稳定同位素内标对人血浆样品中伊伐布雷定和N-去甲基伊伐布雷定测定的影响

建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法同时测定人血浆中伊伐布雷定和N-去甲基伊伐布雷定,并考察稳定同位素内标d3-伊伐布雷定对待测物测定的影响。血浆样品经乙腈沉淀蛋白处理后,经Capcell PAK C18柱(100 mm×4.6 mm,5μm)分离,以甲醇-5 mmol·L-1醋酸铵溶液为流动相。采用电喷雾电离源(ESI源),多反应监测模式进行正离子检测。实验中考察了伊伐布雷定同位素峰[M+H+3]+对内标峰面积的影响以及内标的同位素纯度对伊伐布雷定测定的干扰,通过选择合适的内标浓度满足了方法选择性和线性范围的要求。方法验证结果表明,测定伊伐布雷定和N-去甲基伊伐布雷定线性范围分别为0.100~60.0 ng·m L-1和0.050 0~20.0ng·m L-1。各待测物的日内、日间精密度以及准确度均符合生物样品分析相关要求。本方法成功应用于硫酸氢伊伐布雷定缓释片的人体药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中伊伐布雷定及其活性代谢产物的浓度

目的:建立测定人血浆中伊伐布雷定及其活性代谢产物浓度的方法。方法:血样以叔丁基醚提取后,采用液-质联用(LC-MS/MS)法进样测定。色谱柱为Waters C18,流动相为5 mmol/L醋酸铵-甲酸-甲醇(70∶0.1∶30),流速为0.3 ml/min,柱温为30℃,内标为氨溴索;采用电喷雾离子化(ESI)离子源,以多反应监测(MRM)模式检测,伊伐布雷定、去甲伊伐布雷离子对的m/z分别为469.2/177.1、455.2/177.1。结果:伊伐布雷定、去甲伊伐布雷定血药浓度分别在0.48¹20、0.16120、0.16⁴0 ng/ml范围内线性关系良好(r分别为0.999 8和0.999 7);方法回收率分别为96.35%40 ng/ml范围内线性关系良好(r分别为0.999 8和0.999 7);方法回收率分别为96.35%⁹8.33%、96.20%98.33%、96.20%¹02.50%;日内、日间RSD均<7%;血浆样品长期冻存(-20℃冷冻1个月)稳定性良好,反复冻融3次及室温放置4 h条件下,样品浓度均无显著变化。结论:本方法快速、简便、灵敏、准确,可用于伊伐布雷定的药动学研究。     

伊伐布雷定及其代谢物的血药浓度测定及人体药动学研究

目的：建立伊伐布雷定（IVA）及其活性代谢产物N-去甲基伊伐布雷定（M1）人体血药浓度的HPLC-MS/MS同时测定方法,研究盐酸伊伐布雷定片经健康受试者口服后IVA及M1的人体药代动力学特征。方法：12名健康受试者单次口服盐酸伊伐布雷定片2.5 mg、5 mg和7.5 mg,多次口服5 mg后,采用HPLC-MS/MS测定不同时间点血浆中IVA和M1浓度,并计算其主要药动学参数。结果：IVA和M1血药浓度标准曲线线性范围分别为0.03~80 ng·mL^-1和0.03~10 ng·mL^-1。单次给药2.5、5、7.5 mg后IVA的C_max分别为（9.661±3.832）、（20.63±9.31）、（34.95±19.46） ng·mL^-1,AUC0-48分别为（42.16±19.53）、（85.86±44.85）、（133.6±65.7） μg·h·L^-1;M1的C_max分别为（1.007±0.189）、（2.683±0.675）、（4.064±1.172） ng·mL^-1,AUC_0-48分别为（10.78±1.35）、（26.02±4.91）、（36.24±7.90） μg·h·L^-1。多次给药5 mg后IVA的稳态平均血药浓度Cav为（6.494±2.385） ng·mL^-1,稳态血药浓度波动度DF为（3.3±0.7）,累积常数R_AUC为（1.1±0.2）;M1的C_av为（1.959±0.186） ng·mL^-1,DF为（1.4±0.3）,R_AUC为（1.5±0.2）。结论：建立的人血浆中IVA和M1的LC-MS/MS同时测定方法适用于人体药代动力学研究。单次给药后,在2.5~7.5 mg范围内IVA和M1均呈线性药动学特征;多次给药5 mg后,IVA人体内的暴露量约增加10%,M1人体内的暴露量约增加50%。     

HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片含量

目的建立HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片的含量。方法采用C18Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为磷酸盐缓冲液(pH7.6)-乙腈(60∶40),流速为1.0mL.min-1,检测波长为286nm,柱温25℃。结果盐酸伊伐布雷定线性范围为2.32～16.25μg,峰面积与进样量线性关系良好(r=0.999 9);平均回收率为101.3%,其RSD为1.2%(n=9)。结论该方法准确、可靠、简便,适用于盐酸伊伐布雷定片的含量测定。     

伊伐布雷定的合成工艺改进

目的 改进伊伐布雷定的合成工艺。方法 以3,4-二甲氧基苯甲醛为起始原料,经溴代、缩合、还原、脱羧、环合、氢化、拆分、水解、氯甲酸乙酯保护、还原得到(1S)-4,5-二甲氧基-1-(甲基氨基甲基)-苯并环丁烷(11),将11与苯并氮杂卓部分(12)进行偶合,得到目标化合物伊伐布雷定。结果与结论 目标化合物结构经1H-NMR谱和质谱确证。通过改进合成目标化合物的反应试剂和后处理方法等,使反应操作简单,易于纯化,适合于工业化生产,总产率由7.8 %提高到12.9 %。     

HPLC法测定盐酸伊伐布雷定胶囊的含量

目的建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定胶囊含量的方法。方法采用Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠试液调节pH值为6.8)-乙腈(70∶30),检测波长为285 nm,流速为1.0 mL·min-1。结果伊伐布雷定在0.06⁰.12 mg·mL-1的浓度范围内具有良好的线性关系(r=0.999 8),平均回收率为99.3%,RSD为1.3%(n=9)。结论本法简便、快速、准确,可用于盐酸伊伐布雷定胶囊的质量控制。     

HPLC法测定盐酸伊伐布雷定片的含量

目的建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定片含量的方法。方法采用Thermo ODS Hypersil色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.5%甲酸溶液(用氨水调节pH值至6.5)-乙腈(68∶32),流速为1.0 mL.min-1,检测波长为286 nm。结果伊伐布雷定在119.98～279.95μg.mL-1的浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为99.92%,RSD为0.09%。结论本方法简便、快速、准确,可用于盐酸伊伐布雷定片的质量控制。     

伊伐布雷定临床应用合理性和安全性分析

目的：调查住院患者接受伊伐布雷定治疗的情况,了解该药的应用现状和不良反应并分析其危险因素,为规范其临床合理应用提供依据。方法：汇总国内外伊伐布雷定相关指南、文献和专家共识,形成伊伐布雷定临床应用的合理性评价标准,回顾性调查广州医科大学附属第二医院2020年上半年住院患者中使用伊伐布雷定的病例,按照已制订的评价标准进行合理性和安全性分析,并提出合理化用药建议。结果： 2020年上半年共有173例患者应用了伊伐布雷定,其中有效病例169例,不合理使用病例共81例,不合理使用率达47.93%,以用法用量不适宜和特殊人群用药不合理为主要原因;不良反应共5例,发生率为2.96%,以心房颤动、窦性心动过缓和房室传导阻滞等不良反应为主;临床使用期间应多关注患者的血压和心电监护指标,关注伊伐布雷定的用法用量、特殊人群用药和不良反应等方面。结论：伊伐布雷定减慢心率的作用在临床应用越来越普遍,针对其不合理应用情况和不良反应事件,临床药师应密切留意伊伐布雷定临床指南和专家共识等最新信息,制定合理性评价标准和用药建议,做到实时点评和加强医患沟通,促进伊伐布雷定的合理使用。     

HPLC法测定盐酸伊伐布雷定及其片剂中有关物质

目的建立高效液相色谱法测定盐酸伊伐布雷定及其片剂中有关物质的方法。方法采用CHIRALPAK AD-H手性柱,流动相为正己烷-异丙醇(0.1%三乙胺)(60∶40),检测波长为286 nm,柱温为25℃,流速为0.8mL.min-1,对R-盐酸伊伐布雷定进行分析;采用Kromasil C18柱,流动相为乙腈-pH 7.6磷酸盐缓冲液(30∶70~40∶60)梯度洗脱,检测波长为220nm,柱温为25℃,流速为1.0mL.min-1,对其他有关物质进行分析。结果 R-异构体测定中,检测限为2.12ng,定量限为20ng,精密度RSD为1.11%(n=6),重复性试验与样品测试均未检出R-异构体;其他有关物质测定中,系统适用性试验盐酸伊伐布雷定和相邻峰的分离度为1.91,主峰与杂质A、杂质B、杂质C达到基线分离,专属性试验结果良好。有关物质测定平均值为0.62%。结论该方法准确、可靠、简便,适用于测定盐酸伊伐布雷定片的质量控制。     

伊伐布雷定联合苓桂术甘汤治疗慢性心力衰竭的疗效观察

目的探讨伊伐布雷定联合苓桂术甘汤治疗慢性心力衰竭的临床效果。方法 70例慢性心力衰竭患者,随机分为治疗组和对照组,各35例。对照组采用阿司匹林、血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)、美托洛尔、利尿剂等常规治疗,治疗组在常规治疗基础上采用伊伐布雷定联合苓桂术甘汤治疗。观察比较两组患者的治疗效果、治疗前后心室率变化及心率控制达标率、治疗前后B型脑钠肽(BNP)水平。结果治疗组总有效率为88.6%,明显高于对照组的65.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组心室率少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组心率控制达标率为94.3%高于对照组42.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组BNP水平均低于治疗前,且治疗组(631.2±25.6)pg/ml低于对照组的(1051.3±31.5)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05)。结论伊伐布雷定联合苓桂术甘汤治疗快慢性心力衰竭患者效果显著,可有效降低患者的心率和BNP水平,改善心功能,值得临床应用推广。     

Simultaneous determination of ivabradine and N-desmethylivabradine in human plasma and urine using a LC-MS/MS method: application to a pharmacokinetic study

A sensitive and specific liquid-chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) assay has been developed and validated for the simultaneous quantification of ivabradine and its active metabolite N-desmethylivabradine in human plasma and urine. The assay employed a single liquid–liquid extraction of the analytes from plasma and urine samples, and diazepam was used as internal standard (IS). The chromatographic separation was achieved on a Diamonsil C₁₈ column (150 mm×4.6 mm, 5 μm, Dikma) using a mixture of methanol and aqueous 5 mM ammonium acetate buffer containing 0.2% formic acid (80:20, v/v) as mobile phase. The assay for ivabradine and N-desmethylivabradine in plasma showed good linearity (r≥0.99) over the ranges 0.1013–101.3 ng/mL and 0.085–25.5 ng/mL, respectively. The assay for ivabradine and N-desmethylivabradine in urine showed good linearity (r≥0.99) over the ranges 10.13–6078 ng/mL and 8.5–850 ng/mL, respectively. The intra- and inter-day accuracy and precision values were found to be within the assay variability limits (RSD<15%) in accordance with FDA guidelines. The methods were successfully used for evaluating the pharmacokinetic properties of ivabradine and N-desmethylivabradine in human plasma and urine in Chinese healthy volunteers.     

盐酸伊伐布雷定片人体药动学研究

目的： 研究盐酸伊伐布雷定片在中国健康志愿者中的单次及连续多次给药药动学特征。方法：12例受试者采用随机开放二重3×3拉丁方试验设计,研究单次及连续多次给药药动学特征;采用LC-MS/MS法测定血浆中伊伐布雷定及其活性代谢产物S-18982的药物浓度。药动学参数采用WinNonlin软件计算。结果：单次（5 mg、10 mg、15 mg）给药后伊伐布雷定的主要药动学参数：Cmax分别为（19.48 ± 9.50）,（46.55 ± 24.06）,（78.75 ± 41.47）ug/L; Tmax分别为（0.7 ± 0.5）,（0.6 ± 0.3）,（0.5 ± 0.1） h; AUClast分别为（57.88 ± 31.58）, （138.11 ± 82.86）, （188.53 ± 115.08） ug/L; AUCinf分别为（59.14 ± 31.73）, （139.96 ± 83.89）, （190.54 ± 115.66） ug/L;其活性代谢产物S-18982的主要药动学参数： Cmax分别为（3.11 ± 1.16）,（7.86 ± 2.78）,（14.97 ± 5.35）ug/L; Tmax分别为（1.1 ± 0.8）,（0.8 ± 0.4）,（0.6 ± 0.1）h; AUClast分别为（16.89 ± 8.23）, （46.93 ± 19.26）, （75.87 ± 28.57） ug/L; AUCinf分别为（19.60 ± 8.14）, （52.12 ± 20.63）, （84.54 ± 30.15） ug/L。连续多次给药5 mg后伊伐布雷定的主要药动学参数：Cmax（20.07 ± 7.42） ug/L;Tmax（1.0 ± 0.7）h; AUClast （ 67.40 ± 32.29） ug/L; AUCinf （68.67 ± 32.59） ug/L;其活性代谢产物S-18982的主要药动学参数：Cmax（4.53 ± 1.27 ）ug/L;Tmax（1.1 ± 0.8）h; AUClast （33.77 ± 11.44） ug/L; AUCinf （38.74 ± 13.34） ug/L。结论：单次5~15 mg给药后,伊伐布雷定的体内过程符合一级线性动力学过程,代谢产物S-18982的体内过程呈非线性;连续多次5 mg给药后,母药和代谢产物的血药浓度第5天可达稳态,母药在体内无蓄积,代谢产物存在蓄积现象。     

LC-MS/MS 法测定人尿液中氯法拉滨的浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）方法测定人尿样中氯法拉滨的浓度。方法采用AB SCIEX QTRAP 5500串联质谱仪及Agilent1200高效液相色谱仪进行检测。尿样经甲基叔丁基醚提取处理,以克拉屈滨为内标。色谱柱为ThermoC18柱（150mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈—4mM乙酸铵（含0.3%的甲酸）（250∶3,v/v）;流速为0.5mL·min-1。氯法拉滨和克拉屈滨的MRM扫描离子通道m/z分别为304.2→170.0,286.1→170.0。进样量：10μL。结果氯法拉滨和克拉屈滨分离良好,保留时间分别为3.77min,3.88min。氯法拉滨在2.5~500ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.9995）,日内、日间RSD均低于6.39%,准确度（RE）均低于10.17%。结论本法样品预处理简便快捷,检测结果专属性强,灵敏度好,准确度高,适用于氯法拉滨药代动力学的研究。     

液相色谱-串联质谱法测定辛伐他汀片的人体药动学和生物等效性

目的:建立人血浆中辛伐他汀浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS／MS)测定法,研究健康受试者单剂量口服辛伐他汀受试或参比制剂后的药动学和生物等效性。方法:20名健康男性受试者进行随机双交叉试验,分别单剂量口服20 mg辛伐他汀受试制剂和参比制剂,采用LC-MS／MS以洛伐他汀为内标正离子选择性反应检测测定辛伐他汀血浆浓度,计算两者的药动学参数及相对生物利用度。结果:受试制剂和参比制剂的血药浓度水平一致,主要药动学参数如下:c_(max)分别为(8．0±s 1．9)和(8．1±1．8)μg·L~(-1);t_(max)分别为(1．9±0．3)和(1．9±0．3)h;t_(1/2)分别为(3．7±1．4)和(4．1±2．2)h;AUC_(0～24)分别为(30±8)和(30±6)μg·h·L~(-1);AUC`(0～∞)分别为(30±8)和(31±7)μg·h·L~(-1)。由2种制剂的AUC_(0～24)计算,受试制剂的相对生物利用度为(101±20)%。结论:建立的LC-MS／MS测定法专属、准确、灵敏度适宜。测得辛伐他汀受试制剂和参比制剂生物等效。     

液相色谱-串联质谱法测定美托洛尔缓释片的人体药动学及生物等效性

目的建立测定人血浆中美托洛尔浓度的液相色谱-串联质谱(LC—MS/MS)法,研究健康受试者单剂量和多剂量口服美托洛尔受试制剂和参比制剂后的药动学和生物等效性。方法40名男性健康志愿者进行随机双交叉试验,分别单剂量和多剂量口服美托洛尔受试制剂和参比制剂100 mg,采用LC—MS/ MS法测定血药浓度,用DAS软件计算主要药动学参数。结果单剂量时受试制剂和参比制剂的主要药动学参数如下:c_(max)分别为(144±s 43)和(164±40)μg·L~(-1),t_(max)分别为(3.7±1.2)和(3.5±0.8)h,t_(1/2)分别为(6.0±2.5)和(4.9±2.0)h,AUC_(0～24)分别为(1 639±787)和(1 658±636)μg·h·L~(-1),相对生物利用度为(97±21)%。多剂量达稳态时受试制剂和参比制剂的主要药动学参数如下:c_(max)分别为(241±170)和(232±75)μg·L~(-1),c_(min)分别为(115±66)和(121±64)μg·L~(-1),t_(max)分别为(3.7±1.0)和(3.5±1.6)h,AUC_(ss)分别为(1 905±882)和(1 992±834)μg·h·L~(-1),c_(av)分别为(159±73)和(166±69)μg·L~(-1),DF分别为(77±30)%和(75±31)%。受试制剂与参比制剂的AUC_(0～t),AUC_(0～∞)或AUC_(ss),c_(max)和t_(max)均符合生物等效性要求。结论建立的LC—MS/MS法专属、准确、灵敏度适宜。测定的美托洛尔受试制剂和参比制剂生物等效。     

LC-MS/MS法研究美托拉宗片在健康人体内药代动力学特征

目的:研究美托拉宗片在健康人体内单次和多次给药后的药代动力学特征。方法:10名健康受试者口服美托拉宗片1 mg,每日1次,连续6 d。给药后LC-MS/MS测定美托拉宗片血药浓度,用DAS 2.0药代动力学软件计算药代动力学参数。结果:单次和多次给药后主要药代动力学参数:Cmax分别为(20.6±4.8)和(22.4±5.0)ng.mL-1;Tmax分别为(1.60±0.6)和(2.4±1.4)h;AUC0～48分别为(122.5±36.3)和(156.8±31.6)ng.h.mL-1;AUC0～∞分别为(123.9±37.0)和(160.8±21.1)ng.h.mL-1;t1/2β分别为(7.9±1.2)和(8.9±1.4)h。结论:连续6 d口服美托拉宗片,药物在体内无蓄积,受试者耐受性良好。     

液相色谱-串联质谱法研究盐酸氟西汀胶囊的人体药动学及生物利用度

目的:建立准确、灵敏的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定人血浆中的盐酸氟西汀和诺氟西汀,并研究健康受试者单剂量口服盐酸氟西汀胶囊试验制剂和参比制剂后的药动学和相对生物利用度.方法:20名健康男性受试者进行随机双交叉试验,分别单剂量口服 20 mg 盐酸氟西汀胶囊参比制剂和试验制剂,以盐酸舍曲林为内标,采用ESI正离子选择性反应测定盐酸氟西汀和诺氟西汀血浆浓度,计算药动学参数并进行生物等效性评价.结果:由两种制剂的AUC0-τ计算,受试胶囊盐酸氟西汀的相对生物利用度为(104.0±25.2)%.结论:建立的LC-MS/MS测定法准确、灵敏,结果可靠;统计分析表明盐酸氟西汀胶囊试验制剂和参比制剂生物等效.     

LC-MS/MS法研究辛伐他汀片在健康人体内的药代动力学及生物等效性

目的:建立人体血浆中辛伐他汀的LC-MS/MS测定方法,研究辛伐他汀片在男性健康志愿者体内的药代动力学行为,评价其生物利用度和生物等效性。方法:20名健康成年男性志愿者采用随机分组、自身两周期双交叉对照试验设计,单剂量口服参比制剂辛伐他汀片40 mg后,用LC-MS/MS联用法测定血浆中药物浓度。结果:试验制剂和参比制剂的主要药代动力学参数:Tmax分别为1.8±1.3、2.10±1.00 h;Cmax分别为7.12±1.61、7.38±1.54μg.L-1;AUC(0-24)分别为30.50±11.25、30.17±10.21μg.L.h-1;t1/2分别为3.90±0.78、3.76±0.85 h。以AUC(0-24)计算的试验制剂的相对生物利用度为(101.2±7.8)%。结论:建立的分析方法准确灵敏,测得的数据可靠,统计学分析表明两种制剂生物等效。     

液-质联用法考察单硝酸异山梨酯片的人体生物等效性

目的：建立液-质联用法（LC-MS／MS）的检测方法，评价受试与参比的单硝酸异山梨酯片在健康人体的生物等效性。方法：健康志愿者20名，随机交叉试验设计，单剂量口服受试或参比制剂，给药剂量均为20mg，应用LC-MS／MS法测定各受试者给药后不同时间点的血药浓度，计算药动学参数，应用BAPP 2．0软件进行生物等效性评价。结果：受试与参比制剂的药动学参数如下，AUC0-24分别为（3．4&#177;0．6）mg&#183;h&#183;L^-1、（3．3&#177;0．7）mg&#183;h&#183;L^-1，AUC0-∞分别为（3．6&#177;0．7）mg&#183;h&#183;L^-1、（3．5&#177;0．7）mg&#183;h&#183;L^-1；tmax分别为（1．2&#177;0．9）h、（1．0&#177;0．6）h；Cmax分别为（464．9&#177;108．2）μg&#183;L^-1、（433．6&#177;115．3）μg&#183;L^-1；t1／2分别为（5．4&#177;0．7）h、（5．5&#177;0．9）h。单硝酸异山梨酯片的相对生物利用度为（106．0&#177;16．0）％，主要药动学参数经统计学分析无显著性差异。结论：受试与参比制剂具有生物等效性。     

液-质联用测定氯诺昔康国产与进口片剂的人体生物等效性

目的:建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)的检测方法,评价受试与参比的氯诺昔康片在健康人体的生物等效性。方法:采用随机、开放、双周期交叉试验设计,20名中国男性健康受试者单剂量口服受试制剂和参比制剂8 mg后不同时间点的血浆样本经甲醇直接沉淀蛋白,应用LC-MS/MS法测定氯诺昔康的血药浓度,利用DAS 2.0软件计算药动学参数,并进行生物等效性评价。结果:受试制剂和参比制剂的药动学参数如下:Cmax分别为(782.0±275.1)μg·L-1和(823.4±256.1)μg·L-1,tmax分别为(2.8±1.4)h和(2.6±1.4)h,t1/2分别为(3.5±1.2)h和(3.3±0.8)h,AUC0-24 h分别为(4 545±1 714)μg.h.L-1和(4 516±2 054)μg·h.L-1,相对生物利用度为(103.8±15.0)%。结论:建立的分析方法灵敏、简便、准确,统计结果表明受试制剂和参比制剂生物等效。