大鼠骨髓细胞CD34+β2m-CD90+亚群体外培养诱导分化

目的在体外用HGF EGF诱导骨髓CD34 β2m-CD90 细胞向成熟肝细胞转化.方法四氯化碳皮下注射建立大鼠肝纤维化模型,磁式细胞分离法取骨髓CD34 β2m-CD90 细胞,流式细胞仪检测;DMEM培养细胞,HGF EGF诱导分化;免疫荧光显微镜、免疫细胞化学和RT-PCR检测AFP、白蛋白和CK-18的表达;ELISA法检测培养上清白蛋白浓度,PAS染色法检测糖原的合成.结果实验组CD34 ,β2m-,CD90 亚群数量均较正常对照组显著增加(P＜0.05);诱导分化培养后,细胞的形态与正常肝细胞类似;培养的细胞白蛋白和CK-18的表达随培养时间(第1～21天)的延长而增加,AFP的表达逐渐下降(P＜0.05);上清白蛋白浓度,糖原的合成增加(P＜0.05).结论大鼠肝纤维化可能促进骨髓CD34 β2m-CD90 细胞的增殖;CD34 β 2m-CD90 细胞经HGF EGF SCF诱导分化培养后,在形态和功能上有逐渐向成熟肝细胞转化的趋势.     

人CD34+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的:探讨人脐血来源的CD34 干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础.方法:用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34 脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3 d移植荧光标记的CD34 脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等.结果:脊髓损伤大鼠移植CD34 脐血干细胞5～6 d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10～15 d后可出现爬行,3～4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复.脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生.结论:移植的CD34 脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段.     

CD34+细胞含量在细胞移植治疗心力衰竭中的作用

目的:探讨CD34 细胞含量在骨髓单个核细胞移植治疗心力衰竭中的作用.方法:选择缺血性心力衰竭患者30例,测定移植前骨髓单个核细胞中CD34 细胞含量.观察患者移植前和移植后3个月的心肌梗死缺损区面积、左室射血分数、每搏量的变化.结果:在移植后3个月,CD34 细胞＜4.45×105者心肌梗死缺损区下降幅度、左室射血分数和每搏量上升幅度均明显小于CD34 细胞＞4.45×105者(P<0.05).结论:在骨髓单个核细胞移植治疗心力衰竭的过程中,细胞系中CD34 细胞含量多者,其心功能改善好于CD34 细胞含量少者.     

纯化的CD34+细胞移植治疗移植后复发的系统性红斑狼疮

1997年意大利学者Ｍａｒｍｏｎｔ等[1] 应用自体骨髓移植(ＡＢＭＴ)治疗了 1例病程长、病情严重的系统性红斑狼疮(ＳＬＥ)患者 ,疗效显著。国内欧阳建等[2 ] 2 0 0 1年 4月报道了以ＡＢＭＴ治疗 3例重症ＳＬＥ的结果 ,疗效令人鼓舞。椐欧洲造血干细胞移植治疗自身免疫病登记组的资料 ,至 2 0 0 2年 8月已有 5 3例患者接受此项治疗 ,但迄今已有近半数患者复发[3 ] 。对复发的患者常规抗风湿治疗仍有效 ,但对重症患者仍缺乏满意的治疗手段。 2 0 0 1年 5月我们对一例接受自体骨髓移植后复发的重症ＳＬＥ患者施行了第 2次造血干细胞移植 (纯化…     

OX34预防大鼠小肠移植急性排斥反应

目的:探讨可溶性抗CD2 mAb (OX34)在大鼠小肠移植(SBT)急性排斥反应中的治疗作用. 方法:将两种近交系大鼠(SD, Wistar)72只随机分为A,B,C,D 4组,A组为对照组(n=18)行虚拟手术,给予普通饲料喂养;B组(n=18)行同系小肠移植(iso-strain SBT),术后常规补液,给予抗生素;C组(n=18)行不同品系小肠移植(aniso-strain SBT),术后处理同B组;D组(n=18)行不同品系小肠移植,术后除常规补液、给予抗生素外,同时给予OX34. 各组于术后3, 5, 7 d取材. 行病理学及流式细胞术(FCM)检测. 结果:手术后C组移植受体存活时间及外周血CD2 阳性T淋巴细胞表达率较其他3组差异有统计学意义(P<0.05). 移植肠病理学检查均有从轻度至重度急性排斥反应的发生. D组部分受体于术后5,7d出现轻度急性排斥反应. A,B组未见明显排斥反应发生. 结论:OX34可有效抑制急性排斥反应的发生.     

纯化的自体CD34+细胞移植治疗多发性骨髓瘤的临床观察

目的采用CD34+细胞体外分选技术对多发性骨髓瘤患者进行自体CD34+细胞移植,以降低自体移植后肿瘤复发率.方法对1例多发性骨髓瘤患者采用CliniMACS临床型细胞富集仪,利用磁性分选技术收集CD34+细胞,患者于预处理后,输注分选后的CD34+细胞.结果 CD34+细胞体外纯化富集可使回输CD34+细胞中位数达3.9×106/kg,CD34+细胞回收率为35%,纯度达到97.6%;移植后,患者于+14 d时,中性粒细胞数＞0.5×109/L,+35 d时血小板＞20×109/L,提示造血重建.结论 CD34+细胞移植后获得迅速、稳定的造血重建.体外CD34+细胞纯化富集后移植可望提高多发性骨髓瘤患者自体移植疗效.     

CD34+细胞自身移植治疗儿童难治型系统性红斑狼疮

目的探讨治疗儿童难治型系统性红斑狼疮(SLE)积极、有效的方法.方法对2例病程分别为5年和7年,狼疮肾Ⅲ级和Ⅳ级,主要表现为持续性血小板减少、蛋白尿和浆膜炎的患儿进行CD34+细胞分选的自身干细胞移植.首先经惠尔血动员、CS-3000血细胞分离机获取单个核细胞,通过CliniMACS CD34+细胞分选仪分别得到了1.7×106/kg及1.0×106/kg CD34+细胞,采集物中分别尚存2×105/kg和1×104/kg的CD3+细胞.用CTX 50 mg/kg·d×4 d+ATG(Fresennius S 5 mg/kg·d×3 d)预处理.结果两患者分别于+9 d和+7 d获粒细胞重建,自+15 d起血小板维持于正常水平.现已分别随访13月和6月,原发病症状完全消失,自身免疫相关抗体全部转阴,但细胞免疫功能仍未恢复,CD4细胞仍处于低水平.结论CD34+细胞分选的自身干细胞移植治疗儿童难治型红斑狼疮近期疗效满意.     

肝癌干细胞CD90+和ESA+亚群生物学特性研究

目的　研究肝癌干细胞不同亚群CD90+和ESA+细胞的生物学特性,为肝癌的治疗及预后判定提供新的思路。方法　采用活细胞流式细胞术检测肝癌细胞系MHCC97L中肝癌干细胞标志物CD90、ESA的表达情况,并分选ESA+,CD90+细胞,通过甲基纤维素成球实验、Transwell、CCK8法进行体外生物学特征研究。结果　肝癌细胞系MHCC97L中CD90+和ESA+细胞表达比例分别为2.37%和3.70%。ESA+细胞成球率明显高于ESA-细胞［成球率（35.6±2.1）% vs.（9.6±1.4）%, P<0.01］,CD90+细胞成球率明显高于CD90-细胞［成球率（29.2±1.3）% vs.（7.4±0.6）%］（P<0.01）,ESA+细胞成球率明显高于CD90+细胞且ESA+细胞sphere球体积明显大于CD90+细胞体积;ESA+细胞较ESA-细胞侵袭能力提高2.12倍［（282±15.1 vs. 133±12.4）,P<0.01］,CD90+细胞较CD90-细胞侵袭能力提高2.04倍［（231±18.1 vs. 113±10.2）,P<0.01］。CD90+细胞耐药性明显强于ESA+细胞［IC50（0.98 μg/mL vs. 0.36 μg/mL）］,ESA+细胞增殖能力明显强于CD90+细胞。结论　肝癌组织中存在不同的干细胞亚群ESA+细胞及CD90+细胞,这些亚群具有不同的生物学特性,影响肝癌的耐药、侵袭,了解肝癌中不同干细胞亚群的表达情况可用于指导临床个体化治疗。     

CD34+造血干细胞移植在大鼠缺氧缺血性脑病中的神经保护机制

目的探讨CD34~+造血干细胞移植在大鼠缺氧缺血性脑病中的神经保护作用和机制。方法建立体外人造血干细胞(CD34~+)增殖模型并进行体外扩增,分析其生物学活性。选取90只SD大鼠构建大鼠缺氧缺血动物模型并随机分为三组(每组30只):对照组、模型组和治疗组;给予治疗组大鼠造血干细胞(CD34~+)移植3 d后,处死大鼠并观察脑组织病理改变;采用TUNEL法检测神经细胞凋亡的发生;采用免疫组织化学法检测脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和血清神经生长因子(nerve growth factor,NGF)蛋白的表达。结果与对照组相比,模型组和治疗组动物行为学异常明显加重,凋亡细胞数明显增多,细胞内BDNF和NGF含量显著下降(P0.05);与模型组相比,治疗组动物行为学异常明显减轻,凋亡细胞数明显减少,细胞内BDNF和NGF含量显著上升(P0.05)。结论 CD34~+造血干细胞移植对大鼠缺氧缺血性脑病中具有显著的神经保护作用,可以有效促进脑内神经营养相关因子的表达。     

丙氧鸟苷对亚致死量照射H-2半相合小鼠CD34+细胞植入的影响

①目的探讨丙氧鸟苷(GCV)对亚致死量照射H-2半相合小鼠CD34+细胞移植的影响.②方法从亲代雄性供鼠骨髓分离CD34+细胞,同时取脾脏T细胞转染TK基因.雌性F1受鼠60Co亚致死量照射7.0 Gy后随机分为4组,第1组输入1×105 CD34+细胞,其他3组输入1×105 CD34+细胞和5×105 TK+ T细胞.第3、4组分别于移植后0和7 d给予GCV治疗,然后观察各组移植物抗宿主病(GVHD)发生情况和生存情况.③结果单纯输入CD34+细胞组小鼠未能植活,但自体造血恢复.输入CD34+和TK+ T细胞组小鼠出现急性GVHD,表现为体质量下降;自小鼠外周血扩增出Y染色体片段.输入CD34+和TK+ T细胞后应用GCV组小鼠未发生急性GVHD;0 d应用GCV组80%小鼠未扩增出Y染色体片段;7 d应用GCV组80%小鼠扩增出Y染色体片段.7d应用GCV组植入率与未应用GCV组相比差异无显著性(χ2=0.89,P>0.05);7d应用GCV组植入率高于0d应用组(χ2=2.64,P<0.05).④结论移植后1周应用GCV对CD34+细胞植入影响较小.     

骨髓增生异常综合征中骨髓CD34~+、CD34~-细胞凋亡和增殖的实验研究

目的:分析骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓CD34+细胞和CD34-细胞凋亡和增殖情况,从该角度探讨MDS的发病机制。方法:流式细胞术分析20例高危MDS、20例低危MDS患者及10例正常对照者骨髓CD34+细胞的比例,CD34+细胞和CD34-细胞凋亡、增殖的百分率,计算各组中的凋亡/增殖(A/P)比。结果:(1)MDS患者CD34+细胞的比例明显高于对照组,其中高危组CD34+细胞的比例明显高于低危组(P<0.05),而低危组与对照组比较无显著差异;(2)CD34+,CD34-细胞的凋亡率在MDS低危组中均为最高,明显高于MDS高危组和对照组,在低危组中,CD34-细胞的凋亡率(80.36±1.82)%明显高于CD34+细胞(54.75±2.18)%(P<0.05),而在高危组中,CD34+,CD34-细胞的凋亡率无显著差异;(3)CD34+细胞的增殖率在MDS高危组中最高,明显高于低危组和对照组,而CD34-细胞的增殖率在MDS高危和低危组间无显著差异,在高危组中,CD34+细胞的增殖率(50.67±3.37)%明显高于CD34-细胞的(30.99±1.96)%(P<0.05);(4)无论CD34+,CD34-细胞的A/P值在MDS低危组中均明显高于高危组和正常对照组,而在MDS各亚组中,CD34-细胞的A/P值明显高于CD34+的A/P值(P<0.05)。结论:CD34+细胞百分率随MDS危险度增加而逐渐增加,在低危组中以CD34-细胞的凋亡占主导,随着病情进展,在高危组中则以CD34+细胞的增殖占主导,提示异常的凋亡和增殖在MDS的发生和发展中起重要作用。     

CD34+细胞分选在异基因造血干细胞移植中的应用

CD34^ 细胞分选可有效去除T细胞，显著降低急慢性移植物抗宿主病（GVHD）的发生率及严重程度，对于植入率及疾病复发率无不良影响。随着CD34^ 细胞生物学特性研究的深入及其分离纯化技术的成熟，CD34^ 细胞分选和移植的应用日益广泛，在拓宽供体来源（HLA不全相合或半相合移植）以及提高无关供体移植安全性等方面有良好的应用前景，但也存在着不少问题。本文就有关CD34^ 细胞移植中免疫活性细胞数量与移植效果、G－CSF（GM－CSF）和供体淋巴细胞输注的应用、移植并发症以及HLA半相合CD34^ 细胞移植等问题作一综述。     

CD34+造血干细胞混合CD3+T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化CD34+造血干细胞混合一定量纯化CD3+T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病(GVHD)又保留移植物的抗白血病效应(GVL). 方法 (C57BL/6×615)F1代接种L615白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠,利用免疫磁珠纯化骨髓CD34+造血干细胞及脾脏CD3+细胞,流式细胞仪分析纯化前后CD34+、CD3+细胞百分比,观察单纯移植CD34+细胞及混合不同数量级CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应,移植后骨髓造血重建细胞来源. 结果纯化CD34+细胞1×10+6移植组100%死于白血病复发;CD34+细胞+纯化CD3+细胞(1×10+7)移植组生存期明显延长,50%死于白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(5×10+7)移植组长期存活,无白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(1×10+8)移植组62.5%死于GVHD,37.5%长期存活;CD34+细胞+CD3+细胞(1.5×10+8)移植组100%死于GVHD.移植后生存时间>60 d的受鼠骨髓造血重建细胞y染色体检出率为100%. 结论移植物中CD3+细胞数量与GVHD和GVL效应密切相关,通过限定移植物中的CD3+淋巴细胞的含量能够保留GVL作用而有效控制GVHD发生.     

G-CSF对不同人群CD34+细胞及T细胞亚群影响的动态变化研究

目的探讨应用G-CSF动员外周血干细胞时,异体/自体造血干细胞移植供/受者的骨髓及外周血CD34 细胞和T细胞亚群的动态变化特点及最佳外周血干细胞采集时间.方法对12例健康供者和16例化疗7 d后的恶性血液病患者,以G-CSF 150 μg/12 h,皮下注射,连用5 d.应用流式细胞仪测定骨髓及外周血CD34 细胞和T细胞亚群.结果①应用G-CSF前,两者骨髓CD34 细胞有显著差异(P<0.01).应用48 h后,两者的骨髓CD34 细胞均较前有明显增加(P<0.01),两者之间仍存在明显差异(P<0.01).两者的骨髓CD34 细胞高峰值出现在96 h后,较应用前差异显著(P<0.01),两者之间无差异(P>0.05).②应用G-CSF前,两者的外周血CD34 细胞无明显差异(P>0.05).应用72 h后,两者外周血中CD34 细胞均较前有明显增加(P<0.01),两者之间无明显差异(P>0.05).96 h后,两者的CD34 细胞达高峰,较应用前差异显著(P<0.01).两者之间无明显差异(P>0.05).③应用G-CSF对两者的T淋巴细胞亚群无明显影响.结论应用G-CSF动员外周血干细胞96 h后,异体/自体造血干细胞移植供/受者的骨髓及外周血CD34 细胞均达到高峰,可适时采集外周血干细胞.     

自体外周血CD34+细胞移植治疗2例肿瘤患者临床报告

大剂量化疗合并自体造血干细胞移植越来越多地应用于多种对化疗敏感的恶性肿瘤 ,输注动员后的外周血干细胞可明显减低大剂量化疗导致的并发症和死亡率。然而 ,采集的干细胞中可能含有肿瘤细胞 ,从而导致移植后复发。鉴于人造血干/祖细胞表面表达CD34抗原 ,而很多肿瘤细胞不表达CD34抗原的原理 ,可采用CD34 +细胞分选技术 ,以减少移植物中肿瘤细胞的污染 ,达到净化的目的。我们运用CliniMACS系统纯化CD34+ 细胞进行自体外周血干细胞移植治疗2例肿瘤患者 ,现报告如下。1.1对象例1 :患者男性 ,25岁 ,右髂骨原始神经外胚层肿瘤 ,肿瘤切除…     

自体外周血CD34+细胞移植治疗非霍奇金淋巴瘤

目的 采用CD34+细胞体外分选技术对非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者进行自体外周血CD34+细胞移植,观察其临床疗效.方法 5例NHL患者,女3例,男2例;中位年龄29岁;T细胞NHL 3例,弥漫大B细胞NHL 1例,真性组织细胞型NHL 1例;临床分期ⅡA 2例,ⅣB 3例;移植前4例处首次完全缓解,1例为部分缓解.采用Clini MACS临床型磁性细胞分离器收集CD34+和CD34-细胞组分,患者于预处理后输注分选的CD34+细胞.结果 Clini MACS体外分选可去除3.3个对数级CD34-细胞;回输CD34+细胞中位数为2.0×106/kg;CD34+回收率为52%,CD34+细胞纯度为86%;移植后白细胞恢复至＞0.5×109/L和血小板＞20×109/L天数(中位数)分别为12 d和19 d.患者总体生存率和无病生存率均为4/5,1年生存率为4/5,估计5年生存率为75%.结论 NHL患者自体外周血CD34+细胞移植后可获得迅速稳定的造血重建,体外CD34+细胞纯化富集后移植可望提高NHL患者自体移植疗效.     

自体骨髓单核细胞移植在肝纤维化兔肝脏内的定植能力

目的 建立四氯化碳诱导的兔肝纤维化动物模型,观察体外分离标记的自体骨髓单核细胞(ABM-MNCs)经肠系膜上静脉自体移植至肝纤维化区及周边区后的存活、定植状况.方法 将40只普通级日本大耳家兔随机分为细胞移植组和对照组各20只,实验组腹腔注射40%CCl4橄榄油溶液建立肝纤维化模型,对照组腹腔注射等量生理盐水.细胞移植组于模型稳定后自体髂骨处抽取骨髓,采用氯化氨红细胞溶解法分离得到单核细胞,以5溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记体外ABM-MNCs及鉴定;分离培养ABM-MNCs,将3×109个ABM-MNCs经肠系膜上静脉回输体内,对照组回输等量生理盐水,移植前、移植后3、7、14、21 d分别取肝组织固定,进行免疫组织化学检测.结果 BrdU体外标记ABM-MNCs的免疫组织化学表现示:20 μmol/L BrdU孵育ABM-MNCs 72 h的阳性标记率达95%;肝组织20 μmol/L BrdU免疫组化染色切片显示:自体骨髓单核细胞移植后第3天,肝小叶中央静脉周围BrdU染色阳性,随着时间的推移,阳性染色逐渐增强,并逐步向肝组织内部延伸.阳性染色主要分布于肝组织汇管区周围组织,而对照组BrdU染色则阴性.结论 ABM-MNCs经肠系膜上静脉移植后,可在纤维化区及周边区存活,定植.     

CD34~+细胞在原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症骨髓组织中的表达

目的:探讨CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症及原发性血小板增多症骨髓组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色法,检测原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症实验组及对照组骨髓组织中CD34+细胞表达情况。结果:CD34+细胞在实验组骨髓组织中表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症及原发性血小板增多症骨髓组织中表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症的发生中有一定关系,CD34+细胞与两者之间的转化无必然联系。     

造血干细胞移植中单个核细胞计数与CD34~+细胞计数的比较

目的探讨造血干细胞移植中单个核细胞（MNC）计数与CD34＋细胞细胞计数之间的比较。方法 2006年4月-2012年8月,32例患者（男18例,女14例,中位年龄32岁）在我院进行外周血造血干细胞移植。25例自体、7例异基因（5名父系供者,2名同胞供者,男5例,女2例,中位年龄28岁）接受统一的动员方案,用全自动血细胞分离机以MNC程序进行外周血造血干细胞（PBSC）采集。32例患者均进行MNC计数及CD34＋细胞计数,进行相关分析,比较两种计数指标对造血重建的影响。结果①32例受者输入MNC的中位数为6.75（2.92-18.76）×108/Kg,输入CD34＋细胞的中位数5.03（2.35-15.14）×106/Kg;②32例受者造血重建均达到了100%。。结论 MNC作为造血干细胞含量的计数依据,其植活率和植活速度与CD34＋细胞作为依据的病例相似,结果表明：MNC计数完全可代替CD34＋细胞计数,可作为造血干细胞移植中造血干细胞含量的指标。     

搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中富集CD34^＋干细胞的方法

目的为便于进行心肌干细胞移植的临床研究,探索一种搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中快速富集CD34+干细胞的方法.方法搭桥手术患者11例,男6例,女5例,平均年龄(65.4±8.9)岁,平均体重(60.8±14.6)kg.术中从胸骨和肋股骨髓中多点抽取骨髓,MiniMACS分选系统分离纯化骨髓CD34+干细胞,流式细胞术检测富集的CD34+细胞纯度,镜检细胞活力,计数富集干细胞的时间.结果本方法抽取的骨髓液20～30ml,可富集(1.7±0.8)×107个CD34+干细胞,纯度(95.8±1.6)%,活力(95.3±1.6)%;从抽取骨髓到富集到可用的CD34+细胞用时3.5～4 h.结论搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中可快速富集理想的CD 34+干细胞,获取细胞隐蔽,患者无痛苦,分选时间短,可在搭桥手术结束前提供心肌注射使用,为心肌干细胞移植的临床试验提供依据.