结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征初步分析

目的 阐明结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特点。方法 对110株结核分枝杆菌临床分离株包括rpoB基因利福平耐药决定区（RRDR）81个碱基在内的286bp片段进行聚合酶链反应．单链构象多态性（PCR．SSCP）分析，并对经检测显示有突变的结核分枝杆菌rpoB基因此扩增区域进行序列测定。其中利福平耐药株73株，非利福平耐药株11株，敏感株26株。结果 PCR—SSCP检测显示利福平耐药株中有47株有突变存在，经直接测序分析其中76．6％的菌株存在rpoB基因的单位点突变，主要集中在531位（61．1％）和526位（25．0％）；联合突变发生率为23．4％。此外，经PCR—SSCP检测，11株非利福平耐药株中2株有突变存在，26株敏感株中1株有突变存在。经直接测序分析突变涉及位点为511位、526位和535位。结论 rpoB基因耐药决定区发生突变是结核分枝杆菌利福平耐药的主要原因，其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

结核分枝杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的评价检测rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐利福平（I肝）耐药性测定中的应用价值。方法采用DNA序列分析法和聚合酶链反应-单链构象多态性（PER—SSCP）法对91株结核分枝杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株，耐RFP或含耐RFP耐多药株56株）rpoB基因核心区域的突变情况进行检测。结果以结核分枝杆菌H37RV为对照，所有35株药物敏感株的rpoB基因均无突变，用DNA序列分析方法检测56株耐药株中53株发生突变，敏感性为94．6％（53／56），其中最常见的突变位点是531位丝氨酸和526位组氨酸。PER—SSCP检测56株耐RFP分离株中，52株rpoB基因SSCP图谱异常，其敏感性为92．9％（52／56）。结论DNA序列分析对判断结核分枝杆菌耐利福平非常有价值。PER—SSCP可初步筛选结核分枝杆菌RFP耐药性。     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的 研究农村结核病人中利福平（RIF）耐药结核分枝杆菌（M．TB）临床分离株rpoB基因突变情况。为农村结核病防制提供分子遗传学依据。方法 以标准菌株H37Rv为对照，采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR—SSCP）分析技术，对来自苏北2个县2001年的145株M．TB分离株（其中敏感株117株。耐RIF或含RIF耐多药株28株）的rpoB基因突变的发生率进行研究。结果 农村RIF耐药或含RIF耐多药M．TB临床分离株中rpoB基因突变的发生率平均为71．4％，所有受试117株敏感株rpoB基因均无突变。与药敏试验结果对比PCR—SSCP试验的灵敏度为71．4％；其特异度为100％。结论 M．TB耐RIF与rpoB基因突变密切相关，PCR—SSCP方法可检出RIF耐药M．TB的rpoB基因突变。有助于M．TB耐药性的快速检测和耐药性防治。     

rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究

目的 探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系. 方法 对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区（RRDR）的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析. 结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09％;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58％,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位.     

结核分枝杆菌耐RFP快速检测的方法研究

目的应用PCR—SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变，评价此方法用于结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药性的意义。方法采用PCR—SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果50例耐RFP菌株中有45例PCR—SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别，与药敏试验结果做对比，PCR—SSCP检测敏感性为90％，特异性为100％；12例敏感菌株与H37Rv条带一致，35份肺结核病人痰标本，21份痰PCR扩增阳性，15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别，而且PCR—SSCP28份图谱与H37Rv有差别，阳性率为80％。结论PCR—SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行，有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定，并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。     

PCR-SSCP技术在检测煤工尘肺并发肺结核患者感染的结核分枝杆菌耐药基因突变中的应用

目的探索尘肺结核患者感染的结核分枝杆菌(M.tuberculosis)耐药基因突变与耐药性的关系,及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)的临床应用价值。方法在102例淮南矿区煤工尘肺并发结核患者中分离出M.tuberculosis菌株32株,采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因突变,与采用常规药敏试验(AST)法检测的耐药结果进行对比分析。结果采用PCR-SSCP法检测katG、rpoB和rpsL基因,突变率分别为43.75%(14/32),53.13%(17/32)和31.25%(10/32);采用AST法检测INH、RFP和SM,耐药率分别为53.13%(17/32),65.63%(21/32)和40.63%(13/32),其中多耐药株19例(59.38%),包括耐3种药物的11例(42.31%),耐2种药的8例(30.77%),单耐药株7例(26.92%),敏感株6例,耐药率81.25%。PCR-SSCP法检出3个基因联合突变的有7株(7/26,26.92%),与AST法的符合率为63.64%(7/11);2个基因突变的6株(6/26,23.08%),符合率为50.00%(4/8);单基因突变的8株(8/26,30.77%),符合率为57.14%(4/7)。结论PCR-SSCP技术适用于淮南矿区煤工尘肺并发结核患者感染的M.tuberculosis katG、rpoB和rpsL耐药基因突变的筛选,将其与AST法联合应用,在指导临床用药方面具有着重要的意义。     

煤矿工尘肺结核患者结核分枝杆菌L型耐药基因rpoB序列分析

目的 探讨淮南矿区尘肺结核患者感染结核分枝杆菌L型利福平耐药基因rpoB突变特点.方法 收集结核分枝杆菌L型临床分离株42株,其中利福平耐药株31株,敏感株11株,抽提临床分离株DNA和H37Rv标准菌株DNA,PCR法扩增rpoB基因,并应用全自动DNA测序仪对rpoB基因的突变集中区域进行测序分析.结果 42株结核分枝杆菌L型中,31株耐药株rpoB基因突变率93.55%(29/31),主要集中在531位点(51.61%,16/31)和526位点(32.26%,10/31)碱基置换突变,新发现516位点突变目前在国内外研究中未见报道.11株敏感株未见rpoB基因单链构象异常.结论 高度保守的rpoB基因突变是导致结核分枝杆菌L型利福平耐药的分子基础,其突变位点呈多样性.     

结核分枝杆菌利福平耐药株rpoB基因突变特征研究

目的了解郑州市结核分枝杆菌耐利福平临床分离株的相关耐药rpoB基因突变特征。方法应用PCR方法对40株结核分枝杆菌利福平耐药、40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株中包含"利福平耐药决定区(RRDR)"在内的rpoB基因片段(385bp)进行扩增,并将扩增产物进行测序,以H37Rv结核分枝杆菌标准株的DNA序列作为参比序列,分析结核分枝杆菌临床分离株的突变特征。结果 40株结核分枝杆菌利福平敏感临床分离株及1株H37Rv结核分枝杆菌标准株均未检测到突变,结核分枝杆菌耐利福平临床分离株中有36株检测到突变,突变率92.3%,且突变均位于RRDR区域内;突变位点为8个,共有8个突变类型;最常见的突变热点依次为531位点,该位点突变率为64.1%;526位点,其突变率为12.8%和516位点,其突变率为10.3%。结论 rpoB基因是郑州市结核分枝杆菌对利福平耐药的最相关基因,其中在RRDR内的531位点基因突变率最高,并可通过对rpoB基因的突变检测,对耐多药结核病进行预测。     

焦磷酸测序技术在利福平rpoB基因突变检测中的应用评价

目的 应用焦磷酸测序技术检测结核分枝杆菌rpoB基因突变,并探讨其在结核分枝杆菌利福平耐药性检测中的应用价值.方法 利用焦磷酸测序技术,测定150株结核分枝杆菌临床分离株rpoB基因81个碱基的利福平抗药性决定区(RRDR),分析rpoB基因突变特点,并与绝对浓度法和MIC法药敏结果进行比较.结果 150株结核分枝杆菌中66株耐药84株敏感,54株为耐多药菌株,rpoB基因突变涉及6个密码子12种突变基因型,最常见的突变位点及突变形式分别为531位TCG突变为TYG,占60.6%,526位CAC突变为TAC、GAC,占22.7%.耐药性检测结果表明,焦磷酸检测法与绝对浓度法二者的符合率为92.7%,与MIC法的符合率为97.8%.结论 焦磷酸测序检测技术不仅是一种快速、准确、高通量的利福平分子药敏检测方法,同时也是结核分枝杆菌耐药性研究的有用工具.