肾综合征出血热患者血清样本中汉坦病毒RNA检测及其临床意义

目的 观察病毒血症在病程各期的变化。方法 根据汉坦病毒血清Ⅰ型７６－１１８株及血清Ⅱ型８０－３９株Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物及一条探针,应用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄＰＣＲ方法对５７例９６份肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者血清中ＨＶ－ＲＮＡ检测,所有ＰＣＲ产物用ＤＯＴ－Ｂｌｏｔ证实。结果 ９６份样本中６８份阳性,阳性率７８．８％;在病程第１、２、３周,ＨＶ－ＲＮＡ检测率分别为９４．７％、４７．５％、２５％     

献血员、肝炎患者TTV DNA检测及部分TTV基因序列分析

目的了解献血员、肝炎患者中的输血传递病毒(TTV)感染状况及基因型别。方法设计合成引物采用半套式聚合酶链反应（hemi-nestPCR）方法,对195份献血员血清、72份不同型别的肝炎患者血清进行了TTVDNA的PCR检测,并对部分阳性株进行序列测定及计算机分析。结果①在血清丙氨酸转氨酶（ALT）异常,HBsAg及抗HCV阴性的99份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本36份,阳性检出率为36.3%;而在ALT正常的96份献血员血清标本中,检出TTVDNA阳性标本16份,阳性检出率为16.6%,明显低于ALT异常献血者。②在72例不同肝炎患者中,共检出39例TTVDNA阳性血清,总检出率为54.16%,在非甲-非庚型肝炎患者中TTVDNA阳性率为87.5%,而在明确诊断为甲-庚型肝炎的患者中TTVDNA阳性率为50%,两组相比差异显著（P<0.05）。对8株阳性株序列分析结果显示,测序的8个分离株与9个G1、G2代表株核酸的同源性为60.4%～99.1%,氨基酸的同源性为55.4%～98.6%。经系统发育分析表明,这8个TTV分离株中有7株可分属于G1、G2两个基因型的5个亚型,而另1株为G1型的新亚型。结论①献血者中存在TTV感染,提示TTV可以导致感染个体的肝功能异常,TTV可能与HBV感染相似,亦存在“健康携带状态”。②非甲-非庚型肝炎患者的TTV感染率明显高于明确病原的甲-庚型肝炎患者,TTV感染与肝炎有关,可能是非甲-非庚型肝炎的病原之一。③8个TTV分离株中7个分属于G1、G2两个基因型中的5个亚型,另有1株为G1型的新亚型。     

甲状腺癌TGF-β1、Smad4表达及其临床病理意义

目的:研究甲状腺癌组织中转化生长因子β1(TGF-β1)及其相关蛋白Smad4的表达水平并探讨其临床病理意义。方法:采用免疫组织化学ABC法分析TGF-β1及Smad4在甲状腺癌、甲状腺瘤、癌周组织中表达。结果:TGF-β1蛋白在甲状腺癌、甲状腺瘤及癌周组织的阳性表达率分别为77.9%、20.0%、12.5%,TGF-β1蛋白在甲状腺癌的阳性表达率明显高于甲状腺瘤及癌周组织,差异有统计学意义(P&lt;0.05);Smad4在甲状腺癌、甲状腺瘤及癌周组织中的阳性表达率分别为47.1%、80.0%、87.5%,Smad4在甲状腺癌的阳性表达率低于甲状腺瘤及癌周组织,差异有统计学意义(P&lt;0.05)。TGF-β1、Smad4蛋白的阳性表达率与甲状腺癌的组织类型、淋巴结转移有关。结论:甲状腺癌组织中TGF-β1、Smad4的表达改变可能与其发生、发展相关,并促进肿瘤的浸润与转移,联合检测TGF-β1、Smad4蛋白表达可能是预测甲状腺癌患者预后的重要指标。     

逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附试验在诊断肾病综合征出血热中的价值

寻找一种快速、敏感、特异的诊断肾病综合征出血热 (HFRS)方法。方法　采用碘化钠 -异硫氰酸胍 -氯仿法抽提病毒核酸 ,逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)检测不同病程中 HFRS患者血清中的汉坦病毒感染情况 ,并采用间接酶联免疫吸附试验 (EL ISA)检测特异性 Ig M抗体。结果　 84.7%患者血清中汉坦病毒核酸检测为阳性 ,其中病程为 1周内者检出率为 10 0 % ,1～ 2周者为 6 0 % ,超过 2周者为 33.3% ,而特异性 Ig M的总检出率为 70 .0 5 % ,病程在 1周、1～ 2周、超过 2周者检出率分别为 6 4%、90 %、6 6 .6 %。结论　RT-PCR和 ELISA都是 HFRS的特异性诊断方法 ,两者可相互补充 ,提高诊断率     

ERβ、C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达及其与内分泌治疗效果的关系

目的:检测乳腺癌组织中ERβ蛋白、C-erbB-2蛋白表达情况,探讨ERβ、C-erbB-2表达对乳腺癌患者预后和内分泌治疗的影响。方法:应用免疫组织化学PV-9000法检测86例乳腺癌患者肿瘤组织中ERβ、C-erbB-2的表达,并结合临床病理指标和预后作对比分析。采用χ2检验、Kaplan-Meier法计算生存率。结果:(1)ERβ的阳性表达率与临床分期、腋淋巴结转移相关(P&lt;0.05),与年龄、肿瘤大小、组织学分级及月经状况无显著相关性(P&gt;0.05);C-erbB-2的阳性表达率与肿块大小,腋淋巴结转移相关(P&lt;0.05),与年龄、临床分期、组织学分级及月经状况无显著相关性(P&gt;0.05);(2)ERβ阴性患者中接受内分泌治疗组患者的5年总生存率、无瘤生存率(分别为87.29%和84.06%)高于未接受内分泌治疗组(分别为53.87%和53.87%),差异有统计学意义(P&lt;0.05)。结论:(1)乳腺浸润性导管癌中ERβ、C-erbB-2阳性表达与肿瘤的发生发展密切相关。(2)ERβ阴性患者内分泌治疗效果明显,检测ERβ的表达水平是预测内分泌治疗效果的有用指标。     

叶下珠复方和拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的临床疗效比较

[目的]观察比较叶下珠复方、拉米夫定、叶下珠复方合用拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的疗效.[方法]90例慢性乙型肝炎患者随机分3组,分别为叶下珠复方组(剂量2.6g/次,3次/d)、拉米夫定组(剂量100mg/次,1次/d)和叶下珠复方合用拉米夫定组,均连续口服52周.治疗前、后定期检测血清肝功能指标及乙型肝炎标志物表面抗原(HBsAg)、e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)及酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸(YMDD)含量.[结果]叶下珠复方组肝功能复常率、HBeAg转阴率均高于拉米夫定组,而HBV-DNA转阴率低于拉米夫定组(P<0.05),YMDD变异少于拉米夫定组(P<0.05);两药合用组的HBeAg转阴率与叶下珠复方组相仿(P>0.05)而高于拉米夫定组(P<0.01),HBV-DNA转阴率均高于叶下珠复方组和拉米夫定组(均P<0.01),肝功能复常率高于拉米夫定组(P<0.05或P <0.01),YMDD变异也少于拉米夫定组(P<0.05).[结论]叶下珠复方与拉米夫定联合用药可提高治疗慢性乙型肝炎疗效,减少YMDD变异,推迟和避免拉米夫定耐药株产生,以及由此而引起的病毒在体内的持续复制.     

胃癌组织中Angiopoietin-2、TRAIL与凋亡关系的研究

目的研究血管生成素-2(Angiopoietin-2)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis indueing ligand,TRAIL)在胃癌组织中的表达,探讨二者与细胞凋亡的关系.方法应用免疫组化技术检测67例胃腺癌组织中及相对应的正常胃黏膜中Angiopoietin-2、TRAIL蛋白的表达,用原位末端标记(TUNEL)技术检测癌组织中的凋亡指数(AI).结果angiopoietin-2在胃癌组织中明显表达(52.39%),而在癌旁正常黏膜呈弱表达(7.46%),低分化癌的angiopoietin-2的表达水平高于中高分化癌,有淋巴结转移者的angiopoietin-2的表达高于无淋巴结转移者(P均<0.05).TRAIL在正常胃黏膜中的阳性表达率97.01%高于癌组织中的阳性表达率47.76%(P<0.05);TRAIL蛋白的表达与肿瘤的分化程度有关,分化程度越低,TRAIL的表达率越低(P<0.05),TRAIL蛋白表达与胃癌的直径、部位、大体分型,浸润深度及有无淋巴结转移及患者的年龄、性别无关(P>0.05).胃癌组织中细胞凋亡指数为1.85±0.66.angiopoietin-2蛋白表达阳性组与阴性组、TRAIL蛋白阳性组与阴性组中凋亡指数分别存在着显著性差异(P<0.05);Angiopoietin-2与TRAIL蛋白表达之间无明显的相关性(rs=0.112,P>0.05).结论Angiopoientin-2可抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤的恶性进展;TRAIL可诱导胃癌细胞发生凋亡.     

血清五种肿瘤标志物检测对肺癌早期诊断的价值

目的 探讨血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌抗原(SCCAg)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胃泌素释放肽前体(ProGRP)在肺癌早期诊断中的价值。 方法 收集94例肺鳞癌(SCC)、169例肺腺癌(AD)、74例小细胞肺癌(SCLC)患者与151例肺部良性疾病(LBL)患者,采用电化学发光法检测患者的血清CEA,CYFRA21-1,NSE及ProGRP水平,采用化学发光法检测SCCAg。 结果 CEA,CYFRA21-1,SCCAg,NSE及ProGRP对肺癌诊断的特异性分别88.1%,70.9%,84.1%,84.1%及94.7%。5种标志物在SCC组Ⅰ+Ⅱ期的阳性率分别为26.3%,57.9%,44.7%,15.8%及5.3%,其中CEA(P<0.05),CYFRA21-1及SCCAg(P<0.01)的阳性率明显高于LBL组; CYFRA21-1,SCCAg及NSE的阳性率明显低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.05)。5种标志物在AD组Ⅰ+Ⅱ期的阳性率分别为16.7%,27.8%,9.7%,11.1%及4.2%,与LBL组比较差别无统计学意义(P>0.05); CEA,CYFRA21-1及NSE阳性率明显低于Ⅲ+Ⅳ期(P<0.01)。5项标志物在SCLC组局限期的阳性率分别为41.7%,55.6%,19.4%,53.8%及75.0%,其中CEA,CYFRA21-1,NSE及ProGRP的阳性率明显高于LBL组(P<0.01); NSE阳性率明显低于广泛期(P<0.05)。在SCC组(Ⅰ+Ⅱ期)、AD组(Ⅰ+Ⅱ期)及SCLC组局限期中,约登指数最高的单项指标分别为CYFRA21-1/SCCAg(0.29),CEA(0.05),ProGRP(0.67); 约登指数最高的联合检测组合分别为CEA+CYFRA21-1+SCCAg(0.32),CEA+CYFRA21-1(0.05),NSE+ProGRP(0.62)。 结论 5种肿瘤标志物中,以ProGRP对SCLC的早期诊断效能最高,NSE与SCLC病程的进展相关。SCCAg及CYFRA21-1对SCC早期诊断效能最高且与SCC病程的进展相关,其中CYFRA21-1虽敏感性最高(57.9%),但特异性不佳(70.9%)。5种标志物的检测对AD均不具早期诊断价值,肿瘤标志物的联合检测并不能明显提高对上述3种类型肺癌的早期诊断效能。     

pS2、PSA的表达与乳腺癌神经内分泌分化的关系

目的探讨雌激素调节蛋白(pS2)、前列腺特异抗原(PSA)的表达与乳腺癌神经内分泌细胞(NE细胞)分化的关系.方法应用LSAB免疫组化法检测铬粒素、pS2及PSA在130例乳腺癌患者中的表达.结果①NE细胞阳性乳腺癌pS2阳性表达率为72.2%,明显高于NE细胞阴性者45.0%(P<0.05).②浸润性导管癌及浸润性小叶癌PSA阳性率为18.9%,明显低于其它类型癌37.5%(P<0.05).③NE细胞阳性乳腺癌PSA阳性率为55.0%,明显高于NE细胞阴性者16.4%(P<0.05).结论提示伴有神经内分泌分化的乳腺癌恶性度较低,预后较好.     

GATA3在不同分子分型乳腺癌组织中的表达及与预后关系

目的研究GATA结合蛋白3(GATA3)在乳腺癌组织中的表达与临床病理指标的关系,探讨 GATA3在乳腺癌不同亚型中的表达及预后意义。方法回顾性分析209例乳腺癌患者的临床病理资料。采用免疫组织化学法检测GATA3、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(Her-2)、雄激素受体(AR)、Ki-67增殖指数的表达,采用χ²检验分析GATA3在乳腺癌不同亚型中的表达,采用Kaplan-Meier法进行生存资料分析。结果GATA3的低表达与肿瘤低分化、淋巴结转移、TNM分期等指标相关(P<0.05)。乳腺癌组织中GATA3表达与ER,PR,AR表达呈正相关,与Ki-67增殖指数呈负相关(P<0.05)。GATA3在三阴性乳腺癌中表达率(17.5%)低于非三阴性乳腺癌中表达率(71.0%)(P<0.05); GATA3在Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型、三阴性乳腺癌组织中表达率分别为89.8%,79.1%,43.4%及17.5%(P<0.05)。在 Luminal型乳腺癌不同临床分期中,GATA3(+)组患者的无病生存期较GATA3(-)患者更长(P<0.05)。结论 GATA3表达与乳腺癌分子分型有关,且参与乳腺癌的发展、转移,可作为判断预后的辅助指标。     

ELISA捕捉法与间接夹心法检测肾综合征出血热患者血清IgM抗体的比较

作者用ELISA捕捉法和间接夹心法平行检测106份第7病日内的肾综合征出血热患者血清IgM抗体,其阳性检出率分别为92.5％和87.7％,其中40份第4病日内的血清阳性率分别为90.0％和85.5％,差异均无显著性意义,但前法检出的抗体滴度(平均1:102 400)明显高于后者(1:3200)     

聚合酶链反应检测汉坦病毒感染的实验研究

目的 早期诊断汉坦病毒感染。方法 根据国际标准株（７６－１１８,３９）Ｍ基因Ｇ１区设计两对公有引物和一条探针,按异硫酸氰胍－酚一步法提取汉坦病毒ＲＮＡ,采用ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ检测病毒细胞培养上清原液及稀释液、１６份对照组血清、４０份ＨＦＲＳ急性期（１～５天）血清标本中的汉坦病毒ＲＡＮ,所有扩增产物采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ或Ｄｏｔ ｂｌｏｔ证实其特异性。结果 汉坦病毒细胞培养液和４０份     

汉坦病毒核衣壳蛋白抗原多肽片段的合成与应用

目的 以合成肽为抗原建立新型特异性检测抗汉埋病毒IgG和IgM的ELISA。方法 用多肽合成仪合成汉坦病毒核衣原壳蛋白（aa17-66)50个氨基酸残基的核心序列,以此为抗原,通过实验发现这一序列具有较强的抗原性,首次建立了以合成肽为抗原的新型特异性检测抗汉坦病毒IgG和IgM的ELISA,测定肾综合征出血热（HFRS）患者血清23份,乙型肝炎患者血清9份,正常人血清11份。结果 乙型肝炎患者血清和正常人血清均为阴性,20份HFRS血清IgG阳性,21份HFRS血清IgM阳性,本方法的相对敏感性为86％和91％,相对特异性为100％,符合率为93％和95％。结论 本法特异性强,灵敏度高,简便易行,是适于基层医疗单位的诊断方法。     

HFRS患者血清中HV-RNA的PCR检测及扩增产物的测序分析

目的 探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于ＨＦＲＳ临床标本中病毒基因检测的若干影响因素及西安地区近年主要浒汉坦病毒（ＨＶ）毒株的分子流行病学特点。方法 设计合成了两套分别互补于ＨＶ Ｍ基因片段和Ｓ基因片段的引物,建立了检测ＨＦＲＳ患临床血清标本中ＨＶ基因的ＲＴ－ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ方法,并对扩增的部分ＨＶ靶基因进行了测序分析和比较,结果 １１９份ＨＦＲＳ患轿清（经临床和ＩＦＡ确诊）经用Ｓ基因片段引物的ＲＴ－ｎ     

Study on Distribution of HFRS Virus in the Tissuses and Cells of Human Body

Immunochemical rnethods,viral tissue culture and dlectron microscopic observationtechiniques were used to study the distribution of HFRS virus in the tissues and cells of patients withHFRS and sorne of their abotive faus.The results showed that HFRS virus could infect many hu-man organs and cells and pass through plaoenta and blood-brain barrier,and was characteristic ofpantropical infection,the duration of the viremia of the patients being mostly near a week.Thestudy is valuable for elucidation pathogenesis of the disease.     

汉坦病毒湖北株M片段G1编码区基因变异研究

目的 :探讨近年来汉坦病毒HTN湖北株M基因片段G1编码区部分基因序列的变异情况。方法 :根据汉坦HTNM片段G1编码区核苷酸序列设计引物 ,利用RT PCR方法对 75份病程在 7d以内的肾综合症出血热 (HFRS)患者 (经临床诊断和ELISA确诊 )血清标本进行检测 ,并对扩增出的目的基因片段选用 3种限制性内切酶AluⅠ、RsaⅠ、MboⅠ进行酶切 ,根据限制性片段长度多态性分析筛选出变异毒株 ,继而通过序列测定 ,得到变异毒株G1编码区部分核苷酸序列 ,并与标准株HTN76 118及地方株HTN 114的相应核苷酸序列及氨基酸序列进行比较分析。结果 :75份血清标本通过RT PCR方法进行检测 ,阳性率为 77.3 %。扩增片段用 3种限制性内切酶AluⅠ、RsaⅠ、MboⅠ进行酶切分析 ,发现 4份阳性产物其限制性片段长度多态性与HTN 76 118均不相同 ,但其中 3份阳性产物限制性片段长度多态性与地方株HTN 114基本相同 ,1份与HTN 114株不完全相同。对该扩增产物的核苷酸序列和氨基酸序列进行同源性分析表明 ,其核苷酸序列与标准株 76 118的同源性为 83.3 % ,与地方株HTN 114的同源性为 96 % ;推导氨基酸序列与HTN 76 118的同源性为 93.2 % ,与地方株HTN 114的同源性为 99%。结论 :①近年来引起湖北地区HFRS的主要毒株仍为HTN地方株。②从分析的病     

THE DURATION OF VIREMIA PATIENTS WITH EPIDEMIC HEMORRHAGIC FEVER

The duration of viremia in patients with epidemic hemorrhagic fever (EHF) was studied using immunofluorescence technique and cell culture assays. The duration of virus in plasma of EHF patients was about 1 week, which was concomitant with the febrile phase of the disease. Comparatively, the separation rate of viruses in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) was greater (1.8 times) than in plasma, while the detected peak of EHF (in 4-7 days after onset of the disease) was found to be 2 or 3 days less than that of plasma, thus the detectable viremia was prolonged until the 8th to 11th day of the disease. High titre EHF antibody of IgG, TgM was unable to neutralize the virus in human blood. The results revealed that a blood-cell-associated prolonged viremia is one of the characteristics of EHF infection.     

肾综合征出血热患者血清中和抗体的实验研究

目的：了解肾综合征出血热患(HFRS)血清中是否存在HFRS病毒中和抗体和中和抗体滴度的高低。方法：用近几年患病愈后血清中的HFRS病毒，以固定病毒量、稀释血清抗体方法，用小白鼠乳鼠中和实验，测定血清中和抗体对病毒的中和效价。结果：HFRS病后和隐性感染人群血清中和抗体滴度(GMT)均较高，其中，家鼠型GMT为422．7、野鼠型GMT为302．6、隐性感染GMT也达157．1。结论：中和抗体在血清中存留稳固而持久，是HFRS病后抗体免疫力的标志。     

Interruption study of viremia of patients with hemorrhagic fever with renal syndrome in the febrile phase.

Kinetic changes of viremia were observed in 287 cases of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS) in whom ribavirin was administered with double blind random control studied by means of virus isolation, indirect immunofluorescence assay and enzyme-linked immunosorbent assay. The positive rate of viremia was 79.7% (Sp = 3%) and positive rate of HERS IgM was 85% (Sp = 3.1%) before treatment. Viremia could be interrupted by ribavirin as in the ribavirin treated group, the viremia positive rate decreased, duration of viremia was shortened, viral antigen products, virus titer and HFRS IgG antibody level were reduced as compared with the control group. This showed that viremia was very frequent in patients in the febrile phase and ribavirin is an effective antiviral drug in HFRS during the febrile phase. Dosage and course of treatment of this drug are discussed.