β1-肾上腺素受体自身抗体对大鼠B淋巴细胞增殖的影响

目的 探讨β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)对大鼠B淋巴细胞增殖的影响.方法 本研究以主动免疫大鼠的方法获得β1-AA阳性的IgGs (pIgGs);免疫磁珠分选技术获得大鼠B淋巴细胞;CCK8法检测B淋巴细胞的增殖能力.结果 β1-AA(0.1 μmol/L pIgGs)促进LPS刺激的大鼠B淋巴细胞增殖(A值:0.739±0.036 vs 0.533±0.032,P＜0.05),且有浓度依赖性的趋势;该效应可以分别被β1/β2-肾上腺素受体(β1/β2-AR)阻断剂部分阻断,被两种阻断剂共同作用完全阻断;pIgGs对静息的大鼠B淋巴细胞无增殖作用.结论 β1-AA可能通过B淋巴细胞表面的β1-AR和/或β2-AR信号通路促进激活的B淋巴细胞增殖.     

脂联素抑制β1-肾上腺素受体自身抗体诱导的大鼠H9c2心肌细胞自噬流下降

目的:观察脂联素抑制β1-肾上腺素受体(β1-AR)自身抗体(β1-AA)诱导的大鼠心肌细胞自噬流下降的作用及机制。方法:SD大鼠随机分为免疫组和对照(control)组,每组6只;H9c2大鼠心肌细胞分为control组、β1-AA组、β1-AA+脂联素组、脂联素组、β1-AA+脂联素+Compound C组和β1-AA+Compound C组。合成β1-AR细胞外第2环(β1-AR-ECII)抗原肽段,主动免疫SD大鼠并采用亲和层析法纯化大鼠血清中β1-AA;CCK-8法检测H9c2心肌细胞活力;real-time PCR检测心肌细胞LC3B和beclin-1的m RNA水平;Western blot检测心肌细胞LC3-II、P62、AMP活化蛋白激酶(AMPK)和磷酸化AMPK(p-AMPK)的蛋白水平。结果:与control组相比,10μg/L脂联素预处理可显著抑制β1-AA诱导的心肌细胞活力下降(P<0.05);脂联素预处理可显著逆转β1-AA诱导的心肌细胞LC3B和beclin-1 m RNA水平下降、LC3-II蛋白表达水平下降及P62蛋白的累积(P<0.05);脂联素可逆转β1-AA诱导的心肌细胞AMPK磷酸化水平下降(P<0.05)。加入AMPK抑制剂Compound C预处理,脂联素则不能逆转β1-AA诱导的心肌细胞LC3B和beclin-1 m RNA及LC3-II蛋白水平降低(P<0.05),但仍可减少P62蛋白累积(P<0.05)。结论:脂联素抑制β1-AA诱导的H9c2大鼠心肌细胞自噬流降低,其机制部分依赖AMPK途径。     

扩张型心肌病患者血清中的β1-肾上腺素受体自身抗体通过β1-肾上腺素受体抑制CD4＋T淋巴细胞的增殖作用

目的探讨扩张型心肌病患者血清中针对β1-肾上腺素受体细胞外第二环（ the second extracellular loop of β1-adrenoceptor ,β1-AR-ECⅡ）功能表位肽段的自身抗体（β1-AA）对大鼠CD4＋T淋巴细胞增殖能力的影响。方法采用亲和柱纯化试剂盒提纯扩张型心肌病（ DCM）患者血清中的β1-AA;利用免疫磁珠分选技术分离出大鼠外周血单核细胞中的CD4＋T淋巴细胞,流式细胞技术检测CD4＋T细胞的阳性率;采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;流式细胞术检测CD4＋/CD8＋T淋巴细胞的比值。结果经免疫磁珠分选后CD4＋T淋巴细胞的阳性率为97．7％;β1-AA可浓度依赖性抑制CD3/CD28刺激的CD4＋T淋巴细胞增殖;β1-AA被β1-AR-ECⅡ中和后,该效应消失;β1-AR特异性阻断剂美托洛尔可完全阻断该抑制效应;β1-AA作用于总T淋巴细胞24 h后,CD4＋/CD8＋T淋巴细胞比值没有发生明显改变。结论从DCM患者血清中提取的β1-AA可能通过CD4＋T淋巴细胞表面的β1-AR途径,导致该细胞增殖能力下降。提示β1-AA可能会直接减少T淋巴细胞的数量,使得T淋巴细胞功能下降,进而导致免疫系统紊乱,参与DCM的发生发展。     

β_1-肾上腺素受体自身抗体通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡

目的:探讨内质网应激在β_1-肾上腺素受体自身抗体(β_1-AA)引起心肌细胞凋亡中的作用。方法:采用β_1-肾上腺素受体细胞外第二环抗原肽段主动免疫大鼠,应用SA-ELISA法检测大鼠血清中β_1-AA的水平,TUNEL染色检测心肌组织的凋亡水平,Western blot法和免疫组化法检测心肌组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及caspase-12的蛋白表达。利用亲和层析法纯化的β_1-AA处理H9c2心肌细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用内质网应激抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)预处理H9c2心肌细胞,再给予β_1-AA干预,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞活力及凋亡的变化情况。结果:与对照组相比,主动免疫大鼠血清中β_1-AA水平在免疫2周时显著增加,进一步增加至8周,并且主动免疫2周大鼠心肌组织凋亡率明显升高,持续升高至8周。与对照组相比,主动免疫大鼠心肌组织中GRP78、CHOP及caspase-12的蛋白表达在免疫4周和8周时均明显增加。β_1-AA引起H9c2心肌细胞活力持续降低,凋亡明显增加。与β_1-AA单独处理组相比,内质网应激抑制剂4-PBA预处理H9c2心肌细胞可以有效逆转β_1-AA诱导的细胞凋亡增加和活力下降。结论:β_1-AA可以通过激活内质网应激诱导心肌细胞凋亡。     

β-肾上腺素能受体介导的心肌细胞凋亡

作为交感神经系统主要递质的去甲肾上腺素在多种心脏疾病中诱导心肌细胞凋亡 ,这种诱导作用主要由肾上腺素能受体 (β AR)介导 ,β AR还介导心肌细胞凋亡的信号转导 ,这对于了解心脏疾病的发病机理有一定的临床意义     

心力衰竭大鼠血清抗β3肾上腺素能受体自身抗体的生物学效应

目的:建立心力衰竭大鼠模型，探讨心力衰竭发生发展过程与抗β₃肾上腺素能受体（β₃AR）细胞外第二环自身抗体产生的关系,并观察该抗体的生物学效应。 方法:采用缩窄腹主动脉制备心力衰竭大鼠模型。（2）以人β₃AR细胞外第二环的合成肽段作为抗原，采用ELISA检测心力衰竭大鼠血清中抗β₃AR自身抗体。（3）提纯该抗体阳性的心力衰竭大鼠血清中的IgG。（4）设立各相应对照组观察该抗体对成年大鼠心肌细胞收缩效应和对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。 结果:（1）心力衰竭大鼠模型在术前抗β₃AR自身抗体呈低阳性率21.05%（4/19）、低滴度（平均滴度为 1∶19.49）；于术后12周该抗体呈高阳性率78.95%(15/19)、高滴度（平均滴度为 1∶152.79）(与术前相比，P＜0.01)。（2）该抗体可降低成年大鼠心肌细胞收缩和舒张效应，该作用不能被β1AR和β2AR受体拮抗剂（nadolol）阻断，但可被非特异性β受体拮抗剂（bupranolol）或β₃抗原阻断。（3）该抗体可降低乳鼠心肌细胞跳动频率，同样该作用不能被nadolol阻断，但可被bupranolol或β₃抗原阻断。此外，该抗体的负性变时效应在观察时间内（6 h）无衰减。 结论:本研究首次证明心力衰竭模型形成过程中可产生较高滴度的抗β₃肾上腺素能受体自身抗体并具有负性变力和变时效应，提示该抗体可能参与心力衰竭的病理生理机制。     

心力衰竭大鼠血清抗β1肾上腺素受体自身抗体的产生与生物学效应的研究

目的:建立心力衰竭大鼠模型，探讨心力衰竭发生发展过程与抗β₁肾上腺素受体（β₁AR）自身抗体产生的关系，并观察该抗体的生物学效应及其信号转导通路。 方法:采用缩窄腹主动脉法制备心力衰竭大鼠模型；应用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术，检测心力衰竭大鼠血清中的抗β₁AR自身抗体；利用亲和层析法纯化心力衰竭大鼠抗体阳性血清中的IgG，观察该抗体IgG对乳鼠心肌细胞搏动频率和成年大鼠心肌细胞腺苷酸环化酶活性的影响。 结果:(1) 心力衰竭大鼠血清中抗β₁AR自身抗体的阳性率(82.8%)和抗体滴度［1∶(67.3±2.4)］明显高于假手术组5%, ［1∶(17.3±2.0)］(P＜0.01);(2) 纯化的抗体IgG既可增加乳鼠心肌细胞的搏动频率，还可增强成鼠心肌细胞腺苷酸环化酶的活性，使cAMP产生量增加。 结论:心力衰竭可以诱导大鼠血清中抗β1AR自身抗体的产生，该抗体具有激动剂样正性变时效应，可增强腺苷酸环化酶活性。提示该自身抗体可能通过β1AR-Gs-AC-cAMP-PKA信号通路对心脏产生病理损害。     

乙型肝炎病毒诱导小鼠抗β1-肾上腺素能受体抗体的致心律失常作用机制

目的：探索乙型肝炎病毒诱导的抗β1-肾上腺素能受体抗体致病作用及机制。 方法： 乙型肝炎病毒4次接种小鼠(n=30)，并记录心电图。ELISA法检测抗体，光镜下观察心肌和肝脏的病变。免疫荧光显示该抗体与豚鼠心肌细胞能否结合。辛酸提取法提纯小鼠IgG。膜片钳技术观察抗体对豚鼠心肌细胞电生理特性的影响。 结果： 小鼠该抗体的产生与乙型肝炎病毒接种有关。实验小鼠心脏和肝脏未出现明显的组织病理改变，但6只小鼠可出现束枝传导阻滞、窦性停博、室性早搏等心律失常，其抗体均阳性。免疫荧光显示抗体能与豚鼠心肌细胞结合。该抗体使APD20、APD50、APD90分别延长36.46%、29.63%和12.40%，且使L型钙电流峰值增加(49.67±16.01)%。 结论： 乙型肝炎病毒诱导小鼠产生的抗β1-肾上腺素能受体抗体可导致多种心律失常的发生，该抗体介导心肌细胞L型钙电流增加可能是其致心律失常的机制之一。     

乙型肝炎病毒诱导小鼠抗β1-肾上腺素能受体抗体的致心律失常作用机种

目的探索乙型肝炎病毒诱导的抗β1-肾上腺素能受体抗体致病作用及机制. 方法 乙型肝炎病毒4次接种小鼠(n=30),并记录心电图.ELISA法检测抗体,光镜下观察心肌和肝脏的病变.免疫荧光显示该抗体与豚鼠心肌细胞能否结合.辛酸提取法提纯小鼠IgG.膜片钳技术观察抗体对豚鼠心肌细胞电生理特性的影响. 结果 小鼠该抗体的产生与乙型肝炎病毒接种有关.实验小鼠心脏和肝脏未出现明显的组织病理改变,但6只小鼠可出现束枝传导阻滞、窦性停博、室性早搏等心律失常,其抗体均阳性.免疫荧光显示抗体能与豚鼠心肌细胞结合.该抗体使APD20、APD50、APD90分别延长36.46%、29.63%和12.40%,且使L型钙电流峰值增加(49.67±16.01)%. 结论 乙型肝炎病毒诱导小鼠产生的抗β1-肾上腺素能受体抗体可导致多种心律失常的发生,该抗体介导心肌细胞L型钙电流增加可能是其致心律失常的机制之一.     

α_1-肾上腺素受体抗体介导对糖尿病大鼠肾小管转化生长因子-β_1表达的影响

目的:观察α1-肾上腺素受体抗体(简称α1-受体抗体)介导的糖尿病大鼠对肾小管转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其在肾小管间质病变发生发展中的作用。方法:Wistar大鼠64只,分为对照组和糖尿病组。对照组和糖尿病组又分为无介导组与抗α1-受体抗体介导组。用链脲佐菌素复制糖尿病模型。葡萄糖氧化酶法测定血糖,放射免疫法测定尿白蛋白,免疫组化法检测肾小管基质TGF-β1的表达。结果:成功构建糖尿病大鼠模型,α1-受体抗体介导的对照组和糖尿病组肾皮质远端小管均可见TGF-β1表达,且糖尿病组明显高于对照组(P<0.01)。结论:TGF-β1在α1-受体抗体介导大鼠表达增加,即TGF-β1的表达与自身免疫有关。     

原发性高血压患者中抗α1肾上腺素受体自身抗体激活大鼠主动脉平滑肌细胞内NF-κB

 目的：探讨高血压患者血清中抗α1肾上腺素受体自身抗体（autoantibodies against α1-adrenergic receptor, α1-AAs)拟去甲肾上腺素的激动样效应及胞内信号分子活化机制。方法：培养大鼠主动脉平滑肌细胞。将收集的原发性高血压病人血清进行免疫亲和层析法纯化,ELISA检测其滴度后以1∶80刺激细胞,并设立不同的处理组。将α1-AAs刺激大鼠主动脉平滑肌细胞后,经Western blotting及免疫荧光方法分析胞内核因子κB (nuclear factor κB, NF-κB) 信号分子激活及表达状况。结果：Western bltting显示α1-AAs刺激组中胞内核因子NF-κB (p50)表达较空白对照组明显增强,且可被α1受体阻滞剂哌唑嗪和NF-κB拮抗剂PDTC明显抑制（P<0.05）。免疫荧光实验中,α1-AAs组荧光强度显著高于空白对照组和α1-AAs＋哌唑嗪组(P<0.01)。结论:高血压患者血清中α1-AAs能够致大鼠主动脉平滑肌细胞NF-κB活化。     

多沙唑嗪干预对α_1肾上腺素能受体抗体阳性糖尿病大鼠心肌的保护作用

目的:探讨多沙唑嗪干预对α1肾上腺素能受体自身抗体(α1R-Ab)阳性糖尿病(DM)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)和Ⅰ型胶原表达的影响及其心肌保护作用。方法:Wistar大鼠分为5组:A组(正常对照组,n=10)、B组(DM模型组,n=10)、C组(DM+多沙唑嗪干预组,n=10)、D组(α1R-AbDM组,n=8)和E组(α1R-AbDM+多沙唑嗪干预组,n=8)。腹腔注射链脲佐霉素(STZ)复制T2DM模型。造模成功后,D组和E组于当周、第4、8、12、16周尾静脉注射α1R-Ab注射液(100μg/100g),建立α1R-AbDM模型。C组和E组均从注射α1R-Ab起每日给予多沙唑嗪0.36mg/Kg灌胃,持续16周。A组不予任何处理。16周后处死各组大鼠,取左室心肌组织常规病理切片和超薄切片,采用免疫组化检测左室心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达量,电镜观察心肌超微结构。结果:A组大鼠心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达明显低于B、C、D、E组(均P<0.01),C组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达低于B组(P<0.05),E组心肌TGF-β1和Ⅰ型胶原表达亦明显低于D组(P<0.05);电镜下,A组心肌未见明显异常;D组心肌线粒体减少,排列紊乱,呈空泡变性,间质胶原增生,微血管基底膜增厚;而E组心肌病变较D组明显减轻;C组心肌病变亦较B组明显减轻。结论:多沙唑嗪可通过抑制α1R-Ab阳性DM大鼠心肌组织中TGF-和Ⅰ型胶原表达,减轻DM大鼠心肌间质纤维化,保护心肌。     

β3肾上腺素受体与心力衰竭

肾上腺素β3受体参与心脏和血管的生理调控心脏。β3受体兴奋表现为负性变力作用。心力衰竭时 ,β3受体含量明显增加 ,其负性肌力作用更显著 ,提示 β3受体在心功能恶化和心力衰竭进程中具有重要作用。     

α1-肾上腺素受体激动时心肌细胞表型与基因表达谱的变化

目的 :分布在心脏中的肾上腺素受体 (adrenergicreceptors ,ARs)主要为α1-AR和 β -AR。已知α1-AR持续激动与心肌肥厚的发生密切相关 ,但其机制了解尚不全面 ,尤其对基因水平的了解知之甚少。为此 ,本研究在观察α1-AR激动引起心肌细胞蛋白质合成、葡萄糖摄取等表型变化的同时 ,采用高通量DNA芯片技术 ,检测了α1-AR持续激动不同时间心肌细胞基因表达谱的变化 ,并将基因表达谱变化与心肌细胞表型变化结合对比分析 ,以期深入揭示α1-AR致心肌肥厚的作用机制。方法 :体外培养乳鼠心肌细胞为实验模型 ,以心肌细胞 [3 H]-亮氨酸掺入量…     

去甲肾上腺素对培养心肌细胞肥大和凋亡的作用

目的:研究不同剂量去甲肾上腺素(NE)对培养心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法:心肌细胞暴露于NE,观察心肌细胞形态变化,通过心肌细胞蛋白质含量、[3H]亮氨酸掺入率检测心肌细胞肥大;透射电镜、DNA Ladder和流式细胞术检测心肌细胞凋亡。结果:1和10μmol/L NE可明显增加心肌细胞蛋白含量和[3H]亮氨酸掺入率,并有呈剂量依赖性升高的趋势;50μmol/L NE更可明显增加心肌细胞凋亡率;100μmol/L NE使心肌细胞凋亡率明显增高并出现超微结构改变和DNA梯状带纹。结论:低浓度NE主要诱导心肌细胞肥大,高浓度NE主要诱导心肌细胞凋亡,中浓度NE兼有两种功能。     

自噬降低激活β1-AA诱导的心肌细胞内质网应激相关凋亡途径

目的β1-肾上腺素受体自身抗体(β1-AA)诱导的心肌细胞自噬降低是否参与内质网应激(ERS)相关凋亡途径的激活。方法β1-肾上腺素受体细胞外第二环(β1-AR-ECII)抗原肽段主动免疫大鼠;亲和层析法纯化血清中的β1-AA; SDS-PAGE检测抗体纯度; Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3和p62的表达; Western blot及免疫组化法检测内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡途径相关蛋白GRP78、CHOP和caspase-12的表达。结果与对照组相比,β1-AA处理H9c2心肌细胞12和24 h后,Beclin1和LC3蛋白表达明显降低,p62蛋白表达明显增加;β1-AA作用12和24 h后,GRP78、CHOP和caspase-12蛋白表达均显著增加; 3MA抑制心肌细胞自噬后β1-AA诱导的ERS相关凋亡途径进一步激活; Rapa上调心肌细胞自噬水平后可明显逆转β1-AA诱导的ERS相关凋亡途径的激活。结论 1)β1-AA可以引起心肌细胞自噬降低,并诱导ERS相关凋亡途径激活; 2)自噬降低参与β1-AA诱导的心肌细胞ERS相关凋亡途径的激活。     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体可上调TXNIP导致大鼠胰岛β细胞系INS-1凋亡

目的血管紧张素Ⅱ1型受体(AngⅡ-1R)自身抗体能否通过影响硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)诱导大鼠胰岛β细胞凋亡。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系INS-1,用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,选用10-6mol/L作为最适浓度,24 h作为最佳时间;在上述条件下,用流式细胞计量术及Western blot检测细胞凋亡及凋亡蛋白的表达; Real-time PCR和Western blot检测AngⅡ-1R自身抗体对TXNIP mRNA和蛋白表达的影响。结果AngⅡ-1R自身抗体呈浓度及时间依赖性降低INS-1细胞的活力(P0. 05);促进INS-1细胞凋亡(P0. 01);AngⅡ-1R自身抗体还可以促进TXNIP的mRNA和蛋白表达(P0. 01)。RNA干扰沉默TXNIP表达后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的细胞凋亡减少(P0. 05);使用AngⅡ1R拮抗剂替米沙坦(TM)后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的TXNIP上调及细胞凋亡均被抑制(P0. 05)。结论 AngⅡ-1R自身抗体可以通过AT1R上调TXNIP导致胰岛β细胞凋亡,有望为AngⅡ-1R自身抗体阳性的糖尿病患者的防治提供新靶点。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用

 目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody,AT1-AA）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关的JNK表达的作用。方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）及凋亡蛋白p-JNK的表达水平。结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠（P<0.01）。Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显（P<0.05）。结论: AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能。     

糖尿病肾损害大鼠血清抗血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体水平变化

目的:观察糖尿病(DM)大鼠血清抗血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)与其肾损害的关系。方法:Wistar雄性大鼠36只,其中29只采用腹腔注射链脲左菌素(STZ)法成功复制DM模型(DM组),另7只用作对照(N组)。16周后,应用ELISA检测两组大鼠血清AT1-AA水平,根据检测结果将DM组AT1-AA阳性大鼠定为A组,AT1-AA阴性大鼠定为B组,测定各组大鼠血糖、24h尿白蛋白排泄率(UPE)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)水平。结果:DM组大鼠中分布于A组11只(37.93%),分布于B组18只(62.07%),N组大鼠中有2例AT1-AA阳性(28.57%)。DM组AT1-AA阳性率明显高于N组(P<0.05);A组UPE、BUN及Scr水平均高于B组(P<0.01)。结论:自身免疫机制可能参与了DM肾损害的发生。