抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌的表达

目的 获得鼠抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因并在大肠杆菌中表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)克隆Fd段和k链基因；构建到噬粒pComb3中；并用ELISA、Westem blotting和免疫细胞化学分析证明表达的Fab段特异性结合人精浆蛋白。结果 从分泌抗人精浆蛋白的鼠单克隆抗体杂交瘤细胞系E4B7中克隆出了重链Fd段和k链基因，经序列测定表明，U属于鼠免疫球蛋白XⅢ家族，VH与鼠免疫球蛋白MUSIGHAEI同源性最高。将该Fd和k链基因克隆到表达载体pComb3中，在大肠杆菌中获得了表达。结论FLISA、Westem blotting和免疫细胞化学分析表明，表达的Fab段可以特异性的与人精浆蛋白结合。     

免疫组化在前列腺癌病理诊断中作用

前列腺癌的病理诊断基于光镜下形态学表现,如组织结构异常、核的异型性、明显的核仁、肿瘤上皮特征性的细胞外物质以及基底细胞消失,但这些组织学特征没有一项是绝对敏感和特异的。许多情况下低级别前列腺癌和诸多良性病变在形态学上无明显区别,尤其在穿刺或经尿道前列腺切除（TURP）所获得的小而变形的标本中,癌性与非癌性腺体的鉴别就更为困难。     

人精浆中微量蛋白水平与男性生育关系的探讨

目的 :观察人精浆中各种微量蛋白与男性生殖能力之间的关系。方法 :应用放射免疫分析(RIA) ,对 2 2例生育者和 1 2 5例不育者精浆中的白蛋白 (Alb)、β2 -微球蛋白 (β2 -m)、α1 -微球蛋白 (α1 -m)、TH糖蛋白 (THP)、免疫球蛋白G(IgG)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)、铁蛋白 (Fer)等进行了检测。 结果 :不育症组精浆中Alb、β2 -m、α1 -m、THP、IgG、SIgA均明显低于生育组 ,尤其是Alb、β2 -m、α1 -m、IgG、SIgA在生育组与不育组之间均存在显著性差异 (p <0 0 5或p <0 0 1 ) ;不育症组精浆中Fer含量明显高于生育组 (p <0 0 1 )。结论 :精浆中 β2 -m、Alb、Fer含量与精液中的精子密度均存在密切正相关。对精浆SIgA和IgG含量的观察 ,可以判断男性生殖系统局部的免疫功能状态。测定精浆中Alb、β2 -m、Fer、SIgA和IgG等微量蛋白的含量可以帮助判断男性不育者的状态 ,指导临床对其进行有效的治疗。     

人精浆中蛋白质检测进展

1 精浆免疫球蛋白检测在男性生殖道感染时 ,无论是细菌、支原体等异质性生物细胞或生物所产生的各种抗原的侵入、刺激 ,导致患者体内免疫系统 ,尤其是T、B细胞增生、分化与入侵的异质性抗原结合攻击。B细胞分化出来的浆细胞进一步合成、分泌能同入侵抗原发生特异性结合的活性蛋白即抗体[1] 。男性不育症同时有生殖道感染者的精浆中IgG、IgA升高 ,这种非特异性抗体升高会造成精液质量改变 ,产生精子或无精子症并使精子发生制动、功能障碍 ,从而导致男性不育[2 ] 。黄学文等[3 ] 对 114例男性不育 (包括前列腺炎、无精子症和抗精子抗体阳性…     

血清和精浆中C反应蛋白泊ELISA测定

用抗人Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）血清和ＣＲＰ标准品建立了检测人血清和精浆中ＣＲＰ的ＥＬＩＳＡ，检测了正常人和不育男性精浆中ＣＲＰ含量，以及１０种疾病患者血清ＣＲＰ含量。结果表明，研制的试剂和建立的方法可满足临床常规检测要求。     

BRG1和BRM蛋白在前列腺癌中的表达

目的 探讨SWI/SNF催化亚基BRG1/BRM蛋白在前列腺癌及癌旁组织中的表达以及与前列腺发生发展之间的关系.方法 采用半定量免疫组织化学法配对评价前列腺癌及癌旁组织中BRG1和BRM蛋白的表达水平,分析BRG1和BRM表达与临床病理参数之间的关系.结果 在同一病例中,癌组织BRG1平均免疫反应得分为(57.0±9.8)分,远比前列腺癌旁组织的(19.0±4.1)分高,P=0.000 17,而且这种表达的差异在高级别的肿瘤中更显著;BRM呈现异质性表达,癌组织的平均免疫反应得分为(112±17)分,低于癌旁组织的(151±19)分,P=0.0047;同一病例的癌旁组织和癌组织中BRG1和BRM表达相反;大肿瘤组中癌组织BRG1的平均免疫反应得分与相应癌旁组织的比值明显高于小肿瘤组(P=0.0112).结论 SWL/SNF复合物蛋白BRG1和BRM的异常表达与前列腺癌的发生发展有关,BRG1的表达增强可能促进前列腺癌的生长.     

胰岛素样生长因子在人前列腺增生和前列腺癌中的免疫组化研究

用免疫组化方法研究胰岛素样生长因子（ＩＧＦ－１）在２７例人前列腺良性增生和２８例前列腺癌中的表达。在前列腺增生组织中，ＩＧＦ－Ｉ免疫反应例数为８／２７，主要定位于正常腺体基底层细胞的胞浆内或细胞膜上。阳性反应也同样存在于增生的上皮细胞和鳞状化生上皮细胞的胞浆内，而间质平滑肌细胞和神经纤维对ＩＧＦ－Ｉ免疫反应几乎全部为阳性。在前列腺癌组织中，ＩＧＦ－Ｉ阳性例数为１６／２８，呈区域性或弥漫性分布，染色强度或强或弱。结果提示：ＩＧＦ－Ｉ存在于人前列腺增生和前列腺癌中，并与前列腺癌的发生相关     

抗人精浆蛋白单抗κ链基因的克隆及其在HeLa细胞的表达

目的 获得鼠抗人精浆蛋白单抗（mAb)κ链基因，并将其转染到HeLa细胞进行表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA，用RT－PCR法获取κ链cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3，用脂质体转染法转染HeLa细胞，并用免疫荧光染色法检测κ链的表达。结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠mAb杂交瘤细胞系E4B7中克隆了κ链基因。序列测定表明，Vκ属于鼠免疫球蛋白XⅢ家族。以含κ链基因的真核表达载体pcDNA3-E4B7κ转染HeLa细胞后，在HeLa细胞中检测到了κ链的表达。结论 获得了序列正确的κ链基因，并在HeLa细胞中成功地表达，为进一步构建和表达Fab段打下了良好基础。     

前列腺癌中Bad蛋白的表达及其意义

目的探讨Bad蛋白在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法选择前列腺癌和癌旁良性前列腺增生(benign prostate hyperplasia, BPH)各48例及21例前列腺上皮内瘤(prostate intraepithelial neoplasms, PIN),采用免疫组化SP法观察Bad蛋白在前列腺上皮及间质细胞中的表达,采用化学发光法检测血清PSA值,分析Bad蛋白与前列腺癌、PSA值的相关性。结果 Bad蛋白在前列腺癌和PIN中的阳性率分别为83.3%、66.7%,高于癌旁BPH的33.3%,差异有统计学意义(P均0.01);Bad蛋白在前列腺癌和BPH间质细胞中的阳性率分别为52.1%和25.0%,差异有统计学意义(P0.05);Bad蛋白在Gleason评分≤7和7的前列腺癌中阳性率分别为66.7%和92.6%,差异有统计学意义(P0.05);血清PSA值与Bad蛋白表达无相关性(P均0.05)。结论前列腺癌组织中Bad蛋白高表达,并与Gleason评分有关,提示Bad蛋白在前列腺癌的发生、发展中发挥重要作用。     

bcl-2、p53 蛋白在前列腺癌的表达和临床病理意义

前列腺癌是老年男性生殖系统肿瘤中一种常见和预后较差的恶性肿瘤。近年来,我国其发病率逐年上升。前列腺癌的病理组织学形态和临床变化较大,生物学行为较复杂,单纯依靠常规的病理学观察和临床分期对该肿瘤预后的判断存在一定的困难和偏差。作者采用常规病理诊断和免疫组化方法对前列腺癌作研究,探讨ｂｃｌ2和ｐ53蛋白在前列腺癌的表达及其与临床病理的关系。1　材料和方法1.1　临床资料　华西医大附一院1988年7月至1995年4月间收治前列腺癌21例。所有病人入院前未接受任何治疗。年龄为55～80岁(平均685岁)。按ＪｅｗｅｔｔＷｈｉｔｍｏｒｅ…     

人精浆免疫抑制机制的实验研究

本文从人精浆(Human Seminal plasma,HSP)对小鼠脾T淋巴细胞IL-2产生,活化小鼠脾T淋巴细胞IL-2受体(IL-2R)表达和IL-2R与重组IL-2(rIL-2)结合等几个方面研究了HSP抑制小鼠脾T淋巴细胞增殖的机制。根据实验结果表明,HSP抑制小鼠脾T淋巴细胞增殖的机制是抑制了脾T淋巴细胞IL-2 R表达。     

抗人精浆蛋白单链抗体基因的构建及序列分析

目的：构建抗人精浆蛋白的单链抗体基因，可为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体／羧肽酶Ａ融合蛋白，用于前列腺癌的抗体导向酶－前体药物疗法奠定基础。方法：利用加端ＰＣＲ技术，在已克隆的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因两端加上限制性酶切位点，再分别克隆入载体ｐＵＣ１９－ｌｉｎｋｅｒ中，构建ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－Ｖκ形式的Ｅ４Ｂ７单链抗体基因。利用全自动荧光测序仪测定其序列，采用ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件与已知的ＶＨ和Ｖκ基因进行核苷酸序列的同源性比较，并推导其编码的氨基酸序列。结果：Ｅ４Ｂ７单链抗体基因全长为７４１ｂｐ，为一开放读框，编码２４７个氨基酸，与已知的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因完全同源。ＶＨ和Ｖκ间有４５ｂｐ的ｌｉｎｋｅｒ序列，推导的氨基酸序列为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３，与设计的序列相符。结论：构建成功序列正确的抗人精浆蛋白单链抗体基因，为构建、表达抗人精浆蛋白／羧肽酶Ａ双功能抗体奠定了基础     

抗人精浆蛋白/抗CD3双特异性单链抗体的活性研究

目的:构建并表达抗人精浆蛋白/抗CD3的双特异性单链抗体(BsscFv),并检测其生物学活性。方法:利用重叠延伸拼接PCR,拼接抗人精浆蛋白scFv基因和抗CD3scFv基因,并在中间引入柔性短肽(GlySerGly)2,构建抗人精浆蛋白/抗CD3的BsscFv基因。测序正确后,将融合基因亚克隆入真核表达载体中,并在HeLa细胞中进行表达,采用流式细胞术(FCM)和51Cr释放试验,评价BsscFv的抗原结合活性和体外介导的特异性杀伤靶细胞的效应,以及利用裸鼠前列腺癌模型观察其在体内的抑瘤作用。结果:测序分析证实,Bss-cFv基因片段的大小为1.5kb,编码500个氨基酸,该序列与设计的完全一致。SDS-PAGE和Westernblot分析证明:表达产物存在于HeLa细胞的培养上清中,其相对分子质量(Mr)为61000。FCM结果显示:BsscFv可特异性的结合前列腺癌细胞LNCaP和CD3 淋巴瘤细胞Jurkat,结合率分别为54.1%和53.7%。体外实验表明,BsscFv可介导CTL对LNCaP细胞的杀伤。与对照组相比较,接种LNCaP的裸鼠在体内注射激活的CTL和BsscFv治疗后,肿瘤的生长明显受到抑制(P<0.05)。结论:抗人精浆蛋白/抗CD3的BsscFv具有一定的生物学活性,在体内、体外均可介导CTL杀伤靶细胞LNCaP。     

突触囊泡蛋白在视网膜母细胞瘤中分布的免疫组化研究

用免疫组化方法研究了人视网膜母细胞瘤中触囊泡蛋白的分布。结果表明部分视网膜母细胞瘤瘤细胞有突触囊泡蛋白阳性反应。认为瘤细胞中突触囊泡蛋白的含量越多，瘤细胞分化程度越高残留视网膜中突触囊泡蛋白主要分布于内网层，外网层很少或无，明显不同于正常视网膜中突触囊泡蛋白的分布。     

前列腺癌中AGR2蛋白的表达及临床意义

目的探讨AGR2在前列腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测AGR2和AR在61例前列腺癌和33例良性前列腺增生症中的表达状况。结果 AGR2在前列腺癌中阳性率为68.9%,其在前列腺增生症中的阳性率为36.4%,两组中的差异有显著性(P0.01)。前列腺癌中AGR2和AR的表达呈正相关(r=0.323,P=0.011)。AGR2与患者的临床分期、年龄、Gleason分级及术前患者血清的PSA及cPSA水平均无相关性(P0.05)。结论 AGR2可能与前列腺癌的发生有关,该蛋白的表达可能受AR调控。     

前列腺特异抗原在前列腺癌诊断中的作用

前列腺特异抗原（ＰＳＡ）是目前最佳的前列腺癌标志物。我们对２５４例包括前列腺素、非前列腺癌和部分正常人血清ＰＳＡ值进行了分析，以４ｎｇ／ｍｌ为正常参考值，其相应的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为８２．２％、８２．８％、５７．５％、９４．３％。ＰＳＡ还可为是否行前列腺穿刺活检提供依据。当ＰＡＳ≤４ｎｇ／ｍｌ时，患者可暂无须行穿刺活检，仅有５．７％的风险。而当ＰＳＡ〉１０ｎｇ／ｍｌ时，应即     

雄激素受体在人类前列腺癌发展中的作用研究

目的:研究雄激素受体在前列腺癌雄激素非依赖性生长中的作用。方法:通过连续传代培养,建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞模型。用Western blot方法检测AR和PSA在上述过程中的表达情况。结果:连续传代培养后,LNCaP C-33细胞(传代次数少于33次)生物学行为发生改变。同C-33和C-51(传代次数介于33次和80次之间)细胞相比,C-81细胞(传代次数大于80次)表现出更强生长能力和更低雄激素依赖性。C-81细胞分泌高水平PSA,且DHT对其分泌作用的影响比C-33细胞小。3种LNCaP细胞总AR表达水平相同,但C-81表现为特征性AR-B表达丢失和AR-A表达增加。结论:前列腺癌进展是多因素作用的结果,其中包括AR亚型的差异性表达。     

DNA图像分析在前列腺癌中的应用

ＤＮＡ图像分析在前列腺癌中的应用白培明朱积川王晓峰侯树坤沈丹华阚秀一、材料和方法１材料：５０例前列腺癌标本（１９７８～１９９６年），其中手术切除标本２８例，穿刺活检标本２２例。２０例前列腺增生症（ＢＰＨ）手术切除标本，（均来源于北京医科大学人民医院...     

前列腺特异性膜抗原蛋白在正常和肿瘤组织中的表达及其在前列腺癌诊断中的敏感性和特异性

前列腺癌主要是通过淋巴道和血道向远处器官转移，人体几乎任何一个器官均可发生前列腺癌转移，其中骨、肝脏和肺是最常转移的器官。另外，前列腺癌也能够直接侵犯邻近器官如膀胱。当怀疑有前列腺癌转移时，免疫组化被常规用于识别肿瘤来源。前列腺特异性抗原（PSA）和前列腺特异性酸性磷酸酶（PAP）是2种最常使用的免疫标记物，