苯丙氨酸羟化酶基因部分外显子突变研究

目的：探讨苯丙酮尿症(PKU)患者PAH基因突变特点。方法：用PCR—SSCP和PCR—DNA测序法对天津河北等地的70例无血缘关系并已确诊为PKU患者的基因组DNA进行PAH基因外显子3、5、6、7、10、11和12的突变基因分析。结果：70例PKU患者共140条染色体，共发现26种突变，含错义突变14种、无义突变5种、同义突变4种、剪接位点突变2种和缺失突变1种。除4种同义突变外，阳性突变率为64．28％。其中DelS70、R176X、R261X、L385L、IVS5nt 1g→a、A165D、G247R、Y325X、G344E和R413G占总突变种类的38．5％(10／26)。结论：天津河北等地的PAH基因突变类型复杂，有些常见突变的发生频率与以往报道的地域分布略有不同。     

十堰市苯丙酮尿症儿童苯丙氨酸羟化酶基因突变检测研究

目的 分析十堰市苯丙酮尿症(PKU)患儿苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的突变特点,以指导产前诊断.方法 纳入2012年1月至2015年12月十堰市确诊的PKU患儿15例为研究对象,应用PCR产物直接测序法,检测患儿PAH基因全部外显子及其启动子区域序列.结果 30个PAH等位基因中,突变基因出现19个,占63.3%,类型共10种.突变类型主要为R243Q、R241C、Y365X、R111X,其余均为散在发生突变,对比国内外文献及PAH相关国际数据库,未见新的基因突变类型.结论 十堰市PAH基因突变具有多样性和复杂性,R243Q、R241C、Y365X、R111X为其主要突变位点.     

苯丙氨酸羟化酶基因新突变A165D、Q301X和R413G的检测鉴定

苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)是一种常染色体隐性遗传病,98%~99%的PKU是由于苯丙氨酸羟化酶基因(phenylalanine hydroxylase,PAH)突变导致肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏,使苯丙氨酸不能正常转化为酪氨酸,苯丙氨酸及其代谢物在体内异常蓄积而致病。1983年PAH基因被成功克隆[1],迄今已经发现PAH基因有530多种致病突变可导致PKU。     

错配引物法检测苯丙氨酸羟化酶基因突变

苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH,酶学委员会1.14.16.1)基因发生突变是引发苯丙酮尿症的主要原因,PAH的合成障碍、活性降低或缺乏可导致苯丙氨酸在体内     

PAH基因外显子7上一个中性突变的鉴定

应用单链构型多态(Single strand conformation polymorphism,SSCP)分析技术检测了苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因外显子7,其中一例样品含突变泳带,经直接测序结果发现在密码子245上有一个碱基替换,由 G—A,但氨基酸未发生改变,为一例中性突变。     

苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复序列多态性应用分析

采用苯丙氨酸羟化酶基因内短串联重复序列扩增片段长度多态性连锁分析法，对２２个苯丙酮尿症家系进行了分析。结果显示；２２个ＰＫＵ患者的家庭均能获得多态信息，其中能获得１００％多态信息的有９个家庭，占分析对象的４０．９％。该方法快速简便，对未知基因突变的ＰＫＵ家系的前前诊断提供了可能性，达到了快速基因诊断的目的。     

唐山市苯丙酮尿症患儿筛查及PAH基因突变情况分析

摘要：目的　分析唐山市苯丙酮尿症（PKU）患儿筛查结果及苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因突变的情况。方法　选取2015年1月—2018年12月唐山市新生儿303 777例,通过茚三酮免疫荧光法检测新生儿足跟血中苯丙氨酸（PA）含量。再利用聚合酶链反应（PCR）和基因测序的方法对筛查出的PKU患儿PAH基因进行检测。结果　303 777例新生儿初步筛查共发现609例可疑阳性,召回其中411例（67.49%）进行复查,确诊42例（13.8/10万）。42例PKU患者的PAH基因测序显示,在84条染色体上共检测到62个（73.81%）12种突变,其中错义突变8种,无义突变2种,缺失突变1种,剪接突变1种。患者PAH基因突变分布在第2、3、6、7、9外显子上,其中第7外显子最多（35个,56.45%）,其次为第3外显子（14个,22.58%）。最常见的突变基因为Exon7-R243Q（18个,29.03%）和Exon3-R111X（10个,16.13%）、Exon7-R261Q（10个,16.13%）。筛查中发现1例典型PKU患儿,该患儿在PAH基因外显子区域同时发现2处杂合突变：c.208-210delTCT（缺失突变）和c.964G＞A（鸟嘌呤＞腺嘌呤）。结论　唐山市新生儿PKU发病率略高于全国,PAH基因突变以错义突变为主,第7外显子是唐山市患儿PAH基因高频突变位点。     

应用DHPLC与SSCP法检测苯丙氨酸羟化酶外显子7基因突变

苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH：EC1．14．16．1）是体内苯丙氨酸转化为酪氨酸的关键酶。PAH肽链合成障碍导致其活性降低或缺如，造成苯丙氨酸（Phe）羟化受阻，Phe在体内蓄积。编码PAH的基因发生突变是导致PAH肽链合成障碍，使其活性降低或缺如的原因。单链构象多态性（single—strand conformation polymorphism，SSCP）是检测DNA突变的一种常用技术，该方法既可检测已知突变，又可筛查未知突变基因或进行连锁分析。     

低苯丙氨酸饮食治疗新生儿苯丙酮酸尿症疗效观察

<正>苯丙酮尿症(PKU)是典型的氨基酸代谢病之一,是第一个可以早期诊断、治疗,能很好地改变预后的先天性代谢病。PKU属于单基因隐性遗传病,本病因缺乏苯丙氨酸羟化酶(PAH),使患儿血苯丙氨酸含量显著升高,干扰脑细胞     

FDA批准Biomarin公司的Kuvan用于治疗苯丙酮尿症

FDA已经同意Biomarin公司的二盐酸沙丙蝶呤片（sapropterin dihydrochloride，Kuvan）上市，用于治疗苯丙酮尿症（PKU）。本品可限制苯丙氨酸在体内的异常蓄积。本品为首个获准的针对PKU治疗的药物。本品获得FDA的许可是基于1项在PKU患者中的临床研究，该研究结果表明，本品可明显控制血液中的苯丙氨酸水平。PKU是新生儿疾病筛查领域中最成功、最经典的病种，是由于体内先天性苯丙氨酸羟化酶缺陷引起的苯丙氨酸代谢障碍。PKU患儿肝脏苯丙氨酸羟化酶的水平仅为正常人的1％或更低，因此苯丙酸不能转化为酪氨酸而在体内异常蓄积，同时引发酪氨酸、多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素、黑色素等形成障碍，导致一系列神经系统损害。此外，血中苯丙氨酸经旁路代谢，最终产物蓄积在血液、脑脊液和各种组织中，并从尿液、汗液排出体外。本病的发病率各国、各地区有所不同。据国际筛查学会统计，白种人发病率较高，北爱尔兰1／4404，西德1／6971，美国1／10059。日本的发病率较低为1／73000，我国1983年的发病率为1／16500，北方明显高于南方。     

4例酪氨酸羟化酶基因突变致多巴胺反应性肌张力障碍分析

目的:提高临床医师对酪氨酸羟化酶基因(TH)突变致多巴胺反应性肌张力障碍的认识。方法:采用回顾性研究方法,分析我院2019年8月至2021年1月诊治的4例TH突变致多巴胺反应性肌张力障碍患儿的临床表现、治疗随访情况及基因特征。结果:4例患儿均来自汉族,非亲缘关系,不同家系;男3例,女1例;3～6月龄起病,均以运动发育落后起病,伴有面部表情及自主活动减少、情绪淡漠、不规则低热、鼻腔分泌物增多、眼睑下垂,动眼危象、流涎等表现,部分有晨轻暮重特点。4例患儿均给予口服多巴丝肼片治疗,临床症状均有改善。4例患儿共发现6种突变,均为复合杂合突变,其中c.755T>C突变未见相关文献报道。结论:TH突变致多巴胺反应性肌张力障碍,多于1岁内起病,以肌张力异常及运动发育落后为主要症状,多巴丝肼治疗有效,早期发现并规范用药能取得较好临床效果。     

苯丙酮尿症杂合子高危人群基因型与生化表型相关性

目的:用分子生物学方法对可疑PKU/HPA杂合子进行PAH突变基因分析,以验证生化筛查PKU/HPA杂合子方法的可行性。方法:利用PCR、SSCP和DNA测序等方法对152例已知PKU/HPA杂合子(阳性组)和29例可疑PKU/HPA杂合子(可疑组)的PAH基因部分外显子进行分析。并与健康体检者对照(对照组)结果:152例已知PKU/HPA杂合子中发现26种基因突变,突变检出率为80.9%(123/152)。29例可疑“PKU/HPA杂合子”发现5例突变,检出率为17.2%(5/29)。对照组与可疑PKU/HPA杂合子组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:生化方法与分子生物学方法有一定相关性,提示生化筛查法用作PKU杂合子的初筛是可行的。     

Sapropterin dihydrochloride, 6-R-L-erythro-5,6,7,8-tetrahydrobiopterin,in the treatment of phenylketonuria

Sapropterin dihydrochloride, 6-R-L-erythro-5,6,7,8-tetrahydrobiopterin (BH4) is being introduced in the US for treatment of phenylketonuria (PKU). This compound has been in use in Europe to treat mild forms of PKU. Tetrahydrobiopterin is the cofactor in the hydroxylation reaction of the three aromatic amino acids phenylalanine, tyrosine and tryptophan. It is also involved in other reactions, which are not the focus of this review. The cofactor BH4 is synthesized in many tissues in the body. The pathway of BH4 biosynthesis is complex, and begins with guanosine triphosphate (GTP). The first reaction that commits GTP to form pterins is GTP cyclohydrolase. Several reactions follow resulting in the active cofactor BH4. During the hydroxylation reaction BH4 is oxidized to quinonoid-BH2, which is recycled by dihydropteridine reductase, resulting in the active cofactor. It was discovered that some patients with PKU had a decline in blood phenylalanine after oral intake of BH4. This response to BH4 is not the result of change in the synthesis or regeneration of the cofactor, but rather an effect on the mutant enzyme phenylalanine hydroxylase either by accommodating the higher K_m of the mutant enzyme or by acting as a chaperone for the mutant enzyme. This response has become of intense interest in the treatment of PKU.     

膀胱移行细胞癌组织中PTEN基因第5、8外显子的突变分析

目的：了解膀胱移行细胞癌（TCC）组织中PTEN基因第5外显子（Exon5）和第8外显子（Exon8）的突变情况及其与膀胱癌生物学行为的关系。方法：选择突变率较高的PTEN基因Exon5和Exon8，应用银染PCR—SSCP并结合基因测序方法分析46例TCC患者的PTEN突变情况。结果：PTEN的Exon5扩增产物为379bp，所有肿瘤组织均表现为3条迁移带（2条单链和1条双链），没有发现额外迁移带。Exon8扩增产物为550bp，经酶切为两个片段。所有肿瘤组织均表现为6条迁移带（4条单链和2条双链），没有发现额外迁移带。结论：TCC患者的肿瘤组织中PTEN基因Exon5和Exon8的突变不是一个常见事件，PTEN是否还存在其他灭活方式还需要进一步研究。     

心肌肌钙蛋白Ⅰ基因4 650G/C突变与肥厚型心肌病

目的:调查中国人群肥厚型心肌病(HCM)患者肌钙蛋白Ⅰ基因突变的发生情况,并分析基因型与临床表型之间的关系.方法:对65例HCM患者、60例正常对照者通过聚合酶链反应扩增心肌肌钙蛋白Ⅰ基因第7、8号外显子片段,以测序的方法寻找突变位点,并了解基因型明确的HCM患者的临床特点.临床资料包括症状、体格检查、心电图和心脏超声心动图.结果:在1例31岁女性患者的肌钙蛋白Ⅰ基因第7号外显子上发现了一个新的错义突变位点4 650G/C(H130Q).由于在60例正常对照组中未见异常,且该突变引起的氨基酸改变属于极性中性氨基酸置换为碱性氨基酸,故推测此突变位点为该患者的致病基因位点.结论:心肌肌钙蛋白Ⅰ发挥抑制心肌收缩的作用,推测心肌肌钙蛋白Ⅰ基因4 650G/C(H130Q)的基因突变可导致肥厚型心肌病的发生.