错配修复基因2与卵巢癌紫杉醇化疗耐药相关性研究

目的 检测人类错配修复基因2 (human mismatch repair gene2,hMSH2)在卵巢癌紫杉醇耐药细胞株及卵巢癌组织中蛋白表达的变化,探讨其与卵巢癌紫杉醇化疗耐药的相关性.方法 选用卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TAX及敏感细胞株SKOV3,选取北京世纪坛医院2010-01-01-2014-06-30卵巢癌患者石蜡标本58例,其中紫杉醇化疗后复发行二次手术的患者标本19例(化疗组),术前未化疗患者39例(未化疗组).采用免疫组化二步法,检测卵巢癌细胞及组织中hMSH2蛋白表达.结果 耐药细胞株SKOV3/TAX中hMSH2蛋白表达强度为50 214.64±27 218.39,明显高于敏感细胞株SKOV3的11 791.79±7 385.98,P=0.016;卵巢癌组织中化疗组hMSH2蛋白表达累积光密度值为74 322.52±27 162.82,较未化疗组的57 244.96±24 332.86明显增加,P=0.019;化疗组及未化疗组两组患者在病理分级(P=0.366)、病理类型(P=0.768)和手术病理分期(P=0.533)差异均无统计学意义;全部卵巢癌组织中hMSH2蛋白表达在病理分级(P=0.161)、病理类型(P=0.649)和手术病理分期(P=0.519)中的分布差异均无统计学意义.结论 错配修复基因hMSH2在卵巢癌紫杉醇耐药细胞株及组织中表达上调可能与紫杉醇耐药机制有关.     

卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC3/TAX300建立及基因表达谱分析

目的：建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其基因表达谱差异与紫杉醇耐药之间相关性。方法：采用反复大剂量紫杉醇冲击法,由亲本细胞OC_3建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300)。运用比较基因组杂交(comparative genomic hy- bridization,CGH)及基因芯片技术分析耐药及敏感株细胞染色体DNA拷贝数和基因表达谱差异。结果：OC_3/TAX_(300)耐药株历时10个月建成,耐药性稳定,耐药指数为6.70。CGH结果显示OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高水平扩增。基因表达谱芯片共筛选出显著表达差异基因134条,其中117种基因表达水平下调,17种基因表达上调,有代表性的下调基因为KCNK2、COP9,上调的基因为JAK2。结论：建立卵巢癌紫杉醇耐药细胞株OC_3/TAX_(300),耐药性稳定,可以作为筛选耐药基因和耐药逆转剂的细胞模型。OC_3/TAX_(300)细胞染色体2p22的高度扩增、KCNK2、COP9基因下调和JAK2基因上调与卵巢癌化疗耐药有关。     

卵巢癌铂类耐药标志物的研究进展

摘 要：卵巢癌是女性三大恶性肿瘤之一,其死亡率位于妇科癌症之首。铂类联合紫杉醇是卵巢癌术后一线化疗方案,但约75%晚期患者对铂类药物耐药。铂类耐药标志物能预测患者对铂类药物的反应,指导卵巢癌患者治疗药物的选择。本篇综述按靶前、靶点、靶后和靶外标志物四个方面对近几年的卵巢癌铂类耐药标志物的研究成果进行归纳并简单阐述其相应的耐药机制。     

紫杉醇耐药卵巢癌细胞系的建立及耐药机制研究

目的建立人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株,探讨其耐药机制。方法采用梯度浓度递增法诱导建立对紫杉醇（Paclitaxel,TAX）耐药的人卵巢癌细胞耐药株SKOV3／TAX,MTF法检测SKOV3／TAX对SKOV3的耐药指数（resistanceindex,RI）,WesternBlot法检测耐药细胞中凋亡及耐药相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶（polyADP．ribosepolymerase,PARP）的表达情况,探讨其耐药机制。结果成功建立人卵巢癌耐紫杉醇细胞株SKOV3/TAX,耐药指数高达88．46;与SKOV3相比,紫杉醇耐药细胞株形态较不规则,细胞扁平,且贴壁较牢;WesternBlot及免疫荧光实验均证实SKOVMTAX中PARP水平明显下调,且加用TAX后PARP的剪切带较亲本细胞明显减少甚至缺失。结论紫杉醇耐药卵巢癌细胞中PARP蛋白表达明显下调,该下调很可能参与了卵巢癌对紫杉醇的耐药调控。     

耐药及敏感卵巢癌组织与细胞系中microRNA的表达及意义

[目的]探讨miR-1307的差异表达对卵巢癌紫杉醇耐药性的影响。[方法]Realtime PCR方法研究20例化疗耐药卵巢癌与20例化疗敏感卵巢癌组织及耐药与敏感卵巢癌细胞系（SKOV3-TR30和SKOV3）中miR-1307的表达情况;生物信息学方法预测miR-1307可能的靶基因及其靶基因的GO功能分析及通路分析。[结果]miR-1307在化疗耐药卵巢癌组织及细胞系中表达水平显著高于敏感组织及细胞系中,并且具有显著性（P〈0.05,P〈0.0001）,其表达与卵巢癌患者绝经与否、手术病理分期、组织学分级及有无淋巴结转移无明显相关性（P〉0.05）;通过生物信息学分析,miR-1307的预测靶基因共124个,可能参与的生物学过程461个,分子功能80个,参与的信号通路15个。[结论]miR-1307与卵巢癌化疗耐药有关,可能通过相关的靶基因及其参与的生物学过程调节卵巢癌耐药。     

ZEB1 与卵巢上皮癌化疗耐药相关的研究进展

卵巢上皮癌（epithelial ovarian cancer,EOC）是妇科肿瘤中最致命的恶性肿瘤,在进行最大限度的肿瘤细胞减灭术后需结合铂类药物及紫杉醇联合化疗。多数临床化疗结果表明,EOC患者肿瘤复发后常引起化疗药物的耐药,导致预后差、病死率高。锌指E盒结合同源框1（zinc finger E-box-binding homeobox 1,ZEB1）是多种肿瘤发生、发展、迁移、转移和侵袭的重要调控因子。ZEB1 可能通过调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）过程、非编码RNA（如miRNA、lncRNA）调控影响卵巢癌耐药;此外,ZEB1 还可介导p73 和BRCA1 相关的表观遗传调控参与卵巢癌的耐药。本文从ZEB1 的结构与生理功能、在卵巢癌发生发展和在卵巢癌耐药中的作用及其可能涉及的机制,以及其作为卵巢癌生物标志物的潜力等方面做一综述,为临床治疗EOC寻找新的治疗策略。     

卵巢癌化疗耐药机制研究进展

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,死亡率居妇科肿瘤之首。化疗是目前治疗卵巢癌的重要手段之一。化疗耐药是影响晚期卵巢癌患者预后的主要原因。卵巢癌化疗耐药是多基因多因素共同参与的结果。近年来,多药耐药相关基因及耐药相关蛋白等的发现揭示了卵巢癌耐药机制,可以利用其来预测临床化疗的效果。现就卵巢癌化疗耐药机制研究进展作一综述。     

卵巢癌对顺铂耐药机制的研究进展

卵巢癌的发病率在女性生殖器恶性肿瘤中占第三位，但其患者死亡率却居首位。在细胞减灭术的基础上施以以顺铂为主的联合化疗方案已成为卵巢癌的常规治疗方案。据报道：Ⅲ和Ⅳ期的卵巢癌患者采用联合化疗．其完全缓解率可达60％-80％。但在实际临床应用中却并非如此。近30年来卵巢癌患者的5年生存率一直徘徊于30％-50％之间。其主要原因就是卵巢癌对化疗药物产生了耐爱性。约75％-80％的卵巢上皮癌开始对化疗有反应．其余则表现为原发耐药．最终所有化疗患者至少80％出现耐药。因此，耐药的产生直接影响化疗效果及生存率。如何尽早发现耐药度克服耐药是急需解决的问题。     

卵巢癌化疗耐药作用机制的基因研究进展

卵巢癌是妇科肿瘤中致死率最高的肿瘤,其主要原因之一是卵巢癌细胞易对化疗产生耐药而导致治疗失败。卵巢癌的发生与发展常常联系一系列基因的变化,从分子水平上了解卵巢癌细胞对化疗产生耐药机理,寻找更有效的化疗药物,是提高卵巢癌疗效的关键。本文将近年来此方面的研究进展作一概括。研究发现HER-2、XIAP和bcl-X(L)基因的高表达、Bcl-2和c-myc基因的低表达与卵巢癌患者对化疗药物产生耐药有关。一系列具抗耐药和与卵巢癌化疗药物有协同作用的基因SU5416、EpoB、Apo2L/TRAIL、PSC833、TP53、BCL-2、BAX和MEK1蛋白、MAPKs、JNK、p38和ERK的出现,为改善卵巢癌化疗效果,提高治愈率,带来了新的希望。     

紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞株的生物学特性及其保存

目的 研究紫杉醇诱导的卵巢癌耐药细胞株的生物学特性,探索耐药细胞的长期保存条件,以建立稳定的体外实验模型。方法 选用卵巢癌化疗敏感细胞株SKOV3,分别采用大剂量冲击和小剂量浓度递增诱导建立耐药的卵巢癌细胞株SKOV3/TAX300、SKOV3/TAX30。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测耐药细胞对化疗药物紫杉醇的IC50;比较耐药细胞和敏感细胞的细胞平板克隆形成、生长曲线倍增时间的差异;荧光定量PCR检测敏感细胞和耐药细胞中耐药相关基因的表达;比较无药冻存和加药冻存的方式对耐药细胞的保存效果。结果 耐药细胞SKOV3/TAX300,耐药指数为4.60,耐药细胞SKOV3/TAX30,耐药指数为51.31;与敏感细胞相比,耐药细胞体积增大,形态不规则,倍增时间延长。多药耐药基因1（MDR1）在两种耐药细胞中高表达,肺耐药相关蛋白（LRP）、蛋白激酶Cα（PRKCA）基因仅在SKOV3/TAX300中的表达增高,BCL-2样1基因（BCL2L1）在SKOV3/TAX30中低表达。耐药细胞冻存在含有药物的条件下,有利于耐药性的保持。结论 大剂量冲击和小剂量浓度递增两种方法诱导的耐药细胞为研究紫杉醇耐药机制建立了良好的体外模型,两种耐药细胞SKOV3/TAX300和SKOV3/TAX30具有不同的生物学特性。     

卵巢癌多药耐药^99mTc—MIBI显像的研究现状及临床应用进展

卵巢癌多药耐药（MDR）是导致化疗失败的一个重要原因,无创性诊断卵巢癌多药耐药一直是临床研究热点。其作用机制主要与P糖蛋白（P-gp）、MRP相关蛋白（MRP）及肺耐药蛋白（LRP）等有关。甲氧基异丁基异腈（MIBI）是P—gp、MRP共同的转运底物,细胞内^99mTc—MIBI的摄取浓度与细胞上MDR表达的功能状态成反比。因此利用^99mTc—MIBI功能显像对卵巢癌定性诊断、评价多药耐药及预测化疗效果,指导临床选择个体化的治疗方案可能有很高的临床应用价值。     

DNA甲基化与卵巢癌多药耐药及预后的关系

目的:卵巢癌是严重威胁女性健康的疾病,病死率居妇科恶性肿瘤之首。多药耐药是卵巢癌患者术后化疗失败的主要原因,而DNA甲基化则是卵巢癌多药耐药调控的重要机制,因此全面了解DNA甲基化对卵巢癌多药耐药的调控机制对于卵巢癌治疗和预后具有重要意义。通过Pub Med数据库检索,笔者共提取了26个与卵巢癌多药耐药调控显著相关的DNA甲基化基因,系统整合分析了这些基因甲基化水平改变对卵巢癌耐药的影响及其分子调控机制。在所有26个基因中,至少一半以上的DNA甲基化基因直接或间接地通过调控细胞凋亡信号通路响应耐药调控,说明该信号通路可能是DNA甲基化基因行使其耐药生物学功能的主要方式。另外,分析这26个卵巢癌耐药相关甲基化基因与患者临床预后的关系,表明上述基因主要与不良预后相关。总之,深入探讨DNA甲基化基因与卵巢癌耐药和预后的潜在关系,对于充分认识DNA甲基化对卵巢癌耐药的调控及提高卵巢癌的疗效和改善预后具有一定的指导意义。     

上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2的表达与化疗耐药的相关性研究

目的:探讨上皮性卵巢癌组织中环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达与化疗耐药的关系,以及与p53表达的相关性。方法:用免疫组化SP法检测108例上皮性卵巢癌组织和20例正常卵巢组织中COX-2和p53表达。结果:COX-2和p53在上皮性卵巢癌组织中阳性表达率分别为48.1%和59.3%,正常卵巢组织均未见表达,差异有极显著性(P<0.01);COX-2和p53表达呈显著正相关(P<0.01)。COX-2表达与患者病理类型、临床分期、病理分级及年龄无关,与术后残留灶直径有显著相关性(P<0.01)。COX-2和p53阳性表达率,耐药组和非耐药组相比均有显著差别(P<0.01)。多因素分析显示,卵巢癌患者COX-2、p53表达和术后残留灶直径是与化疗耐药密切相关的独立因素。结论:COX-2表达是与化疗耐药相关的独立危险因素。COX-2过表达与抑癌基因p53的突变可能具有相互促进作用,在卵巢癌化疗耐药中起重要作用。     

卵巢癌顺铂耐药分子生物学研究进展

 化疗耐药是有效治疗卵巢癌的重大障碍。卵巢癌耐药是多因素、多因子共同作用的结果,耐药相关基因的深入研究为从根本上逆转肿瘤耐药提供了新的思路。     

微小RNA与卵巢癌铂类耐药的研究进展

微小RNA(micmRNA,miBNA)是广泛存在于生物体内的一类非编码的小RNA,miRNA是细胞增殖、死亡、应激抗性和脂肪代谢的关键调节因素,体外实验已经证实miRNA在卵巢癌耐药中起重要作用.卵巢癌铂类耐药的产生与发展是十分复杂的过程,研究结果显示,miRNA的表达对卵巢癌细胞株的铂类药物敏感性有着重要作用,能够...     

CCND2可能通过p53信号通路在顺铂耐药卵巢癌中起关键作用

目的:为了使接受顺铂药物治疗的卵巢癌患者获得更好的预后，本研究探讨了卵巢癌顺铂耐药的潜在分子机制。方法:通过加权基因共表达网络分析挖掘GEO数据中的GSE15372数据集得到A2780卵巢癌耐药细胞中与顺铂耐药相关的基因集；基于KEGG数据库进行通路富集分析获取卵巢癌中顺铂耐药的关键通路，并且在病人卵巢癌顺铂耐药数据集GSE23554中进行验证；结合关键信号通路和顺铂耐药相关基因筛选耐药相关的核心基因，并通过生存分析和Western blot实验进行验证。结果:共筛选到1 064个耐药相关的基因，其中623个基因属于差异表达基因。通过KEGG over-represent test富集分析和基因集富集分析 (GSEA) 分析鉴定卵巢癌中顺铂耐药相关的关键信号通路是 p53信号通路，耐药相关的核心基因是RRM2、CCND2和CCNE2。通过生存分析得到CCND2高表达与卵巢癌的不良预后相关，并且Western blot证明CCND2在卵巢癌耐药细胞中高表达。结论:CCND2可能通过p53信号通路在卵巢癌顺铂耐药中发挥重要作用，这些结果为卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究提供了数据支持。     

TTK1在卵巢癌铂类耐药中的生物学功能分析

背景与目的:苏氨酸酪氨酸激酶1(threonine tyrosine kinase 1,TTK1)是纺锤体组装检查点的一个组成部分,确保染色体的正确分离,可能是与化疗敏感性相关的潜在目标分子,但TTK1在铂类药物耐药方面的作用机制仍不清楚.卵巢癌是女性常见的生殖系统恶性肿瘤之一,发病率在妇科恶性肿瘤中排名第三,死亡率排...     

Induction of anoikis and suppression of human ovarian tumor growth in vivo by down-regulation of Bcl-X(L).

Normal or immortal epithelial cells are sensitive to a form of apoptosis, commonly referred to as anoikis, which is induced by detachment from the extracellular matrix (ECM). In contrast, development of carcinomas is associated with acquisition of cellular resistance to anoikis. However, whether human cancer cells deprived of anoikis resistance necessarily display reduced tumorigenic properties in vivo is unknown. We decided to address this question using human ovarian carcinoma cells as a model. Bcl-X(L), an apoptotic factor considered to play an important role in (resistance to) anoikis, is overexpressed in ovarian cancer, and represents an unfavorable prognostic indicator for this type of human malignancy. We therefore evaluated whether Bcl-X(L) can be used as a tool to manipulate anoikis resistance and tumorigenicity of ovarian cancer cells. We show here that when nonmalignant ovarian epithelial cells are detached from the ECM, down-regulation of Bcl-X(L) and apoptotic cell death are observed, although these events do not occur in ovarian carcinoma cells. Moreover, enforced down-regulation of Bcl-X(L) by transfection with antisense cDNA in the anoikis-resistant and highly tumorigenic HEY ovarian carcinoma cell line had no impact on the viability of these cells under adherent conditions but caused significant apoptosis in response to detachment from the ECM. This change was associated with a strong inhibition of tumorigenicity of the Bcl-X(L)-deficient HEY cells in nude mice, both s.c. and in the peritoneal cavity. These results suggest a critical role for Bcl-X(L) in the maintenance of anoikis resistance in ovarian cancer cells. They also serve to establish a functional linkage between this property and the ability of human cancer cells to grow aggressively in vivo. Consequently, targeting molecular mechanisms responsible for anoikis resistance may serve as a potentially effective therapeutic strategy for the treatment of such human malignancies as ovarian cancer.     

Prohibitin silencing reverses stabilization of mitochondrial integrity and chemoresistance in ovarian cancer cells by increasing their sensitivity to apoptosis

Current approaches to the treatment of ovarian cancer are limited because of the development of resistance to chemotherapy. Prohibitin (Phb1) is a possible candidate protein that contributes to development of drug resistance, which could be targeted in neoplastic cells. Phb1 is a highly conserved protein that is associated with a block in the G0/G1 phase of the cell cycle and also with cell survival. Our study was designed to determine the role of Phb1 in regulating cellular growth and apoptosis in ovarian cancer cells. Our results showed that Phb1 content is differentially overexpressed in papillary serous ovarian carcinoma and endometrioid ovarian adenocarcinoma when compared to normal ovarian epithelium and was inversely related to Ki67 expression. Immunofluorescence microscopy and Western analyses revealed that Phb1 is primarily associated with the mitochondria in ovarian cancer cells. Over-expression of Phb1 by adenoviral Phb1 infection resulted in an increase in the percentage of ovarian cancer cells accumulating at G0/G1 phase of the cell cycle. Treatment of ovarian cancer cells with staurosporine (STS) induced apoptosis in a time-dependent manner. Phb1 over-expression induced cellular resistance to STS via the intrinsic apoptotic pathway. In contrast, silencing of Phb1 expression by adenoviral small interfering RNA (siRNA) sensitized ovarian cancer cells to STS-induce apoptosis. Taken together, these results suggest that Phb1 induces block at G0/G1 phase of the cell cycle and promotes survival of cancer cells. Furthermore, silencing of the Phb1 gene expression may prove to be a valuable therapeutic approach for chemoresistant ovarian cancer by increasing sensitivity of cancer cells to apoptosis.