PPARγ配体罗格列酮和GW9662对3T3-L1脂肪细胞内脏脂肪素mRNA表达的影响

目的观察PPARγ配体罗格列酮(ROS)和GW9662对3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA表达的影响,探讨PPARγ与Visfatin的关系。方法以不同浓度ROS和GW9662于各时段处理3T3-L1脂肪细胞,用RT-PCR技术检测VisfatinmRNA的表达。结果1、10、100μmol/L ROS抑制3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA表达。1、5、25μmol/L GW9662抑制3T3-L1脂肪细胞Visfatin mRNA表达。5μmol/L GW9662不能拮抗10μmol/L ROS对Visfatin mRNA的抑制作用。结论ROS可能是通过非PPARγ途径影响Visfatin的表达     

罗格列酮和白细胞介素-6对3T3-L1脂肪细胞chemerin mRNA表达的影响

目的 观察罗格列酮和白细胞介素-6(IL-6)对3T3-L1脂肪细胞chemerin mRNA表达的影响.方法 体外培养3T3-L1前体脂肪细胞并诱导其分化成熟,分别以不同浓度的罗格列酮和(或)IL-6干预,在不同的时间段提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术检测细胞中chemerin mRNA的表达水平.结果 IL-6作用于分化成熟的3T3-L1脂肪细胞能下调chemerin mRNA的表达,且用罗格列酮预处理或与IL-6共同作能够改善IL-6对chemerin RNA的抑制作用.结论 IL-6对chemerin mRNA表达的负调控可能是其引起胰岛素抵抗和糖脂代谢紊乱的机制之一,chemerin可能是噻唑烷二酮(TZD)类药物改善胰岛素敏感性的靶基因.     

罗格列酮抗氧化应激效应影响3T3-L1细胞内脏脂肪素表达

目的:研究罗格列酮对3T3-L1细胞内脏脂肪素表达的影响及其机制。方法:体外培养并诱导分化3T3-L1细胞,加入葡萄糖激酶制作氧化应激模型,并用不同浓度和不同作用时间罗格列酮干预,观察脂肪因子表达的变化。结果:内脏脂肪素的表达随着葡萄糖激酶氧化应激的浓度增高而递减,具有剂量依赖效应(P<0.05);内脏脂肪素的表达随着罗格列酮干预浓度增加而增加(P<0.05),随着罗格列酮作用时间的延长,内脏脂肪素的表达经历了先下降后上升的过程,且罗格列酮对于内脏脂肪素表达的影响与氧化应激状态的改变平行。结论:罗格列酮可以通过抗氧化应激作用调节内脏脂肪素的表达,可能在罗格列酮改善肥胖相关的2型糖尿病胰岛素抵抗中起到重要作用。     

罗格列酮对高糖环境中3T3-L1脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体基因表达的调控作用

目的 研究不同浓度葡萄糖培养环境及罗格列酮干预对分化成熟脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体1（ATIR）和受体2（AT2R）基因表达的影响.方法 取分化成熟的脂肪细胞3T3-L1,分别用含不同浓度葡萄糖（空白对照、5.6、11.2、25.0 mmol/L）的培养基和含不同浓度葡萄糖并添加10 nmol/L罗格列酮的培养基分组培养24 h,Real-time PCR检测3T3-L1脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达.结果 5.6 mmol/L葡萄糖处理组AT1R基因表达明显低于空白对照和11.2、25.0 mmol/L葡萄糖处理组（P〈0.05）;AT2R基因表达随着葡萄糖浓度的升高而明显上调（P〈0.05）.随着葡萄糖浓度的升高,罗格列酮干预组AT1R和AT2R基因表达呈下降趋势.与相应浓度的葡萄糖处理组比较,罗格列酮干预组AT1R表达均显著上调（P〈0.05）.作用随葡萄糖浓度的升高而减弱;AT2R基因表达显著下调（P〈0.05）,作用随葡萄糖浓度的升高而加强.结论 罗格列酮对高浓度葡萄糖导致的脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达变化具有调控作用.     

罗格列酮对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素及抵抗素的分泌及mRNA表达的影响

目的 研究罗格列酮对胰岛素抵抗(IR) 3T3-L1脂肪细胞脂联素、瘦素及抵抗素的分泌及mRNA表达的影响.方法 将3T3-L1脂肪细胞分为5组:A组为对照组,B、C、D、E组为不同水平罗格列酮处理的IR组,分别给予终浓度为0、0.1、0.5、1.0 μmol/L的罗格列酮.检测各组细胞培养液的葡萄糖消耗量,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-RT-PCR)检测瘦素、脂联素及抵抗素的分泌及mRNA表达水平.结果 与B组比较,D、E组细胞分泌的疫素及抵抗素水平及其mRNA表达水平均降低,分泌的脂联素及其mRNA表达水平与葡萄糖消耗量均升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).B组与C组细胞分泌的瘦素、脂联素及抵抗素水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 罗格列酮可以通过调节瘦素、脂联素及抵抗素的表达及分泌减轻脂肪细胞的IR.     

罗格列酮对高糖环境中3T3-L1脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体基因表达的调控作用

目的 研究不同浓度葡萄糖培养环境及罗格列酮干预对分化成熟脂肪细胞血管紧张素Ⅱ受体1(ATIR)和受体2(AT2R)基因表达的影响.方法 取分化成熟的脂肪细胞3T3-L1,分别用含不同浓度葡萄糖(空白对照、5.6、11.2、25.0 mmol/L)的培养基和含不同浓度葡萄糖并添加10 nmol/L罗格列酮的培养基分组培养24 h,Real-time PCR检测3T3-L1脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达.结果 5.6 mmol/L葡萄糖处理组AT1R基因表达明显低于空白对照和11.2、25.0 mmol/L葡萄糖处理组(P<0.05);AT2R基因表达随着葡萄糖浓度的升高而明显上调(P<0.05).随着葡萄糖浓度的升高,罗格列酮干预组AT1R和AT2R基因表达呈下降趋势.与相应浓度的葡萄糖处理组比较,罗格列酮干预组AT1R表达均显著上调(P<0.05).作用随葡萄糖浓度的升高而减弱;AT2R基因表达显著下调(P<0.05),作用随葡萄糖浓度的升高而加强.结论 罗格列酮对高浓度葡萄糖导致的脂肪细胞AT1R和AT2R基因表达变化具有调控作用.     

罗格列酮和血清脂对绵羊前体脂肪细胞分化的影响

目的探讨罗格列酮(rosiglitazone,Ros)和血清脂(serum lipid,Lip)对绵羊前体脂肪细胞分化的影响及不同组织来源的前体脂肪细胞分化影响的差异。方法用不同浓度的Ros和(或)Lip培养绵羊皮下前体脂肪细胞和肾周前体脂肪细胞,通过测量3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)活性和油红O染色萃取液A值分析前体脂肪细胞的分化程度和脂肪细胞充脂量的变化,应用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平。结果 Ros和Lip提高细胞GPDH活性和脂滴的沉积量(P<0.05),上调LPL mRNA表达(P<0.05),最佳浓度分别为100nmol/L和20μL/mL;最佳浓度条件下Ros的诱导作用强于Lip(P<0.05),Ros显著提高了PPARγmRNA表达量(P<0.05),而Lip对PPARγmRNA的表达没有明显影响(P>0.05);Ros和Lip共同诱导与Ros单独作用之间没有明显差异(P>0.05);在相同诱导分化条件下,皮下前体脂肪细胞的分化程度高于肾周前体脂肪细胞(P<0.05)。结论研究结果表明Ros和Lip可促进绵羊前体脂肪细胞的分化,在相同条件下,皮下前体脂肪细胞的分...     

辛伐他汀对3T3-L1脂肪细胞Apelin mRNA表达的影响

目的:观察辛伐他汀对3T3-L1脂肪细胞中Apelin mRNA表达影响,为探讨Apelin在心力衰竭发病中的作用以及他汀类药物抗炎作用提供依据.方法:用辛伐他汀溶液刺激诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,辛伐他汀浓度分别为0、1、10 μ mol/L,作用时间设为24h和48h.提取脂肪细胞总RNA,运用实时荧光定量聚合酶链反应技术测定Apelin mRNA表达量的变化.结果:经辛伐他汀干预后3T3-L1脂肪细胞Apelin mRNA表达降低,高浓度的辛伐他汀对Apelin mRNA的表达有显著的抑制作用(P<0.05).在相同药物浓度下,不同作用时间各组之间差异无显著性(P>0.05). 结论:辛伐他汀可使3T3-L1脂肪细胞中Apelin mRNA表达减少,并具有药物浓度依赖性.这可能部分解释了辛伐他汀的抗炎作用.     

地骨皮水提液对LPS诱导的3T3-L1脂肪细胞 PPARγ表达的影响

目的:观察地骨皮水提液对炎症环境下脂肪细胞葡萄糖代谢及PPARγmRNA表达的影响,探讨其改善炎性脂肪细胞糖代谢的可能机制。方法:葡萄糖氧化酶法检测地骨皮水提液联合脂多糖(LPS)干预72h后3T3-L1脂肪细胞对培养液中的葡萄糖消耗量,RT-PCR法检测PPARγmRNA的表达。结果:LPS能显著降低脂肪细胞葡萄糖消耗量(P<0.01);2.5mg/mL地骨皮水提液能改善LPS干预后的脂肪细胞的葡萄糖利用(P<0.01)。LPS能显著下调PPARγmRNA表达(P<0.05);2.5mg/mL、1.0mg/mL地骨皮水提液能提高LPS干预后的脂肪细胞的PPARγmRNA表达(P<0.05)。结论:地骨皮水提液能改善LPS抑制的脂肪细胞的葡萄糖代谢及PPARγmRNA表达,其机制可能通过上调PPARγ表达来抑制炎症,改善脂肪细胞葡萄糖代谢。     

TNF-α对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及罗格列酮的干预作用。方法采用不同浓度TNF-α（5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml）处理3T3-L1脂肪细胞48h、采用20μg/ml TNF-α处理不同时间（6h、12h、24h、48h）及罗格列酮（10μmol/ml）预处理6h的3T3-L1脂肪细胞与20μg/mlTNF-α作用48h;以2-DG摄入法检测细胞对葡萄糖的摄取率。结果与对照组比较,5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%（P〈0.01）、43%（P〈0.01）、58%（P〈0.01）;20μg/L TNF-α处理3T3-L1脂肪细胞6h、12h、24h、48h使葡萄糖的摄取率分别减少10%（P〈0.05）、28%（P〈0.01）、40%（P〈0.01）、57%（P〈0.01）,罗格列酮预处理能使20μg/ml TNF-α组脂肪细胞对葡萄糖的摄取率增加37%（P〈0.01）。结论TNF-α以浓度和剂量依赖方式导致脂肪细胞胰岛素抵抗;罗格列酮能明显改善此作用。     

SMAF1基因的异位过表达对脂肪细胞3T3-L1增殖和凋亡的影响

目的观察一脂肪细胞特异性表达的新基因小脂肪细胞因子1（SMAF1）在小鼠脂肪前体细胞3T3-L1中的异位表达对脂肪细胞增殖和凋亡的影响。方法构建小鼠SMAF1真核表达载体并稳定转染3T3-L1脂肪前体细胞以获得永久异位表达SMAF1基因的细胞株,使用Westernblot证实SMAFl基因的表达。体外培养SMAF13T3-L1脂肪细胞,以MTT法检测SMAF13T3-L1脂肪细胞的增殖;用流式细胞仪对SMAFl3T3-L1脂肪细胞进行凋亡分析。结果与对照相比,SMAF13T3-L1脂肪细胞增殖明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;而SMAF13T3-L1脂肪细胞凋亡分析结果与对照无显著性差异。结论SMAFl基因在3T3-L1中的异位性表达,对3T3L1前体脂肪细胞生长增殖有显著的抑制作用,而对细胞凋亡无影响,提示SMAF1在脂肪细胞增殖分化中发挥一定的作用。     

白细胞介素-6和罗格列酮对3T3-L1脂肪细胞Vaspin mRNA表达的影响

目的 观察罗格列酮和白细胞介素-6(IL-6)对3T3L-1脂肪细胞Vaspin mRNA表达的影响.方法 体外培养3T3L-1前体脂肪细胞并诱导其分化成熟,分别以不同浓度的罗格列酮和(或)IL-6干预,在不同时间段提取细胞总RNA,采用RT-PCR技术检测细胞中Vaspin mRNA的表达水平.结果 IL-6和罗格列酮分别作用于分化成熟的3T3L-1脂肪细胞,IL-6对Vaspin mRNA的表达无影响,而罗格列酮能上调Vaspin mRNA的表达,用IL-6和罗格列酮共同作用于细胞,则罗格列酮对Vaspin mRNA表达的上调作用未受到显著影响.结论 IL-6对Vaspin mRNA表达无明显的调控作用,表明Vaspin基因可能不是IL-6致胰岛素抵抗的位点.罗格列酮能上调Vaspin mRNA的表达,说明Vaspin可能是噻唑烷二酮(TZD)类药物改善胰岛素敏感性的靶基因.     

黄芪多糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对前脂肪细胞增殖、分化的影响及其机制。方法:以XTT法检测3T3-Ll前脂肪细胞的增殖;油红O染色并通过比色定量分析检测3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积;采用实时聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹(Western blotting)技术检测前脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体γ(peroxi some proliferator activated receptorγ,PPARγ)、CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα) mRNA以及蛋白质的表达。结果:APS浓度从0.025到0.8g/L,在24、48和72h各时间段对前脂肪细胞的生长均表现为增殖趋势,且呈一定的量效关系;0.4g/L APS处理的前脂肪细胞,胞浆中出现较大量脂滴,其作用与噻唑烷二酮(thiazo-lidinedione,TZD)类药物罗格列酮(rosiglitazone,ROS)相似;APS使前脂肪细胞分化相关基因PPARγ和C/EBPα mRNA与蛋白的表达明显增加,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:APS能够促进前脂肪细胞的增殖和分化,增加脂肪细胞分化过程中脂质的堆积,其机制可能与其促进PPARγ和C/EBPα mRNA与蛋白质表达有关。     

抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A／T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3．1（＋）和pcDNA3．1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3．1^（＋）resistin和pcDNA3．1^（-）-resistin^（-）。将pcDNA3．1^（-）resistin^（-）转染小鼠3T3-L1脂肪细胞，通过G418筛选稳定表达的细胞株。3T3-L1脂肪细胞分为对照、瞬时、载体和稳定4个细胞组（每组n=6），用^3H-2-脱氧葡萄糖进行非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取试验。【结果】插入pcDNA3．1^（＋）的DNA片段的核苷酸序列与小鼠抵抗素基因mRNA编码区序列完全一致．且方向正确：插入pcDNA3．10^（＋）的DNA片段的核苷酸序列与抵抗素基因mRNA编码区核苷酸序列完全一致，且方向相反。对照组、瞬时组、载体组和稳定组的3T3-L1脂肪细胞非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取率的无显著性差别（P〉O．05）。【结论】成功构建了载有抵抗素基因和载有抵抗素基因反义核酸的重组真核表达质粒。抵抗素对3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取均无明显影响。     

3T3-L1前脂肪细胞分化过程中miRNAs表达谱的变化

目的探讨3T3-L1前脂肪细胞分化过程中微小RNA(miRNAs)表达谱的变化。方法3T3-Ll前脂肪细胞培养和诱导分化,通过形态学观察和RT-PCR方法,判断3T3-Ll前脂肪细胞是否分化成脂肪细胞。运用miRNAs芯片技术检测3T3-Ll前脂肪细胞和脂肪细胞中差异表达miRNAs。结果3T3-L1前脂肪细胞呈现成纤维状,诱导分化的第9天,细胞变成球形,内含许多脂滴;过氧化物酶体增殖物激活受体r2(PPARr2)和脂肪性脂肪酸结合蛋白(aP2)的表达显著增加。3T3-L1前脂肪细胞分化成脂肪细胞上调的miRNAs有26个,下调的miRNAs有2个。结论3T3-L1前脂肪细胞分化过程中存在miRNAs表达谱的变化。     

抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

 【目的】构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒，探讨抵抗素对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响。【方法】用RT-PCR技术从小鼠脂肪组织扩增抵抗素基因cDNA，A／T克隆于pGEM-T载体，再亚克隆于pcDNA3．1（＋）和pcDNA3．1（-）真核表达载体，构建载有小鼠抵抗素（resistin）基因及其反义核酸的重组真核表达质粒pcDNA3．1^（＋）resistin和pcDNA3．1^（-）-resistin^（-）。将pcDNA3．1^（-）resistin^（-）转染小鼠3T3-L1脂肪细胞，通过G418筛选稳定表达的细胞株。3T3-L1脂肪细胞分为对照、瞬时、载体和稳定4个细胞组（每组n=6），用^3H-2-脱氧葡萄糖进行非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取试验。【结果】插入pcDNA3．1^（＋）的DNA片段的核苷酸序列与小鼠抵抗素基因mRNA编码区序列完全一致．且方向正确：插入pcDNA3．10^（＋）的DNA片段的核苷酸序列与抵抗素基因mRNA编码区核苷酸序列完全一致，且方向相反。对照组、瞬时组、载体组和稳定组的3T3-L1脂肪细胞非胰岛素和胰岛素介导的葡萄糖摄取率的无显著性差别（P〉O．05）。【结论】成功构建了载有抵抗素基因和载有抵抗素基因反义核酸的重组真核表达质粒。抵抗素对3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取均无明显影响。     

3T3-L1脂肪细胞与胰岛素抵抗脂肪细胞miRNAs表达谱的差异性分析

目的探讨正常3T3-L1脂肪细胞和胰岛素抵抗(IR)脂肪细胞微小RNA(miRNAs)的差异性表达,并进行初步分析。方法采用高糖(25 mmol/L葡萄糖)/高胰岛素液(1μmol/L)处理3T3-L1脂肪细胞24h,通过葡萄糖摄取实验判断IR脂肪细胞模型的建立;接着通过miRNA芯片技术,检测脂肪细胞和IR脂肪细胞中miRNAs的表达,并对其分析;随后借助生物信息学方法,对显著变化的2个miRNAs(miR-320和miR-21)寻找并筛检其可能调控的靶基因。结果共获得79个IR相关miRNAs(29个低表达,50个高表达,其中miR-320显著上调,miR-21显著下调),且筛选出与IR或糖尿病相关的靶基因共13个。结论获得了3T3-L1脂肪细胞和IR脂肪细胞miRNAs的差异性表达谱,为进一步研究这些miRNAs在IR和糖尿病的发病机制中的作用奠定了基础。     

罗格列酮对抵抗素转染的HepG2细胞PPARγ mRNA表达和活性氧的影响

目的探讨罗格列酮对抵抗素基因转染的HepG2细胞转录因子PPARγ mRNA表达和活性氧的影响。方法用微量化的葡萄糖氧化酶法对抵抗素基因转染诱导的胰岛素抵抗细胞进行鉴定,加用罗格列酮干预,并和正常HepG2细胞进行对照,用流式细胞仪检测细胞活性氧和RT-PCR法检测PPARγ mRNA表达。结果抵抗素基因转染诱导了肝性胰岛素抵抗的细胞模型,罗格列酮对抵抗素转染的HepG2细胞PPARγ mRNA表达有显著的抑制作用,对活性氧含量改变影响不明显。结论糖尿患者长期服用罗格列酮可能对肝脏PPARγ mRNA的表达有抑制作用。     

人绒毛膜促性腺激素对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ及脂联素mRNA表达的影响

目的:探讨人绒毛膜促性腺激素(HCG)对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)及脂联素mRNA表达的影响.方法:分别用50、500和5000 U/L HCG干预未分化脂肪细胞2、4和6 d,未用HCG干预为空白对照组,PT-PCR测定PPARγ mRNA的表达;用诱导分化液(1 μmol/L地塞米松+0.5 mmol/L 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤+10 ng/L胰岛素)诱导3T3-L1脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞,油红O染色鉴定后用5000 U/L HCG干预成熟脂肪细胞6、12和24 h,未用HCG干预为空白对照组,用RT-PCR测定PPARγ及脂联素mRAN的表达情况.结果:不同剂量HCG干预未分化3T3-L1脂肪细胞,与空白对照组相比,不同剂量干预组未分化脂肪细胞PPARγ mRNA的表达量均增加,差异有统计学意义(F=19.823、21.352和23.519,P均<0.001);不同剂量HCG干预组组间比较,5000 U/L剂量干预组PPARγ的表达量较50和500 U/L剂量组增加,差异均有统计学意义(P均<0.05):50和500 U/L剂量组比较,PPARγ mRNA的表达量差异无统计学意义(P>0.05).5000 U/L HCG干预已分化3T3-L1脂肪细胞后,空白对照组、干预6、12和24 h组相比,脂肪细胞PPARγ mRNA的表达差异有统计学意义(F=26.907,P<0.001),脂联素mRNA的表达差异无统计学意义(F=0.066,P=0.976).结论:HCG可能促进313-L1脂肪细胞的分化,但对脂联素的分泌无影响.