绵羊胚胎体外非协同培养成就和前景

几种家畜的合子(1细胞胚胎)常能在相对简单的培养液中培养发育至胚泡期这一事实,对于早期胚胎在输卵管环境发育的属性提出了质疑。本文综述了绵羊胚胎不用协同培养,在简单培养液中发育的一些最新成果。证据表明,胚胎对于培养液中的成分变化相对来说不甚敏感,而且合子发育至胚泡期的发育率与体内培养所获得的发育率相同甚至更高。然而体外培养也带来了一些发育异常现象,包括细胞质破碎,囊胚腔提早形成,及每个胚泡中核数目减少。体外培养5天的胚胎,移植后妊娠50天时的活力比体内培养胚胎的活力降低(分别为48.2％和59.4％,P<0.1)。同样在类似的体外培养时期,经显微操作(原核基因注射)的胚胎活力也显著地降低,初步观察还表明,体外培养与平均妊娠期延长,羔羊出生时平均体重增加。及死亡数增多间有一定关系。这些异常现象有可能是植入前胚胎体外培养导致发育缺陷所致。本文对于这些结果的意义及培养系统中加入体细胞支持培养的潜在益处也作了讨论。     

培养液成分对胚胎体外发育的影响

牛体外受精、棱移植或转基因的早期胚胎需体外培养到桑椹胚或囊胚后才能非手术移植到受体母牛受孕。本文综述了体外培养液中能量培养基,血清、牛血清白蛋白（BSA）和聚乙烯醇（PVA）,生长因子、胞浆因子和细胞外基质分子,pH值,EDTA、NaN3和2,4-二硝基苯酚等对胚胎体外培养的影响。     

卵母细胞体外成熟时问对绵羊核移植胚胎发育的影响

将体外成熟的卵母细胞按不同成熟时间进行分组处理，并进行克隆胚胎的生产，实验表明，成熟时间为20-22h并在23-25h完成融合及激活的重构胚其融合率，卵裂率及体外培养到达桑葚胚／囊胚的比例分别为76．2％(176／231)、51．1％(118／231)和21．7％(23／106)，而成熟时间为16～18h及24h以上的卵母细胞进行核移植胚胎的生产，其重构胚各种相应的数据分别为44．9％(84／187)、20．9％(39／187)、10．8％(4／37)以及71．1％(263／367)、48．0％(176／367)、和8．5％(14／176)。     

家畜早期胚胎的体外发育

本文概述了近年来家畜早期胚胎体外发育方面的研究进展,着重探讨了早期胚胎体外发育阻断期与胚胎基因组的激活、细胞周期对早期胚胎发育的调节、能量代谢机理与培养基的改进,不同家畜早期胚胎的体外共同培养系统以及输卵管与其它生长因子的作用。 随着胚胎工程的深入研究和商业性胚胎移植的迅猛发展,对胚胎尤其是牛胚胎需求量日益增加。目前除了超数排卵以外,体外受精技术是又一条获得胚胎的主要途径。但后者需要适宜的培养系统,使受精卵体外发育到囊胚(或桑椹胚)期,以便进行非手术移植;而判断培养方法本身的成功与否通常也是以能否发育到囊胚期来衡量的。因此,建立适宜的体外培养系统,无论是在生产上还是在科研领域都具有十分重要的意义。 早期胚胎的体外培养系统比较复杂,其中对胚胎存活起关键作用的成分有温度、湿度、光、pH值、渗透压、离子浓度、能量来源、血清成分(大分子和未确定的生长因子)、气象水质及培养器皿等。由于早期胚胎体外发育时存在着“发育阻断”现象,因此仅采用无血清的特定培养基很难有效地促进早期胚胎的发育。目前,在哺乳动物尤其牛上进行了大量的研究,一般都是采用与其他细胞共同培养的方法来促进早期胚胎的体外发育,但仍存在着下列问题:(1)囊胚发育率低,在牛上仅能达到授精卵     

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响

锌对体外培养胚胎小鼠大脑皮层细胞的影响７１００３２西安第四军医大学神经科学研究所孟晋宏梁吉吉杨浩鞠躬关键词锌；细胞，培养的；培养基，无血清中国图书资料分类号Ｒ３８８．２５锌是真核生物体内重要的微量元素，在中枢神经系统中的分布以皮层和海马为最多。长期以...     

体外化生产牛胚胎的影响因素及其研究进展

本文根据国内外近年来的资料 ,通过分析体外化生产牛胚胎的各个环节和方法 ,从卵母细胞的体外成熟 (InVitroMaturation ,IVM )、精子的体外获能与受精 (InVitroFertilization ,IVF)及受精卵的体外培养 (InVitroCulture ,IVC)等方面探讨了影响体外化生产牛胚胎的因素及提高胚胎生产率的措施     

绵羊和牛胚胎的渗透压特性

简化低温保存家畜胚胎的程序是相当实用和重要的,对小白鼠的胚胎研究表明,快速冷冻比控制速度冷冻需要更高的抗冻剂浓度。由于牛羊胚胎大小和膜的特性的差异,在去除抗冻剂时,牛羊胚胎比小白鼠胚胎对渗透压的变化更为敏感。     

显微注射对绵羊体外受精胚胎的影响

本文研究了显微注射对绵羊体外受精胚胎发育的影响,显微注射组和对照组的囊胚率分别为9．1％和32．2％（P＜0．05）。利用慢速冷冻的方法,显微注射组和对照组的囊胚的冷冻解冻后的存活率没有差异（分别为75．5％和77．7％,P＞0．05）。显微注射组和对照组的冷冻胚胎移植后的产羔率分别为25．0％和33．3％（P＞0．05）。结果表明,绵羊合子原核显微注射外源DNA后的发育能力下降,而发育到囊胚阶段的胚胎的抗冻性及移植后的发育能力受到的影响较小。     

绵羊胚胎直接进入液氮气的快速冷冻

现在所用的绵羊胚胎冷冻的方法是慢速冷冻。这些方法是可靠的,但需要昂贵的仪器设备,费时较长。最简单的冷冻方法是直接将胚胎从室温移入液氮。这种快速冷冻的简易方法尤其适用于绵羊和牛胚胎的商品应用。快速冷冻依赖于使在可渗透抗冻剂中胚胎的脱水,以防止使胚胎致死的冰晶形成。将胚胎放入高渗抗冻液中可引起胚胎快速收缩 渗透和脱水的程度能通过胚胎放入培养液的时间长短和温度加以控制。     

生物活性因子对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外发育的影响

免疫活性肽 (ICP)和表皮生长因子 (EGF)是两种生物活性因子 ,ICP对牛卵母细胞体外成熟及胚胎体外培养的影响还未见报道。本实验将ICP ( 1 0、1 0 0、50 0ng/ml)和EGF ( 2 .5、2 5、50ng/ml)加入成熟液和培养液中 ,对照组中不含生物活性因子。结果表明ICP在浓度为 50 0ng/ml时对卵母细胞成熟有抑制作用 ,对胚胎发育无明显作用 ;EGF( 50ng/ml)对牛卵母细胞成熟和胚胎发育均有促进作用     

供、受体绵羊处理同步性和发情同步差对移植胚胎成活率的影响

研究供受体羊同期发情处理的同步性和发情同步差对移植胚胎成活率的影响。结果:与供体羊同期处理的受体、比供体羊提前1d处理的受体、比供体羊晚一天处理的受体和比供体羊提前2d处理的受体移植胚胎后,移植单胚和双胚胎成活率分别为64.18%和55.44%、56.93%和33.33%、54.5%和43.33%、20.00%和16.67%。同期处理组,均以发情同步差在0~12h内的受体羊妊娠率和胚胎成活率为最高,其值为75.94%和65.74%,其次为同步差在12~24h,受体羊的妊娠率和胚胎成活率分别为61.46%和55.88%;同步差大于24h以上,受体羊的妊娠率和胚胎成活率显著下降。非同期处理组,部分供、受体羊同期发情,并获得57.41%~66.67%的受体羊妊娠率。可见:随着供、受体发情同步差的增大,受体羊的妊娠率和移植胚胎成活率下降,非同期处理的供、受体羊的同期发情在胚胎移植生产中也发挥着重要作用。     

牛腔前卵泡的体外培养

用无血清培养系统研究了牛腔前卵泡的体外培养。直径为 1 0 0～ 2 0 0 μm的牛腔前卵泡在添加L -谷氨酸、BSA、睾酮、转铁蛋白和硒的McCoy’s 5a培养液中培养 ,卵泡保持正常的形态结构并持续生长。培养的第 1 0d左右形成卵泡腔 ,成腔率约50 %。培养液中添加胰岛素 ,对卵泡直径的增长和卵泡腔的形成有明显的促进作用 ,但添加FSH对腔前卵泡的生长未表现促进作用     

发情牛血清和绵羊卵泡液对绵羊卵母细胞体外成熟和受精的影响

本试验研究了绵羊卵泡卵母细胞在体外成熟时,以M-199为基础液,加入FBS,OCS,以及不同直径(小于8mm或大于10mm)卵泡的卵泡液对体外成熟率和体外受精率的影响。在添加同等浓度促性腺激素(FSH,0.4μg/ml;LH,2iu/ml)时,添加5%FBS或5%OCS的成熟率分别为10.00%和69.30%(P<0.05);体外受精分裂率分别为0和60.84%(P<0.05)。在添加以上浓度促性腺激素和5%OCS的基础上添加3%大卵泡液或小卵泡液时,卵母细胞成熟率分别为53.10%和78.20%(P<0.05);体外受精分裂率分别为50.00%和71.67%(P<0.05)。结果表明,发情牛血清配合大卵泡液可以充分满足绵羊卵母细胞体外成熟的需要。     

女性年龄与体外受精胚胎移植结果的关系

目的　探讨女性年龄与体外受精 胚胎移植结果的关系。方法　分析IVF ET 10 6个起始周期、90个移植周期的临床资料 ,按女性年龄≤ 30岁 ,31～ 34岁 ,≥ 35岁分Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ组 ,比较取消率、Gn用量、卵泡数、回收卵子数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率的差别。结果　 3组的取消率分别为 12 .5 0 % ,2 .78% ,33 .33 % ,三组间相比差异显著 (P <0 .0 5 ) ;Gn用量分别为 (2 8.71± 5 .45 )支、(33 .46± 7.5 1)支、(34.0 5± 5 .78)支 ,3组相比 ,Ⅰ组与Ⅱ ,Ⅲ组差异显著 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ组与Ⅲ组之间差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;各组间卵泡数、周期取卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;3组受精率分别为 74.49% ,6 8.0 7% ,6 7.82 % ,各组间相比 ,Ⅰ组与Ⅱ ,Ⅲ组差异显著 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ组与Ⅲ组间差异不显著 (P >0 .0 5 ) ;而卵裂率、优质胚胎率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;3组的每移植周期妊娠率分别是 45 .71% ,2 5 .71% ,15 .0 0 % ,各组间相比差异显著 (P <0 .0 5 )。结论　女性年龄是影响IVF ET成功的重要因素     

施万细胞高效体外传代培养的实验研究

目的探讨获取大量高纯度施万细胞(SC)的体外培养纯化方法。方法取6~7 d SD乳鼠坐骨神经,立体显微镜下机械性剥除神经外膜与束膜,采用低浓度胰酶消化法和差速贴壁法去除成纤维细胞,阿糖胞苷与G enetic in联合应用进行SC纯化,牛脑垂体提取物(BPE)促进SC增殖。结果经形态学及S-100蛋白相关抗原免疫细胞化学染色鉴定证实所获得的SC状态良好,纯度较高,可达96%以上。结论本方法可以体外获取大量、高纯度的SC,为神经组织工程的研究奠定了实验基础。     

新疆规模羊场萨福克与湖羊杂交应用试验

为建立适应新疆规模化羊场的杂交生产体系,提高种羊利用率及当地绵羊的生产性能,以萨福克羊为父本、湖羊为母本,在规模羊场开展杂交应用试验。以出生日龄相近的萨湖F1为试验组,湖羊羔羊为对照组,测定初生重、2月龄重、4月龄重、6月龄体重、6月龄体尺等生长指标及宰前活重、胴体重、净肉重、屠宰率和净肉率等屠宰性能指标。结果表明,萨湖F1羔羊的2月龄重、4月龄重、6月龄体重及日增重显著高于湖羊F1羔羊(P0.05),6月龄萨湖F1羔羊平均宰前活重、胴体重、净肉重、屠宰率及净肉率显著高于湖羊F1羔羊(P0.05)。利用萨福克杂交改良规模羊场湖羊,可以显著提高羔羊的生长发育,杂种优势显著。     

不同日粮组成对育肥羊生产性能及屠宰性能的影响

本文旨在研究在羊的日粮中用苜蓿替代部分豆粕和秸秆对羊的生长性能和屠宰性能的影响,选择12只小尾寒羊羔羊,平均分成两组,对照组的日粮组成是豆粕 秸秆型日粮,试验组是苜蓿 秸秆型日粮,进行饲养试验和屠宰试验。结果表明:(1)试验组羊的日增重较对照组羊提高了22.78g/d。(2)试验组羊的屠宰率和净肉率分别比对照组提高了6.27%、4.62%。(3)试验组羊的失水率、剪切值、脂肪含量、蛋白质含量分别比对照组羊提高了1.35%、0.37kg、0.35%、0.95%。(4)试验组羊的经济效益明显好于对照组,每只羊多收入17.23元。在羊的日粮中用苜蓿替代部分豆粕和秸秆是养羊生产者提高经济收入的有效途径。