人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤模型建立及其应用研究

将人食管癌手术标本直接移植于裸小鼠，建立了人食管鳞状细胞癌裸小鼠移植瘤（Eca910709），其光镜和电镜形态与原发瘤相似。移植瘤中检测到人Alu序列，证明其来源于人体。应用Eca910709，用平阳霉素（BLMA5）对其进行治疗，按15mg／kg腹腔注射给药，经重复实验，抑瘤率为58％-70％（P＜0．01），说明BLMA5对Eca910709有明显的抑瘤作用。经三个疗程治疗，Eca910709即对BLMA5产生耐药，表现在抑瘤从70％（P＜0．01）递减为34％（P＜0．05）和6％（P＞0.05）。给药剂量增加至30mg/kg，BLMA5对已耐药的Eca910709再次显示一定的抑瘤作用（抑瘤率为44％，P＜0．01）。     

人源化食管癌移植瘤模型的建立

目的 将人原代食管鳞状细胞癌细胞与新型3D微载体——microcarrier 6复合,皮下接种于正常免疫功能小鼠,建立患者来源的食管癌移植瘤动物模型,并分析移植瘤病理学特点.方法 将40只C57BL/6雄性小鼠按是否接种微载体或微载体与人源性食管鳞状细胞癌细胞复合物分为对照组和实验组,分4次实验进行,每次用10只小鼠,每组各5只,将上述载体及复合物分别接种于小鼠腋下.观察小鼠成瘤时间、成瘤大小、成瘤率,后期行移植瘤病理学苏木素-伊红(HE)染色及免疫组化分析.结果 基于microcarrier 6皮下种植人原代食管鳞状细胞癌细胞可在正常免疫功能小鼠成功长出移植瘤,成瘤率为80％,成瘤时间为10～12天,成瘤直径0.8～1.2 cm.病理学HE染色和免疫组化检测结果均符合人食管癌病理学特点.结论 应用新型3D微载体复合人食管鳞状细胞癌细胞可成功构建正常免疫功能小鼠人食管癌移植瘤模型.     

食管癌细胞系CSEC的建立及其生物学特性

目的建立人食管癌细胞系为潮汕沿海地区食管癌研究提供实验模型。方法采用胶原酶消化法建立人食管癌细胞系CSEC。研究培养细胞的形态特点、生长特征、对Scid小鼠的致瘤性、细胞遗传学特点及肿瘤相关标志物（AE3、p53）的表达。结果细胞系CSEC在体外持续稳定生长超过13个月，已传至80代以上，群体倍增时间为39．6小时。CSEC细胞具有鳞状细胞的形态和结构特点，胞浆富含张力原纤维束，细胞间可见桥粒。Sdd小鼠移植瘤的组织学形态与患者的原发肿瘤一致。细胞系CSEC呈近四倍体核型，染色体结构改变常见而且复杂。肿瘤相关标志物（AE3、p53）呈强阳性表达。结论人食管癌细胞系CSEC是一分化较高且生物学特性稳定的鳞状细胞癌细胞系，可为食管癌的发病机制和治疗研究提供有价值的实验模型。     

四株人体和大鼠食管癌裸鼠移植瘤株的建立及其生物学特性研究

我们将12例人食管癌手术切除组织接种于NC和BALB/C裸鼠皮下,其中2例获移植成功,裸鼠间传代达32代,历时2年余,建立了二株人食管癌裸鼠移植瘤,分别为人食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤(HEC_2)和人食管腺鳞癌裸鼠移植瘤(HEC_6)。两移植瘤具有潜伏期短、移植成功率高(100％)、荷瘤存活时间长及生物学特性稳定等特点。并在建立大鼠食管癌细胞系(RE25—3.)的基础上,建立了二株大鼠食管癌裸鼠移植瘤(RE25/N和RE66/N)。此四株人体和大鼠食管癌裸鼠移植瘤株为食管癌病因、发病机理及治疗的研究,提供了极好的模型。     

裸小鼠高分化食管鳞状细胞癌株(RE25/N)的建立及其生物学特性的研究

大鼠食管癌裸小鼠细胞株在国内外均很少见,本实验室于1986年11月开始,将体外恶性转化的大鼠食管癌细胞系(RE_(25-3))接种于Swiss及NC两种裸小鼠皮下,并传代获得成功,至今已传至14代,该移植瘤具有生长稳定、接种成功率高(100％),潜伏期短及无自发消退等特点。形态学观察:光镜下肿瘤为高分化鳞癌;电镜观察,超微结构符合高分化鳞癌的改变。流式细胞仪(FCM)的DNA分析,其DNA含量的DI值与其在体外培养的母细胞系相似,但细胞周期各期细胞的比例有明显差异。在裸小鼠体内生长的移植瘤,其S期及G_(2+)M期细胞比例明显降低,说明体内生长的移植瘤其生长增殖能力较体外培养的细胞系为低,生长较慢,可能与宿主对移植瘤的作用有关。     

裸小鼠移植瘤的转移研究

Rygaad和Povlsen 1969年首次将人结肠癌在裸小鼠移植成功,迄今大多数人恶性肿瘤均可在裸小鼠移植。大量研究表明裸小鼠人癌移植瘤是目前人体外最接近人类肿瘤的整体实验模型。但人癌裸小鼠移植后,能否保持其原浸润转移的恶性生物学行为,研究结果意见不一。利用人癌裸小鼠移植瘤模型研究人类肿瘤     

米非司酮对子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长作用的研究

目的探讨米非司酮(RU486)对人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸小鼠皮下接种HHUA细胞建立裸小鼠移植瘤动物模型,将荷瘤裸小鼠随机分为两组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周。治疗期间观察各组裸小鼠生长情况、移植瘤体积、增殖率和形态,治疗结束后应用流式细胞术(FCM)检测各组裸小鼠移植瘤组织细胞周期时相的变化和细胞凋亡率;应用免疫组化技术检测基因Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果米非司酮组裸小鼠移植瘤体积第3周明显减小,肿瘤增殖率明显降低(P<0.01)。4周治疗结束后米非司酮组裸小鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高(38.17±3.02)%,S期细胞比例(SPF)降低(43.87±4.29)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为(15.03±2.19)%,明显高于对照组(3.06±1.13)%(P<0.01);治疗组移植瘤细胞Bcl-2蛋白表达明显降低(1.9±0.61),而Bax呈现过度表达(4.0±1.28)(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮(RU486)能显著抑制人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤的生长,其抗肿瘤作用与调控细胞周期时相和诱导细胞凋亡相关。     

人肺癌组织免疫缺陷鼠移植瘤模型的建立

背景与目的：目前提倡对肿瘤实行靶向药物个性化治疗,建立不同通路异常肿瘤的动物模型成为必需。本研究探讨人非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型的建立及建模的适宜条件和方法。方法：选取BALB／c裸小鼠、SCID小鼠及NOD／scid小鼠各16只,采用套管针四点左边两块、右边一块式接种法,16例患者中每例患者的肿瘤组织标本分别接种于每个鼠种的一只。观察不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间、肿瘤体积倍增时间、自然病亡率及左右两边接种点的成瘤率和头尾部成瘤点处死时大于1cm的比率,并鉴别移植瘤形态结构与来源组织的一致性及鉴定移植瘤是否为上皮来源。结果：总成瘤率为75％,其中4个病例只有SCID小鼠成瘤．2个病例只有BALB／c裸小鼠成瘤,NOD／scid小鼠无一例单独成瘤。不同种免疫缺陷鼠移植瘤成瘤率、成瘤潜伏时间和肿瘤体积倍增时间及左右两边接种点的成瘤率差异无统计学意义。SCID小鼠成瘤率最高,为56．25％;NOD／scid小鼠自然病亡率为25％,BALB／c裸小鼠、SCID小鼠在观察期内无一例病亡;处死时头部成瘤点大于1cm的比率（56．52％）与尾部成瘤点大于1cm的比率（25％）相比差异有统计学意义（P=0．037）;所有移植瘤苏木精．伊红染色显示其形态结构均与来源组织一致,所有移植瘤角蛋白免疫组化均为阳性,显示移植瘤均为上皮来源。结论：四点两块套管针接种BALB／c裸小鼠和SCID小鼠各一只的方法能很好地建立非小细胞肺癌手术标本免疫缺陷鼠皮下移植瘤模型,头部移植瘤的生长速度明显快于尾部。     

人低分化鼻咽癌上皮细胞系(CNE—2Z)裸小鼠移植模型的建立及其特性研究

本文报告人低分化鼻咽癌裸小鼠移植模型的建立及其生物学特性的研究,实验动物为NC系裸小鼠(少量Swiss系),使用CNE—2 Z细胞(1×10~6/0.5ml细胞)皮下接种,历时二年,在203只动物传代30次,移植成功率为100％。组织学及超微结构显示为低分化鳞状细胞癌特征,染色体显示人类肿瘤细胞染色体,有EB病毒基因组存在及EB病毒核抗元(EBNA)、膜蛋白(LMP)表达。我们所建立人低分化鳞状细胞癌裸鼠移植模型,具有移植成功率高,呈进行性生长,恶性程度高,不会自行消退等特点,可供进一步研究鼻咽癌生物学特性及实验性治疗之用。     

人鼻咽癌裸鼠移植瘤（NCN—Z1）建立的初步报告

自从1969年 Rygaard和 Povlsen首次报道人结肠癌裸小鼠移植成功以来,至今几乎所有人类恶性肿瘤均可在裸小鼠成功移植。但国内外关于人鼻咽癌组织裸小鼠移植成功的报道仍很少。作者自1985年底至今曾将38例人鼻咽癌活检组织接种于探小鼠进行移植研究,其中有一例获成功并已在裸鼠间连续传九代,建立了人鼻咽癌裸鼠移植瘤——湛江1(Nasopharyngeal Carcinoma-Nude mice-Z1)。现将该移植瘤的建立过程及其某些生物学特性初步研究结果报道如下。     

IL-27基因对Eca109细胞在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制

背景与目的:细胞因子为主的肿瘤生物治疗已成为肿瘤研究领域热点之一。本研究观察白细胞介素(interleukin,IL)-27基因转染人食管癌Eca109细胞株后在裸鼠体内的成瘤抑制作用及其机制。方法:以逆转录病毒为载体,采用基因转染的方法用G418梯度筛选法建立转染IL-27基因的Eca109细胞,RT-PCR检测其基因导入情况,ELISA法检测IL-27的分泌和其诱导外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)产生γ-干扰素(interferon,IFN)的能力,MTT法观察Eca109/IL-27细胞生长情况。将Eca109/IL-27、Eca109/LXSN和Eca109细胞接种于裸鼠皮下,观察其成瘤性、移植瘤的生长情况并计算抑瘤率。流式细胞技术检测移植瘤组织肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)中CD16、FasL的表达和肿瘤细胞上Fas的表达。结果:RT-PCR示Eca109/IL-27细胞中有IL-27p28和IL-27EBI3亚基基因表达,Eca109/LXSN和Eca109细胞中未见表达(P<0.01),从而成功建立稳定转染的Eca109/IL-27细胞株,ELISA检测Eca109/IL-27中IL-27的分泌量高于Eca109/LXSN和Eca109细胞(P<0.01)。IL-27基因转染不影响人食管癌细胞株的体外生长(P>0.05),Eca109/IL-27诱导PBMC产生IFN-γ含量高于Eca109/LXSN和Eca109[(56.28±1.61)pg/mL vs.(12.70±0.82)pg/mL]和(11.06±0.64)pg/mL,P<0.01),Eca109/IL-27移植瘤体积较Eca109和Eca109/LXSN减小,瘤重减轻,有抑瘤作用(P<0.05);Eca109/IL-27细胞接种的肿瘤组织TIL中CD16阳性率升高,FasL的表达增高(P<0.05),肿瘤细胞表面Fas表达增加(P<0.05)。结论:IL-27基因修饰Eca109细胞在裸鼠体内产生了抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过活化自然杀伤细胞,以Fas/FasL的途径产生的。     

Esophageal carcinoma in human fetus induced by N-methyl-N-benzylnitrosamine (NMBzA)

Previous studies have suggested that N-nitroso compounds play a causative role. In the present study, human fetal esophageal epithelium was cultured for 3 weeks with NMBzA obtained in Linxian County (a high incidence area of esophageal cancer). Then, the explants were heterotransplanted to mesentery of BALB/c nude mice which were continually fed with NMBzA in drinking water for 8 months. The results showed that in NMBzA-treated mice, a small tumor was found on the mesentery two months after transplantation. The small tumor gradually grew to 2 x 1.8 cm in size 8 months after transplantation. No tumor was observed in control nude mice. Macroscopically, no tumor was seen in the esophagus of nude mice bearing esophageal tumor on mesentery. Pathology of the induced tumor showed squamous cell carcinoma. DNA extracted from the tumor induced by NMBzA was hybridized with Alu sequence using dot blot. Alu sequence was present in the induced tumor, indicating that the tumor is of human origin. This is the first report to confirm that human esophageal carcinoma could be induced by N-nitrosamine. It provides a direct evidence that NMBzA is a causative agent of esophageal cancer in Linxian County.     

荷人前列腺癌裸鼠移植瘤模型的建立及其应用研究

目的 应用人前列腺癌细胞株LNCaP接种裸鼠,鼠间移植传代,建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型.方法 观察移植瘤大体形态和组织病理学检查,并应用免疫组织化学方法观察肿瘤组织细胞中前列腺特异膜抗原（PSMA）的表达以及125I标记抗PSMA单抗的荷瘤裸鼠体内放射免疫显像.结果 移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似,移植瘤的移植成功率为100%;放免显像显示标记抗体能浓聚于肿瘤部位,经尾静脉注射标记抗体后96 h,肿瘤显像清晰,肿瘤组织/非肿瘤组织放射性比值（T/NT）均大于2.8.结论 本动物模型的建立为今后前列腺癌放射免疫治疗的实验研究提供1个理想的模型.     

Transplantation model of human lung oat cell carcinoma in nude mice

A human lung oat cell carcinoma from a surgical specimen was successfully transplanted into nude mice and has been maintained for over four years through 14 passages. This transplanted tumor had a long latent period of more than one month, slowly growing in the initial inoculation and the following passages. The interval between two passages was about four months. 5 months after the inoculation, the transplanted tumor in nude mice grew to 2 cm in diameter. It was demonstrated that the transplanted tumor possessed the human isoenzyme pattern and human chromosome karyotype. The original human tumor and its transplanted counterparts in the nude mice were strikingly similar by histopathology. Besides, specific neuro-secretory granules in cytoplasm of the transplanted tumor were observed under transmission electron microscope.     

bcl-xs基因对卵巢癌的作用及其凋亡机制的研究

目的：研究重组腺病毒bcl-xs基因（adv-bcl-xs)对卵巢癌细胞及其裸鼠移植腹水瘤的生长抑制作用和荷瘤裸鼠生存率的影响。同时探讨bcl-xs基因对于卵巢癌的作用机制。方法：采用扩增后的adv-bcl-xs感染卵巢癌细胞NUTU－19，观察对NUTU－19细胞的生长抑制作用并检测其病毒滴度，再将adv－bcl-xs导入人卵巢癌裸鼠移植腹水肿瘤，观察对腹水的生长抑制作用，计算裸鼠荷瘤生存时间，免疫细胞化学染色测定bcl-xs基因表达情况。终末脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL法）计数凋亡细胞检测肿瘤细胞凋亡情况。结果：adv-bcl-xs对NUTU－19有抑制和杀伤作用。在NUTU－19细胞和裸鼠体内过度表达，使裸鼠腹水形成时间和荷瘤裸鼠平均生存时间延长，有统计学意义。在NUTU－19细胞和裸鼠卵巢癌移植腹水肿瘤细胞中检测到凋亡细胞。结果：adv－bcl-xs对卵巢癌细胞有抑制作用，而且可能是通过凋亡机制发挥的。     

高表达MUC1的人食管癌裸鼠移植瘤模型的建立

背景与目的:Mucin-1(MUC1)粘蛋白是一种肿瘤相关抗原,是肿瘤免疫治疗良好的分子靶点之一.本研究建立高表达MUCl的人食管癌裸鼠皮下移植瘤模型,为研究以MUC1为靶点的食管癌的生物治疗提供体内模型.方法:以体外培养的高表达MUC1的人食管癌细胞株EC-109接种于4～5周龄的BALB/c裸小鼠皮下,观察移植瘤生长情况,对移植瘤进行病理组织学检查,采用免疫组化方法检测移植瘤细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigens,PCNA),采用流式细胞仪检测移植瘤细胞的细胞周期及MUC1的表达.结果:裸鼠皮下移植瘤成瘤率为86.0%,移植瘤具有与人恶性肿瘤相似的组织学和生物学特点,其平均PCNA标记指数为(63.5 3.6)%、S期细胞百分比(S-phase fraction,SPF)平均值为(37.6±3.7)%、MUC1的平均表达率为97.5%.结论:高表达MUC1的人食管癌裸鼠皮下移植瘤模型具有恶性肿瘤的生物学特性,可用于研究人食管癌的生物学特点,同时为以MUC1为靶点的食管癌的免疫治疗研究提供了良好的体内模型.     

人卵巢癌裸鼠移植腹水瘤模型的建立

建立人卵巢癌裸鼠移植腹水瘤模型,为研究人卵巢癌发病机制,生物学特性以及转移方式提供工具。方法将１例人卵巢癌的腹水直接接种于裸鼠腹腔,观察裸鼠腹水形以及肿瘤生长和转移情况,做腹水细胞学计数、涂片以及染色体和肿瘤标志物的检查,肿瘤和器官作病理学检查。结果成功建成１个人卵巢癌裸鼠移植腹水瘤模型,并已传至第１８代,传代移植成功率１００．０％,组织学和超微结构结构形态证实,保持了原人卵巢癌特征,具有人类肿瘤     

Ultrastructural study on the model of human lung adenocarcinoma heterotransplanted to nude mice

A human lung adenocarcinoma from surgical biopsy specimen was successfully heterotransplanted into nude mice and has been maintained for 40 generations. The experiments were made on 6-8 week old male or female nude mice with Swiss genetic background cultivated in specific pathogen-free condition. The electron microscopic observation on transplanted tumor of passages 2, 6, 12, 18 and 23 revealed that the ultrastructural features of this tumor were strictly maintained and no obvious change of differentiation was found. But there was a potential prone to regional squamous epithelial metaplasia in the transplanted tumor. The nude mice model of human lung adenocarcinoma so established can be used as a good experimental system of the homologous and reproducible human cancer for the study of basic medical sciences and chemotherapy of human lung carcinoma.     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.