卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子生成的影响

目的 探讨卡泊三醇、维A酸及雷公藤内酯醇对角质形成细胞及COLO16细胞中血管内皮生长因子(VEGF)生成的影响.方法 采用RT-PCR法检测原代培养的人角质形成细胞及COLO16细胞中VEGFmRNA的水平.结果 卡泊三醇作用于正常人角质形成细胞4h和24h后,以及作用COLO16细胞24h后,均可抑制VEGFmRNA的表达,呈剂量依赖性,IC₅₀值分别为1.19×10^-4μg/mL、1.51×10^-4μg/mL和3.16×10^-5μg/mL.维A酸作用于正常人角质形成细胞4h后可抑制VEGFmRNA的表达,作用于正常角质形成细胞24h后及作用于COLO16细胞4h和24h均无抑制作用.雷公藤内酯醇对正常角质形成细胞和COLO16细胞中VEGFmRNA表达均无抑制作用.结论 在转录水平抑制VEGF生成可能是维A酸与卡泊三醇抗银屑病的作用机制之一.     

凉血活血胶囊对皮肤角质形成细胞凋亡的研究

目的 观察凉血活血胶囊对体外角质形成细胞株凋亡的影响,初步探讨其治疗银屑病的机制。方法 以TUNEL法检测银屑病患者皮损细胞凋亡、PCNA检测增殖细胞核抗原,并以碘化丙啶法和膜联蛋白V法在流式细胞仪上检测凉血活血胶囊对体外角质形成细胞凋亡作用的影响。结果 银屑病皮损中基底层和棘细胞中下层角质形成细胞增殖和凋亡较正常皮肤均有所增加。凉血活血胶囊可诱导培养的角质形成细胞凋亡,在1、5、10 mg/mL时分别为24.67±5.07、50.33±10.04、66.20±6.91,随着浓度增加,细胞凋亡率增加,与正常对照组比较差异有显著性,与试验对照复方青黛胶囊组比较差异无显著性。结论 银屑病皮损中角质形成细胞增殖和凋亡发生紊乱,两者在较高水平保持相对平衡。凉血活血胶囊可以诱导细胞凋亡,从而达到治疗银屑病的目的。     

维胺酯对HaCaT细胞增殖和分化的影响

目的 探讨维胺酯对体外培养角质形成细胞(HaCaT细胞)增殖和分化的影响.方法 将浓度为2,5,10,15,20,25,30 μg/mL的维胺酯作用于培养的HaCaT细胞,采用MTT法检测维胺酯对HaCaT细胞体外增殖的影响,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡率变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测分化标记物角蛋白10及内披蛋白mRNA的表达水平.结果 2 μg/mL维胺酯处理的HaCaT细胞,48 h时表现出对细胞增殖的抑制作用,随着时间延长和药物剂量加大,抗增殖作用愈明显;当药物质量浓度达到30 μg/mL时,48 h和72 h时的抑制率分别为57.67%和82.00%.与对照组相比,经维胺酯作用48 h后,细胞G₁期比例显著增加,S期与G₂期比例则显著下降,并可抑制G₁/G₂期转换,但对细胞凋亡无影响.细胞内披蛋白mRNA表达水平随维胺酯处理浓度增高而上升,药物浓度达30μg/mL时,表达水平由对照组的40.80%增高至156.12%;而角蛋白10 mRNA表达水平则下降,由96.46%降至14.60%.结论 维胺酯具有抑制角质形成细胞增殖及诱导其分化的作用.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A诱导黑素瘤B16细胞凋亡的体外研究

目的 探讨超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)诱导黑素瘤B16细胞凋亡.方法 用不同浓度的SEA(0.001、0.01、0.1、1 μg/mL)作用于体外培养的B16细胞,采用荧光法观察SEA诱导B16细胞凋亡的形态学改变,用末端标记法(TUNEL)计算细胞凋亡率,用流式细胞仪分析B16细胞的凋亡周期.结果 三种方法均显示SEA对小鼠B16细胞有明显的诱导凋亡作用,SEA在0.01 μg/mL浓度时B16细胞的凋亡率最高.结论 超搞原SEA对体外培养的小鼠B16细胞有诱导凋亡的作用.     

寻常性银屑病患者皮损中维A酸受体αmRNA的表达

目的 探讨维A酸受体αmRNA在寻常性银屑病皮损中的表达状况。方法 应用RT-PCR方法检测20例寻常性银屑病患者皮损部位和10例正常人表皮中维A酸受体αmRNA的表达情况。结果 维A酸受体αmRNA的表达在寻常性银屑病表皮中较正常人低,且差异有显著性(P<0.01)。结论 维A酸受体αmRNA的表达降低可能和银屑病发病有关。     

抗角蛋白自身抗体对角质形成细胞凋亡的影响

目的 探讨抗角蛋白自身抗体(AK auto Ab)对角质形成细胞凋亡的影响。方法 以不同浓度AK auto Ab作用体外培养人角质形成细胞后,用光镜及透射电镜观察细胞形态变化、用流式细胞仪分析细胞周期变化以及提取角质形成细胞DNA作电泳特征分析。结果 AK auto Ab作用后培养的角质形成细胞光镜、电镜下形态发生凋亡特有的改变,出现核固缩、染色质凝聚,并形成凋亡小体;细胞周期分析图中出现凋亡峰;DNA电泳呈有一定间隔的梯状条带。结论 AK auto Ab对角质形成细胞的凋亡具有诱导作用。     

五倍子对角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞体外增殖的影响

目的 了解中药五倍子治疗瘢痕疙瘩的药用成分和药用机制以及可能存在的不良反应。方法 用MTT比色试验研究五倍子单宁酸对正常人皮肤中的角质形成细胞、黑素细胞和成纤维细胞体外增殖的影响。并与秋水仙碱及红花和芦荟进行了比较。结果 ①五倍子单宁酸与五倍子生药醇提物对人成纤维细胞的增殖具有相似的抑制作用。在20μg/mL及以上质量浓度时,对人皮肤黑素细胞的抑制作用较大,其细胞增殖率是不加药对照组的73.6%～68%。在50μg/mL以下的质量浓度对人角质形成细胞的体外增殖有轻微的促进作用(111%～112%)。②红花生药醇提物和芦荟水提液在实验浓度下均可促进人角质形成细胞的体外增殖,芦荟水提液还可促进人成纤维细胞的体外增殖。结论 单宁酸是五倍子醇提物中的主要活性物质,其对黑素细胞的抑制作用提示五倍子单宁酸可能存在毒副作用。     

角质形成细胞生长因子及神经细胞生长因子在银屑病患者皮损中的表达

目的 探讨角质形成细胞生长因子(KGF)及神经细胞生长因子(NGF)与银屑病的关系及银屑病皮损中间质细胞与角质形成细胞的相互作用。方法 应用免疫组化技术分别检测33例银屑病患者皮损、8例非皮损和13例正常人皮肤中KGF、KGF受体、NGF、NGF受体的表达。结果 KGF、KGF受体在银屑病患者基底层和棘细胞下层有极强的表达,与非皮损组及正常对照组间差异有显着性(P<0.05),而非皮损组与正常对照组间差异无显着性(P>0.05).KGF、KGF受体在真皮层未见表达。NGF、NGF受体则主要表达在颗粒层和棘细胞上层,皮损组与非皮损组之间及非皮损组与正常组之间均差异有显着性(P<0.05)。结论 银屑病患者皮损中KGF及NGF可能介导了角质形成细胞的增殖与分化不全;银屑病皮损中存在着间质细胞和角质形成细胞相互作用的紊乱。     

银屑病患者角质形成细胞对朗格汉斯细胞分化发育的影响

目的 从朗格汉斯细胞(LC)的分化发育过程探讨银屑病角质形成细胞在此过程中的作用.方法 从健康者外周血分离单一核细胞,经银屑病患者角质形成细胞培养上清液与白介素4+粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)+转化生长因子β1共同培养5d,使其分化发育为LC.通过流式细胞仪分析其表型、吞噬功能,通过混合淋巴细胞反应分析其抗原递呈功能.结果 银屑病患者角质形成细胞培养上清液与白介素4+GM-CSF+转化生长因子β1共同培养的LC其表型特征、吞噬抗原的能力以及刺激T淋巴细胞的活性等与健康对照组间差异无显着性.结论 银屑病患者角质形成细胞与正常人角质形成细胞对LC分化发育的影响差异无显着性,提示银屑病患者LC的异常可能不是发生于LC的分化发育过程中.     

β溶血型链球菌诱发点滴型银屑病发病机制的研究

目的 探讨β溶血型链球菌所诱发的急性点滴型银屑病的发病机制.方法 应用MTT方法观察急性点滴型银屑病患者外周血淋巴细胞(PBMC)对链球菌抗原的反应,用³H-TdR掺入法和免疫组织化学方法检测链球菌抗原刺激的PBMC培养上清液对人类角质形成细胞株COLO16DNA合成以及HLA-DR、ICAM-1分子表达的影响.结果 急性点滴型银屑病患者PBMC对链球菌抗原的反应较对照组更为明显(P<0.01),其24h链球菌抗原刺激的PBMC培养上清液对角质形成细胞的促增殖作用较对照组显着增强(P<0.01),并能诱导角质形成细胞表达HLA-DR和ICAM-1.结论具有银屑病素质的个体体内可能存在链球菌抗原特异性的T淋巴细胞,受链球菌抗原或超抗原作用后增殖,产生大量细胞因子,导致角质形成细胞过度增生和HLA-DR、ICAM-1异常表达.     

卡泊三醇对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同浓度卡泊三醇(CPT)对小鼠黑素瘤B16细胞增殖及凋亡的影响。方法不同浓度CPT作用于体外培养的小鼠黑素瘤B16细胞24h,在倒置显微镜下观察细胞密度及形态,采用MTT比色法和AnnexinV/PI染色法分别检测细胞增殖抑制率和凋亡率。结果与对照组相比,CPT浓度为1,10μg/mL组中B16细胞密度及形态无明显变化,也无增殖抑制作用(P>0.05)。而当CPT为102,103μg/mL时,细胞密度减少,形态由多角形变为略圆钝,甚至皱缩,对细胞增殖呈剂量依赖性的抑制作用(P<0.05)。CPT为1,10,102μg/mL时对B16细胞无凋亡诱导作用(P>0.05),而103μg/mL时则明显促进细胞凋亡(19.17±0.31)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CPT≤10μg/mL对B16细胞密度形态、增殖抑制率和凋亡率无明显影响;CPT≥102μg/mL能改变B16细胞形态,并呈浓度依赖性地抑制其增殖;而当CPT≥103μg/mL时能诱导B16细胞凋亡。     

中波紫外线诱导的人角质形成细胞凋亡与SSA/Ro抗原表达

目的 为明确紫外线对光敏感型皮肤型红斑狼疮的作用机制,光照后人角质形成细胞表面SSA/Ro抗原的形成机理及其在皮损形成中的作用。方法 用M154培养基体外培养角质形成细胞,经UVB照射后先用相差显微镜观察细胞形态学改变,并用原位末端标记法测定凋亡细胞的断裂DNA片段,同时用间接免疫荧光法测定角质形成细胞表达SSA/Ro抗原情况;然后分别用DNase、RNase、DNase+RNase消化,碘化丙啶复染。用ELISA法测定细胞上清液SSA/Ro抗原;小剂量UVB照射后的角质形成细胞与亲和纯化的SSA/Ro特异血清及正常人血清孵育,台盼蓝染色观察细胞活性。结果 不同剂量UVB(52.8mJ/cm²、105.6mJ/cm²、158.4mJ/cm²、200mJ/cm²、211mJ/cm²)照射后KC凋亡,表面有凋亡小泡,细胞核有断裂DNA缺口并表达SSA/Ro抗原,随UVB剂量的递增,凋亡和表达SSA/Ro抗原的细胞数增多。这种抗原位于凋亡细胞的凋亡小体中,表达于细胞表面的SSA/Ro抗原可在原位诱导补体杀伤,而在细胞上清液中未测到SSA/Ro抗原。结论 UVB照射角质形成细胞通过诱导角质形成细胞凋亡表达自身抗原SSA/Ro,该抗原并不释放到上清液中,在补体和相应抗体存在的情况下可引起细胞损伤。     

Apoptosis Is Induced by Anti-Fas Antibody Alone in Cultured Human Keratinocytes

Fas is a well-known cell surface receptor whose main function is the induction of apoptosis in many cell types including human keratinocytes. Several reports indicate that anti-Fas antibody can induce apoptosis in cultured keratinocytes after interferon gamma (IFNγ) pretreatment. Because IFNγ is synthesized by activated T cells, but not by keratinocytes, these results suggest that Fas may only be effective in apoptosis occurring in T-cell mediated inflammatory skin diseases. We hypothesized that Fas alone might mediate apoptosis in normal human keratinocytes without any other help and thus play a role in normal epidermal homeostasis. By using Cell Death Detection ELISA, we observed keratinocyte apoptosis 24 hours after anti-Fas antibody stimulation not only in IFNγ-pretreated conditions but also in non-pretreated conditions. Even though the percentage of cultured keratinocytes stained by anti-Fas antibody increased from 7.8 to 25.8% 24 hours after IFNγ stimulation, the apoptotic rate of the anti-Fas only group was the same as that of the anti-Fas plus IFNγ treated group. In both conditions, we have verified apoptotic phenomena in cultured keratinocytes in situ by TUNEL staining. Some apoptotic bodies were phagocytosed by neighboring keratinocytes. Fas-mediated apoptosis was not inhibited by the protein synthesis inhibitor cycloheximide and was enhanced by inhibitors of several protein kinases, including PKC and staurosporine. These results suggest that Fas-mediated apoptosis may play a role in both T cell-mediated skin diseases and normal epidermal homeostasis.     

齐墩果酸对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响

目的探讨齐墩果酸对阿霉素诱导的培养人皮肤角质形成细胞凋亡的影响。方法用MTT法通过比色分析测定吸光度(A)值,检测不同剂量齐墩果酸和阿霉素给药对角质形成细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡。结果阿霉素抑制体外培养的人皮肤角质形成细胞增殖,先给予齐墩果酸处理细胞,然后给予阿霉素,齐墩果酸升高A值(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.05)。结论先行给予适当剂量齐墩果酸处理细胞,能一定程度减轻阿霉素对细胞的损伤,表现出对阿霉素致凋亡的保护作用。     

MTX对正常人表皮角质形成细胞体外培养增殖的作用及影响

目的　探讨甲氨蝶呤 (MTX)对表皮角质形成细胞的作用及影响 ,进而了解MTX治疗银屑病的机理。方法　将人体离体角质形成细胞培养、分离传代并测定其自然生长曲线作对照 ;将不同浓度MTX与角质形成细胞混合培养 ,测定在MTX作用下的角质形成细胞生长曲线 ,比较MTX对细胞生长的影响。结果　MTX对角质形成细胞的体外生长具有明显的抑制作用 ,不仅明显抑制角质形成细胞的正常生长 ,而且可以促使细胞的提前凋亡。结论　MTX通过抑制角质形成细胞的DNA及RNA合成调节细胞的生长代谢及自然凋亡过程 ,尤其对银屑病患者生长过度活跃的表皮角质形成细胞产生调节作用 ,使细胞的过度生长受到抑制 ,保持角质形成细胞的自然生长平衡     

雷帕霉素对Colo-16细胞系Stat3表达的影响

目的研究雷帕霉素对皮肤鳞状细胞癌Colo-16细胞系Stat3表达的影响。方法用不同浓度的雷帕霉素处理Colo-16细胞,Hoechst33258荧光染色法观察凋亡细胞的形态学变化;Western-blotting法检测Colo-16细胞Stat3,P-Stat3蛋白表达水平。结果雷帕霉素能够诱导Colo-16细胞凋亡,荧光染色可见细胞核染色质凝聚、核裂解的形态学改变;在雷帕霉素作用后Colo-16细胞Stat3,P-Stat3表达显著下调。结论雷帕霉素能诱导Colo-16细胞凋亡,其作用机制可能与Stat3表达下调有关。     

靛玉红紫草素对角质形成细胞株凋亡的影响

目的　观察靛玉红、紫草素对体外角质形成细胞株凋亡的影响 ,初步探讨其治疗银屑病的机制。方法　以PI法和Annexin Ⅴ法在流式细胞仪上检测靛玉红、紫草素对体外角质形成细胞凋亡的影响。结果　靛玉红在 0 .10 ,0 .2 5 ,0 .5mol/L时细胞凋亡率分别为 7.5 2 %± 0 .73 % ,19.2 2 %± 4.13 % ,3 0 .62 %± 2 .68% ;紫草素在相同浓度时分别为6.72 %± 0 .73 % ,12 .5 9%± 2 .0 5 % ,3 6.47%± 3 .11%。结论　靛玉红、紫草素可以诱导细胞凋亡 ,从而达到治疗银屑病的目的。