白假丝酵母临床分离株基因分型与药敏分析

目的分析上海交通大学医学院附属瑞金医院白假丝酵母的基因分型情况以及不同基因型白假丝酵母的药敏结果。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增白假丝酵母25S核糖体DNA基因的内含子区,可转座Ⅰ型内含子插入片段的数目及大小的不同使得扩增产物不同,根据产物片段大小和数目分型。采用微量稀释法分析白假丝酵母抗真菌药物敏感性。结果171株白假丝酵母分为3型:A型93株,B型47株,C型31株。B型、C型白假丝酵母对唑类抗真菌药物的耐药率显著高于A型菌株,对氟胞嘧啶的耐药率低于A型菌株。结论白假丝酵母的PCR分型方法简便、快速、重复性好、特异性强;不同型别的白假丝酵母耐药谱有差异,对治疗中抗真菌药物的选择有一定的指导意义。     

获得性免疫缺陷综合征患者白假丝酵母分离株基因型及耐药性分析

目的研究获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者白假丝酵母分离株的基因型及耐药性。方法对分离自上海市公共卫生中心AIDS住院患者的40株白假丝酵母,应用微卫星核心序列引物M13进行聚合酶链反应(PCR)指纹分型。用微量稀释法分析白假丝酵母抗真菌药物敏感性。结果PCR指纹分型将所有白假丝酵母分离株分为A、B、C、D 4种基因型,其中A型14株(35.0%),B型16株(40.0%),C型9株(22.5%),D型1株(2.5%)。白假丝酵母对抗真菌药物的耐药率为:两性霉素B 2.5%,氟康唑22.5%,伊曲康唑15.0%,氟胞嘧啶20.0%,;不同基因型白假丝酵母菌株间耐药性差异无统计学意义。结论上海市AIDS住院患者分离的白假丝酵母主要由3种克隆组成,但无明显优势流行株。     

获得性免疫缺陷综合征患者白假丝酵母分离株基因型及耐药性分析

目的研究获得性免疫缺陷综合征（AIDS）患者白假丝酵母分离株的基因型及耐药性。方法对分离自上海市公共卫生中心AIDS住院患者的40株白假丝酵母,应用微卫星核心序列引物M13进行聚合酶链反应（PCR）指纹分型。用微量稀释法分析白假丝酵母抗真菌药物敏感性。结果PCR指纹分型将所有白假丝酵母分离株分为A、B、C、D 4种基因型,其中A型14株（35.0%）,B型16株（40.0%）,C型9株（22.5%）,D型1株（2.5%）。白假丝酵母对抗真菌药物的耐药率为：两性霉素B 2.5%,氟康唑22.5%,伊曲康唑15.0%,氟胞嘧啶20.0%,;不同基因型白假丝酵母菌株间耐药性差异无统计学意义。结论上海市AIDS住院患者分离的白假丝酵母主要由3种克隆组成,但无明显优势流行株。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌医院感染爆发流行的实验室调查

目的采用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)mecA基因相关高变区(HVR)长度多态性分型了解MRSA的医院感染爆发流行情况。方法选取临床分离的38株MRSA菌株,采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增MRSA mecA基因HVR,据扩增片段大小差异进行基因分型。结果根据PCR产物片段大小,38株MRSA被分为A、B、C、D 4个基因型,其中C型23株(60.53%)、A型7株(18.42%)、B型3株(7.89%)、D型2株(5.26%)、未分型3株(7.89%)。C型在临床各科室均有分布,但主要集中于老干部科。MRSA呈严重且多重耐药,故首选抗菌药物为万古霉素、替加环素、奎奴普汀/达福普汀和替考拉宁。结论医院内存在着MRSA菌株的克隆传播,应加强检测,控制医院感染爆发流行。     

白色假丝酵母菌ERG11基因突变与唑类抗真菌药物耐药的关系

目的探讨白色假丝酵母菌ERG11基因突变与唑类抗真菌药物耐药的关系。方法纸片扩散法初步筛选临床分离的耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌,测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的最低抑菌浓度,随机选择10株白色假丝酵母耐药株,提取基因组DNA。利用DNASTAR软件辅助设计3对PCR引物,以提取的目的 DNA为模板,分别从前(P1)、中(P2)、后(P3)3段扩增ERG11基因全序列。扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中已知标准序列(X13296)进行比较分析。结果电泳结果显示,获得的3段PCR产物大小与预期结果一致。测序结果显示成功获得10株白色假丝酵母菌ERG11全基因序列。与GenBank中标准株序列(X13296)比较,耐药株均存在同义突变和错义突变,共27个碱基突变位点。15个位点是错义突变,其中F126LI、166N、H183Q、V437I、S453F和N490K为新发现的突变位点。结论耐唑类抗真菌药物的白色假丝酵母菌ERG11基因有多个发生错义突变的位点,且为多点突变,可能与其耐药有关。     

不可分群脑膜炎奈瑟菌PCR基因分型研究

目的对自健康人群鼻咽拭子中分离的74株表型特征为不可分群的脑膜炎奈瑟菌,利用PCR基因分型技术进行基因特征分析。方法用PCR方法扩增脑膜炎奈瑟菌种属特异性基因crgA和A、B、C、W135、Y、Z、X以及29E不同群的特异性基因片段,确定不同菌株的基因型。结果以脑膜炎奈瑟菌crgA基因为靶基因进行PCR扩增,74株不可分群脑膜炎奈瑟菌中,66株脑膜炎奈瑟菌crgA基因扩增阳性,检出率89.19%。66株菌株进行不同血清群的PCR分群鉴定,40株菌株（60.61%）可检测为不同的血清群基因型,B群27株,29E群7株,X、Y群各2株,C、W135各1株。结论不可分群脑膜炎奈瑟菌进行PCR基因分型研究对脑膜炎奈瑟菌的研究具有重要的流行病学意义。     

中国汉族人群中白色念珠菌的25S rDNA基因分型及耐药性分析

目的调查白色念珠菌25S核蛋白体脱氧核糖核酸(rDNA)基因型分布,并分析白色念珠菌各基因型与耐药性之间的相关性。方法以经API 20C AUX真菌鉴定板和科玛嘉念珠菌显色培养基鉴定到种的76株白色念珠菌为研究对象,转沙保罗氏培养基纯培养24 h,收集菌液,裂解法提取质粒DNA,用特异性引物扩增白色念珠菌25S rDNA基因,根据聚合酶链反应(PCR)产物电泳图谱进行基因分型;采用微量肉汤稀释法测定各基因型白色念珠菌对4种常用抗真菌药物5-氟胞嘧啶(5-FC)、两性霉素B(AMB)、氟康唑(FCZ)、伊曲康唑(ICZ)的最低抑菌浓度(MIC)。结果 76例白色念珠菌分为A、B、C 3个基因型(A型48例,B型8例,C型20例),按照有无长度为379 bp的Ⅰ型内含子的插入,将76例白色念珠菌分为有内含子组和无内含子组,分别进行4种抗真菌药物耐药率的比较,结果发现2组间对FCZ耐药率差异有统计学意义(P0.01),而对5-FC、AMB和ICZ耐药率差异无统计学意义(P值均大于0.05)。结论白色念珠菌25S rDNA基因内含子(379 bp)的缺失或者插入可能与其对FCZ的耐药性有关。     

变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究

目的 探讨湖南省CTX-M型超广谱B内酰胺酶(ESBLs)基因型分布情况和变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测CTX-M型ESBLs基因型的准确性.方法 用多重PCR扩增标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株blaCTX-M基因,扩增产物经DHPLC分析得到标准菌株和临床菌株色谱峰图,通过比对标准色谱峰图对临床菌株进行基因分型,同时采用单纯随机抽样法选择25株多重PCR扩增阳性菌株进行特异PCR扩增,其产物冉进行基因测序来评估DHPLC法的准确性.结果 142株产ESBLs的肠杆菌科细菌经多重PCR扩增证实109株携带blaCTX-M基因,检出率为76.8%(109/142).109株扩增阳性的菌株经DHPLC分析后检出4种不同的blaCTX-M基因型:33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14.25株基因测序结果与DHPLC基因分型结果作比较显示:24株DHPLC的基因分型结果与基因测序结果完全吻合,但有1株DHPLC基因分型为CTX-M-15,而测序为CTX-M-82.结论 DHPLC可对耐药进行基因快速基因分型,具有准确、快速和经济等优点.     

比较重复序列PCR与多位点序列分型技术用于光滑假丝酵母菌的基因分型检测

目的 评价REP-PCR基因分型技术在临床光滑假丝酵母菌株分型中的应用价值。方法收集2009-2010年上海瑞金医院、上海仁济医院、上海华山医院、安徽医科大学附属医院、深圳人民医院38株光滑假丝酵母菌。采用MLST法扩增光滑假丝酵母菌的6个管家基因内片段,扩增片段测序后与数据库数据比对得出等位基因谱,从而得到相应的序列型（sequence type,ST）。采用REP-PCR法设计Ca21、Ca22、Com21引物扩增38株光滑假丝酵母菌重复序列,通过电泳比较分析,获得REP-PCR型。比较两种分型方法的结果和效率。结果 以Ca22-Com21为引物的REP-PCR分型效果最好。REP-PCR和MLST分型结果相同,38株光滑假丝酵母菌共产生5种REP-PCR型,分别为A、B、C、D、E型,对应于MLST的ST7、ST3、ST19、ST45和新型。REP-PCR比MLST耗时短。结论REP-PCR方法简单快速,且分辨率与MLST技术相同,可作为实验室大量菌株分型的首选方法。     

婴幼儿感染猪霍乱沙门菌耐药基因特点及同源性分析

目的研究致婴幼儿败血症猪霍乱沙门菌的耐药基因特点及同源性。方法16株猪霍乱沙门菌．采用K—B纸片扩散法检测抗菌药物的耐药性,同时用PCR法及DNA测序法对其进行β-内酰胺酶类耐药基因检测;PFGE法测定同源性。结果对氨苄西林耐药的13株猪霍乱沙门菌经PCR扩增后并测序为bl岫。16株猪霍乱沙门菌经PFGE分型,可分为5个PFGE型,其中A型是最主要的克隆（12／16）。13株blTEM-1．基因阳性菌株分别为A型11株,B型1株,D型1株。结论产TEM-1割β-内酰胺酶是本地区猪霍乱沙门菌对氨苄西林耐药的主要机制,PFGE分型方法对猪霍乱沙门菌分型能力较好。克隆性传播为猪霍乱沙门菌的主要传播途径．同一PFGE型菌株的耐药谱非常接近。