巨噬细胞细胞毒因子性质的研究

巨噬细胞(MΦ)经多种因素活化后能非特异但有选择地杀伤瘤细胞。这种杀伤作用是通过细胞毒介质实现的,但对其本质尚有不同的认识,一股认为是肿瘤坏死因产(TNF),中性蛋白水解酶、补体C3a和过氧化氢。本文报道钙离子载体A23187活化的MΦ经微量细菌脂多糖(LPS)刺激后产生的1种巨噬细胞细胞毒因子(MΦ-CF),根据其理化性质和生物学活性,证实其为TNF或TNF样物质。     

大刺中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子及其mRNA表达的影响

目的 研究大枣中性多糖（JDP－N）对小鼠腹腔巨噬细胞（Mφ）分泌肿瘤坏死因子（TNF）及其mRNA表达水平的影响。方法 MTT法测定细胞增殖,半定量RT－PCR测定TNF－αmRNA的表达。结果 JDP－N能诱导Mφ分泌TNF,诱生TNF达峰时间约为6h,与脂多糖相比,时效关系相仿;蛋白激酶C激活在JDP－N诱导Mφ分泌TNF过程中具有关键性作用;JDP－N能促进MφTNF－αmRNA的表达。结论 JDP－N增强小鼠免疫功能的机制之一是促进Mφ分泌TNF。     

白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

低剂量辐射增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的IL-1βDTNFαmRNA转录水平

目的：探讨低剂量辐射（LDR）对荷瘤机体巨噬细胞（Mφ）内白细胞介素I（IL—1）和肿瘤坏死因子（TNF）mRNA转录水平的影响。方法：采用C(57)BL／6J小鼠右后肢腓肠肌内接种Lewis肺癌细胞做为实验动物模型，在荷瘤后10d给予75mGyX射线全身照射，照射后18h冲洗腹腔，用贴壁法分离MФ，应用原位杂交组织化学方法检测MФ内IL—1β和TNFa的mRNA转录水平，结果用病理图像密度扫描仪测定的平均密度值（MA）表示。结果：照射组小鼠的MФ内阳性颗粒数明显增多，染色加深；照射组IL—1β和TNFα阳性颗粒的MA值分别为：0．285士0．005、0．272士0·012，假照组分别为：0．216土0．015、0．204士0．005，二者相比具有显著的差异（P＜0．01）。结论:LDR可明显增高荷瘤小鼠MФ的IL—1β和TNFαmRNA转录水平，促进二者的直接抑瘤和免疫调节效应，从而增强了荷瘤机体的免疫功能和杀灭肿瘤细胞的功能。     

人补体杀伤小鼠N9小胶质细胞及亚溶破模型的建立

目的: 探讨正常人血清(normal human serum,NHS)补体杀伤小鼠N9小胶质细胞的机制,建立人补体攻膜复合物(sublytic membrane attack complex,sMAC)N9细胞亚溶破刺激模型.方法: 用阻断补体活化途径的方法探讨 N9细胞活化人补体系统的机制;采用微量补体反应性溶破法,以酵母多糖 (Zymosan,Z)活化急性期病人血清制备补体优球蛋白C56,EDTA-NHS作为C7-C9的来源,组装N9细胞sMAC亚溶破模型;CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积;脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力.结果: 未致敏N9细胞可通过旁路途径直接活化人血清补体系统;当C56稀释度在1∶ 500 以上,NHS(含1 mmol/L EDTA)稀释度为 1∶ 20时,膜攻击复合物(membrane attack complex,MAC)活性逐渐降低,细胞溶破减少,确定 C56 1∶ 500,NHS 1∶ 20为N9细胞亚溶破补体量;激光共聚焦鉴定sMAC沉积于N9细胞表面;亚溶破剂量MAC刺激N9细胞后与对照组相比细胞脱落增加(P<0.05),而细胞活力正常.结论: 探讨了小鼠N9细胞活化人补体的机制;通过建立N9细胞人补体sMAC亚溶破模型,证实sMAC刺激N9细胞后可降低细胞黏附力但不影响细胞活力;为sMAC对中枢神经系统小胶质细胞亚溶破刺激效应的深入研究提供了理论与实验基础.     

黄芪丹参注射液对妊娠高血压综合征大鼠血浆一氧化氮及肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨一氧化氮(N0)及肿瘤坏死因子α(TNF—α)在妊娠高血压综合征及胎儿宫内发育迟缓发病中的作用及益气化痰法提高胎盘血供的内在机制。方法 采用L-精氨酸甲酯(L-NAME)于妊娠第10d起皮下注射制作大鼠妊娠高血压综合征模型，黄芪丹参注射液及硝酸甘油干预，于妊娠第18d用亚硝酸根还原酶法检测血浆N0水平，ELISA法检测血浆TNF—α含量。结果 模型组N0合量明显降低(P＜0．01)，TNF—α水平升高(P＜0．05)，经黄芪丹参注射液治疗后，血浆N0水平升高(P＜0．01)，而阳性组TNF—α水平不仅未降低，反而有所升高，N0含量稍有升高，但差异无统计学意义，并且N0与TNF—α含量呈负相关。结论 以益气化瘀立法的黄芪丹参注射液舒张血管、降低外周阻力、改善胎盘循环的作用可能是通过抑制TNF—α、促进内皮细胞分泌N0而实现的。     

急性一氧化碳中毒血清肿瘤坏死因子α、可溶性白介素2受体检测的临床意义

目的：探讨血清肿瘤坏死因子α(TNFα)、可溶性白介素2受体(sIL-2R)在总性一氯化碳(CO)中毒中的变化及临床意义。方法：采用ELISA法检测20例急性C0中毒患者及20例正常人血清TNFα、sIL-2R。结果：急性C0中毒组血清TNFα、sIL-2R均高于正常对照组(P＜0．001，P＜0．01)；C0组治疗后TNFα、sIL-2R明显低于治疗前(P＜0．001，P＜0．01)。结论：急性C0中毒可致TNFα、sIL-2R增高，治疗后水平较治疗前明显降低。故血清TNFα、sIL-2R的升高可作为总性C0中毒时病情严重程度的指标之一，且糖皮质激素的应用可作为除纠正缺氧外的另一治疗手段。     

巨噬细胞细胞毒功能的调变Ⅲ.Fusarin C对活化的巨噬细胞细胞毒功能的影响

本文报道串珠状镰刀菌毒素Fusarin C对巨噬细胞(Mφ)介导的细胞毒功能的影响,结果表明Fusarin C强烈抑制巨噬细胞激活因子(MAF)体外活化的Mφ介导的抗体依赖性细胞毒作用(ADCC)和溶瘤细胞作用(MTC),对短小棒状杆菌(Cp)体内活化的Mφ所介导的瘤细胞增殖抑制作用(CS)也有明显的抑制,但对Mφ的免疫吞噬功能无明显影响。     

黄芪总苷对血吸虫虫卵抗原活化的大鼠腹腔巨噬细胞TNFα mRNA表达及分泌的影响

目的:观察黄芪总苷(astragalosides,AST)对血吸虫虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)活化的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφs)TNFαmRNA表达及上清液中TNFα分泌的影响。方法:采用RT-PCR技术及放射免疫法检测在SEA(10 mg/L)的刺激下,AST与大鼠腹腔巨噬细胞共育6 h时,TNFαmRNA表达水平及上清液中TNFα分泌水平。结果:黄芪总苷(10,20 mg/L)能明显降低SEA(10 mg/L)刺激的大鼠PMφs中TNFα mRNA表达及上清液中TNFα分泌水平(P<0.05),且呈药物浓度依赖性趋势。结论:AST对SEA刺激引发的大鼠PMφs TNFα mRNA表达及分泌有明显的抑制作用。     

鼻咽癌患者血清中超氧化物歧化酶和脂质过氧化物及肿瘤坏死因子-α水平测定和意义

目的：通过测定鼻咽癌(NPC)患者外周血血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氯化物(LP0)含量以及肿瘤坏死因子—α(TNF—α)的水平，探讨其在鼻咽癌发病机理和肿瘤免疫方面的作用。方法：采用比色法测定86例NPC患者和65例正常对照者血清中SOD活性和LPO含量；用双抗夹心ELISA法分别测定其血清中TNF—α水平。结果：鼻咽癌患者外周血血清中LP0含量非常显著高于正常对照组(P＜0．O01)，SOD活性非常显著低于正常对照组(P＜0．001)，而TNF—α水平显著高于正常对照组(P＜0．01)，血清中LP0含量和TNF—α水平呈高度正相关(LP0含量的P值＜0．001，TNF—α的P值＜0．01)，而SOD活性则相反(P值＜0．O01)。结论：鼻咽癌患者外周血血清中SOD活性和LP0含量及TNF—α水平的联合检测，有助于了解鼻咽癌患者的机体免疫状态．对探讨鼻咽癌的发病机制、病情判断、转归、预后以及临床治疗有指导意义和价值。     

抗链球菌溶血素“O"及C—反应蛋白测定方法的改进

抗链球菌溶血素“O”(ASO)试验及C—反应蛋白(CRP)测定临床应用很广,但传统方法繁琐,均需加热及排除RF的干扰,才能获得实验结果的准确性。为此,作者应用EDTA络合血清中钙、镁离子,能迅速阻断补体途径或旁路途径的活化作用的原理,通过优选法在检测血清中加入适量的EDTA溶     

C3d及荷C3d免疫复合物的测定与意义

补体在激活剂(activators)如抗原抗体复合物(IC)、C-反应蛋白、葡萄球菌A蛋白、聚合阴离子(polyanions)以及某些细菌、病毒激活下,可经传统或旁路途径活化。C3被C3转化酶(C-42,C——3bBb)裂解成C3a、C3b片段,在H因子协同下,C3b进一步被I因子裂解成C3c、C3f、C3dg,后者又被蛋白水解酶水解成C3d、C3g。血清中C3d含量可反映补体活化程度。由于补体被IC激活后,C3d可以共价键结合于IC上,因而IC上荷有C3d是该种IC可激活补体的标志。鉴于补体的活化,IC特别是激活补体的IC在组织中的沉着具有重要的病理生理意义,并在某些疾病的发病机…     

Mnk1对脂多糖诱导的巨噬细胞炎症反应的影响

目的：探究丝裂原活化蛋白激酶相互作用丝苏氨酸激酶1(Mnk1)基因缺失对脂多糖（LPS）诱导的小鼠巨噬细胞（Mφ）炎症反应的影响及可能机制。方法：选取8～10周龄健康雄性野生型C57BL/6J(WT)、Mnk1基因敲除（KO）小鼠，分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组，腹腔注射PBS或LPS 24 h后，ELISA法检测血清中IL-1β含量，提取脾脏Mφ行qRT-PCR检测脾脏Mφ中IL-1β和Sprouty2(Spry2)的mRNA表达水平。同时分别提取两种品系的小鼠腹腔Mφ进行体外实验，检测巨噬细胞黏附功能，并以等体积LPS或PBS溶液刺激24 h，分为WT+PBS组、KO+PBS组、WT+LPS组、KO+LPS组，并用表达Spry2的腺病毒转染各组Mφ，qRT-PCR法检测Mφ中LFA-1α、IL-1β、iNOS、CD206、Arg1和Spry2的mRNA表达水平，Western blot法检测Mφ中Mnk1、ERK1/2、P-ERK1/2、P-p38、P-JNK、Spry2蛋白水平。结果：在体实验中，腹腔注射LPS的KO+LPS组小鼠较WT+LPS...     

GFP-hDaxx融合蛋白高表达抑制活化巨噬细胞分泌TNFα

目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌TNFα的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP hDaxx转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP -hDaxx在巨噬细胞内的表达与定位。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS诱导激活巨噬细胞后 ,在 0 .5、4、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子TNFα的含量。结果　GFP -hDaxx在巨噬细胞内即时高表达且定位于细胞核。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNFα量明显降低 (在 4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论　hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌TNFα。     

草麻黄中补体抑制成分的纯化和活性

0　引言　现已明确补体激活成分 C3a,C5 a,MAC等是一组重要的炎性介质 ,在感染、创伤、缺血再灌注损伤、自身免疫疾病等多种原因引起的急、慢性炎症反应中 ,参与介导了对自身组织的损伤 .因此 ,用补体抑制剂阻断补体活化可能成为治疗炎症的一种有效手段 .国外已成功获得基因重组的可溶性补体一型受体 (s CR1) ,并用于治疗大鼠心肌缺血再灌注损伤 ,疗效显著 .目前已临床试用治疗急性成人呼吸窘迫综合症 (ARDS) .但 s CR1价格昂贵 ,产量有限 ,难以推广 .草麻黄在我国分布广泛 ,价廉易得 ,是中药方剂中的常用药材 .我们以薄层层析分析控…     

SLE患者血清sTNF—RI、sTNF—RⅡ和TNF—α的变化

目的 探讨活动期和稳定期系统性红斑狼疮（SLC）患者血清可溶性肿瘤坏死因子受体I（sTNF-RI)、可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ（sTNF-RⅡ）及肿瘤坏死因子－α（TNF-α）水平的变化在疾病发生、发展过程中的意义。方法 应用ELISA方法测定46例SLE患者及30例正常人对照血清中TNF－α和sTNF-RI、sTNF-RⅡ水平,及其与补体C3、抗双链DNA抗体（dsDNA)、抗核抗体（ANA）及血沉的相关性。结果 与对照组相比,SLE患者血清中TNF－α、sTNF-RI和sTNF-RⅡ都显著升高,且活动期升高更为显著（P＜0．01）。活动期患者sTNF-RI和sTNF-RⅡ的变化与补体C3、dsDNA、ANA及血沉有非常显著的相关性（P＜0．01）,但与TNF－α水平无相关性（P＞0．05）。结论 TNF－α在SLE的免疫 务机制中起重要的作用,而sTNF-RI和sTNF-RⅡ在疾病中具有免疫调控作用,并可作为疾病活动的参考指标之一。     

M2型巨噬细胞与支气管哮喘研究进展

<正>巨噬细胞在体内分布广泛,根据活化后细胞表面标志及功能的不同,巨噬细胞大体可分为M1和M2型巨噬细胞~([1])。M1型巨噬细胞即经典活化巨噬细胞(classically activated macrophages,CAM),主要发生在Thl细胞的免疫应答中,由IFN-γ、LPS和TNF-α等诱导,活化后释放活性氧(ROS),诱导生成一氧化氮合成酶(iNOS),合成大量促炎因子(IL-6、IL-12、IL-1β、TNF-α等)。M2型巨噬细胞即替代活化巨噬细胞(alternatively activated macrophages,AAM),由IL-4、IL-1 3     

金黄色葡萄球菌DNA对小鼠免疫功能的影响

目的探讨金黄色葡萄球菌DNA对正常小鼠免疫功能的影响。方法纯化提取金黄色葡萄球菌DNA并注射于小鼠腹腔内,测定脾脏自然杀伤(NK)细胞、腹腔巨噬细胞(Mφ)的杀伤活性以及小鼠血清内IFNγ、TNFα的活性。结果实验组NK、Mφ细胞杀伤活性分别为:(75.0±13.9)%,(74.7±6.9)%;对照组分别为:(53.2±17.4)%,(53.8±8.8)%,两组数据各自比较差异均有显著性(P<0.01)。实验组IFNγ、TNFα的活性分别为120.33±45.32,28.77±8.51;对照组分别为125.25±27.57,25.40±9.68,两组数据各自比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论金黄色葡萄球菌DNA可提高小鼠NK、Mφ细胞的活性,但对小鼠血清内IFNγ、TNFα的活性无显著影响。     

肿瘤坏死因子与儿童哮喘

支气管哮喘(简称哮喘)发病机制复杂，至今尚未完全阐明，有多种免疫细胞、炎症细胞及细胞因子参与其发病过程。肿瘤坏死因子(TNF)作为一种重要的炎性介质，是一种多效应的肽类生物活性分子，哮喘时各种过敏原使呼吸道上皮细胞、血管内皮细胞及肺外周血白细胞活化，释放TNF，它通过增加细胞间黏附分子、血管细胞黏附分子表达，诱导血小板活化因子及白细胞介素1、5、8的释放，刺激前列腺素、白三烯和嗜酸性粒细胞阳离子蛋白等过敏毒素的合成，导致哮喘时气道高反应性的发生。TNF-α除具有炎性介质作用外，也可作为各种细胞因子的启动因子，影响与哮喘有关的染色体遗传基因的改变，故阻断TNF-α的释放或使用抗TNF-α抗体及基因治疗哮喘．可成为将来治疗哮喘的有效方法。     

小檗碱对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响

目的观察小檗碱对脂多糖（LPS）、白细胞介素－4（IL－4）诱导的小鼠RAW264．7细胞极化的影响。方法体外培养小鼠巨噬细胞RAW264．7,模型组和给药组分别加入LPS （终浓度100 ng／mL）或IL－4（终浓度10 ng／mL）,给药组用终浓度20μmol／L的小檗碱分别进行干预,同时空白对照组给予等体积磷酸盐缓冲液（PBS）。采用荧光定量聚合酶链反应检测精氨酸酶－1（ Arg－1）、一氧化氮合酶（ iNOS）、细胞因子信号传导抑制蛋白2（ SOCS2）、细胞因子信号传导抑制蛋白3（SOCS3）的mRNA表达水平,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及IL－10的分泌量。结果小檗碱对LPS刺激的巨噬细胞TNF－α分泌量的增加以及iNOS、 SOCS3 mRNA表达水平的上升均有显著的下调作用（P＜0．05或P＜0．01）;对IL－4刺激的巨噬细胞IL－10分泌量的增加和Arg－1 mRNA表达水平的上升均有显著下调作用（P＜0．05）,而对SOCS2 mRNA的表达无显著影响（P＞0．05）。结论小檗碱能抑制巨噬细胞向M1型极化,亦能抑制巨噬细胞向M2型极化,提示其可能在维持M1／M2动态平衡中发挥调节作用。