槟榔提取物对口腔黏膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的探讨口腔黏膜下纤维性变的发病机制。方法体外培养口腔黏膜下纤维性变患者和正常人口腔黏膜成纤维细胞,并用不同浓度的槟榔提取液进行干预,用MTT法检测FB的增殖状况。结果槟榔提取物在高于1×103ng/mL时对口腔黏膜FB的生长有抑制作用;体外培养的正常人FB与口腔黏膜下纤维性变患者FB的增殖能力没有显著差异。结论OSF的发病可能并非槟榔对FB的直接作用。     

槟榔碱对α平滑肌肌动蛋白在口腔黏膜成纤维细胞中表达的影响

目的 了解肌成纤维细胞与口腔黏膜下纤维性变（OSF）的关系并探讨肌成纤维细胞分化的来源和机制。方法 体外培养正常口腔黏膜成纤维细胞和OSF成纤维细胞,用免疫组织化学方法和RT-PCR方法检测α平滑肌肌动蛋白的表达,并观察槟榔碱对其表达的影响,同时用ELISA方法检测了槟榔碱对成纤维细胞合成TGFβ1的影响。结果 OSF来源的成纤维细胞中α平滑肌肌动蛋白表达明显高于正常口腔黏膜成纤维细胞,槟榔碱对体外培养成纤维细胞合成α平滑肌肌动蛋白和TGFβ1水平无明显影响。结论 肌成纤维细胞可能在OSF的发病中起作用;OSF中肌成纤维细胞的来源可能与槟榔成分对成纤维细胞的直接作用无关。     

槟榔提取物对人口腔纤维母细胞的毒性及DNA损伤的研究

观察口腔粘膜纤维母细胞的毒性和ＤＮＡ损伤的作用，结果显示：随着槟榔提取物浓度增大，细胞存活率降低，细胞ＤＮＡ损伤程度愈严重，本文槟榔提取物具有潜在致癌的可能性。     

槟榔碱干预后的血管内皮细胞上清液对口腔颊黏膜成纤维细胞生物活性的影响

目的 比较不同浓度槟榔碱干预后的血管内皮细胞上清液(AECS)对正常人、OSF患者成纤维细胞(NM-FB、OSF-FB)增殖和胶原合成的影响.方法 0、30、60、90和12μg/mL槟榔碱干预血管内皮细胞(EC)24 h,收集去除槟榔碱后EC在无血清培养液中的上清液AECS并干预FB.结果 AECS30、AECS60、AECS90较AECS0更能促进FB的增殖和胶原合成(P＜0.05),但AECS120与AECS0无明显差别(P＞0.05).结论 低浓度槟榔碱干预后的EC分泌功能改变促进FB的增殖和胶原合成能力增强,EC可能参与了OSF的形成.     

体外不同张应力对人牙周膜成纤维细胞增殖活性的影响

目的 观察不同张应力对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)增殖活性的影响，进一步了解HPDLF的应力-生物学效应及其在正畸治疗中可能的生长增殖规律。方法 利用自行设计的膜式动态张应力-体外细胞培养研究系统对分离培养的HPDLF进行对照组(0kPa)、静张应力组(5kPa)、动态张应力组1(5kPa-0kPa-5kPa)、动态张应力组2(5kPa-2．5kPa-5kPa)不同水平及频动范围张应力加载，每组再分16h、24h和32h3个观察时间点，以^3H-TdR掺入法检测其S期细胞增殖活性。结果 静张应力对HPDLF具有明显的促增殖作用，有使其增殖高峰提前的趋向;动态张应力对HPDLF的增殖活性有一定的抑制作用。结论 不同张应力对HPDLF的增殖活性的影响明显不同，静张应力作用具有明显的促增殖作用，而动态张应力有一定的抑制作用。     

槟榔碱通过促进巨噬细胞分泌含miR-155-5p外泌体诱导人口腔成纤维细胞的活化

目的 探讨槟榔碱（ARE）通过调控巨噬细胞外泌体内miR-155-5p水平诱导人口腔黏膜成纤维细胞向成纤维表型转化的作用机制。方法 以人单核细胞系（THP-1）与人口腔黏膜成纤维细胞系（HOMF）为研究对象。实验设为空白对照组、阴性对照组、ARE刺激组、ARE刺激后THP-1培养上清刺激组（CS）、ARE刺激后THP-1外泌体刺激组（EXO）、ARE刺激后THP-1无外泌体上清刺激组（NES）、miR-155-5p过表达组（miR-155-5p mimics）、ARE刺激后EXO处理对照组（NC+EXO-ARE）和miR-155-5p抑制联合ARE刺激后EXO处理（miR-155-5p inhibitor EXO-ARE）组。以流式细胞术检测THP-1细胞极化情况。Transwell细胞迁移实验检测HOMF细胞迁移能力。DCFH-DA检测细胞氧化应激水平。qRT-PCR检测细胞α-SMA、I型胶原和SOCS1的mRNA转录水平。免疫印迹实验检测细胞α-SMA、I型胶原与SOCS1蛋白表达。结果 流式检测显示,相较于对照组,ARE组THP-1细胞由M0趋向M1极化。ARE对THP-1和H...     

槟榔碱对口腔黏膜成纤维细胞病变的影响

目的分析槟榔碱对口腔粘膜成纤维细胞(OMFb)微丝骨架及胶原吞噬的影响。方法取正常人口腔黏膜,行组织块法培养,取第6代细胞行不同浓度槟榔碱(0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL)干预,检测12h、24h、48h后细胞增殖情况;分析24h后胶原吞噬率变化情况;观察24h后细胞微丝骨架变化情况。结果槟榔碱干预12h后,不同槟榔碱浓度OMFb增殖情况差异无统计学意义(P0.05);24h后,10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb增殖率上升,且20μg/mL浓度组增殖率10μg/mL浓度组;30μg/mL、40μg/mL浓度组OMFb无增殖;48h后,各浓度槟榔碱均对OMFb增殖存在抑制效用。10μg/mL、20μg/mL浓度组OMFb胶原吞噬能力存在明显改善,而30μg/mL、40μg/mL浓度组胶原吞噬能力被抑制。此外,10μg/mL、20μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架表现为粗大束状排列,出现张力纤维,细胞极性增强,且10μg/mL浓度组变化情况高于20μg/mL浓度组;而40μg/mL浓度组其OMFb细胞微丝骨架明显减少,30μg/mL浓度组次之,细胞皮层出现大量染色聚集物质。结论低浓度槟榔碱在增强OMFb活性、胶原吞噬能力等方面具有显著促进作用,但高浓度则具有抑制作用。此外,低浓度的槟榔碱还可增强OMFb细胞微丝骨架聚合,而高浓度槟榔碱则可以抑制OMFb细胞微丝骨架聚合,这可能是口腔黏膜下纤维性变的主要发病机制之一。     

组织工程化人口腔黏膜的构建

目的:用组织工程方法培养人全层口腔黏膜.方法:婴儿唇裂多余口腔黏膜组织为取材对象,分离成纤维细胞与上皮细胞,分别接种在聚乳酸羟基乙酸(PLGA)膜上培养,后将其移至气液面进行复合.HE染色、免疫组化AE1/AE3及Vimentin染色,光镜、倒置相差显微镜、扫描电镜观察其形态结构.结果:口腔黏膜具备上皮层和上皮下纤维组织,上皮细胞3～7层,见桥粒连接,AE1/AE3阳性;同有层细胞核形Vimentin( ).结论:成功培养全层人口腔黏膜,PLGA可作为口腔黏膜组织工程支架材料.     

血竭提取物对人成纤维细胞增殖的影响

目的: 观察血竭提取物对体外培养成纤维细胞增殖的影响,探讨血竭促进创面愈合的机制. 方法: 将血竭经过氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提取得到的3种提取液,分别加入培养液并进行成纤维细胞的培养,MTT法检测不同血竭提取物在不同浓度以及不同时间点对体外培养成纤维细胞增殖的影响, 并绘制最适浓度条件下细胞生长曲线. 利用流式细胞仪分析最适浓度培养条件下成纤维细胞的细胞周期变化. 结果: 血竭乙酸乙酯提取物在0.5～2.0 g/L浓度范围内,促进成纤维细胞增殖,且呈剂量依赖性,在浓度为2.0 g/L时促进作用最为显著,此条件下处于S期的细胞较对照组增加18.3% (P＜0.01). 结论: 血竭乙酸乙酯提取物能显著促进成纤维细胞增殖,可能与血竭促进创面愈合的机制有关.     

维拉帕米对人巩膜成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

为探讨维拉帕米防治部增殖性疾病的可能性，在体外观察了维拉帕米对人巩膜成纤维产殖指数和胶原合成的影响。     

硒对氟诱导的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤的作用

目的 :研究硒对氟中毒诱导的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤的作用。方法 :选用雄性SD大鼠 ,氟中毒组大鼠饮用含 15 0mg·L-1氟化钠 (NaF)的蒸馏水溶液 ,硒氟联合作用组大鼠饮用含 15 0mg·L-1氟化钠(NaF)和 2mg·L-1亚硒酸钠 (Na2 SeO3 )的蒸馏水溶液 ,染毒 4周 ,用单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤。结果 :氟中毒能明显诱导大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞的DNA损伤 ,总损伤细胞百分率分别为 5 0 .2 0 %和 4 4 .80 % ,而硒对氟造成的口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用 ,总损伤细胞百分率分别为 14 .6 0 %和 12 .6 0 %。结论 :硒对氟中毒引起的大鼠口腔粘膜细胞和肝细胞DNA损伤具有明显的拮抗作用。     

瘦素诱导肝星状细胞增殖及银杏叶提取物调控作用的研究

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对外源性瘦素(Leptin)诱导肝星状细胞(HSC)增殖功能的影响。方法:分别以不同浓度瘦素(0、10、50、100、200、400μg/L)在不同时相(6、12、18、24h)对复苏后处于对数生长期的HSC-T6细胞进行刺激,同时采用银杏叶提取物(20、40、80、160mg/L)对100μg/L瘦素刺激的HSC-T6细胞作用,设常规培养组为对照,均用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖情况。结果:不同剂量瘦素在不同时间点对HSC-T6细胞增殖呈现剂量、时间依赖性(P<0.05)。银杏叶提取物能明显抑制瘦素刺激的HSC-T6的增殖(P<0.05)。结论:瘦素可明显刺激HSC的增殖,GbE对瘦素刺激的HSC的活化途径的抑制,可能是其抗肝纤维化的重要机制。     

口腔黏膜疾病教学研究及诊治中的伦理学问题探讨

作者从医学伦理学角度探讨口腔黏膜学科在医疗、教学及科研方面现存的问题,通过分析产生这些问题的原因,提出了相应的对策,主要有:①逐渐加大国家对黏膜病医教研的资助率和资助强度;②学习最新技术,以保证我国口腔黏膜病学进一步发展;③改革教学方式,培养整体意识;④要充分认识到患者的恐癌心理;⑤遵循医学伦理学的中心原则--患者的利益高于一切.     

人成纤维细胞对人胚胎干细胞生长的支持作用

目的观察人成纤维细胞对人胚胎干细胞（hESC）生长的支持作用，建立完全非动物源性培养系统。方法采用人包皮成纤维细胞为饲养层，以血清替代品取代动物血清，支持人胚胎干细胞生长，观察其增殖和分化情况。结果包皮成纤维细胞能很好地支持人胚胎干细胞生长增殖，并保持87％左右未分化表型：碱性磷酸酶（AKP）染色强阳性，阶段特异性胚胎抗原3（SSEA-3），肿瘤排斥抗原160（TRA-1-60）表达强阳性，可见转录因子OCT-4mRNA表达。核型正常，体外能形成拟胚体。结论人成纤维细胞完全可以支持人胚胎干细胞增殖，可望为胚胎干细胞定向诱导分化应用于临床打下基础。     

人口腔黏膜上皮细胞的培养

目的:培养人口腔黏膜上皮细胞,建立稳定的人正常口腔黏膜角化细胞体外培养体系,为进一步采用组织工程技术构建口腔黏膜组织奠定基础。方法:取3个月唇裂患儿手术多余口腔黏膜,经Dispase及胰蛋白酶消化获取细胞,采用无血清角化细胞培养液进行原代培养,并进行形态学观察和角蛋白免疫组化染色等细胞定性研究。结果:在0.25×10~2个细胞的低密度接种下,经过20天培养,获得了完全融合成片的口腔黏膜原代细胞,细胞呈铺路石样生长,经鉴定为单一的口腔黏膜上皮细胞。结论:正常口腔黏膜组织经Dispase及胰蛋白酶消化,应用无血清培养液进行培养,可成功培养出人正常口腔黏膜上皮原代细胞。     

槟榔提取物F57对大鼠结肠平滑肌运动的影响

目的:观察从中药槟榔中分离出的F57对离体大鼠结肠平滑肌运动的影响。方法:制备大鼠结肠平滑肌肌条,以0.9%氯化钠溶液(NS)和乙酰胆碱(Ach)作对照,观察不同浓度的F57对离体大鼠平滑肌肌条的收缩效应。结果:与NS组比较,不同浓度的F57对离体大鼠结肠平滑肌均有不同程度的促进作用,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。以Ach标化实验数据,0.1 g/L的F57组与1×10-4 mol/L的Ach对离体大鼠结肠平滑肌的收缩效应无明显差异;当F57的浓度增大到1 g/L时候,肌条收缩效应基本达到峰值,收缩不再随着浓度的增大而增加。结论:从槟榔中分离出的F57对大鼠结肠平滑肌有明显促进收缩的作用,且收缩的效应与剂量呈正相关,可以进一步对F57进行分离单体的研究。     

5味中药对体外培养原代人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的 利用原代培养的人外阴正常皮肤成纤维细胞,观察中药对人外阴皮肤成纤维细胞增殖的影响.方法 胰蛋白酶消化、分离及培养人外阴皮肤成纤维细胞;倒置显微镜下观察成纤维细胞生长状态;HE染色观察细胞爬片下的形态及着色;免疫组织化学染色观察成纤维细胞中间丝波形蛋白;测定细胞生长曲线;MTT法测定莪术、黄芪、丹参、川穹及当归5种中药作用后细胞增殖能力.结果 生长曲线测定结果显示:传6代内以及传6代内复苏人外阴皮肤成纤维细胞增殖能力均很强.MTT检测结果显示:5种药物在特定浓度范围内均能抑制人外阴皮肤成纤维细胞的增殖.分别作用于人外阴皮肤成纤维细胞72 h后,莪术5、10、100 mg/L浓度组,黄芪500、1 000 mg/L浓度组,丹参1 000 mg/L浓度组,川穹500、1 000 mg/L浓度组,当归100、500、1 000 mg/L浓度组均显示抑制增殖作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中莪术和川穹的抑制强度呈剂量依赖性.结论 成功建立了体外人外阴皮肤成纤维细胞原代培养及鉴定方法;特定浓度范围内的莪术、黄芪、丹参、川穹和当归能够抑制人外阴皮肤成纤维细胞的体外增殖.     

慢性乙醇摄取对胃粘膜损害的实验研究

目的：探讨慢性乙醇摄取对胃粘膜损害的病理特点和机制。方法：按本室创建的方法用乙醇直接灌胃，于4周末、8周末和12周末分别断头处死大鼠，肉眼及镜下观察胃粘膜损伤情况、损伤指数积分及损伤程度积分。结果：模型组胃粘膜肉眼可见自糜烂到小溃疡形成，镜下由充血水肿到腺体萎缩。炎性细胞浸润的种类随时间的推移有明显不同，至4周末主要是中性粒细胞，8周末同时伴有淋巴细胞和浆细胞，而12周末在腺体萎缩的基础上主要是淋巴细胞和浆细胞。结论：长期持续乙醇刺激胃粘膜可发生腺体萎缩，同时炎性细胞浸润的种类随时间的推移有明显不同，其机制可能是胃粘膜对慢性乙醇刺激的适应性反应，主要是免疫反应。     

Cyclin D1基因沉默诱发肾癌ACHN细胞增殖受抑的研究

目的 证实Cyclin D1基因作为肿瘤基因治疗新靶点的可行性及发卡环RNA(shRNA)表达载体介导该基因沉默的有效性.方法 设计合成Cyclin D1-shRNA模板片段,与Pgenesil-1-U6载体连接,构建shRNA真核表达载体;将Pgenesil-Cyclin D1-shRNA转入ACHN肾癌细胞株.RT-PCR、Western blot分析Cyclin D1基因mRNA及蛋白表达;MTT比色法绘制细胞生长曲线;流式细胞术测细胞凋亡率;Transwell小室体外侵袭实验检测细胞侵袭.结果 Pgenesil-Cyclin D1-shRNA构建成功.Cyclin D1-shRNA实验组 Cyclin D1 mRNA抑制效果显著(0.10±0.04),明显高于Pgenesil-NC阴性对照组(0.92±0.03)及ACHN空白对照组(0.94±0.04)(均P<0.05).同样,实验组Cyclin D1蛋白表达明显下调.流式细胞术分析提示,Cyclin D1-shRNA组细胞早期及晚期凋亡细胞均较Pgenesil-NC组和ACHN组显著增高.生长曲线显示Cyclin D1-shRNA组细胞生长明显缓慢(P<0.05).Transwell实验同样发现该组细胞侵袭能力显著下降(P<0.05).结论 Cyclin D1可作为肾癌ACHN细胞生物学行为的评判标准.经载体介导shRNA干扰的高效性为肾癌基因治疗提供了实验依据.