多重PCR用于缺失型α-地中海贫血的基因检测

为了探讨多重PCR技术在检测我国南方常见缺失型α—地中海贫血中的临床应用，观察缺失型α—地中海贫血的基因分布频率，采用单管多重DNA扩增的方法(M—PCR)对经血红蛋白定量分析初步诊断为标准型和静止型α—地中海贫血及血红蛋白H(HbH)病的145例患者进行基因检测。扩增产物经1．2％琼脂糖凝胶电泳，出现1．3及1．8kb条带者，提示为-^SEA／αα；1．6及1．8kb条带者为-α^4.2／αα；1．8及2．0kb条带者为-α^3.7／αα；1．3及1．6或2．0kb条带，提示为缺失型HbH病(-^SEA／-α^4.2或-^SEA／-α^3.7)。结果表明，145例受检者中发现100例-^SEA／αα(68．9％)，15例-α^3.7/ αα(10．3％)，8例-α^4.2/αα(5．52％)，2例-α^3．7／-α^4.2(1．38％)，-α^3.7及-α^4.2纯合子各1例(0．69％)；14例-SEA／αα(9．65％)，2例-SEA／-α^4.2(1．38％)；另有2例患者产前诊断证实为Bart水肿胎儿。结论：运用多重PCR技术可以准确、简便、快速地检测我国南方地区常见的-α^3.7、-α^4.2、-^SEA3种缺失型α-地中海贫血，这一技术对α—地中海贫血的大人群筛查及携带者的检出是一种较为理想的方法。     

β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的分子检测及血液学分析

本研究对β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子进行分子检测及血液学表型分析，以了解其检出情况及基因分布状况。采用单管多重gap—PCR技术检测3种常见的缺失型α-地中海贫血基因；采用PCR结合反向点杂交法检测β-珠蛋白基因17个位点的18种突变；进行血细胞常规分析。结果表明：81例β-地中海贫血杂合子中有15例复合缺失型α-地中海贫血，占18．52％。共有9种基因型，包括6例（7．41％）β-地中海贫血杂合子携带α-地中海贫血-1基因（--^SEA／αα-）；8例（9．88％）携带α-地中海贫血-2基因，其中6例（7．41％）为右侧缺失型（-α^3.7／αα），2例（2．47％）为左侧缺失型（-α^4.2／αα）；1例（1．23％）携带缺失型HbH基因（--^SEA／-α^3.7）。β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的各项红细胞参数与单纯β-地中海贫血杂合子比较差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：梧州市β-地中海贫血复合缺失型α-地中海贫血双重杂合子的发生率很高，而血液学指标缺乏特异性。采用gap—PCR作为临床上地中海贫血筛查的一线方法，可以有效减少β-地中海贫血复合α-地中海贫血双重杂合子漏检的可能，对遗传咨询和准确进行产前诊断具有重要意义。     

酶联免疫吸附试验检测胚胎型ζ珠蛋白链快速筛查东南亚缺失型α地中海贫血

东南亚各国和我国长江以南各省区人群中东南亚缺失型（- -^SEA）α地中海贫血（地贫）基因携带率高达4％～14％^1.2。- -^SEA、自身或与α地贫2（-α，如-α^3.7和-α^4.2）或非缺失型（α^T）α地贫相互组合可分别引起致死的Hb Bart’s 水肿综合征和严重影响生命质量的HbH病。目前对该病尚无根本有效的治疗方法，通过遗传筛查和产前诊断选择性地淘汰重型α地贫胎儿是控制该病发生的唯一途径，其中- -^SEA携带者的峪定则是关键的一步？我们采用单管多重PCR（gap—PCR）技术作为标准并辅以铁代谢状态的分析，对酶联免疫吸附试验（ELISA）检测外周血红细胞中ζ珠蛋白链作为临床- -^SEA携带者的常规筛查方法进行了评价，以期为该型α地贫的大样本人群筛查提供新的技术选择。     

基因芯片用于检测缺失型α地中海贫血

地中海贫血 (珠蛋白生成障碍性贫血 ,地贫 )是我国长江以南发病率最高、危害最大的一种遗传病。我国南方地区常见的 3种缺失型α地贫分别是由 -α3 .7、-α4.2 和 - - ＳＥＡ基因的缺失引起的。传统的缺失型α地贫基因分析检测方法主要是用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链反应 (ＰＣＲ)法。但由于α地贫珠蛋白基因缺失型的不同所需试剂及反应条件也不同 ,须分别进行检测 ,给临床筛查及快速诊断带来不便 ;同时 ,全套检测的累加费用较高 ,给患者造成了一定的经济负担。近年来基因芯片技术的发展给疾病的基因诊断提供了广阔的应用前景。我们运…     

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14—20周的贫血孕妇,采用gap—PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明：在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失^--SEA,2例为右侧缺失-α^3.7。结论：采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。     

跨跃断裂位点PCR检测α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失及其临床应用

目的评价跨跃断裂位点PCR（GAP-PCR）法检测α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失（-α^3.7，-α^4.2，-^SEA）的可行性，并进行初步临床应用。方法用GAP-PCR法检测158例临床疑诊为α-珠蛋白生成障碍性贫血病人血标本，用金标准Southern blot法进行盲法平行检测，评价前者方法学性能。结果GAP-PCR法检出α-珠蛋白生成障碍性贫血基因缺失阳性率为42．41％（67／158），其中αα／-^SEA为32．91％（52／158），-α^3.7／αα为6.96%（11／158），-α^4.2／αα为1．90％（3／158），-α^3.7／-^SEA为0．63％（1／158），与Southern blot法完全一致。GAP-PCR法检测敏感度、特异度和准确度均为100％。结论此法检测结果准确，操作简便，为α-珠蛋白生成障碍性贫血诊断和筛查的有效方法。     

缺失型α—地中海贫血中的基因诊断新技术研究

目的 建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血（α-地贫）,即东南亚型缺失（--^SEA)、右侧缺失（-α^3.7)和左侧缺失（－α^4.2)的PCR技术。方法 设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果 成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论 本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术,准确、简便、重复性好,便于推广应用。     

多重聚合酶链反应在α-地中海贫血诊断中的应用

目的初步评价使用单管多重PCR对缺失型α-地中海贫血(α-地贫)的诊断效能。方法使用单管多重PCR基因诊断试剂对202例血液学方法筛检疑似α-地贫患者进行基因检测，并对其中部分标本进行测序。结果疑似为α-地贫的202份临床标本，基因检测证实其中136例为α-地贫，其结果经序列分析证实。与PCR检测相比，一管法红细胞脆性、MCV、MCH与RDW-CV检测的灵敏度分别为85．29％、99．44％、73．53％和61．03％，特异性分别为69．70％、66．67％、62．12％和60．61％。在136例α-地贫患者中，--^SEA/αα104例、-α3.7/αα14例、-α^4.2/αα例、-α^3.7/--^4.211例和-α^4.2/--^SEA3例，分别占76．47％、10．29％、2．94％、8．09％和2．21％。结论与血液学方法相比，多重PCR检测具有快速、准确的优点，可用于人群和临床样品的缺失型α-地贫的分子筛查以及产前诊断。     

厦门地区α-地中海贫血基因缺失及突变类型分析

目的：分析厦门地区α-地中海贫血基因缺失及突变类型和频率。方法采用导流杂交 PCR 方法检测血样中α-地中海贫血3个α-地中海贫血缺失基因、2个α-地中海贫血突变基因。结果在585例患者中,共检测出55例α-地中海贫血基因缺失,阳性检出率为9.40％,2例α-地中海贫血基因突变,阳性检出率为0.34％。结论厦门地区α-地中海贫血基因缺失比例较高,占阳性标本的96.5％,基因突变型较少。     

α-地中海贫血患者血液学表型和基因型分析

目的分析深圳市罗湖区α-地中海贫血患者基因型分布特点,以及血液学表型和基因型的关系。方法选取2016年8-10月该院确诊的α-地中海贫血患者209例,分为静止型组(58例)、标准型组(138例)、中间型组(4例)和非缺失型组(9例),同时选取同期健康体检者25例作为对照组,采用全自动毛细管电泳检测血红蛋白A2(HbA2),采用全自动血细胞分析仪检测平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)等血液学指标。结果 209例患者中共检出8种突变基因型,其中--SEA/αα缺失型占66.03%,-α3.7/αα缺失型占22.97%;静止型组、中间型组、标准型组和非缺失型组MCV、MCH和MCHC均明显低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);中间型组HbA2低于正常对照组,差异有统计学意义(P0.05);静止型组、标准型组和非缺失型组HbA2与正常对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论深圳市罗湖区α-地中海贫血患者基因突变以--SEA/αα缺失型为主,MCV、MCH和MCHC等血液学指标可作为α-地中海贫血的联合筛查指标,但对-α3.7/αα缺失型α-地中海贫血患者存在漏诊可能性。     

中国南方α地中海贫血基因突变型研究

为了进下完善和建立一套筛查我国α地中海贫血基因突变型的方法，研究我国南方两广地区α地中海贫血突变类型及分布情况，采用Gap-PCR，nested-PCR，PCR-SSCP，4P-ASPCR及序列分析等方法，对356例临床初诊为标准型和静止型α地中海贫血患和78例血红蛋白H(HbH)病患进行基因筛查。结果表明：356例标准型和静止型α地中海贫血患中发现-SEA/αα295人（82.87％），αα/α-α^3.71人（0.28％），αα/α-α^4.2 3人（0.84％）αα/αα^CS3人（0.84％），αα/αα^QS1人（0.28％）和αα/α^Westmeadα2人（0.56％），没有发现-α4.2和-α3.7的纯合子患；78例HbH病患中-SEA/αα^-3.7 29人（37.2％），-SEA/αα^-4.2 20人（25.6％），-SEA/αα^CS 19人（24.3％），-SEAαα^QS 2人（2.6％）。在8例未能确定基因突变类型的HbH患中，2例广西籍HbH患的α2基因第65密码子（第二外显子）有一同义突变[CD65(GCC→GCG)。它与HbH病表型究竞竟有无关系，抑或是DNA单核苷酸多态位点（SNPs），有待进一步研究证实。在方法学方面，本研究进一步完善了以PCR为基础的基因诊断方法，建立了一种改进的检出非缺失型点突变的4P-ASPCR方法，能准确、快速地用于诊断我国常见的缺失型和非缺失型α地中海贫血突变基因。结论：我国α地中海贫血的基因背景比较复杂，不同地区点突变类型、频率及其发病机理等仍需进一步研究。本研究对进一步调整我国南方地区α地中海贫血基因诊断和产前基因诊断策略，有效地防止该病患儿的出生具有重要意义。     

PCR技术对α-地贫家系进行产前检测

目的：探讨PCR技术对α-地贫家系进行产前检测对优生优育的临床意义。方法：利用电泳和聚合酶链反应(PCR)技术，对筛查出的300例患者进行缺失型α-地中海贫血的产前诊断。结果：300例进行PCR诊断结果为：α地1杂合子140例，占46．7％；a地1纯合子24例，占8％。其中114对有不良孕产史的夫妇中有52对夫妇双方均α地1杂合子，占47％。HbH病患儿为α地1杂合子，其母也为α地1杂合子，其父α地1检测正常。结论：提示PCR技术用于α-地中海贫血的产前诊断，快速、准确。     

两种常见缺失型α-地中海贫血快速检测技术的研究

目的：建立简便快速准确可推广使用的检测α－地中海贫血（α-Thal)右侧失型（－α^3.7)和左侧缺失型（－α^4.2)的聚合酶链反应（PCR）方法。方法：自行研究设计两组引物。优化PCR反应条件。PCR反应产物用1％琼脂糖凝胶电泳分离,溴化乙啶染色,UVP凝胶成像仪下观察记录电泳图谱。结果：运用引物A′、B′、C3进行PCR,出现1700bp扩增带表示－α^3.7,出现1900bp扩增带表示α－珠蛋白基因正常或为野生型。二条扩增带同时出现表示是－α^3.7缺失杂合子。无任何扩增带表示是是东南亚型缺失纯合子。运用引物G′、E、F′进行PCR,根据出现1580bp扩增带和1180bp扩增带可诊断为－α^4.2,还可区分杂合子与纯合子。结论：本研究设计的两组引物及优化的PCR条件,可以简便准确地检测出α－Thal标本中有无－α^4.2和－α^3.7。     

基因芯片检测α珠蛋白生成障碍性贫血的价值

目的探讨基因芯片检测技术在筛查和诊断α-珠蛋白生成障碍性贫血的临床价值。方法应用基因芯片技术对184例在我院门诊及住院就诊的可疑α-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行检测。结果184例患者确诊为α-珠蛋白生成障碍性贫血56例，约占30％，其巾56例α-珠蛋白生成障碍性贫血患者的基因型分别为aa／-SEA28例（占50％），aa／-4.2 4例（占7％），aa／-3.7 12例（占21％），SEA／-a3.7 2例（占4％），SEA／-a4.2 10例（占18％）。结论基因芯片检测技术在临床筛查和诊断α-珠蛋白生成障碍性贫血具有快速、准确、微量、自动化等特点，为临床α-珠蛋白生成障碍性贫血的基因诊断提供重要的依据。     

基因芯片检测α珠蛋白生成障碍性贫血的价值

目的探讨基因芯片检测技术在筛查和诊断α-珠蛋白生成障碍性贫血的临床价值。方法应用基因芯片技术对184例在我院门诊及住院就诊的可疑α-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行检测。结果184例患者确诊为α-珠蛋白生成障碍性贫血56例，约占30％，其巾56例α-珠蛋白生成障碍性贫血患者的基因型分别为aa／-SEA28例（占50％），aa／-4.2 4例（占7％），aa／-3.7 12例（占21％），SEA／-a3.7 2例（占4％），SEA／-a4.2 10例（占18％）。结论基因芯片检测技术在临床筛查和诊断α-珠蛋白生成障碍性贫血具有快速、准确、微量、自动化等特点，为临床α-珠蛋白生成障碍性贫血的基因诊断提供重要的依据。     

广东省茂名地区地中海贫血基因型分析

目的研究广东省茂名地区α和β地中海贫血基因型分布特征。方法对2009年4月至2013年6月本院检验科遗传学实验室检测的2198例地中海贫血基因诊断结果进行分析。其中α-地中海贫血采用跨越断裂点PCR（Gap—PCR）基因诊断技术,β-地中海贫血采用PCR结合反向点杂交RDB（PCR-RDB）方法。结果2198例地中海贫血标本中,检测出缺失型α-地贫l083例．最常见的基因类型是-SEA/αα;检验出β-地贫622例,共有11种基因型,最常见的基因型是CD41／42（-TCTT）,其次是IVS—II-654（C〉T）;检出p复合仅地贫基因84例。结论茂名地区α缺失型地贫以-SEA/αα为主;β-地贫突变类型排在前四位的是CD41／42（-TCTT）、IVS-Ⅱ-654（C〉T）、-28（A〉G）和CD17（A〉T）;β复合α地贫基因检出率为13．5％。本研究为茂名地区制定人群筛查地中海贫血预防计划和遗传咨询、产前诊断提供了有价值的基础资料;基因检测对于地中海贫血的临床诊断、治疗和预防有重的意义。     

东南亚缺失型α地中海贫血1复合血红蛋白CS家系基因突变检测的方法学探讨

本研究旨在应用PCR与PCR-RFLP（限制性片段长度多态性）相结合的方法,检测东南亚缺失型（South-East Asian,SEA）α地中海贫血1（--^SEA／）和HbCS（Constant Spring血红蛋白）基因突变,并探讨其应用价值。先用PCR方法检测α地中海贫血患儿家庭成员的SEA缺失型基因突变,再用PCR-RFLP方法进行血红蛋白CS（HbCS）点突变的筛查。结果表明：从7个家庭19名成员中检出15人为α-地中海贫血（--^SEA）携带者,2个家庭为合并的α-地中海贫血1与血红蛋白CS的双重杂合（--^SEA／α^csα）家系。结论：PCR结合PCR—RFLP方法可简便、快速、准确地检测基因型为--^SEA／α^csα的HbH病。     

采用Amplicon文库构建法对地中海贫血的基因检测

目的 进一步完善现有地中海贫血的检测方法并且建立一种新的基于高通量测序的基因诊断方法,研究α/β地中海贫血基因的突变类型及分布情况.方法 采用Amplicon文库构建法,基于高通量测序平台,对219例地中海贫血患者全血样本进行上机测序与数据分析. 结果 在219例地中海贫血患者中,共计检测出14种突变类型,包括CD122、CD125、CD142 3种非缺失型α-地贫突变及IVS-Ⅱ-654、CD41-42、CD17等11种常见β-地贫突变型别.此外,通过生物信息学软件作图分析,筛查出--SEA、-α37、-α42 3种缺失型α-地贫. 结论 本研究进一步完善了基于高通量测序的基因诊断方法,建立了一套Amplicon文库构建法,能准确、有效地用于诊断α/β地中海贫血基因的缺失与突变类型,对人群筛查,优生优育的遗传咨询,防止该病重症患儿的出生等具有重要意义.     

缺失型α-地中海贫血的基因诊断新技术研究

目的建立诊断我国最常见的三种缺失型α-地中海贫血(α-地贫),即东南亚型缺失(--SEA)、右侧缺失(-α3.7)和左侧缺失(-α4２)的PCR技术。方法设计三组PCR引物,优化PCR反应条件,运用PCR、琼脂糖凝胶电泳、UVP凝胶成像技术,根据电泳图谱检测并诊断三种缺失型α-地贫。结果成功地检测这三种缺失型的纯合子、杂合子或双重杂合子,结果与Southern blotting分析一致。完成42例α-地贫样本的基因诊断。结论本研究所建立的检测α-地贫缺失型的技术方法,准确、简便,重复性好,便于推广应用。     

一种快速诊断东南亚缺失型α地中海贫血1的方法及其临床应用

目的：寻找一种快速诊断东南亚缺失型α地中海贫血（α地贫）１的方法。方法：用多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测７６例门诊患者。结果：检出３１例东南亚缺失型α地贫１，其中５６例受检者与检测ζ珠蛋白肽链检测α地贫１的方法相对照，符合率８３．９３％。用该方法对１０例α地贫进行了产前诊断，诊断出１例为Ｂａｒｔ’ｓ水肿胎儿，４例是东南亚缺失型α地贫１的携带者，其余５例是正常胎儿或α地贫２的携带者。结论：该法简捷、易行、准确性高，为α地贫胎儿产前诊断及α地贫基因的检测提供一种新方法。