雷公藤内酯醇抑制树突状细胞免疫功能

雷公藤制剂在调节机体免疫状态中有重要作用,但仍不清楚雷公藤是否通过ＤＣ而发挥药理作用[1,2]。本实验将研究雷公藤内酯醇对ＤＣ表面人白细胞抗原ＤＲ(ＨＬＡＤＲ,为ＭＨＣⅡ主要成份之一)和免疫分子Ｂ7表达水平及ＤＣ免疫功能的影响,并进一步探讨该影响在雷公藤制剂调节机体免疫状态中的可能作用。1　对象及方法1.1　实验对象及材料　健康成人10例,男女各5例,30～44岁,平均年龄38岁。雷公藤内酯醇由中国医学科学院皮肤病研究所提供。鼠抗人ＨＬＡＤＲ单克隆抗体(ＭｃＡｂ)为ＤＡＫＯ公司产品。鼠抗人ＣＤ83ＭｃＡｂ为ＴｅｄｄｅｒＴＦ博…     

雷公藤内酯注射液对人结肠癌细胞DNA嵌合能力的观察

本文用琼脂糖电泳观察阿霉素和雷公藤内酯注射液对结肠癌细胞DNA 的嵌合作用。实验发现,不同批号的雷公藤内酯注射液对结肠癌细胞DNA 嵌合能力有明显差异,并同阿霉素,随制剂存放时间延长,药物对DNA 的嵌合能力减弱。提示本实验方法可反映药物制剂质量的稳定性。     

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者外周血Th17细胞的影响

目的 观察系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血Th17细胞的变化以及雷公藤内酯醇对其的影响。方法 用流式细胞术检测15例SLE稳定期患者、16例SLE活动期患者和32例正常对照者外周血单个核细胞（PBMC）中Th17细胞比例,用RT-PCR检测PBMC中维A酸相关孤儿核受体γt（RORγt）mRNA表达水平。同时对SLE活动期和正常对照组PBMC用雷公藤内酯醇进行干预,培养24h后检测其对Th17细胞比例和RORγt mRNA表达的影响。结果 SLE稳定期及活动期组患者PBMC中Th17细胞比例均高于正常对照组,活动期组患者Th17细胞比例高于稳定期患者;SLE稳定期及活动期组患者PBMC中RORγt mRNA表达水平高于正常对照组,活动期组患者RORγt mRNA表达水平高于稳定期患者,差异均有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。经雷公藤内酯醇干预后活动期SLE患者PBMC中Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平低于没有干预组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 SLE患者PBMC中Th17细胞比例和RORγt mRNA表达水平升高,雷公藤内酯醇在体外实验中能降低SLE患者PBMC中Th17细胞比例、减低RORγt mRNA表达水平。     

雷公藤与4种中药饮片配伍对雷公藤内酯醇的影响

目的 研究赤芍、莱菔子、佛手、竹茹与雷公藤配伍后对雷公藤内酯醇的影响.方法 4种饮片分别与雷公藤配伍,加水提取,用HPLC测定雷公藤单提液及其配伍提取液中的雷公藤内酯醇.结果 佛手-雷公藤配伍提取液中雷公藤内酯醇约增加25%(P＜0.05).其余配伍提取液中雷公藤内酯醇无显著变化.结论 佛手和雷公藤配伍能明显增加提取液中雷公藤内酯醇,其余配伍对雷公藤内酯醇无显著影响.     

雷公藤内酯醇与表雷公藤内酯醇的HPLC测定

建立了HPLC法以测定雷公藤内酯醇与差向异构体表雷公藤内酯醇的含量。采用Hypersil ODS色谱柱，以甲醇－水（45：55）为流动相，检测波长为220nm。两者均有良好的线性关系，γ分别为0．9998和0．9996。方法精密度分别为0．73％和0．52％。方法平均回收率分别为100．2％（RSD0．36％）和99．6％（RSD1．03％）。     

体外观察雷公藤内酯醇对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测不同条件下TP对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察TP对MCF-7细胞形态学影响;流式细胞仪检测MCF-7细胞的凋亡情况;Caspase检测试剂盒测定Caspase-3,9的变化。结果:TP以剂量及时间依赖性方式明显抑制MCF-7细胞的增殖;TP作用MCF-7细胞后,细胞出现明显的形态学改变(形态不规则、脱落,细胞碎片等)。流式细胞仪检测5μg/mL的TP明显诱导MCF-7细胞凋亡;Caspase-3,9表达水平明显升高,和对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TP可能通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡而发挥其抑制作用。     

雷公藤内酯醇与人乳腺癌细胞大分子DNA作用膜式的探讨

采用药物与ＤＮＡ作用的体外检测方法，以ＤＮＡ嵌入剂表阿霉素（ＥＤＲ）作对照，从分子药理水平研究雷公藤内酯醇（ＴＬ）对乳腺癌细胞ＤＮＡ的作用模式。实验发现ＴＬ在１２０μｇ／ｍｌ浓度，３７℃作用２４ｈ可与ＤＮＡ模板结合，同ＥＤＲ呈嵌合效应，但嵌入ＤＡＷ尚不牢固，易发生解离；ＥＤＲ在较低浓度（５μｇ／ｍｌ）作用３０ｍｉｎ即可显示明显的嵌合效率且不是可逆的。说明ＴＬ对乳腺癌细胞ＤＮＡ的作用模式为嵌合逆行模     

雷公藤多苷片中雷公藤总内酯及雷公藤内酯醇的测定

建立雷公藤多苷片中雷公滕总内酯及雷公藤内酯醇的含量测定方法。方法:采用比色法,以3,5-二硝基苯甲酸显色,于540 nm 波长处测定吸收度,测得雷公藤总内酯含量;另外采用高效液相色谱法,使用 ODS 柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相 A 为甲醇,流动相 B 为甲醇-0.01mol·L~(-1)磷酸二氢钾水溶液(20∶80),采用梯度洗脱,于218 nm 处检测,测定雷公滕内酯醇的含量。结果:以比色法测定雷公藤总内酯(以雷公藤内酯醇计),浓度在8～40mg·L~(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率(n=9)为100.6%;以高效液相色谱法测定雷公藤内酯醇,浓度在10～100 mg·L~(-1)范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=9)为99.6%。测得市售雷公藤多苷片中雷公藤总内酯含量在0.061%～0.363%范围内,雷公滕内酯醇含量在0.002%～0.200%范围内。结论:两方法均准确可靠、耐用性良好,可用于雷公藤多苷片质量分析控制。市售雷公藤多苷片中雷公藤总内酯及雷公藤内酯醇含量差异较大,应该加强其质量控制、保障用药安全与有效。     

雷公藤内酯醇对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响

目的研究雷公藤内酯醇对表皮生长因子(EGF)信号刺激下HaCaT细胞生长增殖的影响.方法以永生化的皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞为靶细胞,观察雷公藤内酯醇(10-10～10-6 mol·L-1)对10 ng·mL-1 EGF信号刺激下HaCaT细胞生长曲线的影响;用光镜直接镜检及Gimasa染色观察细胞形态和生长状况;用MTT法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞DNA合成和凋亡.结果雷公藤内酯醇影响EGF信号刺激下HaCaT细胞的生长状态并抑制其生长速度,对细胞增殖效应的抑制呈剂量依赖性,IC50在(1.2～2.5)×10-8 mol·L-1,对DNA的合成也有较强的抑制作用.同时雷公藤内酯醇有诱导HaCaT细胞晚期凋亡的现象.结论雷公藤内酯醇对EGF信号刺激下的角质形成细胞生长和增殖效应有明显抑制作用.     

雷公藤内酯醇的结构修饰

为降低雷公藤内酯醇的毒性,寻找高效低毒的抗炎免疫化合物,对雷公藤内酯醇(trip-tolide,1)的结构进行了修饰,合成了九个雷公藤内酯醇衍生物。初步活性测定显示雷公藤氯内酯(tri-pchlorolide,2)和雷公藤溴内酯醇(tripbromolide,3)的免疫抑制活性与雷公藤内酯醇近似,但毒性有所降低。其他化合物的活性大大低于雷公藤内酯醇。     

雷公藤内酯醇对Raji细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的:研究雷公藤内酯醇与Raji细胞上血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系,探讨其抗肿瘤的机制.方法:在体外培养的Raji细胞上,采用免疫细胞化学、RT-PCR的测定方法.结果:雷公藤内酯醇(浓度为25 nmol·L-1)作用于Raji细胞24 h后血管内皮生长因子VEGFmRNA及蛋白的表达较对照组明显降低.结论:雷公藤内酯醇可降低Raji细胞系(非何杰金淋巴瘤B细胞系)上VEGF的表达,从而抑制肿瘤的生长.     

雷公藤内酯醇体内外对HL-60细胞作用的研究

目的探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)在体内外对人髓系白血病细胞株HL-60的作用。方法运用MTT比色法检测TPL对HL-60细胞的增殖抑制作用,采用TdT酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测TPL对HL-60细胞的诱导凋亡作用;建立HL-60裸鼠异种移植瘤模型,观察经TPL治疗后的肿瘤抑制率。结果在体外,TPL对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制及诱导凋亡作用,呈时间和剂量依赖性;在体内,TPL可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长,抑制率最高可达53.5%。结论TPL在体内外均可抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。     

异硫氰酸基雷公藤内酯醇活性代谢物雷公藤甲素在大鼠体内的药代动力学

目的观察大鼠单剂量静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇后雷公藤甲素的药代动力学。方法将大鼠分为2组(每组5只),分别单次尾静脉注射异硫氰酸基雷公藤内酯醇低、高剂量(4.25,8.50 mg·kg-1)。用LC-MS/MS法,检测大鼠血浆中雷公藤甲素的浓度,用BAPP 3.2软件计算药代动力学参数。结果低、高剂量的主要药代动力学参数如下:Cmax分别为(12.36±1.09),(55.74±21.20)ng·mL-1,Tmax均为(2.0±0.0)min,t1/2分别为(12.82±2.41),(13.73±2.84)h,AUC0-t分别为(245.93±42.50),(1034.45±471.76)ng·min.mL-1。结论在4.25～8.50 mg·kg-1,雷公藤甲素的药代动力学表现出非线性消除特征。     

HPLC法测定雷公藤多苷中雷公藤内酯甲的含量

目的:建立了雷公藤多苷中雷公藤内酯甲的含量测定方法。方法:雷公藤多苷经柱层析洗脱后,采用HPLC法进行测定。色谱柱:C18柱,流动相:乙腈-水(75∶25),流速:1.0m1.min-1;检测波长为210nm。结果:雷公藤内酯甲与其他成分分离良好。线性范围为6～120μg.ml-1(r=0.9997)。平均回收率为98.98%,RSD为1.99%(n=9)。结论:方法简便、准确、重复性好,可用于雷公藤多苷的质量控制。     

褪黑激素对HeLa细胞生长的影响

目的　研究褪黑激素对体外培养的人宫颈癌(HeLa)细胞活性的影响。方法　MTT测定褪黑激素的抗肿瘤活性;电镜观察药物对肿瘤细胞形态学的影响;流式细胞仪检测药物对肿瘤细胞周期的影响。结果　褪黑激素高浓度(2mmol·L^-1 )可抑制HeLa细胞的生长,使细胞倍增时间TD 延长,细胞杀伤率达61.0 %。用此浓度作用3d ,可使S期细胞的比例减少,细胞形态学发生非特异性改变,有较多的坏死细胞和少量凋亡细胞。结论　高浓度褪黑激素抑制HeLa细胞增殖,可能与抑制细胞的S期有关。     

雷公藤内酯醇滴眼液眼内药代动力学的实验研究

角膜移植免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因 ,寻找高效低毒的免疫抑制剂一直是临床面临的主要问题。雷公藤 (ＴｒｉｐｔｅｒｙｇｉｕｍｗｉｌｆｏｒｄｉｉＨｏｏｋ ｆ ,ＴＷＨｆ)有免疫抑制、抗炎、抗生育、抗肿瘤和抗菌作用 ,可用于治疗多种自身免疫性疾病 ,过敏性疾病 ,皮肤性疾病 ,器官移植术后抑制免疫排斥反应[1] ,但由于其全身应用对造血系统、心、肝、肾及生殖系统毒副作用较大 ,阻碍了其广泛的临床应用。雷公藤单体研究发现 ,雷公藤内酯醇 (ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ,又称Ｔ10 、甲素 )是ＴＷＨｆ的主要活性成分[2 ] ,目前虽有Ｔ10 …