中药制剂PC-SPESⅡ对前列腺癌激素非依赖型细胞株PC-3诱导凋亡的作用

目的:探讨中草药混合制剂PC-SPESⅡ诱导雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3凋亡的作用和机制。方法:MTT法检测细胞增殖在用药后的改变,荧光显微镜观察凋亡细胞,FCM测定用药前后细胞凋亡,Western印迹方法分析细胞凋亡相关蛋白表达在用药组(加入PC-SPESⅡ药液)和对照组(加入等体积70%乙醇)之间的改变。结果:PC-SPESⅡ可以促使PC-3发生凋亡或死亡。通过荧光显微镜观察发现用药组细胞出现明显的凋亡,FCM用药组出现凋亡峰,凋亡细胞数为(29.8±5.6)%,而对照组为(0.06±0.014)%(P<0.01)。用药组线粒体抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL与对照组相比表达降低,而促凋亡蛋白Bax表达升高(P<0.01),下游caspase-3裂解后的活性片段在用药组表达明显升高(P<0.01)。结论:PC-SPESⅡ具有促进PC-3细胞凋亡的作用。通过线粒体途径激活caspase-3发挥作用可能是其诱导凋亡发生的机制之一。     

塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡与Fas/FasL表达的影响

目的 观察选择性环氧合酶2抑制剂塞来昔布体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用及其机制.方法 用吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、流式细胞仪(FCM)技术观察不同浓度的塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,用流式细胞仪技术榆测Fas和FasL.蛋白表达.结果 荧光染色法显示塞来昔布在15～120 μmol/L时诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,且呈浓度和时间依赖性.FCM显示不同浓度的塞来昔布作用SGC-7901细胞48 h后.凋亡率分别为8.02%～50.81%,呈浓度依赖性.塞来昔布上凋胃癌SGC-7901细胞Fas蛋白的表达,下调FasL蛋白的表达.结论 塞来昔布可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡;Fas/FasL表达的改变可能是塞来昔布诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制之一.     

维生素E琥珀酸酯诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）对非雄激素敏感的前列腺癌PC-3细胞株的凋亡诱导作用及分子机制。方法：以体外培养的PC-3细胞为研究对象,采用含不同浓度的VES培养液作用于细胞。采用噻唑兰（MTT）比色法检测细胞增殖活性;采用Wright—Giemsa染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡并测定Fas蛋白表达水平;采用酶联免疫法检测转化生长因子口（TGF-β）的表达水平的变化。结果：VES可显著抑制PC-3细胞的生长及增殖,光镜下可见到PC-3细胞呈典型凋亡的形态学改变。FCM细胞周期分析显示G2／M期细胞增加而s期细胞明显减少,Fas蛋白和TGF-β表达明显上调。结论：VES可诱导前列腺癌PC3细胞凋亡,其作用机制可能与其上调Fas、TGF-β的表达有关。     

凋亡调控基因Bcl-2、Bax、Caspase-3与骨肉瘤

细胞凋亡是一种基因控制的细胞自主性的死亡过程，是维持内环境稳定的重要机制之一，其概念最早由Kerr等提出。目前普遍认为，细胞凋亡的改变可以引起肿瘤的发生，因此探讨细胞凋亡机制及其调节将对肿瘤防治产生积极的影响。细胞凋亡的发生和发展可以这样概括为3个阶段：信号转导阶段、中央调控阶段和结构改变阶段。     

全反式维甲酸诱导大肠癌细胞株LoVo凋亡的初步研究(摘要)

目的:细胞凋亡的调节紊乱与肿瘤的发生密切相关,已发现维甲类化合物全反式维甲酸ATRA在一些实体瘤细胞系中具有诱导凋亡作用。但在大肠癌中无报道,我们就此作一研究。材料和方法:结肠癌细胞株Lo-Vo在1640培养液中常规培养,取对数生长期细胞进行实验,ATPA溶解在无水乙醇中,实验和对照组乙醇终浓度均为0.05%。①MTT法反映活细胞数量,用MTT法测细胞生长抑制率;②流式细胞仪(FCM)分析细胞周期。FCM测定采用单染色单激光法。标本为10~(-5)molATRA作用后2、4、6d和传2、4、6代的LoVo细胞株;③IXl0~(-5)mol、IXl0~(-6)molATRA作用6d后在电镜下观察凋亡细胞;④用DNA断端标记(TDT)法测定凋亡细胞:凋亡细胞DNA断裂,末端被FITC标记,在荧光显微镜下计算凋亡细胞;⑤核酸电泳:按照Wessenlborg方法进行。结果:①ATRA浓度在10~(-5)~10~(-7)mol对LoVo细胞均有生长抑制作用(P<0．01),是有效药物浓度,生长抑制显示时间剂量依赖性;②流式细胞仪分析细胞周期,结果ATRA能改变LoVo细胞的细胞周期,使G_0/G_1期比例增高,S期下降,细胞被阻滞于G_1:期。10(-5)mol组第6天及传代2、4、6代后G_0/G_1期细胞比例下降,S期逐渐上升并出现亚“G_0/G_1”凋亡峰;③透射电镜下见特征性凋亡细胞,其特点是核膜完整染色质固缩,形成新月形,而对照组     

靶向Survivin基因的短发卡RNA对U251细胞生长和凋亡的影响

目的观察Survivin基因特异性短发卡RNA（shRNA）对人脑胶质母细胞瘤U251细胞体外生长和细胞凋亡的影响。方法对U251细胞，稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞，以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞。分别采用细胞计数法绘制生长曲线和平板克隆形成实验观察各组细胞的体外生长情况；采用流式细胞术（FCM）定量测定各组细胞的细胞周期和凋亡细胞数量；采用HE染色、Hoechst染色和原位末端标记（TUNEL）方法观察各组细胞形态学特征。结果与U251和U251-P细胞相比，U251-SR细胞生长明显减缓（P〈0．01），细胞克隆形成明显减少（P〈0．01）；U251-SR细胞G1期细胞增多，S期细胞减少，凋亡细胞增加至20．9％，并呈现典型的细胞凋亡形态学改变。结论靶向Survivin基因的特异性shRNA能够在体外明显抑制U251细胞的生长并诱导其发生大量凋亡。     

Clusterin对膀胱癌细胞抗凋亡作用机制的研究

目的：探讨新的抗细胞凋亡因子Clusterin对膀胱癌EJ细胞的作用机制。方法用丝裂霉素（MMC）诱导膀胱癌EJ细胞凋亡，采用流式细胞术（FCM）检测不同浓度的Clusterin对抗EJ细胞的凋亡率。结果：小剂量Clusterin可以特异性抑制MMC诱导的EJ细胞凋亡作用。结论Clusterin通过抗凋亡机制作用于膀胱癌EJ细胞，可能与膀胱癌细胞的复发、耐药等临床特性有关、此项研究对阐明膀胱癌发生发展的生物学机制以及临床应用Clusterin抗体的治疗胱癌提供帮助。     

细胞凋亡与胎盘的发育和成熟

细胞凋亡是属于机体的生理机制,是多细胞生物更新正常细胞和清除异常细胞的重要手段,参与机体生殖、胚胎发育、免疫等生理过程以及肿瘤、病毒感染等疾病发生过程。目前已揭示,在细胞凋亡过程中,细胞内部发生一系列特殊基因的表达以及生化和形态学改变。本文仅就人胎盘中的细胞凋亡作一综述。一、细胞凋亡概述１细胞凋亡的基本概念：当细胞被诱导启动凋亡时,先后发生一系列的生物化学和代谢变化。先可观察到胞浆内钙离子浓度增高,钙离子是激活细胞内的核酸内切酶所必需。钙离子还能活化谷氨酰胺转移酶,使蛋白质大量交联,在胞膜内形…     

PLNCX-TNFα基因转染对人胆管癌细胞生长的影响

目的 研究LNCX-TNFα基因过表达对人胆管癌细胞的作用。方法 构建LNCX-TNFα复合体，培养人胆管癌细胞，LNCX-TNFα转染人胆管癌细胞，得到稳定表达，通过聚合酶链式反应（PCR），流式细胞仪（FCM），免疫组织化学等方法检测基因表达，细胞生长增殖和细胞凋亡等情况。结果 重组体LNCX-TNFα基因转染人胆管癌细胞后，能抑制细胞的生长和集落形成，流式细胞技术证实，LNCX-TNFα能诱导细胞发生凋亡并导致基发生G1期阻滞，G2-M期和S期比例明显下降，凋亡细胞数也明显增加。结论 TNFα基因通过诱导肿瘤细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞在肿瘤基因治疗方面发挥作用。     

蛇毒抗高凝状态酶、氟尿嘧啶对BEL-7404细胞作用的实验研究

目的通过蛇毒抗高凝状态酶（AHCSE）、氟尿嘧啶（5-FU）对人肝癌细胞BEL-7404（简称7404细胞）、正常LO2肝细胞（简称LO2细胞）作用的比较，研究AHCSE对肝癌的作用以及探讨其可能的作用机制。方法应用光学显微镜、透射电镜、MTT法、TUNEL、FCM等方法观察7404细胞、LO2细胞经过AHCSE、5-FU处理后，细胞形态学、生物化学等方面的变化。结果7404细胞、LO2细胞经过AHCSE、52FU处理后，发生了形态学改变；小剂量AHCSE对7404细胞具有很强的抑制作用，但对LO2细胞几乎无影响；随着剂量的加大，AHCSE对7404细胞抑制率上升不明显，但是出现对LO2细胞的抑制作用。经AHCSE作用后，7404细胞发生了凋亡，凋亡率随AHCSE浓度的增加而增加；与5-FU对7404细胞作用相似，但5-FU对LO2细胞抑制作用明显增强。结论AHCSE、5-FU对BEL-7404细胞均有很强的抑制作用，诱导细胞凋亡是其作用机制之一，AHCSE可能成为一种新的肝癌细胞凋亡的诱导剂。     

半胱氨酸蛋白酶32在丝裂霉素C诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的　探讨半胱氨酸蛋白酶 32 (caspase 3)在丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌EJ细胞凋亡中的作用。　方法　采用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)研究EJ细胞凋亡及细胞周期变化 ,分析caspase 3抗体对低剂量MMC诱导EJ细胞凋亡的影响。　结果　TUNEL法显示MMC组EJ细胞出现细胞凋亡特有的形态学特征 ,凋亡指数 (6 2 .9± 2 .2 ) % ,较cas pase 3抗体加MMC组 (4.9± 0 .3) %和空白组 (2 .7± 0 .7) %显著增高 (P <0 .0 0 1)。FCM检测结果明 ,MMC主要诱导G0 /G1期细胞凋亡而出现凋亡峰 ,凋亡率 2 6 .0 6 % ;caspase 3抗体能特异性抑制MMC诱导EJ细胞凋亡 ,凋亡率仅为 4.6 5 %。　结论　低剂量MMC对caspase 3的活化在诱导膀胱癌细胞凋亡中有重要作用。     

表阿霉素诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的 研究表阿霉素对肝癌细胞凋亡的影响.方法 在体外培养的肝癌细胞中加入不同浓度的表阿霉素,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征.细胞凋亡百分率及细胞周期的变化.结果 在表阿霉素作用下,凋亡的肝癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带;流式细胞术测定,出现典型的凋亡峰,其凋亡百分率随着药物浓度的提高和作用时间的延长而明显升高;同时,G_(1/0)期和S期细胞含量下降,而G_2/M期细胞含量上升.非凋亡细胞则无此表现.结论 表阿霉素可诱导肝癌细胞发生凋亡,并可使肝癌细胞生长受阻于G_2/M期,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin-A(TSA)诱导肿瘤细胞凋亡的机制.方法 显微镜下观察TSA作用24、48 h后,小鼠NIH3T3成纤维细胞、人乳腺癌MCF-7细胞的形态学变化,采用流式细胞学方法(FCM)检测细胞凋亡情况.利用Western blot方法检测细胞周期相关蛋白Rb蛋白和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(PARP)降解片段的表达.结果 TSA作用后的NIH3T3细胞,生长变得缓慢,但细胞尚保持生长的活性.MCF-7细胞24、48 h的凋亡率分别为(36.4±1.5)%、(67.0±2.8)%,以48 h最明显.TSA作用24、48、72 h后,两种细胞均出现不同程度的磷酸化Rb蛋白水平下降,MCF-7细胞中PARP发生明显的降解,48 h后降解明显,72 h达到最大程度.结论 TSA可诱导MCF-7细胞凋亡,其机制可能通过改变肿瘤细胞校染色质的空间结构,以及阻滞细胞周期实现的.     

失神经骨骼肌萎缩机制的研究进展

目的对近年失神经骨骼肌萎缩机制的研究进展作一综述。方法广泛查阅近年有关失神经骨骼肌萎缩的国内外文献,并进行综述。结果失神经骨骼肌萎缩的机制非常复杂,目前主要从组织学、细胞学和分子学的改变来研究萎缩机制。失神经骨骼肌纤维变细,排列紊乱,并有凋亡小体出现。促凋亡相关基因表达上调,抑制凋亡相关基因下调。骨骼肌卫星细胞在失神经支配后增多,但不能分化为成熟肌纤维,以致最后减少甚至耗竭。失神经支配萎缩的骨骼肌细胞中线粒体结构改变和代谢相关酶基因下调导致肌细胞代谢紊乱。结论骨骼肌纤维组织学改变,肌卫星细胞数量及分化改变,线粒体结构改变,凋亡相关基因和代谢相关基因表达发生改变均参与了失神经骨骼肌萎缩的发生。     

一氧化氮合酶、p38MAPK、Caspase-3介导缺氧神经细胞凋亡机制的研究

目的探讨缺氧引起PC12细胞凋亡和NOS、p38MAPK和(Caspase-3在缺氧后神经细胞凋亡中的共同作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法测定缺氧对PC12细胞的生长抑制率,荧光显微镜观察缺氧对PC12细胞损伤,比色法测定PC12细胞在缺氧环境下乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术(FCM)检测缺氧PC12细胞NT阳性细胞百分比,以及细胞周期改变和细胞凋亡率, RT-PCR半定量分析nNOS、iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA的表达。结果MTT法测定缺氧抑制PC12细胞生长趋势;AO荧光染色缺氧24 h时PC12细胞可见凋亡小体;缺氧时间延长,LDH渗出量增多,NT阳性细胞百分比增大,S期细胞增多,细胞凋亡率升高,缺氧24 h调亡率达到45.67%;PCR结果分析显示nNOS mRNA在缺氧早期表达,iNOS、p38MAPK和Caspase-3 mRNA主要在缺氧晚期表达。结论缺氧能够引起PC12细胞凋亡现象,nNOS、iNOS分别在缺氧早期和晚期发挥神经毒性作用,NOS,p38MAPK和Caspase-3三种基因共同介导缺氧后PC12细胞凋亡。     

阿霉素诱导人胆囊癌细胞凋亡的研究

目的　观察阿霉素 (ADM )对胆囊癌细胞凋亡的影响。方法　在体外培养的胆囊癌细胞中加入不同浓度的阿霉素 ,应用光镜、电镜、DNA凝胶电泳及流式细胞仪检测胆囊癌细胞凋亡的形态学特征、生化学特征、细胞凋亡百分率及细胞周期的变化。结果　在阿霉素作用下 ,凋亡的胆囊癌细胞出现膜小泡、凋亡小体等特征性改变 ;DNA电泳呈现典型的“梯状”条带 ;流式细胞仪测定 ,出现典型的凋亡峰 ,其凋亡百分率随着药物浓度的提高而明显升高 ,分别与对照组比较 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;同时 ,S期细胞含量下降 ,而G2 /M期细胞含量上升。非凋亡细胞则无此表现。结论　ADM可诱导胆囊癌细胞发生凋亡 ,并可使胆囊癌细胞生长受阻于G2 /M期 ,这可能是其杀伤肿瘤的一种重要机制     

缺血-再灌注对移植猪心Bcl-2、Bax及Fas表达的影响

细胞凋亡广泛参与机体的正常发育和各种病理生理过程。细胞凋亡发生不足或凋亡过度均可导致机体发生多种病理生理变化,细胞凋亡可在多种病理应激条件下被激活。实验证实,心脏移植后心肌细胞凋亡增加,与多种因素相关。目前,移植心脏大多来自于尸体,早期常伴有血流动力学改变和暂     

端粒酶反义RNA转染促进膀胱癌T24细胞凋亡的研究

目的　探讨端粒酶反义RNA对膀胱癌T2 4细胞恶性表型的抑制及促进其凋亡的作用。　方法　采用脂质体转染法将转录出端粒酶反义RNA质粒导入膀胱癌T2 4细胞。应用PCR ELISA法测定转染后T2 4细胞的端粒酶活性 ;光镜、电镜、MTT及流式细胞术 (FCM )等方法观察端粒酶反义RNA对T2 4细胞生长及凋亡的影响。　结果　端粒酶反义RNA能显著抑制T2 4细胞的端粒酶活性 ,转染T2 4细胞后使其生长受到抑制。形态学观察 ,转染后T2 4细胞出现典型的凋亡现象。FCM检测发现G1期前出现凋亡峰。　结论　转染端粒酶反义RNA能抑制膀胱癌T2 4细胞的恶性表型 ,促进其凋亡     

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控前列腺癌22RV1细胞雄激素受体及Akt磷酸化

目的:探索哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTORC1和mTORC2在前列腺癌22RV1细胞增殖及凋亡中的作用。方法:噻唑蓝(MTT)比色法检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞增殖改变;流式细胞术(FCM)检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞凋亡;Western印迹检测mTORC1和mTORC2沉默后前列腺癌22RV1细胞雄激素受体(AR)和Akt磷酸化表达。结果:MTT显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞的生长率无明显变化(P>0.05),而mTORC2沉默后,细胞的增殖受到了显著抑制(P<0.01);FCM显示mTORC1沉默后,细胞的凋亡率明显增加(P<0.01),而mTORC2沉默后,细胞的凋亡率无明显变化(P>0.05);Western印迹检测显示mTORC1沉默后,前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达显著增加(P<0.05),而mTORC2沉默后则显著抑制了前列腺癌22RV1细胞中AR和Akt磷酸化表达(P<0.05)。结论:mTORC2对于前列腺癌22RV1细胞的存活是必需的,mTORC2有可能成为治疗前列腺癌的一个有意义的靶点。     

胸苷激酶基因系统对膀胱癌细胞及凋亡基因的影响

目的 探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶／丙氧鸟苷(HSV-TK／GCV)系统对膀胱癌细胞BIU87的杀伤作用及对凋亡基因的影响。方法 脂质体将TK基因成功转入BIU87。噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪(FCM)分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化；逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax、bak、Caspase-3 mRNA表达变化．比色法测定Caspase．3活性变化。结果 作用5dlmg,／LGCV能杀死67％的细胞，100mg／，LGCV达到最大杀伤率杀死97％的细胞；GCV诱导细胞凋亡，细胞周期阻滞在S和G2期；bcl-2表达降低，bax表达升高，Caspase-3表达及活性升高。结论 HSV-TK／GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡，细胞周期阻滞、bcl-2和bax表达变化、Caspase-3活化是引起凋亡发生的重要因素。