钙敏感受体在缺氧/复氧诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的 探讨钙敏感受体(CaSR)对缺氧/复氧(A/R)所诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 原代培养乳鼠心室肌细胞缺氧2 h/复氧24 h,建立A/R心肌细胞损伤模型.心肌细胞随机分为三组:对照组、A/R组和CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组.四氮唑嗅盐法(MTT)检测细胞的存活率,原位缺口末端标记法(TUNEL)分析细胞凋亡率,蛋白印迹法检测CaSR、半胱氨酸天冬酶(caspase)-3、9和细胞色素c(Cytc)蛋白的表达.结果 TUNEL染色显示A/R后心肌细胞凋亡为(17±3)%,与对照相比,心肌细胞凋亡明显增加,CaSR表达也增加.CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至(28±4)%,MTT检测表明心肌细胞存活率仅为(51.2±6.8)%;CaSR、caspase-3、caspase-9和Cytc表达进一步上调,明显高于A/R组.结论 CaSR通过线粒体Cytc-caspase-3途径参与了A/R所诱导的心肌细胞凋亡.     

钙敏感受体对乳鼠心肌细胞凋亡的诱导作用

探讨在缺氧/复氧所诱导乳鼠心肌细胞凋亡中,钙敏感受体（calcium - sensing receptor,CaSR）对Fas/Fas配体（Fas L）途径的影响。方法对8只2日龄Wistar大鼠心肌细胞进行原代培养,后随机分为三组：(1)对照组：细胞不经缺氧/复氧处理,在其他组复氧开始时培养基内加入与用药组等体积的生理盐水;(2)缺氧/复氧组：心室肌细胞缺氧2h/复氧24h,细胞培养基内于复氧开始时加入与用药组等体积的生理盐水;(3) CaSR激动剂氯化钆(GdCl3)组：细胞培养基内于复氧开始时加入300μmol/L CaSR激动剂GdCl3。流式细胞仪分析细胞凋亡率,透射电镜观察细胞超微结构,蛋白印迹法检测CaSR、Fas和FasL蛋白的表达。结果流式细胞仪检测显示,缺氧/复氧组心肌细胞凋亡为12.18％±1.54％,与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增加(P＜0.01)。CaSR激动剂GdCl3使心肌细胞凋亡进一步增加至20.25％±2.87％ (P＜0.01)。透射电镜下可见线粒体絮状变、线粒体嵴溶解、空泡样变;CaSR激动剂使CaSR、Fas和FasL表达进一步上调,明显高于缺氧/复氧组(P＜0.05)。结论CaSR激活参与了缺氧/复氧所诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,CaSR可通过激活Fas/FasL死亡受体途径导致乳鼠心肌细胞凋亡。     

还原型谷胱甘肽对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的探讨还原型谷胱甘肽（GSH）对缺氧／复氧（A／R）心肌细胞的保护作用及机制。方法建立大鼠心肌细胞A／R损伤模型，随机分为5组：A组为正常对照组；B组为A／R组，缺氧2h。复氧1h；C、D、E组为处理组，加入GSH分别使其终浓度为40、80、160mg／L后A／R。用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶活性，硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛含量，荧光法测定细胞内钙离子浓度变化，采用RT-PCR检测白介素-1βmRNA和肿瘤坏死因子-αmRNA表达变化。结果与A组相比，B组心肌细胞内钙离子浓度明显升高，差异有非常显著性（P〈0．01）；心肌细胞培养液中超氧化物歧化酶活性下降、丙二醛含量升高，差异有非常显著性（P〈0．01）；白介素-1βmRNA和肿瘤坏死因子-αmRNA表达迅速增强，差异有非常显著性（P〈0．01）。与B组比，D、E组上述变化明显减轻，差异有非常显著性（P〈0．01）。结论GSH对A／R心肌细胞有保护作用，其作用在一定范围内呈剂量依赖关系。     

复方丹参注射液减轻缺氧/复氧性HK-2细胞损伤的作用及机制

目的：探讨丹参注射液减轻缺氧/复氧性人肾近曲小管上皮细胞（HK-2）细胞损伤的作用机制。方法：以人近曲肾小管上皮细胞为研究对象,采用液体石蜡覆盖法建立缺氧/复氧模型。实验分为3组：对照组、损伤组和丹参组,每个组均设立7个时间点：缺氧4,12,24 h和缺氧24 h后复氧4,12,24,48 h,其中丹参组设立4个浓度亚组（生药浓度）：0.05%,0.10%,0.15%,0.20%。在倒置相差显微镜下观察细胞的形态学改变,MTT法进行活细胞计数,生化法检测培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量,放射免疫法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量。结果：缺氧处理后,损伤组在各时间点细胞数量均明显降低,在缺氧24 h达最低值;与损伤组比较,在丹参各组中,HK-2细胞数量较多,其中以0.10%丹参组细胞数量在各时间点均为最高。与对照组比较,损伤组LDH,TNF-α水平升高,在缺氧24 h/复氧4 h达最高值;与损伤组相比,丹参组在缺氧/复氧过程各时间点中LDH,TNF-α水平降低。结论：复方丹参注射液对HK-2细胞缺氧／复氧性损伤具有保护作用,作用机制可能与丹参注射液抑制炎症细胞因子的产生有关。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：559-562］     

钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用及其机制。方法30只Wistar大鼠随机分为3组(每组10只):假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和钙敏感受体激动剂组(Gdcl3组),采用冠状动脉结扎和松结的方法,制备大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型。分别测定血清一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,光镜及透射电镜下观察心肌结构病理变化。结果I/R组血清LDH、MDA水平明显高于sham组(P<0.01),NO、SOD低于sham组(P<0..01);Gdcl3组血清LDH、MDA水平明显高于I/R组(P<0.01),而NO、SOD低于I/R组(P<0.01)。光镜及透射电镜下可观察到Gdcl3组心肌结构破坏,心肌细胞呈灶状或片状坏死;线粒体损伤,核皱缩,核染色质边集,其病理学改变程度较I/R组严重。结论钙敏感受体激活可使氧自由基产生增加,减少NO含量,降低SOD活性,加重心肌缺血/再灌注损伤。     

心肌缺氧／复氧时pH反常和钙超载的关系

缺氧／复氧可导致心肌细胞的钙超载和ｐＨ反常，ｐＨ反常是Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋交换和Ｎａ＾＋／Ｃａ＾２＋交换的共同作用产生钙超载而引起的，且可能是细胞损伤的始动环节。缺氧期应用Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋或Ｎａ＾＋２＋／Ｃａ＾２＋交换抑制剂可有效防治心肌细胞缺氧／复氧时ＰＨ反常造成的损伤。     

缺氧缺糖可导致培养的乳鼠心肌细胞凋亡

目的　心肌细胞凋亡是许多心血管疾病发生与演变的细胞学基础 ,成为心血管疾病研究中的一个热点问题。国内外研究表明心肌缺血后再灌注可导致心肌细胞凋亡 ,但缺血是否引起心肌细胞凋亡尚有争议。该研究旨在探讨心肌缺氧损伤时是否发生心肌细胞凋亡。方法　取 2～ 4d的新生SD乳鼠心室肌进行心肌细胞培养 ,采用模拟“缺血模型” ,分不同时间段缺氧缺糖组和正常对照组观察 ,用AnnexinV FITC/PI双染色流式细胞术(Flowcytomeutry ,FCM)、Hoechst/PI荧光染色镜检判断细胞凋亡。用原子吸收法测定细胞内钙、镁含量。 结果　FITC AnnexinV/PI双染色法FCW检测 ,缺氧 11.5 ,12 .5 ,13.5和 14 .5h早期凋亡细胞比例分别为 (10 .7±0 .4 5 ) % ,(13.7± 0 .71) % ,(15± 0 .5 4 ) %和 (17.2± 0 .6 7) % ,比正常对照组 (3.5 7± 0 .2 6 ) %明显增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;Hoechst/PI染色计数心肌细胞凋亡指数 ,缺氧 11.5 ,14 .5h分别为 18± 2 .4 ,2 5± 3.8高于正常对照组 3.75± 0 .96 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;缺氧缺糖各组与对照组相比心肌细胞内钙含量高、而镁含量低 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,但不同时间段缺氧缺糖心肌细胞内钙、镁含量变化差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　在缺氧缺糖模拟“缺血     

钙敏感受体在新生小鼠持续性肺动脉高压中的作用

目的探讨钙敏感受体(CaSR)激动剂及抑制剂在新生小鼠持续性肺动脉高压(PPH)模型中对CaSR的表达影响,明确其在新生小鼠PPH模型中的作用。方法将49只新生小鼠随机分为对照组(n=10)、PPH组(n=11)、激动剂组(n=13)和抑制剂组(n=15);将PPH组、激动剂组和抑制剂组小鼠暴露在12%的氧浓度中,对照组小鼠暴露在空气中。激动剂组和抑制剂组每日分别给予GdCl3(16 mg/kg)、NPS2390(1 mg/kg)腹腔注射1次,低氧组和对照组每日以生理盐水替代,共持续14 d。采用苏木精-伊红染色和免疫组化检测肺血管的变化;采用激光共聚焦技术观察CaSR在新生小鼠肺组织中的表达位置及含量;qRT-PCR技术检测新生小鼠肺组织中CaSR mRNA表达;Western blot法检测新生小鼠肺组织中CaSR蛋白的表达。结果与对照组相比,PPH组肺小动脉血管壁厚度(WT%)及右心室与左心室壁厚度比(RV/LV)均较对照组明显增大(P0.05),模型验证成功。与对照组相比,PPH组CaSR mRNA和蛋白表达水平明显增加(P0.05),激动剂组表达水平增加更加明显(P0.05),而抑制剂组表达减少(均P0.05)。结论 CaSR参与了低氧诱导的新生小鼠PPH,可能发挥重要作用。     

钙及钙调蛋白依赖性激酶在神经元缺氧损伤中的作用

目的：探讨钙及钙调蛋白依赖性激酶（calmodulin dependent kinase,CaMK）在神经元缺氧损伤中的作用及机制。方法：体外培养大鼠胚脑皮质神经元,随机分为单纯缺氧组及钙阻滞剂干预组,其中钙阻滞剂干预组采用尼莫地平（nimodipine）、MK-801分别阻断L-VSCC受体、NMDA受体的传导,采用MTT法测定各组神经元缺氧前后细胞活性,用Fluo-4AM荧光探针测定各组细胞内钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡ及CaMKⅣ的表达。结果：尼莫地平及MK-801组细胞活性较单纯缺氧的对照组高;尼莫地平可迅速降低缺氧神经元的细胞内钙, MK-801可长时间降低缺氧神经元的细胞内钙。尼莫地平可抑制CaMKⅡ的表达,MK-801对CaMKⅡ的表达无明显影响,但可抑制CaMK Ⅳ的表达。结论：尼莫地平和MK-801可分别通过抑制CaMKⅡ和CaMKⅣ表达实现对缺氧神经元的保护作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（4）：324-326］     

MMP-2在缺氧缺血/复氧再灌注损伤新生大鼠星形胶质细胞表达及FDP干预研究

目的 研究新生大鼠星形胶质细胞(AC)基质金属蛋白晦2(MMP-2)在缺氧缺血/复氧再灌注(复氧)损伤中的变化和1,6-二磷酸果糖(FDP)对AC缺氧/复氧损伤MMP-2表达的影响,为缺氧缺血性脑损伤的机制和治疗提供线索.方法 采用免疫激光共聚焦的方法检测体外培养的AC在缺氧/复氧不同时段和给予FDP干预时MMP-2的表达.结果 随着缺氧/复氧时间延长,MMP-2蛋白存AC的表达明显增高;FDP保护组及治疗组较相应时段缺氧复氧组MMP-2蛋白表达均明显降低.且随着缺氧/复氧时间延长,AC形态变化明显,主要表现为细胞间连接减少,足突减少;FDP保护12 h组及FDP治疗6 h组,AC形态变化明显减轻.结论 在缺氧/复氧损伤时,AC的MMP-2表达增高,AC间的相互连接破坏,影响AC正常形态,功能的维持.FDP可通过降低MMP-2的表达,以维持Ac问相互连接和AC的正常形态,减轻缺氧/复氧对AC的损伤.