大鼠创伤性脑损伤后海马细胞凋亡及bcl-2、NGF-R阳性细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后不同时相海马细胞凋亡及。bcl-2、NGF—R阳性细胞的变化规律。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、2、3、4、5、7、10d取脑切片，作：Nissl染色，用TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组化染色观察bcl-2、NGF-R阳性细胞。结果：Nissl染色可见损伤侧海马CA2、CA3区锥体细胞层细胞消失或排列紊乱。损伤侧海马凋亡细胞伤后5d达到高峰，正常侧海马各时相点均未见到凋亡细胞。损伤侧海马bcl-2阳性细胞数量下降，伤后3d至最低点；NGF—R阳性细胞数量增加，伤后5d达到高峰。结论：大鼠创伤性脑损伤后损伤侧海马细胞凋亡数量的变化与伤后时程有关。伤后细胞bcl-2表达下降、NGF-R表达增加是导致细胞凋亡的因素。     

大鼠创伤性脑损伤后星形胶质细胞的变化

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤后星形胶质细胞的形态学变化及GFAP和NOS的表达情况。方法：采用大鼠自由落体脑损伤模型，伤后1、3、7d取脑切片，行Nissl染色以及GFAP免疫组化和NADPH—d组化单标记及双标记染色。结果：损伤区周围皮质GFAP阳性细胞胞体增大、突起增粗增长，GFAP阳性细胞数量与正常侧及对照组相比，伤后1d即有明显增加，伤后3d、7d数量持续增加；损伤侧海马CAI～3区和DG各层GFAP阳性细胞排列紊乱，胞体增大、突起增粗增长，GFAP阳性细胞数量与正常侧及对照组相比则无明显变化。损伤区周围皮质、损伤侧海马NOS阳性细胞数量明显增加。伤后3d损伤区周围皮质和损伤侧海马中GFAP与NOS双标细胞分别占GFAP阳性细胞的14．2％和13．4％左右。结论：大鼠创伤性脑损伤后大量的星形胶质细胞活化、GFAP表达增加并且部分转化为NOS阳性细胞，提示其参与了脑组织的损伤与修复过程。     

孕酮对大鼠脑损伤后大脑皮质及海马CA1区环氧合酶-2和诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的: 观察孕酮对大鼠脑损伤后皮质及海马CA1区COX-2和iNOS表达的影响.方法: 雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组和孕酮治疗组,按照改良的Feeney自由落体损伤装置制作大鼠脑损伤模型.孕酮治疗组伤后1h、 6h腹腔注射孕酮16mg/kg.各组于伤后24h取材.用免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法,观察大鼠皮质及海马CA1区COX-2、iNOS的免疫阳性细胞数和蛋白表达水平变化.结果: 与假手术组大鼠相比,脑损伤组大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平较假手术组增加;孕酮治疗组与脑损伤组比较,大鼠皮质及海马CA1区COX-2、 iNOS阳性细胞数和蛋白表达水平减少,差异有统计学意义.结论: 孕酮可能通过降低COX-2、 iNOS的表达发挥脑损伤保护作用.     

大鼠额叶皮质损害后诱导型iNOS阳性细胞的变化

目的：一氧化氮在脑内的许多生功能中起重要作用,并参与脑损伤的病理生理过程。本研究旨在探讨实验性脑损伤后的NOS阳性细胞的来源及成份。方法：利用机械油吸法制成大鼠额叶皮质损伤动物模型,应用NADPH-d组织化学及GFAP免疫组化法观察损伤后1、3、7、14、21、30及60d皮质损害区NOS阳性细胞的类型和变化。结果：损害后1d即见皮质损害区底部和两侧nNOS阳性细胞增加,损害底部出现诱导型胶质细胞,尤以胼胝体中更为密集。这种反应3-7d时逐渐增强,2周时最明显,以后随时间推移及损害的修复而降低,研究发现部分iNOS阳性细胞与GFAP者共存,提示系反应性胶质细胞,未见eNOS阳性细胞上调现象。结论：皮质受损时,出现2种不同表型的NOS阳性细胞且上调,即出现诱导型神经元nNOS和诱导型iNOS胶质细胞。究其来源各不相同,但均能合成NO,NO主要集中在损伤部位的周围。     

壳聚糖作载体的NSCs移植对大鼠脑损伤区胶质增生的抑制作用

目的：探讨壳聚糖作载体的神经干细胞（NSCs）移植对大鼠创伤性脑损伤（TBI）区胶质增生的抑制作用。方法：用低温冷冻干燥法制备壳聚糖多孔支架。将从鼠胚前脑中分离的NSCs进行扩增传代。Feeney法制备SD大鼠TBI模型12只，随机均分为2组：损伤对照组和NSCs＋支架移植组2组。术后3个月取脑切片行Nissl染色、GFAP免疫荧光染色，观察两组损伤区和海马变化以及损伤区周边星形胶质细胞增生情况。结果：Nissl染色见损伤对照组创伤区形成烧杯状空洞，损伤侧海马萎缩变形，而NSCs＋支架移植组创伤区有移植物填充且已与宿主整合，损伤侧海马萎缩不明显。GFAP免疫荧光染色，损伤对照组创伤区周边可见到大量GFAP阳性细胞，荧光强度较强，疤痕较宽，而NSCs＋支架移植组创伤区周边仅见到少量的GFAP阳性细胞，荧光强度弱，疤痕较窄。t检验结果显示两组损伤区周围GFAP免疫荧光的灰度值、胶质疤痕宽度有显著性差异（P〈0．01）。结论：大鼠TBI后行壳聚糖作载体的NSCs移植治疗可以抑制脑损伤区胶质增生，从而促进脑损伤的修复。     

大鼠额叶损伤后诱导型一氧化氮合酶的表达变化

为了探讨大鼠额叶损伤后不同时间诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化及意义,本研究采用大鼠额叶锐器损伤模型,经Nissl和H.E.染色观察伤后的病理变化过程,RT-PCR及免疫组织化学染色方法检测伤后iNOSmRNA和iNOS阳性细胞的表达变化。结果显示:伤后12、24h创伤区炎症细胞大量浸润;创伤区及周边iNOSmRNA的表达3h开始上升,24h达到高峰;伤后iNOS阳性细胞数量也增多,伤后3、6h主要由神经细胞表达iNOS,在12、24h主要由巨噬细胞表达iNOS,而72、120h则主要由胶质细胞表达iNOS。上述结果说明大鼠额叶锐器伤后iNOS的表达增加,iNOS阳性细胞的种类和数量变化与伤后时程有关。     

大鼠隔区AChE阳性神经元向海马的投射

本文用改良AChE组化法和Nissl法研究了切断大鼠-侧伞-穹窿后的隔区和海马内的细胞之胞体和纤维的形态改变.结果显示:术后第5天,在Nissl染色切片上术侧隔区细胞肿胀、皱缩,或染质溶解,或胶质增生,或细胞数减少.AChE染色显示术侧隔区AChE阳性细胞增大、或皱缩或数减少.术侧海马区AChE阳性纤维明显减少.第10天和第15天,上述变化进一步加剧.本实验证实隔区AChE阳性神经元大部分发支经伞-穹窿投射至海马.     

多重脑震荡大鼠5-羟色胺能神经纤维变化

目的:研究多重脑震荡(MCC)与大鼠认知记忆相关脑区5-羟色胺(5-HT)能神经纤维变化的规律,以探讨MCC大鼠认知行为障碍的神经生物学基础。方法:应用自制单摆式机械打击装置构建MCC大鼠模型,免疫组织化学及半定量方法研究MCC后大鼠5-HT能神经纤维的变化。结果:前额叶皮质、中隔区、丘脑、海马CA1和CA3区5-HT能神经纤维免疫反应阳性物在伤后2d组反应达高峰,杏仁体、海马CA2和CA4区在伤后4d组免疫反应了阳性最强;顶叶皮质、梨状皮质及伏隔核内侧在伤后8d组反应最强。5-HT纤维密度在中隔区和伏隔核内侧以伤后2d最高,杏仁体区以伤后1d最高,大脑皮质和丘脑5-HT纤维密度在伤后各损伤组与对照组相比无显著性差异。结论:MCC可引起与认知功能有关脑区的5-HT表达增高,5-HT的高表达可能由脑损伤后神经元过度兴奋所引起的神经递质紊乱造成,而这种紊乱可能影响大鼠的认知功能。     

穹隆海马伞损伤诱导巢蛋白在隔-海马通路表达

目的:探讨穹隆海马伞横断后巢蛋白在隔-海马通路表达的情况。方法:在立体定位仪上横切SD大鼠大脑皮质、胼胝体和穹隆海马伞,于术后1～30 d处死动物。用免疫组化染色方法,观察损伤后巢蛋白在隔-海马通路的表达。结果:穹隆海马伞损伤后,第1天,隔区和海马未见巢蛋白阳性细胞;第3天巢蛋白阳性细胞开始出现在损伤近侧背外侧核区和海马CA3区及齿状回;第5天巢蛋白阳性细胞范围扩大,数量增加,出现在远离损伤平面嘴侧端的隔区和尾侧端的海马以及损伤对侧。第7天起,巢蛋白阳性细胞在损伤平面区减少而在远离区增加;第15天损伤对侧多于损伤侧;第20天消失。结论:穹隆海马伞横断引起隔-海马通路巢蛋白表达的改变,巢蛋白阳性细胞具有修复中枢神经系统病变的潜能。     

高血糖加重缺血性脑损伤

目的：探讨高血糖对脑缺血损伤的影响。方法：采用大鼠高血糖全脑缺血模型,用HE和TUNEL染色,对比检测脑细胞损伤和凋亡。结果：高血糖组在缺血再灌注后与血糖正常组相比,纹状皮质脑水肿和神经元变性、死亡明显加重;海马CA1区损伤神经元计数无显著性差异;海马CA3区损伤神经细胞数明显多于血糖正常组。TUNEL染色可见,在纹状皮质、海马CA1区和CA3区高血糖组和血糖正常组阳性细胞明显多于对照组;在缺血或再灌注后,正常血糖组和高血糖组的TUNEL阳性细胞数均无显著性差异。结论：高血糖可加重缺血引起的神经元损伤。     

银杏叶提取物改善AD模型鼠学习记忆功能的作用

目的 :研究银杏叶提取物 (EGb)对早老性痴呆 (AD)模型鼠学习记忆等认知功能的影响和对基底前脑隔区胆碱能神经元的保护作用。方法 :大鼠随机分成预防组、治疗组和对照组。各组切割右侧海马伞后分别用EGb(预防组及治疗组 )和蒸馏水 (对照组 )灌胃连续 6周。其中预防组在手术前先用EGb灌胃 2周。各组在术后次日及灌胃 6周后进行行为学检测。脑切片经Nissl、NOS组织化学和ChAT免疫组织化学染色 ,观察损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS和ChAT阳性神经元的变化 ,并对ChAT阳性神经元作图像分析。数据分别用方差分析、SNK检验及 χ2 检验作统计学处理。结果 :行为学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠的学习记忆等认知功能较对照组明显改善 ,其中预防组效果又较治疗组为好 ;形态学检测证实 ,EGb用药组AD模式鼠损伤侧内侧隔核和斜角带垂直支中NOS、ChAT阳性神经元数目及ChAT阳性神经元的面积和周径等均优于对照组 ,预防组结果又优于治疗组。结论 :EGb对AD模型鼠学习记忆等认知功能障碍有一定的改善作用 ,这一作用是通过保护基底前脑隔区胆碱能神经元而实现的 ,其中预防效果比治疗效果更优     

养血清脑颗粒对蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的治疗作用

目的 探讨蒙古沙鼠全脑缺血再灌注后养血清脑颗粒(Yangxueqingnaokeli,YXQNKL)的治疗作用.方法 采用蒙古沙鼠两侧颈总动脉结扎法,缺血30min再灌注5d模型(分为假手术组、缺血再灌注组、养血清脑颗粒治疗组).用Nissl染色法观察海马CA1区神经元的形态和数量,用免疫组织化学方法观察海马CA1区神经元神经钙离子感应蛋白1(NCS-1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和谷氨酸盐合成酶(Glusyn)的表达情况.结果 与缺血再灌注组比较,缺血再灌注 0.4g/kg养血清脑颗粒治疗组和缺血再灌注 0.8g/kg养血清脑颗粒治疗组Nissl染色显示海马CA1区神经元数量明显增加(P＜0.05);免疫组织化学法显示海马CA1区神经元细胞NCS-1、caspase-3和Glusyn的阳性细胞数明显减少(P＜0.05).结论 全脑缺血再灌注后,给予养血清脑颗粒能显著增加海马CA1区神经元数量,这与其减少海马CA1区神经元NCS-1、caspase-3和Glusyn的表达有密切的联系.     

Delayed apoptotic pyramidal cell death in CA4 and CA1 hippocampal subfields after a single intraseptal injection of kainate

We have performed a detailed time-course analysis of cell death in the hippocampal formation, basal forebrain and amygdala following a single intraseptal injection of kainate in adult rats. Acetylcholinesterase histochemistry revealed a profound loss of staining in the medial septum but not in the diagonal band, and cholinergic fiber density was highly reduced in the hippocampus and amygdala at 10 days postinjection. Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated uridine 5'-triphosphatebiotin nick end labeling (TUNEL) histochemistry was performed for precise location of apoptotic cells. Both the medial septum and amygdala exhibited numerous TUNEL-positive nuclei after the intraseptal injection of kainate, while the lateral septum exhibited a lower but significant incidence in terms of apoptotic cells. In the medial septum, the presence of apoptotic cells was at a location displaying acetylcholinesterase staining. TUNEL histochemistry revealed a time-dependent sequential apoptotic cell death in hippocampal pyramidal cells. During the first two days postinjection, apoptosis in the hippocampus was only evident in the CA3 region. At five days postinjection, the entire CA4 region became apoptotic. At 10 days postinjection, the whole extent of the CA1 pyramidal cell layer exhibited numerous TUNEL-positive nuclei. The time-course of kainate-induced apoptosis in Ammons's horn correlated with the disappearance of hippocampal pyramidal neurons as detected by Nissl staining, which is suggestive of a prominent apoptotic death for these cells. The temporal delayed distant damage to CA4 and CA1 hippocampal subfields after a single intraseptal kainate injection is not seen in other models employing kainate and may be a valuable tool for exploring the cellular mechanisms leading to cell death in conditions of status epilepticus.     

Rapamycin保护大鼠缺血性脑损伤和特定脑区神经新生有关

目的:探讨缺血前给予自噬诱导剂对脑缺血损伤的保护效应及可能机制。方法:双侧颈总动脉结扎建立全脑缺血模型,再灌注后24 h,评价动物神经行为功能,连续脑切片,采用Nissl染色定量检测皮层及海马CA1区细胞密度;通过免疫荧光技术检测Caspase-3阳性神经元,计数皮层及海马CA1凋亡细胞数量;激光共聚焦显微镜观察并计数海马齿状回颗粒下层内呈Ki67阳性、GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阴性(Ki67+/GFAP-)细胞的数量。结果:Rapamycin术前预处理可以改善缺血导致的神经功能缺陷(P<0.05)。Nissl染色结果表明Ra-pamincy术前1 h给药可以减轻缺血导致的皮层(P<0.01)及海马CA1区(P<0.01)细胞丢失。同时,Rapamycin术前给药也显著减少了缺血导致的皮层及海马CA1区内Caspase-3阳性细胞的数量,组间比较有显著性差异(P<0.05)。Rapamycin术前1 h给药增加了海马齿状回内Ki67+/GFAP-细胞的数量,和缺血组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:在全脑缺血模型上,通过自噬活化途径的缺血预处理可以保护缺血性脑损伤,这一作用和Rapamycin减少凋亡、增加新生神经细胞的数量有关。