发生率的影响。实时定量PCR检测Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b基因和抑癌基因p27^Kip1的表达。结果通过5-aza-dC干预能使诱导的大肠肿瘤发生率从95％降至35％，肿瘤数目（个）由9．43±4．21减少到3．98±2．95，肿瘤最大直径（单位：mm）由6．43±5．12缩小到3．44±2．11，差异有统计学意义（P〈0．05）。实时定量PCR检测发现肿瘤组织中存在Dnmt1和Dnmt3b的高表达，而p27^Kip1的表达量降低。5-aza—dC可以通过抑制甲基化酶活性，防止p27^Kip1基因的高甲基化失活。结论5-aza-dC可以显著降低DMH诱发小鼠大肠癌的发生率，阻止抑癌基因的高甲基化失活可能是5-aza-dC预防肿瘤的重要机制。     

5-Aza-CdR对胃癌细胞系BGC823生长及DAPK1基因甲基化的影响

目的观察5．氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-CaR）对体外培养的胃癌BGC823细胞增生和凋亡的影响及其对此细胞中DAPK1基因的甲基化状态的影响。方法选择浓度为1×10^-6的5-Aza-CdR处理体外培养的BGC823细胞后,用Annexin—v—FITC凋亡检测药物处理后细胞凋亡情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT—PCR法检测用药前后细胞中DAPKI的mRNA表达的变化。结果在药物作用24、48、72h后细胞的凋亡率分别为5．83±0．53、9．23±0．58、15．34±0．90,较对照组明显增加（P〈0．05）。DAPK1基因的甲基化状态得到了逆转,DAPK-1基因的mRNA表达得到增加。结论5-Aza—CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,并促进细胞凋亡。DAPK1基因表达情况与其甲基化状态的改变有关。     

p73和p51基因在结直肠癌中的表达和意义

背景：p53基因是一种肿瘤抑制基因，其家族成员p73和p51在结构上与p53具有高度同源性，影响细胞转录和凋亡的功能与p53相似。目的：研究p73和p51基因在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡和肿瘤临床病理特征的关系，探讨两者在结直肠癌发生、发展中的可能作用。方法：以逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测60例结直肠癌组织和相应癌旁组织中p73、p51mRNA表达，以原位末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡。结果：结直肠癌组织p73、p51AmRNA表达阳性率显著高于相应癌旁组织（p73：71．7％对5．0％，P〈0．01：p51A：46．7％对11．7％，P〈0．01）：p51B mRNA在结直肠癌组织与相应癌旁组织中的相对表达量无明显差异（0．7318±0．3628对0．6836±0．3516，P〉0．05）。p73、p51A mRNA表达阳性者肿瘤细胞凋亡指数分别显著低于p73、p51A mRNA表达阴性者（p73：3．2％±2．5％对5．5％±2．8％．P=0．003；p51A：2．6％±2．3％对4．9％±2．7％，P=0．001）。p73mRNA表达与结直肠癌的分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关（P〈0．05），p51A mRNA表达仅与淋巴结转移相关（P〈0．05）。结论：结直肠癌中p73、p51A基因表达上调，两者可能通过抑制肿瘤细胞凋亡而参与了结直肠癌的发生、发展。p73过表达可能与结直肠癌预后不良有关。     

曲古霉素A对人胃癌细胞的抑制作用及其机制探讨

背景：组蛋白去乙酰基酶抑制剂（HDACi）是一类新型抗肿瘤药物。曲古霉素A（TSA）是目前研究最为广泛的HDACi之一,已发现其对多种肿瘤细胞具有明显抑制作用,但关于TSA对胃癌作用的研究尚少。目的：观察TSA对人胃癌细胞增殖、凋亡、细胞周期以及相关基因表达的影响,探讨其抑制人胃癌细胞的可能作用机制。方法：以不同浓度TSA（0—1μmol／L）处理人胃癌细胞株AGS和HGC-27。CCK-8实验检测细胞增殖抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,realtimeRT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡、细胞周期相关基因mRNA和蛋白水平的表达。结果：TSA能剂量依赖性地抑制AGS、HGC-27细胞增殖（P=0．000）,对两者的半数致死浓度分别约为0．25μmol／L和0．5μmol／L。TSA能诱导AGS、HGC-27细胞发生G0／G1期和G2／M期阻滞,以G0／G11期阻滞更为明显。TSA对AGS细胞的诱导凋亡作用强于HGC-27细胞（P〈0．05）。TSA尚能上调p21、p53、BaxmRNA和蛋白表达,下调Bel-2、CDK2、cyelinD1mRNA和蛋白表达,作用均呈时间依赖性（P〈0．05）。结论：TSA抑制人胃癌细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用可能是通过调节细胞凋亡、细胞周期相关分子、激活多种肿瘤相关信号通路实现的。     

丝裂原激活蛋白激酶阻断剂与DNA甲基化酶抑制剂对人结肠癌细胞的协同影响

目的研究细胞外信号渊节激酶-丝裂原激活蛋白激酶途径（ERKMAPK）与DNA甲基化问的关系及对结肠癌细胞生物学行为的协同影响。方法培养人结肠癌细胞SW1116，分别以PBS、二甲基亚砜（DMSO）为对照组，PD 9805950μmol／L、5氮脱氧胞苷（5-aza—dC）5μmol／L、PD9805950μmol／L＋5-aza-dC5μmol／L进行药物干预．以定量RT-PCR检测DNA甲基化酶（Dnmt）1、3a和3b基因转录水平；流式细胞仪分析细胞周期；MTT测定细胞活力；光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果ERK—MAPK途径阻断剂PD98059下调Dnmt 1和Dnmt 3b．Dnmt抑制剂5-aza-dC下调Dnmt 1、Dnmt 3a和Dnmt 3b，且5-aza-dC联合PD98059对Dnmt1及Dnmt 3a mRNA的表达下调更为显著。5-azo-dC明显降低G0／G1期细胞百分比（P〈0．05），G2／M期细胞百分比明显增加（P〈0．05）；PD98059使G0／G1期细胞百分比降低（P（0．05）．G2／M期增加（P〈0．05）。PD98059明显抑制细胞生长。PD98059促进细胞分化，呈上皮样改变，细胞变狭长，胞质减少，细胞排列开始出现相对整齐；5-azm-dC干预组细胞大小不一，出现较多多倍体细胞（多个核分裂相）。结论ERK-MAPK途径阻断剂及Dnmt抑制剂均能抑制结肠癌SW1116细胞分裂、增殖，并诱导细胞分化；两者有协同作用；ERK—MAPK信号转导途径能调控DNA甲基化水平。     

肼屈嗪对人胃癌细胞株RUNX3基因甲基化及其表达的调节作用

背景:甲基化所致的抑癌基因RUNX3表达沉默是胃癌发生的重要机制,以脱甲基化制剂恢复其表达可起到抗肿瘤作用。目的:研究脱甲基化制剂肼屈嗪对人胃癌细胞株RUNX3基因甲基化及其表达的调节作用,观察肼屈嗪对胃癌细胞生长和凋亡的影响。方法:分别以RT-PCR和甲基化特异性PCR(MSP)检测肼屈嗪和5-Aza-dC处理前后SGC7901、MKN28和MGC803细胞的RUNX3 mRNA表达及其甲基化状态。以MTT法检测MKN28细胞增殖活性,以流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:MKN28细胞存在甲基化所致的RUNX3基因表达沉默。40μmol/L肼屈嗪作用72 h后,MKN28细胞可扩增出 RUNX3非甲基化条带,呈部分脱甲基化,RUNX3 mRNA恢复表达,但相对表达量低于5-Aza-dC组(P0.05)。10μmol/L以上浓度的肼屈嗪对MKN28细胞生长具有抑制作用,可使细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡(P0.05)。结论:肼屈嗪可通过脱甲基化恢复RUNX3基因表达并能抑制MKN28细胞生长,诱导细胞凋亡。有必要对肼屈嗪在胃癌治疗中的作用作进一步研究。     

siRNA靶向沉默PcG蛋白EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响

背景：PcG蛋白是一组转录抑制因子,其核心成分EZH2在胃癌组织中表达增高,并与胃癌的进展相关。目的：应用RNA干扰（RNAi）技术研究EZH2对人胃癌细胞株MKN45增殖和侵袭力的影响,从细胞水平探讨EZH2参与胃癌发生的机制。方法：使用EZH2小干扰RNA（siRNA）转染MKN45细胞,以实时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法检测EZH2mRNA和蛋白表达,CCK-8（Cell Counting Kit-8）实验检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期．MatrigelTM侵袭实验检测细胞侵袭力。结果：EZH2siRNA能有效抑制MKN45细胞的EZH2mRNA和蛋白表达。与阴性对照siRNA组相比,EZH2siRNA组MKN45细胞增殖抑制率为14．7％（P＜0．05）,侵袭能力显著降低[穿过Transwell小室膜细胞数：（38．5±3．4）个／HPF对（92．7±9．7）个／HPF,P＜0．05）,细胞周期阻滞于G0／G1和G2／M期。结论：EZH2siRNA可抑制人胃癌细胞的增殖和侵袭力,证实EZH2通过促进细胞增殖和侵袭在胃癌发生中发挥作用。     

雌二醇下调铁对成骨细胞活性的抑制作用

目的了解雌二醇与铁对小鼠原代成骨细胞活性的影响及活性氧(ROS)的作用。方法提取新生小鼠颅骨原代成骨细胞,经差速贴壁法纯化后传代,选取3~4代进行实验,随机分为对照组,枸橼酸铁铵(FAC)组和FAC+17β-雌二醇(FAC+E2)组,分别用2.5μmol/L FAC和10 nmol/L E2干预7 d后收集细胞,用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;用碱性磷酸酶(ALP)活性试剂盒检测各组细胞碱性磷酸酶活性;荧光定量PCR(Q-PCR)检测成骨相关基因(Runx2、osterix、Bglap、IBSP)表达;荧光酶标仪检测各组ROS水平并在荧光显微镜下观察。结果细胞活性氧水平检测结果显示,FAC组活性氧水平明显高于其余各组,FAC+E2组与FAC组相比ROS水平降低(P0.05);FAC干预后细胞增殖能力及ALP活性明显下降(P0.05),FAC+E2组细胞增殖能力较FAC组上升(P0.05),ALP活性上升,但差异无统计学意义(P0.05);Q-PCR结果显示,与对照组相比,FAC组Runx2、osteorix表达水平明显下降(P0.05),FAC+E2组与FAC组相比,各基因表达水平均显著升高(均P0.05)。结论 FAC可能通过升高ROS水平抑制成骨细胞生物活性;雌二醇可能通过清除FAC诱导生成的ROS下调该抑制作用。     

结直肠癌中CDX2、p21~(H-ras)、p21~(WAF1)表达的临床意义

背景:CDX2与肠源性肿瘤的发生密切相关,而p21表达减低或缺失可能是结直肠癌发生、发展中的一个普遍事件。目的:探讨结直肠癌中CDX2、p21~(H-ras)、p21~(WAF1)表达的相关性和临床病理意义。方法:收集45例临床病理资料完整的结直肠癌手术切除标本,以免疫组化方法检测癌组织和相应癌旁组织中的CDX2、p21~(H-ras)、p21~(WAF1)蛋白表达。结果:结直肠癌组织中CDX2、p21~(H-ras)、p21~(WAF1)阳性率分别为86.7%、68.9%和35.6%,相应癌旁组织中阳性率分别为100.0%、37.8%和51.1%,CDX2和p21~(H-ras)在癌组织和癌旁组织中的阳性率差异有统计学意义(P=0.026和P=0.006);半定量分析结果显示CDX2和p21~(WAF1)在癌组织和癌旁组织中的表达水平差异有统计学意义(P=0.007和P=0.005)。癌组织中CDX2与p21~(H-ras)的表达存在相关性(r_s=0.501,P=0.000)。Dukes A、B期患者癌组织p21~(WAF1)阳性率显著高于C、D期患者(P=0.016),有淋巴结转移者p21~(WAF1)阳性率显著低于无淋巴结转移者(P=0.048),CDX2、p21~(H-ras)的表达与结直肠癌各临床病理特征均无相关性。结论:CDX2、p21~(H-ras)、p21~(WAF1)表达改变可能与结直肠癌的发生、发展相关。     

YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制研究

背景:研究发现生存素(survivin)在胃癌组织中高表达,YM155是survivin的特异性抑制剂。目的:探讨YM155对人胃癌细胞株MKN28的作用及其机制。方法:以不同浓度YM155作用于人胃癌细胞株MKN28。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖抑制率;以原位末端标记(TUNEL法)检测细胞凋亡率;以逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、蛋白质印迹法分别检测survivin mRNA和survivin、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、caspase-3蛋白表达。结果:YM155作用后,MKN28细胞增殖抑制,凋亡增加。随着YM155浓度升高,survivin mRNA和蛋白表达水平明显降低,并伴随PARP、caspase-3蛋白裂解。结论:YM155可抑制人胃癌细胞株MKN28增殖,并诱导其凋亡,此机制可能与抑制survivin表达,继而激活caspase凋亡信号通路有关。     

CaN-NFAT信号传导通路参与EPCs凋亡作用的研究

目的:研究钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号传导通路参与内皮祖细胞(EPCs)的凋亡过程。方法:采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞,贴壁培养获得EPCs。实验分为4组:空白对照组、苯肾上腺素(PE)组、环孢素A(CsA)组、CsA+PE组。采用TUNEL染色测定EPCs凋亡状况。逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2、Caspase-3及NFAT4的mRNA的转录水平。免疫荧光染色检测NFAT4亚细胞水平定位。结果:(1)EPCs凋亡检测:与空白对照组及PE组比较,CsA组和CsA+PE组EPCs凋亡数明显增加[(3.41±0.89)比(4.39±1.92)比(23.68±1.14)比(25.92±2.62),P<0.05];(2)与空白对照组和PE组比较,CsA组和CsA+PE组的Bcl-2mRNA水平、Bcl-2/Bax mRNA比值明显下降(P均<0.05),Caspase-3mRNA水平明显升高(P<0.05)。NFAT4mRNA水平:与空白对照组比较,PE组的明显升高(P<0.05),CsA组的明显下降(P<0.05);与PE组比较,CsA组和CsA+PE组的NFAT4mRNA水平均明显下降(P<0.05)。四组之间Bax mRNA水平均无显著差异;(3)与空白对照组比较,PE组NFAT4核转移率明显增加[(25.33±2.08)%比(95±2)%,P<0.05];与空白对照组及PE组比较,CsA组和CsA+PE组NFAT4核转移率[(8.00±2.65)%、(7.00±1.73)%]明显下降(P均<0.05)。结论:CaN-NFAT信号传导通路参与EPCs凋亡的调节作用。     

受体胸腺内注射Fas抗体对急性移植排异的作用及机制

目的:探讨胸腺内注射死亡受体(Fas)抗体对心脏移植急性排异、半胱氨酸基天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase-3)表达及心肌细胞凋亡的影响。方法:应用大鼠腹腔心脏移植模型(供体:Wistar大鼠,受体:SD大鼠),随机分为实验组、环孢素组和对照组。心脏移植前24h,向实验组受体胸腺内注射Fas抗体(0.1mg/kg)1次,腹腔注射生理盐水2mL1次/d;向环孢素组受体胸腺内注射磷酸缓冲液(PBS)(1mL)1次,腹腔注射环孢素(8mg/kg)1次/d;向对照组受体胸腺内注射PBS(1mL)1次,腹腔注射生理盐水(2mL)1次/d。术后5d取移植心脏,进行病理学检查,排斥分级;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植心脏Caspase-3 mRNA表达;免疫组化检测Caspase-3蛋白表达;原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果:1.排斥级别:实验组2.13±0.64低于对照组3.75±0.46高于环饱素组1.25±0.68(P<0.05);2.Caspase-3 mRNA水平:实验组0.62±0.05低于对照组0.87±0.12,高于环孢素组0.59±0.08(P<0.05);3.Caspase-3蛋白阳性细胞数:实验组113±12.5低于对照组223±4.80高于环孢素组95±4.50(P<0.05);4.凋亡指数:实验组7.32±0.58低于对照组11.07±1.18高于环孢素组5.67±0.43(P<0.05)。结论:受体胸腺内注射Fas抗体减轻心脏移植急性排异程度。机理是下调移植心脏Caspase-3基因mRNA及蛋白表达、减少心肌细胞凋亡。     

S-腺苷蛋氨酸对活化人肝星状细胞增殖和凋亡的影响

背景:肝星状细胞(HSCs)的活化是肝纤维化发生的中心环节。S-腺苷蛋氨酸(SAM)是机体最重要的甲基供体,既往研究表明SAM具有一定的抗纤维化作用,能抑制HSCs的活化。目的:观察SAM对活化人肝星状细胞株LX-2增殖、凋亡的作用及其相关机制。方法:用不同浓度SAM培养LX-2细胞24 h,采用CCK-8法检测SAM对LX-2细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,实时定量PCR法检测cyclin D1 mRNA表达,蛋白质印迹法检测α-SMA蛋白表达。结果:与对照组相比,3.0~8.0 mmol/L SAM能抑制LX-2细胞增殖,并呈剂量依赖性(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组G1/G0期细胞比例显著降低(P0.05),S期细胞比例显著升高(P0.05);4.0、8.0 mmol/L组早期凋亡率和总体凋亡率显著升高(P0.05);2.0、4.0 mmol/L组cyclin D1 mRNA表达显著升高(P0.05);1.0、2.0、4.0 mmol/L组α-SMA蛋白表达显著降低(P0.05)。结论:SAM能抑制LX-2细胞增殖,其机制可能通过上调cyclin D1的表达而使细胞周期阻滞于S期;同时,SAM能诱导LX-2细胞的凋亡,并下调α-SMA的表达。     

不同胃黏膜病变中Runx3表达及其与幽门螺杆菌感染关系的临床研究

背景：Runt相关转录因子3（Runx3）是近年新发现的肿瘤抑制基因,幽门螺杆菌（Hp）感染可能导致Runx3蛋白表达下调,进而参与胃癌的发生。目的：研究不同胃黏膜病变中Runx3表达及其与Hp感染的关系。方法：选取2010年3月～2011年3月广州军区广州总医院40例慢性萎缩性胃窦炎、40例胃窦溃疡和40例胃窦癌患者。应用^13C-尿素呼气试验和Giemsa染色检测Hp感染情况,免疫组化SP法测定Runx3蛋白表达,并分析其与Hp感染的关系。结果：慢性萎缩性胃窦炎组、胃窦溃疡组和胃窦癌组的Hp阳性率（分别为45．0％、82．5％、57．5％）差异有统计学意义（P〈0．05）;Runx3蛋白表达呈逐步下降趋势（蛋白阳性率分别为70．0％、62．5％、35．0％）,差异有统计学意义（P〈0．05）。Hp阳性率与Runx3蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论：在胃黏膜癌变过程中,Hp感染和Runx3蛋白表达缺失可能是胃癌的危险因素。     

PIAS1基因沉默对雨蛙肽诱导胰腺腺泡细胞凋亡的影响

活化STAT蛋白抑制物(PIAS)1基因沉默可增强雨蛙肽诱导的胰腺腺泡细胞炎症反应。目的:探讨PIAS1基因沉默对雨蛙肽刺激胰腺腺泡细胞凋亡的影响。方法:AR42J胰腺腺泡细胞在Lipofectamine~(TM)2000介导下转染PIAS1-siRNA和阴性siRNA。将细胞分为PIAS1-siRNA+雨蛙肽组、阴性siRNA+雨蛙肽组、脂质体+雨蛙肽组、PBS+雨蛙肽组和对照组。以DNA Ladder、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况,流式细胞术测定细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR和蛋白质印迹法检测1353、Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:与其余各组相比,PIAS1-siRNA+雨蛙肽组DNA梯度裂解条带明显增加,荧光着色阳性细胞数增多;G1期细胞数增多,S期细胞数减少,细胞凋亡率增加;p53、Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P均0.05)。结论:PIAS1基因沉默可增强雨蛙肽活化的caspase-3凋亡途径诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,为通过调控PIAS1表达治疗急性胰腺炎提供新的理论依据。